RECUENTO DE BACTERIAS HETERÓTROFAS

INTRODUCCIÓNBacterias heterótrofas son aquéllas que necesitan materia orgánica como

fuente de energía, al contrario de las bacterias autótrofas.

El recuento de bacterias heterótrofas proporciona un recuento aproximado

del número total de bacterias viables, lo que suministra valiosa información sobre

la calidad del agua y puede aportar datos que respalden el significado atribuido a

los resultados de los análisis de coliformes.  

El recuento heterótrofo en placa es útil para valorar la eficacia de los distintos

procesos de tratamiento y puede tener una importante aplicación como análisis del

control dentro de una planta depuradora. También es útil para controlar la calidad

final del agua de un sistema de distribución, como indicador del recrecimiento de

microorganismos y de la acumulación de sedimento en secciones de circulación

lenta y en extremos muertos. También permite comprobar si el transporte del agua

ha sido correcto. 

Frecuentemente las muestras que hay que estudiar tienen un número muy

elevado de microorganismos, por lo que se requiere diluirlas para poder contarlos.

Para ello se realizan diluciones seriadas, que posteriormente se siembran en

placas con medios de cultivo. 

Existen varios métodos, con medios de cultivos diferentes, según las

características de los microorganismos y del medio a examinar. 

La ley de aguas estipula que para realizar el recuento de heterótrofos hay

que contabilizar las colonias que se forman de una célula aislada y se denomina

UFC.

Se usa temperaturas de 37º para determinar patógenos y de 25º para

determinar bacterias ambientales.

Según INDECOPI para el Recuento de Heterótrofos en placa de acuerdo con

la Metodología: SMEWW-APHA AWWA-WEF.Part 9215 B, 22 nd Ed.

2012.Heterotrophic Plate Count.Pour Plate Method; el parámetro es dado por el

Ministerio de Salud en el D.S. Nº 031-2010-MINSA que es de 500 UFC/ml a 35°C.

OBJETIVOS Conocer el procedimiento de recuento de bacterias heterótrofas mediante el

método de la placa fluida.

Conocer el número de bacterias heterótrofas en una muestra de agua.

Determinar la calidad sanitaria del agua.

I. FUNDAMENTOLas bacterias heterotróficas (heterótrofas) se definen como aquellas

bacterias que usan compuestos del carbono orgánico como fuente de energía y

el carbono para su crecimiento, en contraposición con las bacterias autotróficas

que utilizan los compuestos inorgánicos como fuente de energía y el C02, como

fuente de carbono. Esta definición de bacteria heterótrofa es amplia e incluye

tanto a las bacterias saprofíticas como a las patógenas. Por lo tanto, tanto las

bacterias que causan como las que no causan enfermedades son heterótrofas.

Los medios para el recuento heterotrófico en placas (RHP) empleados para

enumerar los heterótrofos encontrados en el agua se consideran medios no

selectivos porque no tienen compuestos inhibitorios ni selectivos para un

determinado grupo de bacterias. Las condiciones de incubación, incluida la

temperatura, pueden ser selectivas y por consiguiente tales condiciones deben

estar especificadas para las bacterias particulares que se procura detectar o

enumerar.

El RHP es un procedimiento sencillo que se puede realizar por el método de

placa fluida, difusa o filtración por membrana (FM) y es una herramienta muy útil.

Aunque no es esencial para evaluar la seguridad del agua potable, los resultados

del RHP proporcionan información que complementa los resultados de los

coliformes totales.

El RHP se puede usar para indicar la composición bacteriana general del

agua de la fuente y la eficacia y eficiencia de los procesos de tratamiento del

agua, como la sedimentación, coagulación, filtración y cloración. El monitoreo del

RHP en el agua distribuida puede proporcionar información sobre la limpieza del

sistema de distribución, desarrollo de bacterias después del tratamiento, efectos

de los cambios de temperatura en el agua y del cloro residual en la población

bacteriana.

Método de placa fluida (MPF).- Este método para el análisis del RHP de las

muestras de agua presenta algunas desventajas que limitan la recuperación de

las bacterias. Como usa agar licuado a una temperatura de 44 a 46 °C, las

bacterias en la muestra de agua están expuestas a la presión del calor, lo cual

puede hacer que los microorganismos no sean viables. Además, como se

emplea un medio rico en nutrientes, es probable que las bacterias

fisiológicamente estresadas o dañadas no se desarrollen debido a alguna forma

de inhibición metabólica. Tanto la presión del calor como el medio de crecimiento

rico producen una recuperación reducida de las bacterias. Otra desventaja es

que mediante este método sólo se puede analizar un máximo de 1,0 ml de

muestra.

II. MATERIALES Muestras:

o M. 3: Agua de pozo.o M. 4: Agua de grifo 1.

Pipetas de 1 ml – 10 ml Placas Frascos Botellas Agar Plate Count

III. PROCEDIMIENTOSMétodo de placa fluida1. Homogenizar la muestra (agitar 25 veces la muestra de agua antes de verter

en placa)

2. Con una pipeta estéril aplicar la cantidad de muestra respectiva para cada dilución.

Para la dilución 100 y 10-1 se toma 1 ml y 0.1 ml respectivamente de la muestra original y se vierte en placa e inmediatamente se le agrega el agar (Agar Plate Count) diluido.

Para la dilución 10-2 y 10-3, se diluye 1 ml de muestra en 49.5 ml de diluyente.

De la dilución se toma 1 ml y 0.1 ml para tener las diluciones 10 -2 y 10-3

respectivamente y se vierten en placas y se agrega inmediatamente el agar diluido.

3. Mover las placas homogéneamente para que la muestra se extienda por toda la placa. Luego dejar que se solidifique el medio e Incubar.

Temperatura ambiente 35°C 24 a 48 horas.

Luego se midió el pH de la muestra de agua.

IV. RESULTADOSPara el recuento se toma las placas cuyo número de colonias este en entre 30-

300 y se multiplica por el factor de dilución.

Conteo:100: + 300 colonias 10-1: +300 colonias 10-2: 280 colonias 10-3: 253 colonias

MUESTRA N° 3

Temperatura Ambiente

Temperatura a 35°C

Conteo:

100: +300 colonias 10-1: + 300 colonias 10-2: 99 colonias 10-3: 26 colonias

Conteo:

100: 225 colonias 10-1: 174 colonias 10-2: 110 colonias. 10-3: 62 colonias

MUESTRA N° 4

Temperatura Ambiente

Temperatura a 35°C

Conteo:

100: + 300 colonias 10-1: 46 colonias 10-2: 11 colonias 10-3: 9 colonias

Recuento= (Σt. Ambiente + Σt.35°C) UFC/ml

TABLAS DE RESULTADOS

MUESTRA N° 3

T. AMBIENTE T. 35°C PROM. UFC UFC/ml100 +300 UFC + 300 UFC -10-1 + 300 UFC + 300 UFC -10-2 99 UFC 280 UFC 189.5 UFC 19 x 104

10-3 26 UFC 253 UFC 139.5 UFC 14 x 105

Recuento: 165 UFC/ml

MUESTRA N° 4

T. AMBIENTE T. 35°C PROM. UFC UFC/ml100 225 UFC + 300 UFC -10-1 174 UFC 46 UFC -10-2 110 UFC 11 UFC 60.5 UFC 61 x 103

10-3 62 UFC 9 UFC 35.5 UFC 36 x 104

pH:

8

Recuento: 48 UFC/ml

V. INTERPRETACÍON La muestra N° 3 presenta 165 UFC/ml. Esta dentro del rango establecido

por el MINSA. La muestra N° 4 presenta 48 UFC/ml. Esta dentro del rango establecido por

el MINSA.

Rango – MINSA: <500 UFC/ml

VI. CONCLUSIONES

Se logró determinar la presencia de heterótrofos en el agua.

Se logró determinar la calidad higiénica del agua la cual es apta para el consumo humano.

Se logró determinar la alcalinidad en la que se encontraba la muestra de agua.

VII. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA:

Madigan, M., J. Martinko y J. Parker, “BROCK BIOLOGIA DE LOS

MICROOORGANISMOS”-8va Edición-Ed. Prentice May-1064pp.

Donald J. Reasoner, Ph.D. Recuento heterotrófico en placas División de

Contaminantes Microbiológicos, WSWRD, NRMRL Agencia de Protección

Ambiental de los Estados Unidos Cincinnati, Ohio 45268. Tomada el 12 de

junio del 2015 de

http://www.bvsde.paho.org/bvsala/e/fulltext/recuento/recuento.pdf.

http://www.digesa.minsa.gob.pe/publicaciones/descargas/

reglamento_calidad_agua.pdf