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CLASES TEÓRICAS:

Viernes de 11:00 a 13:00 hs. (Campus Ntra. Sra. del PILAR)

TRABAJOS PRÁCTICOS:

Martes (INTA Castelar)

Com. A: 09:00 a 11:00 hs.

Com. B: 11:00 a 13:00 hs.

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http://helminto.inta.gob.ar/alumnos.htm

DIRECCIONES ÚTILES:

OBJETIVO:

Determinar la presencia de parásitos adultos o de diferentes

estadios evolutivos.

En PARASITOLOGÍA, el análisis de materia fecal es el exámen

más frecuente, donde se pueden encontrar numerosos

parásitos, y con mayor frecuencia sus huevos.

DIAGNÓSTICO PARASITOLÓGICO

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MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO

1. Métodos directos:

Búsqueda de los parásitos, sus huevos, ó sus larvas y posterior

identificación mediante exámenes macroscópicos ó

microscópicos.

Técnicas:

a) Flotación / sedimentación

b) Biológicas (inoculación experimental)

2. Métodos indirectos:

Test serológicos

1. MACROSCÓPICO:

Consistencia, color, sangre, moco, parásitos

EXAMEN DE MATERIA FECAL

2. MICROSCÓPICO:

Cualitativo:

a) Frotis directo

b) Enriquecimiento

(flotación y sedimentación)

Cuantitativo:

McMaster modificado (HPG: huevos por gramo)

http://cdigital.uv.mx/bitstream/123456789/30786/1/MendezManuel.pdf

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TOMA Y REMISIÓN DE MUESTRAS

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L3

L1 L2 L3

10 DIAS

L3 L4 Adultos

Entradas y Salidas: Entran: L3 Salen: Huevos

Día 1

Huevos

Día 21

Ciclo biológico de los nematodes gastrointestinales

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1. Preparar el material necesario para la toma de muestra.

2. Confeccionar protocolo:

• Fecha

• Formulario de antecedentes

• Anamnesis

3. Extracción de muestras

• Establecimiento • Profesional actuante • Material remitido • Explotación • Edad y cantidad de animales

DIAGNÓSTICO DE GASTROENTERITIS VERMINOSA:

Toma y remisión de muestras

• LA MUESTRA DEBE SER INDIVIDUAL

• TOMAR LA MUESTRA RECIENTEMENTE EMITIDA (consultorio: termómetro)

• No mezclar (contaminar) la muestra con ORINA

• Análisis seriado (3 deposiciones de 3 días seguidos)

• Frasco limpio y desengrasado

• Formol al 5%

• Cucharitas plásticas o bajalenguas

Algunas consideraciones de la toma de

muestra de materia fecal

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OBTENCIÓN DE LAS MUESTRAS DE MATERIA FECAL

EXTRACCIÓN DE LA MUESTRA DE MATERIA FECAL

SE REGISTRA LA IDENTIFICACIÓN DEL ANIMAL

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SE IDENTIFICA LA MUESTRA

• NO USAR CONSERVANTES QUÍMICOS (formol)

• ENVÍO en cajas de telgopor REFRIGERADAS

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PARA DIAGNÓSTICO DE HEMOPARÁSITOS.

• Obtención:

Venas marginal de la oreja o yugular.

• Envío:

Anticoagulada (EDTA) y refrigerada.

Para diagnóstico de TRICHOMONIASIS

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Enfermedad parasitaria producida por el protozoario Trichomona foetus.

TRICHOMONIASIS

El toro enfermo (portador asintomático crónico) transmite la enfermedad durante el coito. También puede transmitirse a través del semen congelado.

Pérdidas económicas: • Muerte del embrión (momificados), abortos (1° tercio de la preñez). • INFERTILIDAD.

www.veterinaria.uanl.mxx

• Obtención de prepucio:

- Raspado

- Lavado

- Hisopado • Envío:

Medios de cultivo

www.engormix.com

1- Toros 2- Vacas 3- Fetos abortados

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SARNA Raspado de piel con vaselina

• Garrapatas Formol al 10%

• Piojos

• Miiasis

Ácaros de la sarna

Piojos

Miiasis

Garrapatas

Ácaros productores de la sarna Psoróptica

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SARNA PSORÓPTICA

SARNA PSORÓPTICA

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Técnicas de diagnóstico más empleadas

en el laboratorio de Parasitología

• HPG (recuento de huevos por gramo de materia fecal)

• OPG (recuento de ooquistes por gramo de materia fecal)

• Cultivo de larvas (Técnica de Corticelli-Lai)

• Técnica de flotación de Willis

• Baermann

• Dennis, Stone y Swanson

• Necropsia parasitaria

• Lavado de pasto

MACROSCÓPICO

MICROSCÓPICO

Cualitativo

Directo

Enriquecimiento

Flotación

Sedimentación

Cuantitativo

McMaster modificado (HPG) (ovinos/bovinos)

Parasitómetro

EXÁMEN DE MATERIA FECAL

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Técnica del HPG (Huevos por gramo de materia fecal)

Técnica del HPG

• Muestreo individual

• Método cuantitativo

• Indica el grado de contaminación de las pasturas

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Técnica del HPG: elementos para su realización

Pesar 5 g de materia fecal

Técnica del HPG: metodología

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Técnica del HPG: metodología

1 2

3

Técnica del HPG: metodología

Cámara de McMaster

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Técnica del HPG

Haemonchus, Ostertagia, Trichostrongylus

Cooperia, Bunostomum

Nematodirus

Strongyloides papillosus

Trichuris

Cestodos

Doble membrana

Cámara de aire

Células blastomerales

Huevo de Nematodo Gastrointestinal Indiferenciado

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Técnica del HPG

Nematodirus Cestodos

Trichuris

El número de huevos eliminados en materia fecal depende:

1. Género de parásitos: poseen diferente “potencial biótico”

Haemonchus: 10.000 huevos por día

Ostertagia y Trichostrongylus: 200 a 300 huevos por día

2. Edad de los animales: hasta 15 meses

3. Estado inmunitario de los animales:

• Stress • Desnutrición • Enfermedades concomitantes

Técnica del HPG: interpretación

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¿ Cómo se expresa el valor final del HPG ?

BOVINOS

OVINOS

Lectura de 2 celdillas Lectura de 4 celdillas

N x 14

El número de huevos contados (N) se multiplica por:

N x 7

N x 20 N x 10

2 ml N huevos

70 ml 70 x N / 2: 35 N

5 gramos 35 N

1 gramo 35 N x 1 g / 5 g: 7 N

BOVINOS:

Si se leen 4 celdillas (2 ml) de la Cámara de McMaster

Si se leen 2 celdillas (1 ml) de la Cámara de McMaster

1 ml N huevos

70 ml 70 x N / 1: 70 N

5 gramos 70 N

1 gramo 70 N x 1 g / 5 g: 14 N

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Técnica del OPG (Oooquistes de coccidios por gramo de materia fecal)

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TÉCNICA DE FLOTACIÓN DE WILLIS

Método cualitativo y de concentración

• Principio: recuperación de los huevos y ooquistes por flotación.

• Diagnóstico de huevos de nematodes GI y coccidiosis.

Técnica de flotación de Willis

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1- Triturar 5 g de heces en un mortero con solución salina

sobresaturada.

2- Filtrar con un colador común.

3- Verter el contenido en un tubo de Willis de 20 cc y dejar

reposar 30’.

4- Colocar un portaobjetos encima del tubo.

5- Invertir el portaobjetos y observar al microscopio.

Metodología:

Técnica de flotación de Willis

Metodología:

Técnica de flotación de Willis

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CULTIVO DE LARVAS

(Técnica de Corticelli-Lai)

• Método cualitativo

• Permite diagnosticar los géneros de las L3 infectivas de NGI

• Cámara húmeda

• Placas de Petri

• Duración: 10 días a temperatura ambiente o estufa

Técnica de cultivo de larvas (Corticelli-lai)

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Técnica de cultivo de larvas (Corticelli-lai)

A los 10 días, se invierte la placa de Petri chica,

y por hidrotropismo las L3 se dirigen hacia el agua

Técnica de cultivo de larvas (Corticelli-lai)

Las L3 obtenidas del cultivo se concentran por sedimentación.

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Larva 3 obtenida mediante la Técnica de Corticelli y Lai (coloración con Lugol)

Larva 3 obtenida mediante la Técnica de Corticelli y Lai (coloración con Lugol)

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Estructura de una L3 infectiva de nematodes

gastrointestinales

Clave para identificación de larvas infectantes de

nematodes gastrointestinales de bovinos y ovinos

Strongyloides

papillosus

Bunostomum

Spp.

Trichostrongylus

Ostertagia Haemonchus Cooperia Nematodirus

Oesophagostomum y

Chabertia

http://cnia.inta.gov.ar/helminto/Niec/fig4.htm

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TÉCNICA DE BAERMANN

• MÉTODO CUALITATIVO

• PRINCIPIO:

Por hidrotropismo +, las larvas pasan de las heces hacia el agua.

Características de las larvas de Dictyocaulus spp.:

• Metacromáticas

Azul de metileno

Lila

• Cola corta

• Lazy (perezosas)

Técnica de Baermann

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• En el embudo lleno de agua tibia se coloca una

malla metálica de 150 µm.

• Sobre la misma se distribuye una capa delgada

de materia fecal fresca, de manera que las heces

queden cubiertas por el agua.

• Recoger el sedimento en 24 h (L1).

• Colorear con “azul de metileno” y leer con lupa.

Técnica de Baermann

Metodología:

Técnica de Baermann

Metodología:

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TÉCNICA DE

DENNIS, STONE y SWANSON

Método cualitativo

Principio: recuperación de los huevos por sedimentación

Fasciola hepatica adulta

Huevos de Fasciola hepatica

Técnica de Dennis Stone y Swanson

Fasciola hepatica y Macracanthorynchus hirudinaceus

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1- Triturar 5 g de heces (ovinos) y 10 g (bovinos y equinos)

en un mortero con agua corriente.

2- Filtrar con un colador común.

3- Verter en un vaso cónico y completar con 500 cc de agua.

4- Dejar reposar 10’, sifonar, y completar hasta 500 cc con agua.

5- Repetir el paso anterior por 5’ y luego por 3’.

6- Tomar el sedimento y leer con lupa agregando lugol.

Metodología:

Técnica de Dennis, Stone y Swanson

Metodología:

Técnica de Dennis, Stone y Swanson

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TÉCNICA DE NECROPSIA PARASITARIA

APARATO GASTROINTESTINAL

Es el método más preciso porque nos permite recuperar,

contar e identificar los géneros de parásitos presentes.

Se estudian cada órgano por separado.

NECROPSIA PARASITARIA

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NECROPSIA PARASITARIA: separación de cada uno de los compartimientos

APARATO GASTROINTESTINAL

• Se recupera 1 litro del lavado de cada órgano

• Se adiciona formol al 10%

• Se envía el cuajar “refrigerado” para realizar la técnica

de maceración para diagnóstico de “ostertagiosis inhibida”

NECROPSIA PARASITARIA

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3

1

4

2

NECROPSIA PARASITARIA: lavado del cuajar

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Observación de vermes adultos (Haemonchus placei)

NECROPSIA PARASITARIA: lavado del cuajar

Edema, congestión y petequias de la mucosa del cuajar

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Nódulos de Ostertagia ostertagi en el cuajar de bovino

Lesiones severas (score III) Lesiones leves (score I)

OSTERTAGIOSIS

Ostertagiosis inhibida: “Técnica de maceración del cuajar”

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1 2

3 4

NECROPSIA PARASITARIA: lavado intestinal

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• Se realiza inspección, palpación y cortes.

• Se observa permeabilidad de la vesícula biliar (Fasciolosis crónica).

HÍGADO

NECROPSIA PARASITARIA

Fasciola hepatica: adultos y estadíos juveniles (fasciolómulos)

Quistes hidatídicos: vesícula con líquido a presión

Ejemplar adulto de Fasciola hepatica

HÍGADO

NECROPSIA PARASITARIA

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Dictyocaulus viviparus (bovinos)

Dictyocaulus filaria (ovinos)

PULMÓN

NECROPSIA PARASITARIA

PULMÓN

NECROPSIA PARASITARIA

Dictyocaulus spp.

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TÉCNICA DE LAVADO DE PASTO

1. Recolección de la muestra

2. Lavado

3. Observación y conteo de las larvas

Técnica de “Lavado de pasto”

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Técnica de “Lavado de pasto”: recolección de la muestra

• Se hace temprano en la mañana

• El área elegida se divide en rutas

• Se corta un puñado de pasto con tijera (1 puño)

• Se procede al lavado

• Cada muestra se sumerge en balde con agua y se deja por 24 hs.

• Se extrae el pasto y se deja secar hasta peso constante.

• Se deja sedimentar el agua en el balde por 1 hora.

• Se sifona hasta que queden 2 litros en el balde y se transpasa a

una probeta de 2 litros.

Técnica de “Lavado de pasto”:

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• Se concentran las larvas por sifonación y sedimentación hasta un

volumen de 250 cc.

• 1º centrifugación a 2000 rpm durante 30’ con agua.

• 2º centrifugación a 2000 rpm durante 30’ con Benbrook.

• Se lleva a 2 litros de agua y se procede nuevamente a concentrar por

sifonación y sedimentación.

• Se concentra hasta obtener un volumen de 10 cc.

• Se procede a la lectura.

Técnica de “Lavado de pasto”:

• Se lleva a 1 cc y se toman 3 muestras de 40 µl c/u

• Se colocan en portaobjetos y se agrega lugol

• Se cuentan las L3

• Se promedian los conteos y se calcula el N° L3/kg de pasto seco

Técnica de “Lavado de pasto”: observación y conteo de L3

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Niveles de infección de las pasturas por NGI y potencial de pérdidas productivas en las distintas categorías

Fuente: Steffan P., Fiel C., Ferreyra D.

Niveles de infección de las pasturas por NGI y potencial de pérdidas productivas en las distintas categorías

Fuente: Steffan P., Fiel C., Ferreyra D.

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