Metodologia para medios de cultivo

Metodologa para los cultivos comunes: Tipos de cultivo en microbiologa clnica: urocultivo, coprocultivo, hemocultivo, tracto respiratorio, genital, SNC, piel y heridas. Antibiograma. Definicin. Procesamiento.

Universidad Nacional de TrujilloFacultad de Farmacia y Bioqumica- Dpto. Bioqumica Ctedra de Bioqumica-Asignatura Anlisis ClnicosDocente: MSc. Anabel Gonzlez SicchaTrujillo, 10 de Abril de 2014

1CultivosSon medios esenciales para determinar la identidad, cantidad y patogenicidad de un microorganismo.Secrecin: es el proceso por el que una clula o un ser vivo vierte al exterior sustancias de cualquier clase. Tambin se llama secrecin a la sustancia liberada. El acto de verter una secrecin se llama secretar.Ejemplo :Secrecin de heridasUrocultivoCoprocultivoHemocultivo

UROCULTIVOEs la determinacin de elementos anormales, observacin del sedimento urinario y cultivos en medios selectivos y diferenciales RECOMENDACIONESEl paciente no debe haber recibido antibiticos por lo menos cinco das antes del examen.El recolector puede estar como mximo 30 instalado, mas tiempo, la muestra se considera contaminada.MATERIALESMuestra de orina ( torunda de algodn, Sol salina, frasco recolector), Microscopio, Placas de Agar, agar-sangre, Asa de siembra.

UROCULTIVODeterminacinVolumen (ml)ComentariosBACTERIAS0.5-1 PRIMERA ORINA DE LA MAANAHONGOS> 20 PRIMERA ORINA DE LA MAANAMICOBACTERIAS> 20PRIMERA ORINA DE DIAS CONSECUTIVOSANAEROBIOS1ASPIRADO SUPRAPBICO,ENVIAR EN UN SISTEMA DETRANSPORTE PARA ANAEROBIOSPARSITOSORINA DE 24 HORASUROCULTIVOMETODOTomar la orina sin centrifugar, con el asa de siembra calibrada, es decir q cada asada suministre 0,01 o 0,001 ml de orina.Sembrar la orina por dispersin-agotamiento con una asa de siembra, sobre una placa de agar sangre y otra sobre una placa de agar Mac Conkey.Rotular e incubar a 37C.

UROCULTIVOLectura e InterpretacinDetallar las caractersticas de las colonias en el medioSeleccionar colonias y resembrar en los medios de diferenciacin bioqumica (citrato, urea)Se interpreta de acuerdo a las Rx bioqumicasPara conocer el nmero de microorganismos en 1 ml de orina, se cuentan las colonias y el resultado se multiplica x 100, si se uso asa de 0,01 ml. (0,001ml x 1000).Si el # de colonias sobrepasa el # de 100 000 bacterias/ ml de orina, al informar no interesa precisar el # exacto de bacterias, slo debe informarse ms de 100 000 bact/ml de orinaNegativo(contaminacin)De 0 10 000 bacterias por ml de orinaDudoso, discutible ( debido al tiempo de envo de la muestra al laboratorio) De 10 000 100 000 bacterias / ml de orinaPositivo: Indica infeccin urinariaRecuento superior a 100 000 bacterias/ ml de orinaLectura e InterpretacinEn la orina infectada puede encontrarse:E. coli, P. aeruginosa, Enterococo, Citrobacter, KlebsiellaSe acepta un recuento superior de 100,000 bacterias/ ml de orina, indica infeccin de las vas urinarias.COPROCULTIVOSe toma muestra para identificar parsitos y otros microorganismos que causan diarrea, para valorar la funcin intestinal y para investigar la posibilidad de sangre oculta.RecomendacionesSe el anlisis cuando presenta prurito anal, dolor abdominal y diarreas.Cada muestra debe contener por lo menos 4 ml ( necesaria para facilitar la deteccin de parsitos cuando se encuentran pocos concentrados). Los nios que controlan su evacuacin deben orinar y luego defecar en el recipiente.No se debe dejar las muestras expuestas al aire en recipientes sin tapa. No dejar muestras para examinarlas despus de 2 a 3 horas. No aceptar muestras mezcladas con orina.COPROCULTIVOMATERIALES : Recipientes indicados, hisopo rectal estril, cinta adhesiva transparente 12 x 1 cm (huevos oxiuros)METODO1) Examen parasitolgico: Test de Graham

COPROCULTIVO2) Examen bacteriolgicoUsar un recipiente estril para la muestra.Se debe recolectar antes de la administracin de cualquier antibiticoEn nios y en paciente con problemas, se usa un hisopo embebido en el medio de transporte y se introduce en el recto en unos 3 cm, se toma la muestra rotando y por movimiento circular para arrastrar la deposicin.Se coloca la muestra en un tubo estril con medio de transporte y se corta la porcin sobrante del palo del hisopo y se ajusta fuertemente la tapa del tubo.COPROCULTIVOLectura e InterpretacinSe puede identificar: helmintos, huevos o larvas de helmintos, protozoarios , quistes de flagelados y ciliados ( Giardia lamblia, Balantidium coli)En estado primario de la enfermedad (salmonella y shiguella) se encuentran el cc en perodo agudo.En heces con moco: Giardia lamblia.Los coprocultivos se piden en toda diarrea desinteriforme, mxime si cursa con respuesta inflamatoria sistmica o si hay pus o sangre en las heces.

HUEVO DE ASCARIS EN HECESHUEVO DE TENIA EN HECES HUEVO DE TRICHURIS TRICHURA ADULTO DE ECHINOCOCCUS HEMOCULTIVOEs la prueba ms til y ms frecuentemente usada para demostrar la presencia de microorganismos en la sangre.Consiste en obtener sangre en asepsia y aadirla a un frasco q contiene un medio de cultivo elegido para aislar un determinado microorganismo.RecomendacionesDeben obtenerse, antes que el paciente reciba terapia antimicrobiana.Tomar la muestra cuando el paciente esta con T elevada.Se requiere un mnimo de tres hemocultivos seriados por pacientes antes de considerar el caso como negativo.El medio: corazn cerebro con agar (aerobias y anaerobias), tioglicolato (b. anaerobias)HEMOCULTIVOMETODOSe extrae sangre del pliegue del codo en forma aspticaSembrar 5-10 ml de sangre ( mayor cantidad posible)El medio de eleccin se calienta a 37C en una estufa de cultivo, y se flamea el tapn para destruir los microorganismos contaminantes en la superficie.Para llevar el frasco a la cabecera del paciente se cubre el tapn con un algodn con alcohol.Obtenida la muestra de sangre, se retira el algodn se introduce la aguja de la jeringa y se expulsa la sangre en el medio, se retira la aguja y se mezcla el contenido del frasco.HEMOCULTIVOLectura e InterpretacinExaminar el frasco diariamente durante la primera semana para detectar la aparicin de turbidez en el medio, hemlisis, signos de produccin de gas o crecimiento de colonias directamente encima de la sangre.Si los cultivos son negativos deben seguir en observacin hasta por 21 das antes de informarse como negativos.Los hemocultivos visualmente positivos (turbidez) deben teirse por el mtodo de Gram y subcultivarse (resiembra)Retirar un gota del hemocultivo utilizando una jeringaSembrar en medios de agar sangre y otros medios selectivos dependiendo de los resultados de coloracin GramLas secreciones que pueden determinarse son entre otras:Tracto Respiratorio: ticas: conducto auditivo externoVaginal : conducto cervicalUretralExudados etc.Materiales:Hisopos de algodn estril Tubos de ensayos con medio de cultivoAsa bacteriolgica estril de alambre delgadoTubo como medio de transporteSolucin fisiolgicaSecrecionesTracto Respiratorio: MuestrasTracto Respiratorio SuperiorTracto Respiratorio InferiorMUESTRAS EXTRAPULMONARESFaringo-amigdalinoEsputo, Esputo inducidoLquido pleuralNasofaringeAspirado traqueobronquialBiopsia pleuralNasal:Staphylococcus aureus.Puncin transtraquealHemocultivoSenos paranasalesMuestras obtenidas a travs de fibrobroncoscopiaCavidad oralCandidiasisMuestras obtenidas por abordaje percutneoTracto RespiratorioMtodoSe obtiene la secrecin farngea.Paciente sentado, abre la boca, baja la lengua y dice Ahhh.Introduce el hisopo evitando tocar la lengua, vulaIntroduce el hisopo con la secrecin en el medio de cultivo Ejemplo:

El frotis farngeo es un importante test para diagnosticar y tratar con una gran precisin las infecciones que causan los dolores de garganta, adems puede prevenir la transmisin de estas enfermedades de una persona a otra. Por ejemplo:Coco gram(+) Streptococcus beta-hemoltico (S. pyogenes). (Agar sangre-azida)Neisseria gonorrhoeae, A. haemolyticum, C. diphteriae y H. influenzae (Epiglotitis (Agar Chapman)Enterobacterias: Agar Mc ConkeyLevaduras.

Tracto Respiratorio Secrecin tica

Mtodo:Si la pus sale al exterior, es preferible eliminarlo con algodn estril.Introduce el hisopo en el CAE, en direccin oblicua de atrs hacia delante y de abajo hacia arriba. Introduce el hisopo con la muestra en el tubo estril.

Secrecin Vaginal

Mtodo:La muestra es tomada del C. cervical.En gonorrea: antes o inmediat despus de la menstruacin. Coloca al paciente en posicin ginecolgica, entreabrir la vulvaIntroducir el espculo humedecido en agua tibia en la vagina, no usar lubricante.Visualizar el cuello uterino Introducir el hisopo estril dentro del canal cervical rotndolo suavemente y en un tiempo de 10 a 30 seg, retirar y colocar en el tubo estril.Secrecin Uretral

Mtodo:Se toma la muestra a primera hora de la maana, antes q el paciente haya orinado Limpiar el meato con algodn humedecido en sol. salina estril.Aplicar al pene una ligera presin desde atrs, de manera que salga una gota de secrecin (pus) por el meato.Si la gota no aparece, introducir el hiposo estril en el C. uretral anterior hasta una profundidad de 2,5 cm aprox. para obtener la muestra. Tomar la pus con el hisopo o asa e introducir en el tubo con medio de transporte. Ejem:Neiseria (Agar Thayer-Martin), Levadura (Agar-glucosa Sabouraud, Agar selectivo para candida)Exudados y/o heridasMtodo:1)Muestra de FluidosLavar la lesin ulcerada con agua y jabnPpula/alcohol/agua oxigenada/sol fisiolgicaInyectar, aspirar el contenido, y retirar la jeringaSe inocula II a III gotas del material aspirado en tubos de medio de cultivo.2)Muestra de FrotisLavar la lesin ulcerada con agua y jabn, desinfectar alcoholPresionar con firmeza los bordes de la lesin hasta q palidezca: en el borde interno, hacer una incisin con bistur, levantando la piel, secar la sangre y raspar el tejido.Con el material obtenido hacer el frotis en portaobjetos.Lquido CefalorraqudeoEl LCR es un lquido producido en los ventrculos, que son los espacios que hay dentro del SNC. En los ventrculos hay una estructura especializada que son los Plexos Coroideos donde se produce el LCR. Circula en el espacio que rodea a la mdula espinal y el encfaloSe produce y se reabsorbe continuamente a una velocidad de 500 mL / da. Su volumen permanece constante en situaciones fisiolgicas. Estudio qumico del lquido cefalorraqudeoEl estudio de qumica del LCR identifica qumicos, tales como las protenas y los niveles de glucosa, que pueden ayudar a diagnosticar ciertos trastornos y enfermedades.Llamado tambin Qumica del LCR.

Forma en que se realiza el examen

Una puncin lumbar (espinal) es el medio ms comn para recolectar una muestra de LCR y generalmente se realiza de la siguiente manera: se le solicita al paciente que se acueste de lado con las rodillas encogidas hacia el abdomen y la barbilla pegada al trax. Se inyecta anestesia local en la parte inferior de la columna. Se inserta la aguja espinal generalmente entre la tercera y cuarta vertebra lumbar y se extrae el lquido para evaluarlo. El paciente debe permanecer en posicin horizontal o casi horizontal durante por lo menos seis u ocho horas despus del examen.

Forma en que se realiza el examen

Si el paciente presenta un problema como deformidad lumbar o infeccin, imposibilita la puncin lumbar o hacerla no confiable. La puncin cisternal implica la insercin de una aguja debajo del hueso occipital (parte posterior del crneo). Esto puede ser peligroso porque la aguja se inserta cerca del tronco enceflico. La puncin ventricular es an menos comn, pero se puede recomendar cuando es necesario obtener la muestra de LCR en personas con posible hernia cerebral inminente. Se realiza generalmente en el quirfano. Se perfora un orificio en el crneo y se inserta una aguja directamente en el ventrculo lateral del cerebro.Posteriormente se lleva el LCR al laboratorio para su evaluacin.

Conteo de clulas de LCR

Valores normalesEl valor normal de glbulos blancos est entre 0 y 5. El valor normal de glbulos rojos es 0. Significado de los resultados anormalesUn aumento en el conteo de leucocitos indica infeccin, inflamacin o sangrado dentro del lquido cefalorraqudeo. Algunas de las causas son: Absceso ,Infeccin aguda, Encefalitis , Hemorragia,,Esclerosis Mltiple, Meningitis, ACV hemorrgico, Tumor,Afecciones adicionales que este examen puede ayudar a Dx abarcan: Malformaciones arteriovenosa (cerebral), Delirio, Aneurisma cerebral, Demencia,Sindrome de Guillain-Barr, Epilepsia, Neurosfilis, Linfoma cerebral primario, Tumor Espinal, ACV secundario a la sfilis, Meningitis asptica sifiltica, Mielopata sifiltica etc.

Cultivo de LCR

Para detectar la presencia de bacterias, virus y hongos en el LCR causantes de infeccin. El LCR es un lquido claro que transporta productos de neurosecreciones (qumicos liberados por el tejido neural), nutrientes, qumicos en las clulas y cambios qumicos en las mismas. El LCR generalmente se obtiene a travs de una puncin lumbar (espinal). El cultivo se realiza en el laboratorio. El microbilogo lo examina todos los das y en caso de presentarse crecimiento (un "cultivo positivo"), se identifican los microorganismos y se verifica la susceptibilidad a los antibiticos, permitiendo la mejor seleccin de stos. Valores normales: Es normal la ausencia de crecimiento de organismos (negativo).

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO Meningitis bacteriana

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO ANTIBIOGRAMADefinicin:Es el procedimiento por el cual se determina el grado de resistencia de una bacteria al antibitico.Consiste en poner en contacto al germen que hemos cultivado con distintos antibiticos para ver cual de ellos es el que mejor va con el tratamiento (seleccin del mejor antibitico).Se cultivan en discos los cuales son unos receptculos circulares con sustancias que favorecen el crecimiento de los microorganismos, pero al mismo tiempo contienen cada uno de ellos, un antibitico conocido.En resumen:Se hace un antibiograma para ver que microorganismo ha provocado la enfermedad y como podremos vencerlo.Mtodo:Se distribuye sobre una placa el microorganismo previamente cultivado, en forma uniforme y abundante con una asa de siembra.Colocar los discos sobre este medio slido con pinzas estriles, dejando 2 cm entre cada uno de ellos.Llevar a la estufa e incubar a 37C durante 12 18 horas.ANTIBIOGRAMA

Antibiograma. Tcnica del disco en medio slido Lectura:Se observan las zonas de inhibicin ( donde no crecen los microorganismos) alrededor de los discos ( halo claro) que deben ser medidas con una regla en mm, en la parte exterior y reversa de la placaUna zona de inhibicin indicar sensibilidad o resistencia del antibitico, segn las medidas obtenidas en mm.Se utilizan discos para determinados microorganismos, segn sean muestras de: hemocultivo, urocultivo , coprocultivo y/ o secrecionesANTIBIOGRAMAModo de accinAntibiticosInhibicin de sntesis de la paredPenicilina,Bacitracina, NovobiocinaCicloserina,,Vancomicina,Ristocetna,GrriseofulvinaAccin sobre la membranaPolipptidicos bsicos:Polimixinas, BacitracinaTirotricinaReplicacin del DNAMitomicina, Acido nalidixicoTranscripcin del DNAActinomicina, NovobiocinaTraduccin del RNAm(sntesis de protenas)Inhibicin de la sntesisanomalas en la lectura del cdigoMacrolidas, Sinergistina,LincomicinaTetraciclina,Cloranfenicol etc.

Referencias BibliogrficasGAW A, COWAN RA, OREILLY D, STEWART MJ Y SHEPHERD J. (2006): Bioqumica Clnica. 2 Ed. Editorial Harcourt - Elsevier, Espaa.

http://perso.wanadoo.es/sergioram1/Microbiologia.htmMuchas Gracias