Recuento Microscopico Directo

7/26/2019 Recuento Microscopico Directo

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RECUENTO MICROSCOPICO DIRECTO: METODO DE BREED

1. INTRODUCCION:

Existen muchos mtodos para la cuantifcacin de microrganismo,

incluyendo mtodos microscpicos, electrnicos (contador Coulter),qumicos (para estimar masa celular), y conteo en placas donde seorman y crecen las colonias de bacterias

El recuento microscopico directo trata de un mtodo para el!recuento de totales!, dado que se contabili"an los microorganismos#i#os y muertos Cuando el mtodo solamente recuenta organismos#i#os se denomina !recuento de #iables

Entre las principales des#enta$as del recuento directo tenemos% sepueden contar clulas muertas y #i#as, difculta el conteo de

bacterias m#iles, se requieren concentraciones de bacteriasadecuadas

En esta tcnica un #olumen defnido se coloca en un portaob$etospara luego ser obser#ado al microscopio El mtodo de recuento de&reed es muy usado en la industria l'ctea, en ste se colocan mlde muestra sobre un portaob$etos con un recuadro de cm*que seti+e con un colorante para luego contar las clulas obser#adas con elob$eti#o de , al fnal el n-mero de bacterias contadas semultiplica por .os recuentos microscpicos tambin se reali"anusando la c'mara de /etro012ausser3 estos mtodos no requieren

tiempo de incubacin

.os estudios relacionados con el an'lisis de muestras como agua,alimentos, leche y aire requieren de una enumeracin cuantitati#a delos microorganismos presentes en estos compuestos, ya que lacalidad microbiolgica de estos productos est' en relacin directa conla calidad sanitaria y la seguridad para el consumo de ellos

2. OBJETIVOS: 4diestrar al estudiante con el mane$o del metodo de extension

de &reed

5eterminar el numero total de microorganismos presentes enuna muestra de alimento por el metodo de breed

3. MATERIAL

MATERIAL BIOLOGICO 4gua

MATERIAL DE LABORATORIO .amina porta ob$etos

/ipeta graduada

6echero

4sa bacteriologica

COLORANTE Y REACTIVO 7ioleta de genciana


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8aranina

4lcohol acetona

.ugolEQUIPO

6icroscopio

4. PROCEDIMIENTO 8obre un porta ob$etos limpio y desengrasado se dibu$o con

un l'pi" un cuadrado de un centmetro cuadrado 8e homogeni"o la muestra problema y con una pipeta se

coloco una gota de la muestra (aproximadamente , ml)sobre el cuadrado y extendio bien sin salirse de l

8e f$o la muestra y se coloreo mediante la tecnica de 9ram

8e obser#o al microscopio

8e conto el n-mero de microorganismos en #arios campos, no

menos de campos .uego se sac un promedio del n-mero de microorganismos

por campo y se multiplic por el actor microscpico .uego, como la muestra usada ue de m.,

multiplicaremos el resultado anterior obtenido por ml parapasarlo a la misma unidad

5. RESULTADOS

ACM= r2

ACM=3.1416

2500

2

ACM=78542

FM= 10

8

7854=12732.4

10712732.40.01ml

x1ml

x=13107

6. COMENTARIO

El metodo de &reed es un metodo de recuento directo que se puedeaplicar para el analisis de muestras en el campo de alimentos nosindica en el numero de celulas o microorganismos esta alterando undeterminado alimento , pero el error de este metodo que cuentacelulas #i#as y muertas

7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS


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4tlas, : 6 ; : &artha * 6icrobial EcologyCummings 8cience /ublishing Collins C2 y .yne/atricia 6 ?@? 6todos 6icrobiolgicos 4C:A&A4 B*= pp

6adigan, 6 , D6 6artino y D /arer *F &roc

&iologa de los microorganismos G Edicin en espa+ol/rentice may Aberia, Espa+a


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DETECCION DE UEVOS Y LARVAS DE PARASITOS

1. INTRODUCCION

.as inecciones parasitarias se encuentran entre los trastornos m'sgenerali"ados que aectan a los ni+os en edad escolar y los residentes

de las "onas pobres de los centros urbanos .a acilidad de lacontaminacin, la alta de saneamiento y las polticas estructuralesque se centraron en la #igilancia de las enermedades parasitariascontribuyeron a esta situacin

.a ineccin alimentaria por proto"oos y helmintos transmitidos por laingestin de #egetales que se comen crudos, es uno de los actoresque conducen a la propagacin de estas enermedades El aguacontaminada por materia ecal de origen humano, a menudo esutili"ada para el riego de $ardines y la contaminacin de los alimentospor manipuladores inectados tambin puede ser una de las causasde contaminacin de #egetales

.a mayora de los par'sitos intestinales se transmiten porcontaminacin del ambiente y en este aspecto, el agua y losalimentos $uegan un papel importante 8i las heces no se eliminan demanera apropiada, los quistes, ooquistes y hue#os de los par'sitosintestinales pueden quedar en el ambiente de las casas o contaminaruentes de agua o culti#os regados con aguas residuales /or lo que seestima que =H del total de muertes en el mundo se deben aproblemas relacionados al agua, desagIe e higiene

Giardia duodenalis, causa giardiasis (9A1are15A41sis), ste es unpar'sito unicelular microscpico que puede #i#ir en los intestinos delos animales y de las personas 8e encuentra en cada reginalrededor del mundo y est' reconocido como una de las causas m'scomunes de enermedades transmitidas por agua (y ocasionalmentepor alimentos)

Taenia saginata (gusano plano de carne de res) y Taenia solium(gusano plano de carne de cerdo) son gusanos par'sitos (helmintos)

aeniasis es el nombre de la ineccin intestinal causada por gusanosplanos en la etapa adulta (gusanos planos de res y cerdo)

Cisticercosis es el nombre de la ineccin del te$ido (adem's deintestinal) causada por esta etapa lar#al del gusano plano de cerdosolamente Es interesante notar que los humanos son los huspedesdefniti#os de ambos organismos Esto signifca que su cicloreproducti#o y la produccin de hue#os por estos microorganismos,slo ocurren dentro de los humanos .os hue#os pasan en las hecesecales y pueden ser excretados al ambiente mientras los gusanospermane"can en el intestino (tanto como por F a+os) En adicin, loshue#os pueden permanecer #iables en el ambiente por muchosmeses Estas enermedades son pre#alecientes en pasessubdesarrollados donde las pr'cticas de saneamiento son sub 1

est'ndares y en 'reas donde la carne de cerdo y de res sonconsumidas crudas o no cocidas completamente


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2. OBJETIVO:

Adentifcar los tipos d ehue#os de parasitos y algunas ormaslar#arias

3. MATERIALBIOLOGICO 6uestras conser#adas conteniendo hue#os y quistes de

parasitos

DE LABORATORIO: .amina portaob$etos

.amina cubre ob$etos

.ugol

9otero

EQUIPO 6icroscopio

4. PROCEDIMIENTO 8e homogeni"o la muestra *B g en **B ml de agua destilada se

la#o y se centriugao para obtener el sedimento 8e agrego lugol y se suspendio el sedimento y se obser#o en el

microscopio

5. RESULTADOS

O!"#$%&'()*:Ascaris sp

A+,#*-) : = x

O!"#$%&'()*:Entamoeba coli


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6. COMENTARIO

.os parasitos pueden ser transmitidos mediante la ingesta dealimentos o agua contaminada ocasionando una serie deenermedades en las personas con malos habitos alimenticios ehigienicos


8olarte ;, /e+a 6, 6adera C ransmisin de proto"oarios

patgenos a tra#s del agua para consumo humano Colomb 6ed*J3 FK()% K=1@* /rIs 4, Lay 5,


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RECUENTO POR EL MTODO DEL N/MERO M0S PROBABLE

1. INTRODUCCIN

El mtodo de n-mero m's probable (N6/) es una estrategiaefciente de Estimacin de densidades poblacionales especialmentecuando una e#aluacin cuantitati#a de clulas indi#iduales no esactible .a tcnica se basa en la determinacin de presencia oausencia en rplicas de diluciones consecuti#as de atributosparticulares de microorganismos presentes en muestras de suelo uotros ambientes /or lo tanto, un requisito importante de estemtodo es la necesidad de poder reconocer un atributo particular dela poblacin(es) en el medio de crecimiento a utili"arse El estimadode densidad poblacional se obtiene del patrn de ocurrencia de eseatributo en diluciones seriadas y el uso de una tabla probabilstica

4lgunas de las #enta$as del N6/ son% (i) la capacidad de estimartama+os poblacionales basados en atributos relacionados a unproceso (selecti#idad)3 por e$emplo se puede determinar la densidadpoblacional de organismos que pueden nodular leguminosas en unamuestra de suelo usando el mtodo de ineccin de plantas, (ii)pro#ee una recuperacin uniorme de las poblaciones microbianasde suelos di#ersifcados, (iii) determina slo organismos#i#os y acti#os metablicamente, y (i#) suele ser m's r'pido e igualde confable

El mtodo requiere la reali"acin de una serie de diluciones en serie

de la muestra de culti#o, en un medio lquido adecuado para elcrecimiento de dicho organismo de un #olumen die" #eces mayor.uego, se incuban las muestras de esos tubos y, pasado un tiempo,se examinan los tubos 4quellos tubos que recibieron una o m'sclulas microbianas procedentes de la muestra, se pondr'n turbios,mientras que los tubos que no recibieron ninguna clulapermanecer'n transparentes

4l aumentar el actor de dilucin, se alcan"a un punto en el quealgunos tubos contendr'n tan slo un microorganismo y otros tubosno contendr'n ninguno 4l calcular la probabilidad de que los tubos

no hayan recibido ninguna clula, se puede estimar el n-mero m'sprobable de microorganismos presentes en la muestra original, apartir de una tabla estadstica

.a precisin del mtodo del n-mero m's probable aumenta con eln-mero de tubos que se usan3 cinco tubos por dilucin se considerancomo una relacin adecuada entre precisin y economa

2. OBJETIVOS

5eterminar el numero aproximado de bacterias #iablespresentes en una muestra de alimento


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3. MATERIAL

BIOLOGICO 6uestra (agua)

DE LABORATORIO ubos de ensayo

/ipetas de y ml

Campana5urhanhttps%>>riunetup#es>bitstream>handle>*B>F@F@>E#aH*9arcHCFH45aH*Calidad

H*leche1*=pdQsequenceR 9radilla 6echero

MEDIOS DE CULTIVO Caldo lactosa bilis #erde brillante (&:A..4)

Caldo triptonado

REACTIVO Lo#acSs

EQUIPOS Estua reguladora a FB 1FKTC &a+o 6aria a == T C

4. PROCEDIMIENTO

8e desinecto la mesa de traba$o con alcohol yodado

8e procedio a tomar la muestra (agua) y se agito parahomogeni"ar la muestra

8e pipeteo ml de muestra original a cada uno de los tresprimeros tubos conteniendo ml de caldo &:A..4 doble

concentrado, ml a los tres siguientes tubos conteniendo&:A..4 a concentracion normal y ml a los tres tubosrestantes con &:A..4 a concentracion normal

8e homogeni"o la siembra adecuadamente y se incubo lostubos a FB1FK TC durante *= a =@ horas

5e cada tubo positi#o (presencia de gas) se sembro unaalicuota en caldo &:A..4 y otra alicuota en caldo triptonado

8e incubo en ba+o maria a ==TC durante *=1 =@ horas

.uego del tiempo de incubacion eectuar la prueba del indol enlos tubos con caldo triptonado para lo cual se adiciono * a Fgotas de reacti#o de o#acs

5. RESULTADOS


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6. COMENTARIO

El numero mas probable (N6/>ml % =F) de coliormes totales en lamuestra de aguaEl crecimiento bacteriano de coliormes en los tubos es reUe$adomediante el cambio de apariencia en el medio que se enturbia y lapresencia de gas que se obser#a en la campana 5urham


CC4;4C161= (*J) VEstimacin de la densidad microbiana

por la tcnica del n-mero m's probable, deteccin de coliormestotales, cliormes ecales y Escherichia coli por el n-mero m'sprobableW


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PASTEURIACION

1. INTRODUCCION

.a pasteuri"acin o pasteri"acin, es el proceso trmico reali"ado

a lquidos(generalmente alimentos) con el ob$eti#o de reducir la

presencia de agentes patgenos(como por e$emplo

ciertas bacterias, proto"oos, mohos, le#aduras, etc) que puedan

contener Este proceso de calentamiento recibe el nombre del que lo

lle# a cabo por primera #e", el cientfco1qumicorancs.ouis

/asteur(@**1@?B) .a primera pasteuri"acin ue reali"ada el *

de abril de @J= por el propio /asteur y su colega Claude &ernard

Yno de los ob$eti#os del tratamiento trmico es una !esterili"acin

parcial! de los alimentos lquidos, alterando lo menos posible suestructura sica, sus componentes qumicos y sus propiedades

organolpticas ras la operacin de pasteuri"acin, los productos

tratados se enran r'pidamente y se sellan hermticamente con

fnes de seguridad alimentaria3 por esta ra"n, es b'sico en la

pasteuri"acin el conocimiento del mecanismo de la transerencia

de caloren los alimentos 4 dierencia de la esterili"acin, la

pasteuri"acin no destruye totalmente las esporasde

los microorganismos, ni elimina todas

las clulasde microorganismos termolicos

.ouis /asteur me$or la calidad de #idaal hacer posible que

productos alimenticios b'sicos, como la leche, se pudieran

transportar largas distancias sin ser aectados por

la descomposicin En la pasteuri"acin, el ob$eti#o primordial no es

la !eliminacin completa de los agentes patgenos! sino la

disminucin sustancial de sus poblaciones, reducindolas a ni#eles

que no causen intoxicaciones alimentariasa los humanos (siempre

que el producto pasteuri"ado se mantenga rerigeradocorrectamente y que se consuma antes de la echa de

caducidadindicada) En la actualidad, la pasteuri"acin es ob$eto de

cada #e" m's polmicas por parte de ciertas agrupaciones de

consumidoresen todo el mundo, debido a las cuestiones existentes

sobre la destruccin de #itaminasy alteracin de las propiedades

organolpticas (sabory calidad) de los productos alimenticios

tratados con este procedimiento
https://es.wikipedia.org/wiki/L%C3%ADquidohttps://es.wikipedia.org/wiki/Alimentohttps://es.wikipedia.org/wiki/Agente_biol%C3%B3gico_pat%C3%B3genohttps://es.wikipedia.org/wiki/Bacteriahttps://es.wikipedia.org/wiki/Protozoohttps://es.wikipedia.org/wiki/Mohohttps://es.wikipedia.org/wiki/Levadurahttps://es.wikipedia.org/wiki/Qu%C3%ADmicohttps://es.wikipedia.org/wiki/Franciahttps://es.wikipedia.org/wiki/Louis_Pasteurhttps://es.wikipedia.org/wiki/Louis_Pasteurhttps://es.wikipedia.org/wiki/Claude_Bernardhttps://es.wikipedia.org/wiki/Propiedades_organol%C3%A9pticashttps://es.wikipedia.org/wiki/Propiedades_organol%C3%A9pticashttps://es.wikipedia.org/wiki/Seguridad_alimentariahttps://es.wikipedia.org/wiki/Transferencia_de_calorhttps://es.wikipedia.org/wiki/Transferencia_de_calorhttps://es.wikipedia.org/wiki/Esporahttps://es.wikipedia.org/wiki/Microorganismohttps://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A9lulahttps://es.wikipedia.org/wiki/Term%C3%B3filohttps://es.wikipedia.org/wiki/Calidad_de_vidahttps://es.wikipedia.org/wiki/Lechehttps://es.wikipedia.org/wiki/Descomposici%C3%B3nhttps://es.wikipedia.org/wiki/Intoxicaci%C3%B3n_alimentariahttps://es.wikipedia.org/wiki/Etiquetado_de_alimentoshttps://es.wikipedia.org/wiki/Etiquetado_de_alimentoshttps://es.wikipedia.org/wiki/Asociaci%C3%B3n_de_consumidoreshttps://es.wikipedia.org/wiki/Asociaci%C3%B3n_de_consumidoreshttps://es.wikipedia.org/wiki/Vitaminahttps://es.wikipedia.org/wiki/Saborhttps://es.wikipedia.org/wiki/Calidad_de_los_alimentoshttps://es.wikipedia.org/wiki/Alimentohttps://es.wikipedia.org/wiki/Agente_biol%C3%B3gico_pat%C3%B3genohttps://es.wikipedia.org/wiki/Bacteriahttps://es.wikipedia.org/wiki/Protozoohttps://es.wikipedia.org/wiki/Mohohttps://es.wikipedia.org/wiki/Levadurahttps://es.wikipedia.org/wiki/Qu%C3%ADmicohttps://es.wikipedia.org/wiki/Franciahttps://es.wikipedia.org/wiki/Louis_Pasteurhttps://es.wikipedia.org/wiki/Louis_Pasteurhttps://es.wikipedia.org/wiki/Claude_Bernardhttps://es.wikipedia.org/wiki/Propiedades_organol%C3%A9pticashttps://es.wikipedia.org/wiki/Propiedades_organol%C3%A9pticashttps://es.wikipedia.org/wiki/Seguridad_alimentariahttps://es.wikipedia.org/wiki/Transferencia_de_calorhttps://es.wikipedia.org/wiki/Transferencia_de_calorhttps://es.wikipedia.org/wiki/Esporahttps://es.wikipedia.org/wiki/Microorganismohttps://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A9lulahttps://es.wikipedia.org/wiki/Term%C3%B3filohttps://es.wikipedia.org/wiki/Calidad_de_vidahttps://es.wikipedia.org/wiki/Lechehttps://es.wikipedia.org/wiki/Descomposici%C3%B3nhttps://es.wikipedia.org/wiki/Intoxicaci%C3%B3n_alimentariahttps://es.wikipedia.org/wiki/Etiquetado_de_alimentoshttps://es.wikipedia.org/wiki/Etiquetado_de_alimentoshttps://es.wikipedia.org/wiki/Asociaci%C3%B3n_de_consumidoreshttps://es.wikipedia.org/wiki/Asociaci%C3%B3n_de_consumidoreshttps://es.wikipedia.org/wiki/Vitaminahttps://es.wikipedia.org/wiki/Saborhttps://es.wikipedia.org/wiki/Calidad_de_los_alimentoshttps://es.wikipedia.org/wiki/L%C3%ADquido


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2. OBJETIVOS

8aber la importancia de la pasteuri"acion en los procesos de

abricacion de alimentos

3. MATERIAL

BIOLOGICO

6uestra (agua)

DE LABORATORIO

/ipetas

/lacas petri

6echero

9radilla

ermometro

7aso de precipitacion

MEDIOS DE CULTIVO:

/C4

EQUIPOS:

Estua

4. PROCEDIMIENTO

4 partir de la muestra original se siembra ml por incorporacion

en dos placas y se agrega el medio /C4 se de$a solidifcar y se

lle#a a incubar *= a =@ horas


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.a muestra se lle#o a tratamiento termico a J=TC por F min y se

sembro ml en dos placas por incorporacion , se agrega el medio

/C4 y se de$o solidifcar y se lle#o a incubar *= a =@ horas

5. RESULTADOS

M+#"-$& )$((*&

/laca R ?=

/laca * R J

X=100=10x101

Yml

P&"-#+$(&'()*No hubo crecimiento microbiano en ninguna de las placas

6. COMENTARIO

8i se redu$o las poblacion microbiana de la muestra de agua lo quedemuestra que este tratamiento es eecti#o para eliminar la Uora#egetati#a presente en los alimentos

7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS !6icrobiologa e higiene de los alimentos!, 2ayes /:, Ed 4cribia

84, Zarago"a, Espa+a, ??F

RECUENTO EN PLACA

1. INTRODUCCION :

En di#ersos estudios microbiolgicos (como an'lisis de alimentos, deagua de bebida, de productos armacuticos o del medioambienteentre otros), se requiere conocer el n-mero de microorganismos

presentes en un material con ob$eto de determinar su calidad Elprocedimiento es esencialmente el mismo que para la medida delcrecimiento de las poblaciones de bacterias El crecimiento depoblaciones microbianas puede determinarse mediante mtodos demedida de la masa total celular, que generalmente es directamenteproporcional al n-mero de clulas, (mtodos de determinacin delpeso, de la acti#idad del culti#o o mtodos turbidimtricos) o por ladeterminacin del n-mero de clulas Es un mtodo muy utili"adocuando se necesita determinar el tama+o de la poblacin bacterianade una muestra

El recuento de microorganismos, en este caso, se basa en que cadauno desarrollar' una colonia #isible /ero debido a que una muestra


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no es totalmente homognea con respecto a su composicinmicrobiolgica, es posible que una colonia se origine de unmicroorganismo o de cientos de ellos, dando en este -ltimo caso unrecuento menor del real ambin es posible que muchas de lasbacterias presentes en la muestra no puedan crecer en las

condiciones elegidas (p2, temperatura, medio de culti#o, tiempo,etc) En este caso el recuento tambin ser' inerior al real .o que sise sabe es que cada colonia obser#ada se orm a partir de por lomenos un microorganismo Esta es una condicin necesaria ysufciente Entonces la colonia es considera una unidad ormadora decolonia (uc) a los eectos de los c'lculos

8e admite, por lo tanto, que en los mtodos de recuento demicroorganismos #i#os, son ine#itables los errores Especialmentecuando se examinan muestras peque+as, es posible cometer grandeserrores

.a tcnica se basa en contar las Vunidades ormadoras de coloniasW oY


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8olucion salina fsiologica

EQUIPOS Ancubadora regulada a FB1 FKT C

4. PROCEDIMIENTO 8e procedio a tomar la muestra de agua y se coloco un ml

apartir de la muestra original en * placas 8e coloco ml de la muestra original en ?ml de 88< ( 1) a partir

de la dilucion se sembro por incorporacion ml en * placas 8e licuo el medio /C4 y se agrego a todas las placas y se de$o

solidifcar 8e lle#o a incubar a FKTC por *=1=@ horas

5. RESULTADOS

6. COMENTARIO

.os resultados obtenidos en la practica estan dentro del rangoestablecido de F1F Yml , al momento de la lectura se obser#o

D(+'()* 11 :

/laca R @ Yml

/laca *R K YmlKx

M+#"-$& )$((*& :

/laca R BJ Yml

/laca *R F Yml

=x

Yml


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contaminantes es decir que no se traba$o de una manera aseptica,mala manipulacion al momento de tomar la muesta, las #entanas alestar abiertas el aire pudo arrastar tierra y eso contamina el medio,etc


8ecretara de 8alud NX61?18841??= &ienes y 8er#icios

/rocedimiento para la oma, 6ane$o y ransporte de 6uestras de4limentos para su 4n'lisis 6icrobiolgico Norma Xfcial 6exicana6xico

8ecretara de 8alud NX6118841??= &ienes y 8er#icios

/reparacin y 5ilucin de 6uestras de 4limentos para su 4n'lisis6icrobiolgico Norma Xfcial 6exicana 6xico

8ecretara de 8alud NX61?*18841??= &ienes y 8er#icios6todo para la cuenta de &acterias 4erobias en /laca NormaXfcial 6exicana 6xico

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