Seminario 4-cromatografía

BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA

Facultad de Ciencias Quiacutemicas

Lic En Quiacutemico Farmacobioacutelogo

Laboratorio de Quiacutemica Orgaacutenica l

Seminario No 4 CROMATOGRAFIacuteA

Verano 2015 Alumnas Carmen Guadalupe Maacuterquez Hernaacutendez

Pilar Berenice Vargas Aquino 1 Lab Quiacutemica Orgaacutenica l

2 Lab Quiacutemica Orgaacutenica l

1 Descripcioacuten general de la

cromatografiacutea Es un meacutetodo fiacutesico de separacioacuten en la cual los

componentes de una mezcla maacutes o menos compleja

se distribuyen entre dos fases una que es fija (fase

estacionaria) y la otra que se mueve en una

direccioacuten definida (fase moacutevil) IUPAC

recommendations 1993


a) principios fiacutesicos

inversamente proporcional a la afinidad por la fase estacionaria

Viajando a una

distancia que es

Se moveraacute con la fase

moacutevil

La sustancia de intereacutes

se adheriraacute a la fase

estacionaria o


b) Fase moacutevil bull La fase moacutevil puede ser un gas o un liacutequido


c) Fase estacionaria bull soacutelo puede ser un liacutequido o un soacutelido


d) Coeficiente de particioacuten bull K = CSCM

bull donde CS y CM son las concentraciones de soluto

en la fase estacionaria y moacutevil respectivamente

Cuando K = 1 el soluto se encuentra igualmente

distribuido entre las dos fases El coeficiente de

reparto determina la v


bull 2 Clasificacioacuten de los

meacutetodos cromatograacuteficos


bull Cromatografia de particion

bull Esta teacutecnica se basa en la retencioacuten del analito en una columna soacutelida sobre la cual hay distribuida una capa fina de un disolvente afiacuten al analito

bull una fase moacutevil liquida o gaseosa y la estacionaria esta mediado por el analito que se reparte entre ambas y queda al final disuelto en la fase estacionaria



Cromatografia de intercambio ionico


Cromatografiacutea de exclusioacuten

bull Una variante de la cromatografiacutea de permeacioacuten en gel o cromatografiacutea de exclusioacuten es cuando se realiza para la exclusioacuten de iones Mediante esta modificacioacuten se tienen separaciones que dependen de factores como tamantildeo de partiacutecula de la resina forma ioacutenica e incluso distribucioacuten de isoacutemeros Esto permite separar especies que de otra forma eluiriacutean al mismo tiempo Las separaciones se llevan a cabo en resinas de intercambio con base en poliestireno de alta capacidad como eluyentes aacutecidos minerales diluidos


3 Cromatografiacutea de adsorcioacuten


4 Descripcioacuten las caracteriacutesticas de las principales fases estacionarias


a) Gel de siacutelice bull Es una sustancia quiacutemica de aspecto cristalino

porosa inerte no toacutexica e inodora de foacutermula

quiacutemica molecular SiO2 nH2 O insoluble en agua ni

en cualquier otro solvente quiacutemicamente estable

soacutelo reacciona con el aacutecido fluorhiacutedrico y el aacutelcali


bull Gracias a su composicioacuten quiacutemica uacutenica y a su

estructura fiacutesica el gel de siacutelice posee unas

caracteriacutesticas incomparables con otros materiales

similares por ejemplo la alta absorcioacuten funcionamiento

termal estable caracteriacutestica fiacutesica estable fuerza

mecaacutenica relativamente alta etceacutetera

bull El gel de siacutelice tambieacuten puede diferenciar la adsorcioacuten

de diferentes moleacuteculas actuando como un absorbente

selectivo

bull se utiliza para separar sustancias maacutes polares (alcoholes

aminas aacutecidos carboxiacutelicos)


Alumina bull La aluacutemina u oacutexido de aluminio es un adsorbente

ligeramente baacutesico debido a que en el proceso de

extraccioacuten de la aluacutemina a partir de la bauxita

quedan algunas moleacuteculas de hidroacutexido de

aluminio adheridas a la aluacutemina daacutendole a eacutesta un

caraacutecter baacutesico No consigue un desarrollo tan alto

de la sustancia depositada como el gel de siacutelice

bull se utiliza para separar compuestos relativamente

apolares (hidrocarburos haluros de alquilo eacuteteres

aldehiacutedos y cetonas


bull La aluacutemina puede ser tratada quiacutemicamente para

conseguir aluacuteminas aacutecidas baacutesicas y neutras

Puede contener aglomerantes yo indicadores

ultravioletas Es un adsorbente de caraacutecter polar

de tal forma que retendraacute con mayor avidez a los

componentes polares


5- Disolventes maacutes empleados acuerdo a su

polaridad y punto de ebullicioacuten

Hexano

Tetraclorometano

cloroformo

Diclorometano

Acetato de etilo

Acetona

2-Propanol




En general estos disolventes se

caracterizan por tener bajos puntos

de ebullicioacuten y viscosidad lo que

les permite moverse con rapidez

Raramente se emplea un

disolvente maacutes polar que el metanol

El orden de elucioacuten de un compuesto se

incrementa al aumentar la

polaridad de la fase moacutevil o eluyente


6- Cromatografiacutea en capa fina a) Usos

bull Determinar el grado de pureza de un compuesto

bull Comparar muestras

bull Realizar el seguimiento de una reaccioacuten


6- Cromatografiacutea en capa fina b)

Procedimiento


6- Cromatografiacutea en capa fina

b) Procedimiento


i Preparacioacuten de la cuba

cromatograacutefica

1 Se rodea la cuba con papel absorbente

dejando una ventanita

2 Colocar el solvente de desarrollo

Esperar que se moje el papel

3 Tapar la cuba y dejar 5 a 10 minutos para que se sature

con los vapores de la mezcla de solventes



cromatograacutefica


ii Eleccioacuten de la fase estacionaria y la fase

moacutevil



moacutevil


iii Aplicacioacuten de la muestra Recortar una tira de papel

cromatograacutefico de aproximadamente 25 cm de ancho por 6 oacute 7 cm de

largo y marca una liacutenea a 1 cm de la base paralela a la

misma

Sembrar utilizando tres capilares diferentes los tres extractos por separado a unos 3 ndash 5 mm del borde de la placa y equidistantes entre siacute

Tocar el extracto alcohoacutelico con el extremo delgado del capilar

El liacutequido asciende

Tocar el centro de la liacutenea de siembra con el capilar con mucho cuidado para no romper o dantildear el papel cromatograacutefico

Repetir 3 o 4 veces la operacioacuten de siembra para generar una buena

concentracioacuten 28 Lab Quiacutemica Orgaacutenica l

iii Aplicacioacuten de la muestra


iv Desarrollo de la cromatografiacutea Introducir el

papel cromatograacutefico sembrado de

manera que el solvente no

toque la zona de siembra

Tapar inmediata

mente

Dejar ascender el solvente por el papel hasta

que se encuentre

entre 1 y 05 cm de su borde

superior

En ese instante

retirarlo de la cuba

Dejar secar y marcar el

contorno de mancha

observada


iv Desarrollo de la cromatografiacutea


v Deteccioacuten (tipos de reveladores)




vi Determinacioacuten del Rf


7 Cromatografiacutea en capa fina

preparativa bull Se utiliza para la

separacioacuten y

aislamiento de los

componentes de una

mezcla en cantidades

comprendidas entre 100

ndash 200 mg



preparativa

Se transfiere a un matraz erlenmeyer

Antildeadir un disolvente en el cual sea soluble el producto

Se filtra el gel de siacutelice

Y una vez eliminado el disolvente

Tenemos el producto puro


8 Cromatografiacutea en columna


8 Cromatografiacutea en columna b)

Procedimiento


i Preparacioacuten de columna

Colocar una bolita de algodoacuten en el fondo de la columna para evitar que se desprenda el gel de siacutelice

Sujetar la columna con dos pinzas y nos aseguramos de que esta recta


ii Eleccioacuten de la fase moacutevil

La fase estacionaria se deposita en el interior de una columna de vidrio que termina con una placa porosa que impide su paso


iii Eleccioacuten de la fase moacutevil

La mezcla se deposita en la parte superior de la fase estacionaria mientras que la fase moacutevil atraviesa el sistema


iv Llenado de la columna Verter la pasta en la columna aseguraacutendose de que la llave estaacute cerrada

Una vez bien compactada abrimos la llave para que el disolvente caiga hasta que queden unos 5 mm por encima de la siacutelice


v Aplicacioacuten de la muestra

Con ayuda de una pipeta Pasteur echamos con cuidado la muestra resbalando por las paredes de la columna

Procedemos a llenar la columna con el disolvente (hexano)


vi Elucioacuten de la columna

Si el disolvente es muy polar la elucioacuten seraacute muy raacutepida y generalmente habraacute poca separacioacuten de los componentes de la mezcla

Si por el

contrario el disolvente es muy apolar no eluiraacuten los compuestos de la columna


ldquoCROMATOGRAFIacuteA EN CAPA FINA rdquo

bull Objetivo bull Aplicar la tecnica cromatografia en capa fina CCF para el analisis de productos

bull quimicos Utilizar el equilibrio de particion y adsorcion en tecnicas cromatograficas para

bull separar dos compuestos diferentes

bull MATERIAL Y REACTIVOS

bull Material bull 1048576 3 tubos capilares

bull 1048576 cubas cromatograficas

bull 1048576 placas de cromatografia en CCF de aprox 2 X 5 cm

bull 1048576 4 vasos de precipitados de 50 mL

bull 1048576 lampara de luz UV

bull Reactivos bull Disolucion de acetanilida al 1

bull Disolucion de nitrobenceno al 1

bull Acetato de etilo

bull Hexano


Se dispone de tres disoluciones previamente preparadas

de acetanilida (A) nitrobenceno (N) y una mezcla de

ambos (M)

Se introduce un tubo capilar en la disolucion (A) tomando

una pequentildea cantidad de la misma y por su extremo se

coloca en una placa CCF con gel de silice como

adsorbente una mancha a unos 6 mm del borde izquierdo

de la placa y a 4 mm del borde inferior


bull A la misma altura en el borde derecho se

coloca con otro capilar una mancha de la

solucion (N) y en la parte central 30 de la placa

una mancha de la solucion M de nuevo con un

capilar diferente (Cuidado no confundir los

capilares de cada disolucion)

M M


bull Se deja secar y se introduce la placa en el

interior de una cuba cromatografica

conteniendo 3 mL de acetato de etilohexano

5050 de modo que el disolvente no toque la

zona en la que se encuentran las manchas


bull Se tapa la cuba y cuando el disolvente ha migrado hasta llegar a 4 mm del borde superior se saca la placa y se marca el nivel del disolvente en un extremo de la misma

bull Se deja secar y se revela la placa en una laacutempara de luz ultravioleta o en una caacutemara de yodo localizando la posicioacuten de cada mancha Se miden las distancias recorridas por el frente del disolvente y para cada mancha y se calcula el valor de Rf Se repite todo el proceso utilizando como eluyente acetato de etilohexano 2080 acetato de etilohexano 8020 Intentar con otros eluyentes y elegir cuaacutel es el mejor


Propiedades fisicas y toxicas de reactivos Propiedades fiacutesicas Propiedades toacutexicas

ACETANILIDA

Foacutermula molecular Masa molecular ESTADO FISICO ASPECTO Punto de fusioacuten Punto de ebullicioacuten

C8H9NO 13516 soacutelido blanco de olor caracteriacutestico 113-115 ordmC 302-304 ordmC

Irritante especialmente para los ojos Por ingestioacuten puede provocar naacuteuseas voacutemitos arritmias hipotensioacuten dificultades respiratorias espasmos Riesgo de explosioacuten del polvo Inflamable Mantener alejado de fuentes de ignicioacuten

NITROBENCENO

Foacutermula molecular Masa molecular ESTADO FIacuteSICO ASPECTO Punto de ebullicioacuten Punto de fusioacuten

C6H5NO 1231 Liacutequido aceitoso amarillo paacutelido de olor caracteriacutestico

211degC 5degC

Dolor de cabeza Labios o untildeas azulados Veacutertigo Naacuteuseas Debilidad Confusioacuten mental Convulsiones Peacuterdida del conocimiento Combustible En caso de incendio se desprenden gases toacutexicos e irritantes Por encima de 88degC pueden formarse mezclas explosivas


Propiedades fiacutesicas y toacutexicas de reactivos Propiedades fiacutesicas Propiedades toacutexicas

ACETATO DE ETILO

FORMULA PESO MOLECULAR Aspecto Punto de ebullicioacuten Punto de fusioacuten -

C4H8O2 881 gmol liacutequido incoloro con olor a frutas 77degC - 83 degC

Inhalacioacuten Causa dolor de cabeza naacuteuseas e incluso peacuterdida de la conciencia Contacto con ojos Una exposicioacuten prolongada causa el oscurecimiento de las coacuterneas Contacto con la piel El contacto constante o prolongado a este compuesto provoca resequedad agrietamiento sensibilizacioacuten

HEXANO

FORMULA PESO MOLECULAR Aspecto Punto de ebullicioacuten Punto de fusioacuten

C6H14 8617 gmol liacutequido incoloro con un olor parecido al del petroacuteleo

69degC - 956 degC

Inhalacioacuten Causa tos y cansancio Contacto con ojos Causa irritacioacuten y enrojecimiento Ingestioacuten Causa naacuteusea voacutemito e irritacioacuten de la garganta Compuesto altamente inflamable cuyos vapores pueden viajar a una fuente de ignicioacuten pueden explotar en una aacuterea cerrada


Propiedades fiacutesicas y toacutexicas de reactivos

Propiedades fiacutesicas Propiedades toacutexicas

ETEacuteR DE PETROLEO

Aspecto Punto de ebullicioacuten Peso molecular

Liacutequido incoloro 30-60 degC 87 -114 gmol

Por inhalacioacuten de vapores Irritaciones en viacuteas respiratorias Por ingestioacuten nauseas Riesgo de aspiracioacuten al vomitar neumoniacutea Por absorcioacuten dolores de cabeza veacutertigo ansiedad espasmos peacuterdida del conocimiento paro cardiovascular Los gases vapores pueden formar mezclas explosivas con













Viajando a una

distancia que es


moacutevil



estacionaria o












































selectivo




















componentes polares




Hexano

Tetraclorometano

cloroformo

Diclorometano

Acetato de etilo

Acetona

2-Propanol




















Procedimiento



b) Procedimiento



cromatograacutefica









cromatograacutefica



moacutevil



moacutevil





misma













Tapar inmediata

mente


que se encuentre


superior

En ese instante



contorno de mancha

observada












separacioacuten y

aislamiento de los

componentes de una



ndash 200 mg



preparativa










Procedimiento





















Si por el
















bull Hexano




ambos (M)













M M












ACETANILIDA




NITROBENCENO



211degC 5degC




ACETATO DE ETILO




HEXANO



69degC - 956 degC




















































selectivo




















componentes polares




Hexano

Tetraclorometano

cloroformo

Diclorometano

Acetato de etilo

Acetona

2-Propanol




















Procedimiento



b) Procedimiento



cromatograacutefica









cromatograacutefica



moacutevil



moacutevil





misma













Tapar inmediata

mente


que se encuentre


superior

En ese instante



contorno de mancha

observada












separacioacuten y

aislamiento de los

componentes de una



ndash 200 mg



preparativa










Procedimiento





















Si por el
















bull Hexano




ambos (M)













M M












ACETANILIDA




NITROBENCENO



211degC 5degC




ACETATO DE ETILO




HEXANO



69degC - 956 degC


























componentes polares




Hexano

Tetraclorometano

cloroformo

Diclorometano

Acetato de etilo

Acetona

2-Propanol




















Procedimiento



b) Procedimiento



cromatograacutefica









cromatograacutefica



moacutevil



moacutevil





misma













Tapar inmediata

mente


que se encuentre


superior

En ese instante



contorno de mancha

observada












separacioacuten y

aislamiento de los

componentes de una



ndash 200 mg



preparativa










Procedimiento





















Si por el
















bull Hexano




ambos (M)













M M












ACETANILIDA




NITROBENCENO



211degC 5degC




ACETATO DE ETILO




HEXANO



69degC - 956 degC












Hexano

Tetraclorometano

cloroformo

Diclorometano

Acetato de etilo

Acetona

2-Propanol




















Procedimiento



b) Procedimiento



cromatograacutefica









cromatograacutefica



moacutevil



moacutevil





misma













Tapar inmediata

mente


que se encuentre


superior

En ese instante



contorno de mancha

observada












separacioacuten y

aislamiento de los

componentes de una



ndash 200 mg



preparativa










Procedimiento





















Si por el
















bull Hexano




ambos (M)













M M












ACETANILIDA




NITROBENCENO



211degC 5degC




ACETATO DE ETILO




HEXANO



69degC - 956 degC




























Procedimiento



b) Procedimiento



cromatograacutefica









cromatograacutefica



moacutevil



moacutevil





misma













Tapar inmediata

mente


que se encuentre


superior

En ese instante



contorno de mancha

observada












separacioacuten y

aislamiento de los

componentes de una



ndash 200 mg



preparativa










Procedimiento





















Si por el
















bull Hexano




ambos (M)













M M












ACETANILIDA




NITROBENCENO



211degC 5degC




ACETATO DE ETILO




HEXANO



69degC - 956 degC











b) Procedimiento



cromatograacutefica









cromatograacutefica



moacutevil



moacutevil





misma













Tapar inmediata

mente


que se encuentre


superior

En ese instante



contorno de mancha

observada












separacioacuten y

aislamiento de los

componentes de una



ndash 200 mg



preparativa










Procedimiento





















Si por el
















bull Hexano




ambos (M)













M M












ACETANILIDA




NITROBENCENO



211degC 5degC




ACETATO DE ETILO




HEXANO



69degC - 956 degC











cromatograacutefica









cromatograacutefica



moacutevil



moacutevil





misma













Tapar inmediata

mente


que se encuentre


superior

En ese instante



contorno de mancha

observada












separacioacuten y

aislamiento de los

componentes de una



ndash 200 mg



preparativa










Procedimiento





















Si por el
















bull Hexano




ambos (M)













M M












ACETANILIDA




NITROBENCENO



211degC 5degC




ACETATO DE ETILO




HEXANO



69degC - 956 degC











cromatograacutefica



moacutevil



moacutevil





misma













Tapar inmediata

mente


que se encuentre


superior

En ese instante



contorno de mancha

observada












separacioacuten y

aislamiento de los

componentes de una



ndash 200 mg



preparativa










Procedimiento





















Si por el
















bull Hexano




ambos (M)













M M












ACETANILIDA




NITROBENCENO



211degC 5degC




ACETATO DE ETILO




HEXANO



69degC - 956 degC











moacutevil



moacutevil





misma













Tapar inmediata

mente


que se encuentre


superior

En ese instante



contorno de mancha

observada












separacioacuten y

aislamiento de los

componentes de una



ndash 200 mg



preparativa










Procedimiento





















Si por el
















bull Hexano




ambos (M)













M M












ACETANILIDA




NITROBENCENO



211degC 5degC




ACETATO DE ETILO




HEXANO



69degC - 956 degC











moacutevil





misma













Tapar inmediata

mente


que se encuentre


superior

En ese instante



contorno de mancha

observada












separacioacuten y

aislamiento de los

componentes de una



ndash 200 mg



preparativa










Procedimiento





















Si por el
















bull Hexano




ambos (M)













M M












ACETANILIDA




NITROBENCENO



211degC 5degC




ACETATO DE ETILO




HEXANO



69degC - 956 degC













misma













Tapar inmediata

mente


que se encuentre


superior

En ese instante



contorno de mancha

observada












separacioacuten y

aislamiento de los

componentes de una



ndash 200 mg



preparativa










Procedimiento





















Si por el
















bull Hexano




ambos (M)













M M












ACETANILIDA




NITROBENCENO



211degC 5degC




ACETATO DE ETILO




HEXANO



69degC - 956 degC
















Tapar inmediata

mente


que se encuentre


superior

En ese instante



contorno de mancha

observada












separacioacuten y

aislamiento de los

componentes de una



ndash 200 mg



preparativa










Procedimiento





















Si por el
















bull Hexano




ambos (M)













M M












ACETANILIDA




NITROBENCENO



211degC 5degC




ACETATO DE ETILO




HEXANO



69degC - 956 degC




















separacioacuten y

aislamiento de los

componentes de una



ndash 200 mg



preparativa










Procedimiento





















Si por el
















bull Hexano




ambos (M)













M M












ACETANILIDA




NITROBENCENO



211degC 5degC




ACETATO DE ETILO




HEXANO



69degC - 956 degC











preparativa










Procedimiento





















Si por el
















bull Hexano




ambos (M)













M M












ACETANILIDA




NITROBENCENO



211degC 5degC




ACETATO DE ETILO




HEXANO



69degC - 956 degC













Procedimiento





















Si por el
















bull Hexano




ambos (M)













M M












ACETANILIDA




NITROBENCENO



211degC 5degC




ACETATO DE ETILO




HEXANO



69degC - 956 degC





























Si por el
















bull Hexano




ambos (M)













M M












ACETANILIDA




NITROBENCENO



211degC 5degC




ACETATO DE ETILO




HEXANO



69degC - 956 degC























bull Hexano




ambos (M)













M M












ACETANILIDA




NITROBENCENO



211degC 5degC




ACETATO DE ETILO




HEXANO



69degC - 956 degC












ambos (M)













M M












ACETANILIDA




NITROBENCENO



211degC 5degC




ACETATO DE ETILO




HEXANO



69degC - 956 degC
















M M












ACETANILIDA




NITROBENCENO



211degC 5degC




ACETATO DE ETILO




HEXANO



69degC - 956 degC




















ACETANILIDA




NITROBENCENO



211degC 5degC




ACETATO DE ETILO




HEXANO



69degC - 956 degC











ACETATO DE ETILO




HEXANO



69degC - 956 degC










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