8/18/2019 Recuento de Aerobios Mesófilos

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1. INTRODUCCIÓN

Mesófilos son microorganismos que para su desarrollo necesitan una temperatura

media. En el recuento total de microorganismos mesófilos se determina el número total demicroorganismos aerobios por gramo o mL de alimento, pero sin especificar tipos degérmenes.

Esta determinación refleja la calidad sanitaria de los productos analizados. Tiene unvalor limitado como indicador de la presencia de patógenos o sus toinas!−−−−  "n recuento total de mesófilos bajo no asegura que un alimento esté eento de

patógenos.−−−−  "n recuento alto tampoco significa, inevitablemente, presencia de flora patógena.

Ecepto en productos que se elaboran por fermentación, altos recuentos demesófilos se consideran poco aconsejables para la ma#or parte de los alimentos. $usignificado es diverso!-  Materia prima ecesivamente contaminada.-  %eficientes métodos de manipulación durante la elaboración de los productos.-  La posibilidad, por tratarse de microorganismos mesófilos, de que entre ellos pueda

&aber patógenos, dado que esta flora suele ser mesófila.-  'ltos recuentos suelen ser signo de inmediata alteración del producto. Tasas

superiores a ()*+() de gérmenes por gramo o mL suele ser #a inicio de descomposición.

En general, el recuento de la flora aerobia mesófila es una prueba para conocer lascondiciones de salubridad de algunos alimentos.

2. MÉTODOS DE RECUENTO EN PLACA 

$e utilizan para determinar el número de gérmenes por gramo o mililitro delalimento en estudio, partiendo de la -serie de diluciones decimales. /odemos efectuar elrecuento utilizando!  placas de petri convencionales con medio nutritivo para recuento 0/1'2. ' su vez

podemos efectuar la siembra!-  en masa o profundidad 0técnica de 3arr# modificada2, o-  en superficie4

  en vez de placas de /etri, membranas re&idratables 0/etrifilm , 1ompact %r# 2espec5ficas para recuento de aerobios mesófilos.

2.1. RECUENTO EN PLACA DE PETRI POR SIEMBRA EN MASA O ENPROFUNDIDAD  

  MATERIAL!-  /lacas de /etri estériles vac5as de 6) mm 0las normales2.-  'gar nutritivo de recuento 0/1'2.

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-  /ipetas de ( mL.-  Estufa de cultivo a 7(81.-  1ontador de colonias.

  TÉCNICA (Barry modii!ada"#

- 

' partir de las diluciones decimales, # por duplicado, depositar con una pipeta estéril( mL de cada dilución en otras tantas placas /etri estériles.-  '9adir a cada placa unos (: mL de /.1.'. previamente licuado # atemperado 0a ;:+

;812. El tiempo transcurrido entre el momento de depositar las distintas dilucionesen las placas # verter el medio de cultivo, no debe ser superior a () minutos.

-  Mezclar perfectamente medio e inóculo sobre la mesa &aciendo movimientoscirculares con la placa, a favor # en contra del sentido de las aguja del reloj # enforma de cruz, evitando que el medio impregne la tapa. %ejar solidificar el agar delas placas sobre una superficie &orizontal.

-  $e invierten las placas # se introduce en la estufa. n marcando para evitar contarlas dos veces.-  El n8 de colonias por gramo o mL se calcula multiplicando el n8 de colonias por placa

por el rec5proco de la dilución sembrada.-  El resultado se epresa en! unidades formadoras de colonias por gramo o mL. 0"?1@g

o mL2.

"?1@g o ml A 1 @ ?%

1A n8 colonias contadas?% A factor de dilución

Es lo mismo que!

?% A 1d@1c4 ?% 1c A 1d41c A 1d@?%

?% A factor de dilución1d A concentración disolución diluida 0en la placa que &emos contado2! "?1@ml1c A concentración disolución concentrada 0en el alimento2! "?1@ml o "?1@g

Es lo mismo que!

Media del n8 de colonias de placas duplicadasBecuento 0"?1@ml o "?1@g2 A    

?actor de dilución volumen inoculado en la placa

Ejemplo! en la placa correspondiente a la dilución ()+; &emos obtenido ;: colonias en unade las placas # en la otra placa, de la misma dilución, :( colonias. Cúmero medio de

colonias! 0;: D :(2@= A ; colonias4 la dilución es ()+;

, por lo tanto!

"?1@g A ; @()+; A ; (); ⇒ en el alimento &a# ;, (): "?1@g o ml

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1 ml

Suspension madre 1:10 TW

10-5

 10-4

 10-3

 10-2

 10-1

 

10

Agar PCA

Incubación 31ºC, 72h

Recuento

Método de siembra en masa

Es lo mismo que!;

Becuento 0"?1@ml o "?1@g2 A    A ; (); A ;, (): "?1@g o ml()+;  (

2.2. RECUENTO POR SIEMBRA EN SUPERFICIE  

  MATERIAL!-  /lacas de /etri con agar nutritivo 0/1'2 de recuento estériles.

-  /ipetas de ),( mL o pipetas autom>ticas de ()) µL con puntas de pipeta estériles.-  'sas de %rigalsFi estéril.-  Estufa de cultivo a 7(81.-  1ontador de colonias.

  TÉCNICA -  /reparación de las placas con medio /1'! En varias placas /etri estériles se vierten

unos (: mL de /1', previamente licuado # enfriado a ;81, # se deja que solidifiqueen una superficie &orizontal.  /ara secar la superficie del agar se introducen lasplacas en la estufa, colocando la parte que lleva el agar en posición invertida #apo#ada en la tapa. Estar>n dispuestas para el uso cuando se &a#a secado el agua decondensación de la superficie. Cunca se deben secar a temperatura superior a ;: 81.

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-  /artiendo de las diluciones decimales, # por duplicado, se transfieren ),( mL de cadauna de ellas a las placas con /1'. El inóculo se disemina por toda la superficie delagar, sin romperlo, con el asa de %rigalsFi estéril.

-  Esperar = ó 7 minutos a que se seque el inóculo.-  1olocar las placas en la estufa a 7( ± (81 durante = &.

-  Bealizar el recuento de colonias como en el caso anterior.-  El n8 total de colonias contadas, multiplicado por el rec5proco de la dilución, dar> elrecuento total de mesófilos en ),( g de alimento # para epresarlo en ( g o mL, &abr>que multiplicar por ().

"?1@ml o g A 1 (@?% ()1A n8 colonias contadas?%A factor de dilución

Es lo mismo que!

Media del n8 de colonias de placas duplicadasBecuento 0"?1@ml o "?1@g2 A    

?% ),(

Ejemplo! en la placa correspondiente a la dilución ()+7 &emos obtenido *= colonias en unade las placas # en la otra placa, de la misma dilución, * colonias. Cúmero medio decolonias! 0*= D *2@= A *: colonias4 *: colonias @),( ml de la dilución ()+7 , luego en elalimento!

ufc A 1 (@?% ()

u.f.c.@ml o g A *: ()7

  () A *: ();

 A *,: ():

 Es lo mismo que!

*:u.f.c.@ml o g A    A *,: (): 

()7  ),(Método de siembra en superficie

0,1ml

Suspensión madre 1:10 TW

10-5

 10-4

 10-3

 10-2

 10-1

 

10

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2.$. RECUENTO UTILI%ANDO COMPACT DR& PLATES

Gtra alternativa, cada vez m>s utilizada es utilizar, en vez de placas de /etriest>ndar, membranas re&idratables 0P'rii)m, Com*a! Dry2 espec5ficas para recuento de

aerobios mesófilos. 'mbas utilizan una cuadr5cula para facilitar el recuento # sustratoscromogénicos para visualizar mejor las colonias.

"tilizaremos el sistema Com*a! Dry TC *ara r'!+',o oa)

  MATERIAL -  1ompact dr# plates T1 0tantas como diluciones va#amos a realizar2. En este medio

cromogénico las colonias aparecen de color rojo 0medio contiene agar de cultivoest>ndar # debido a la sal de tetrazolio, indicador redo, las colonias de bacteriaspresentan una coloración roja, pudiéndose con ello distinguir mu# f>cilmente de

posibles restos de alimentos2.-  /ipetas estériles de ( mL o pipetas autom>ticas ( mL con puntas de pipeta estériles.-  Estufa de cultivo a 7(81.-  1ontador de colonias.

  TÉCNICA -  'brir la 1ompact %r# /late, a9adir ( ml de cada una de las diluciones en el centro de

la placa. Esperar unos segundos a que autodifunda. $in m>s, cerrar, marcar los datos.$e suelen realizar duplicados e incluso triplicados de cada dilución. 

-  rea de la placa son =) cm =! $i ladistribución de colonias es &omogénea, puede contar un cuadrado # multiplicar por=), #a que éstos son de ( cm=. 

Media del n8 de colonias de placas duplicadasBecuento 0"?1@ml o "?1@g2 A    

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