IED COLEGIO LAS MERCEDEZ COLSUBSIDIOTÉCNICO EN PRODUCCIÓN BIOTECNOLÓGICA DE MATERIAL VEGETAL

COMPETENCIA: SEMBRAR EL MATERIAL VEGETAL DE ACUERDO CON LOS PROTOCOLOS PLANTEADOS

ACTIVIDAD DE ENSEÑANZA-APRENDIZAJE: Conocer las características de los microorganismos contaminantes y su forma de control

PRACTICA DE MORFOLOGÍA MICROBIANAMARCO TEÓRICO: Uno de los problemas más importantes en el desarrollo de la biotecnología vegetal y especialmente del cultivo in vitro de células y tejidos ha sido la contaminación microbiana. Las contaminaciones siguen teniendo un alto índice de afectación, sobre todo en la fase de multiplicación donde se reportan pérdidas significativas por bacterias, hongos, levaduras, fitoplasmas y virus. Muchos de estos agentes no ocasionan daños en campo sino durante el cultivo in vitro, frecuentemente denominados como vitropatógenos. La mayoría de los métodos empleados con fines de detección son complejos y costosos, reportándose una gran lista de microorganismos, fundamentalmente bacterias, en muchos cultivos micropropagados.

MATERIALES Y MÉTODOS: Muestras de cultivos contaminados Asa recta, asa curva gotero Laminas, laminillas Azul de metileno Cristal violeta Lugol Fucsina básica Alcohol Microscopio Aceite de inmersión o glicerol Marcadores de vidrio o lápiz de vidrio

Coloración de Gram Bacterias:a. Las laminas se deben encontrar en un frasco con alcohol para desengrasarse

b. Deje secar al ambiente las laminas o con una toalla de papel

c. Con el gotero coloque una gota de agua corriente y realice una emulsión de la muestra.

d. Deje secar al ambiente

e. Ya seca marque la lamina con el nombre de la muestra de tal manera que no se borre cuando realice la tinción

f. Flamee la muestra tres veces

g. Ubíquese en un lavaplatos para realizar la tinción observe que tenga los colorantes a la mano

h. Cubra con cristal violeta 1 min, lave con agua

i. Cubra el frotis con lugol 1 min, lave con agua

j. Cubra el frotis con alcohol o acetona 30 segundos lave con agua

k. Y por ultimo cubra el frotis con fucsina básica o safranina 1 min y lave con agua, deje secar al ambiente

l. Ubique la lamina en el microscopio y observe 4x, 10 x y 40 x cuando ya tenga enfocado en este aumento baje completamente el portaobjetos, abra el portaobjetos, condicione toda la luz del microscopio agregó una gota de aceite de inmersión sobre el frotis y enfoque.

m. Recuerde diagrame tanto macro como microscópicamente la muestra en los diferentes aumentos.

n. Realice lo mismo con una muestra proveniente de su saliva. y correlacione los resultados, identifique morfologías y tipos bacterianos

Tinción con azul de metileno Hongos:

a. Diagrame la muestra que considera que se encuentra contaminada por un agente fúngico

b. Tome una lamina deje secarla, tome una gota de agua y realice una emulsión con el material recuperado del medio.

c. Distribuya la muestra homogéneamente sobre la lamina, adicione una gota de azul de metileno sobre la muestra y luego una laminilla.

d. Limpie los excesos y observe al microscopio, en 4x, 10x y 40 x diagrame la visualización de cada uno de los aumentos e identifique las estructuras fúngicas y dibújelas lo más detalladamente.

Cuestionario:1. Realice una investigación sobre el fundamento de las tinciones empleadas en el

laboratorio2. ¿Que microorganismos son los mas habituales contaminantes en cultivos in vitro?

¿cuál es su origen?3. ¿Que actividades contribuyen y disminuyen la contaminación del material

micropropagado?