Practica Biologia 2013-II (1-4)

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA PROFESIONAL QUIMICA

M A N U A L D E P R A C T I C A S

L A B O R A T O R I O DE

B I O L O G Í A

CH 061

SEMESTRE ACADEMICO 2013-1

PILAR GARCÍA AVELINO

Jefe de Prácticas

Manual de Prácticas: Laboratorio de Biología

2

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA PROFESIONAL DE QUÍMICA BIOLOGÍA (CH 061)

Cronograma de Practicas de Laboratorio de BIOLOGÍA - CH 061

LABORATORIO Fecha de ejecucion

Entrega de Informe

CLASE INTRODUCTORIA AL LABORATORIO

10 y 11 de setiembre

1. Reconocimiento de Biomoléculas 17 y 18 setiembre 24 y 25 set.

2. Extracción de ADN 1 y 2 octubre 9 oct.

EXAMENES PARCIALES 14 ó 16 octubre* NO HAY

LABORATORIO

3. Amilasa salival 22 y 23 octubre 29 y 30 oct.

PRACTICA CALIFICADA 1: Análisis de un artículo científico

30 octubre

EXPOCIENCIA 5 al 8 noviembre NO HAY

LABORATORIO

4. Hongos ambientales 12 y 13 noviembre 19 y 20 noviembre

PRACTICA CALIFICADA 2 Bioseguridad y Laboratorios: 1, 2, 3

25 de noviembre En la clase de

TEORIA!

EXÁMENES FINALES 09 ó 11 diciembre* NO HAY

LABORATORIO

EXÁMENES SUSTITUTORIOS 16 ó 18 diciembre* NO HAY

LABORATORIO

En la fecha de realización de los laboratorios se entregaran los preinformes correspondientes. * Las fechas definitivas de los exámenes parcial, final y sustitutorio serán definidas por el Dr. Guy Carvajal

Prof. Pilar García Avelino


3

PRESENTACION DEL MANUAL DE PRÁCTICAS

El propósito del Laboratorio es familiarizar al estudiante con la metodología de trabajo de la biología, proporcionarle un ambiente donde tenga oportunidad de encontrarse con sustancias e instrumentos que le motive a experimentar.

Considerando al laboratorio como un lugar donde el trabajo en equipo se facilita, da lugar a un proceso de constante integración, comunicación, investigación, construcción de ideas, surgimiento de nuevas preguntas, donde las actividades experimentales propician la reorganización de conocimientos y facilitan el alcanzar un aprendizaje significativo.

Para logra tales fines, se propone esta guía que, como material de apoyo didáctico, reforzara el proceso constante de enseñanza aprendizaje, requiriendo la participación y guía del profesor.

Material necesario para trabajar por alumno:

Individualmente: un mandil, gafas de seguridad, guantes, plumón marcador, toalla, cuaderno

de apuntes.

Por equipo: El que se indique para cada práctica.

INSTRUCCIONES GENERALES.

1. Busca conceptos, antecedentes previos a la realización de las prácticas.

2. Construye la hipótesis de trabajo, antes de solicitar su material.

3. Lee cuidadosamente los experimentos antes de ejecutarlos.

4. Recurre a tus libros de texto y/o consulta para aclarar dudas después de realizadas las

practicas, o consulta al profesor responsable.

5. Al efectuar cada uno de los pasos del desarrollo experimental, observa minuciosamente

y anota los cambios ocurridos.

6. Al concluir el desarrollo experimental, resuelve el cuestionario para su futura revisión.

7. Elabora tus conclusiones.

PRECAUCIONES PARA EL DESARROLLO DE CADA EXPERIMENTO

Las medidas oportunas y la compresión de las prácticas a seguir, hará del laboratorio un

lugar seguro como cualquier ambiente de clases.

Para ello deberán tenerse en cuenta, en forma general las siguientes precauciones:

1. Observa donde dejas el material caliente, cerciorándote que este frio antes de tomarlo

con la mano.

2. Cuando calientes un tubo de ensayo, no lo apuntes hacia ti o hacia tus compañeros,

pude proyectarse su contenido.

3. Si cae sobre ti o en tu ropa un material corrosivo, lávate inmediatamente con

abundante agua, e infórmalo al profesor del curso.

4. Nunca pruebes una sustancia.

5. Al detectar el olor de un liquido, no coloques la cara sobre la boca del recipiente, con

tu mano abanica hacia ti el aroma.

6. Antes de usar un reactivo lee dos veces la etiqueta de su contenido.

7. Los tubos de ensayo no pueden calentar ser por el fondo sino por las paredes, para

evitar su expulsión del contenido.

8. No arrojes cuerpos sólidos en los lavaderos, no viertas directamente los ácidos.

9. Rotula tu material de trabajo, así te será fácil identificarlos.

10. Cuando trabajes con el mechero mantén tu cabello recogido.

11. Nunca emplear papel para encender el mechero.


4


PRESENTACION DEL INFORME

No olvidarse de indicar el grupo de laboratorio (incluido horario) que pertenecen: A1, A2, B1, B2, C1, C2

I. Resumen (1 p)

¿Qué teorías lo sustentan? En relación al desarrollo de los experimentos.

II. Objetivos específicos (1 p) Tema central de estudio para cada experimento desarrollado

III. Observaciones experimentales, datos y resultados (para c/experimento) (3 p) Durante el desarrollo del experimento: Qué se observó? Qué datos hubieron? ¿Cuáles fueron los resultados?¿Qué reacciones se dieron? Se indican los resultados tal y como se dieron durante la investigación. Se debe describir los pasos ejecutados durante la experimentación

Se pueden presentar los datos en tablas, gráficas, o figuras, debidamente numeradas IV. Discusión de las observaciones experimentales, datos y resultados (3 p)

¿Se obtuvieron los resultados correctos según la teoría? ¿Si, no? ¿Qué sucedió? Es la etapa que encadena los resultados obtenidos por la investigación. Se relaciona, interpreta y discute los resultados. Se pone a prueba la capacidad analítica y de autocrítica del investigador. La discusión pone el toque personal al trabajo.

V. Conclusiones (2 p) ¿Qué significan los resultados? Las conclusiones están relacionadas con los objetivos. Es el análisis del cumplimiento de cada uno de los objetivos de la práctica

VI. Cuestionario (1.5 p) Preguntas relacionadas al tema

VII. Bibliografía (0.5 p)

¿Qué autores se consultaron para fundamentar la investigación? ¿Qué fuentes han sido consultadas (libros, artículos, tesis? REVISAR: Referencias Bibliografías al estilo Vancouver, en: http://www.unap.cl/p4_biblio/docs/Normas_VANCOUVER.pdf

http://www.unap.cl/p4_biblio/docs/Normas_VANCOUVER.pdf


5


PREINFORME DEL LABORATORIO Nº 1

RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS

Nombre del Alumno: Calificación

Grupo:

Fecha:

Recuerde que el PREINFORME debe de entregarlo de manera individual, el día de realización del laboratorio,

se presenta en hojas A4 bond, que tiene un peso máximo de 4 ptos. sobre la nota del Laboratorio.

1. Realice el DIAGRAMA DE FLUJO de los experimentos a desarrollar PROCEDIMIENTO,

realice un esquema de trabajo de cada experimento.

Es el plan ordenado de la forma en que se realizó la práctica para lograr el objetivo de la

misma. (2 puntos)

Ejemplo:

Se indica el proceso (…Se adiciona… se separa)

a. Identificación de azucares reductores

b. Hidrolisis de la sacarosa

c. Reconocimiento del almidón

d. Reconocimiento de proteínas

e. Reconocimiento de lípidos

2. Cuestionario:

a. Mencione algunos carbohidratos alimenticios, según la clasificación de la siguiente

tabla:

Monosacáridos (3 ej.)

Disacáridos (3 ej.)

Oligosacáridos (1 ej.)

Polisacáridos (2 ej.)

b. ¿Qué es la inversión de la sacarosa?

c. ¿Qué sucede “químicamente” al añadir lugol a las muestras positivas para la reacción?

d. ¿Cuál es la reacción que tiene lugar entre el reactivo de Biuret y las proteínas?

e. ¿Cuál es el valor de la polaridad de la acetona y el cloroformo?

3. Bibliografía: cite correctamente la bibliografía consultada

A

B

C


6


GUIA DE LABORATORIO Nº 1


INTRODUCCIÓN

En los organismos se encuentran cuatro tipos diferentes de moléculas orgánicas en gran

cantidad: carbohidratos, lípidos, proteínas y nucleótidos. Todas estas moléculas contienen

carbono, hidrógeno y oxígeno. Además, las proteínas contienen nitrógeno y azufre, y los

nucleótidos, así como algunos lípidos, contienen nitrógeno y fósforo.

Se ha dicho que es suficiente reconocer cerca de 30 moléculas para tener un conocimiento que

permita trabajar con la bioquímica de las células. Dos de esas moléculas son los azúcares

glucosa y ribosa; otra, un lípido; otras veinte, los aminoácidos biológicamente importantes; y

cinco las bases nitrogenadas, moléculas que contienen nitrógeno y son constituyentes claves

de los nucleótidos.

En esencia, la química de los organismos vivos es la química de los compuestos que contienen

carbono, es decir, los compuestos orgánicos.

El carbono es singularmente adecuado para este papel central, por el hecho de que es el

átomo más liviano capaz de formar múltiples enlaces covalentes. A raíz de esta capacidad, el

carbono puede combinarse con otros átomos de carbono y con átomos distintos para formar

una gran variedad de cadenas fuertes y estables y de compuestos con forma de anillo. Las

moléculas orgánicas derivan sus configuraciones tridimensionales primordialmente de sus

esqueletos de carbono. Sin embargo, muchas de sus propiedades específicas dependen de

grupos funcionales. Una característica general de todos los compuestos orgánicos es que

liberan energía cuando se oxidan. Entre los tipos principales de moléculas orgánicas

importantes en los sistemas vivos están los carbohidratos, los lípidos, las proteínas y los

nucleótidos.

OBJETIVOS

Determinar cualitativamente los azucares reductores.

Hidrolizar la sacarosa.

Reconocer la presencia de almidón.

Reconocer cualitativamente las proteínas presentes en muestras biológicas.

Demostrar la solubilidad de los lípidos en diferentes tipos de solventes.

MATERIALES Y REACTIVOS Tubos de ensayo, mechero, placas petri, vasos de precipitado, gradillas, pipetas graduadas,

propipetas, pinzas de madera, pisceta, almidón.

Reactivo de Fehling, solución de azucares, solución de almidón, acetona, cloroformo, sulfato de

cobre, hidróxido de sodio

Por grupo: un huevo, 5 ml leche, 1 papa (elementos crudos)


7

IDENTIFICACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES (I)

FUNDAMENTO

Los monosacáridos (figura 1) y la mayoría de los disacáridos poseen poder reductor, que

deben al grupo carbonilo que tienen en su molécula. Este carácter reductor puede ponerse de

manifiesto por medio de una reacción redox, llevada a cabo entre ellos y el sulfato de cobre (II).

Tras la reacción con el glúcido reductor se forma óxido de cobre (I) de color rojo. De este modo

el cambio de color indica que se ha producido la reacción y que el glúcido presente es reductor.

Figura N°1. Algunos monosacáridos

Reacción de Fehling:

Es una reacción cualitativa que sirve para determinar la presencia de un azúcar reductor que

no sea sacarosa (carece de carbono anomérico y no es azúcar reductor).

El reactivo de Fehling presenta sulfato de cobre, carbonato de sodio, citrato de sodio, y agua.

En la reacción para determinar a los azucares reductores los agentes estabilizantes de la

reacción son el carbonato y citrato, el sulfato de cobre es el reactante específicamente el Cu

que va a reaccionar con los grupos químicos de aldehídos y cetonas. Que en reacciones de

oxido reducción el Cu se convierte en CuO dando un color rojo ladrillo que precipitará

posteriormente, como lo expresa la siguiente reacción (figura 2):

Figura N°2. Reacción de Fehling

PROCEDIMIENTO

- Rotular 6 tubos de ensayo, adicionar el azúcar correspondiente.

- Adicionar los reactivos en el orden señalado

- Mezclar por inversión el reactivo con cada uno de sus componentes

- Someter a la acción del calor hasta ebullición

- La reacción será positiva si en la muestra se forma un precipitado color rojo ladrillo

(CH2O), y será negativa si se queda azul o cambia a un tono de azul-verdoso.


8

Tabla N°1. Azucares reductores

COMPONENTES TUBO DE ENSAYO

1 2 3 4 5 6

1.Solución de glucosa 1% 3 ml

2.Solución de maltosa 1% 3 ml

3.Solución de lactosa 1% 3 ml

4.Solución de fructuosa 1% 3 ml

5.Solucion de galactosa 1% 3 ml

6.Solución de sacarosa 0.5% 3 ml

Reactivo de Fehling A 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml

Reactivo de Fehling B 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1ml 1 ml

Calor: ebullición (aprox. 5´) mechero / baño maría

GRAFICAR / ESQUEMATIZAR / ANOTAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS (De las distintas muestras)


9

HIDROLISIS DE LA SACAROSA (II)

FUNDAMENTO La sacarosa (figura 3) es un disacárido que no posee carbonos anoméricos libres por lo que

carece de poder reductor y la reacción con el licor de Fehling es negativa, como ha quedado

demostrado en el anterior experimento. Sin embargo la presencia de HCl y el calor, la sacarosa

se hidroliza, es decir incorpora una moléculas de agua y se descompone en los monosacáridos

que la forman: glucosa y fructuosa, que sí son reductores (figura 4).

Figura N° 3. Sacarosa

Figura N° 4. Disacáridos: (a) reductor, (b) no reductor

PROCEDIMIENTO

- Mezclar por inversión el reactivo con cada uno de sus componentes, ver la tabla 3.

- Someter a la acción del calor hasta ebullición

Tabla N°2. Componentes de la hidrolisis de la sacarosa

COMPONENTES Muestra sacarosa

Solución de sacarosa 0.5% 3 ml

Ácido clorhídrico HCl 1M 1 ml

Calentar al mechero 5’

Enfriar

Hidróxido de sodio NaOH 1M 1 ml

Reactivo de Fehling A 1 ml

Reactivo de Fehling B 1 ml

Calor: ebullición mechero

baño maría

- La reacción será positiva si en la muestra se forma un precipitado color rojo ladrillo

(CH2O), será negativa, si la hidrolisis no se ha realizado correctamente, apareciendo

una coloración verde en el tubo de ensayo.

GRAFICAR / ESQUEMATIZAR / ANOTAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS


10

RECONOCIMIENTO DE POLISACARIDOS: ALMIDÓN (III) FUNDAMENTO

El almidón es un polisacárido vegetal formado por dos componentes: la amilosa y la

amilopectina. Esta prueba usa como reactivo el lugol, se basa en la especificidad del almidón

cuando está presente en solución, la cual da un color azul en presencia del Yodo. El lugol

presenta: yoduro de potasio y yodo, más agua (solución de Lugol). El yodo de la solución

tiene afinidad por los enlaces α 1-4 y α 1-6 de la moléculas de almidón, esta interacción del

yodo por dichos enlaces producen el cambio de coloración no por una reacción química sino

por una reacción de adsorción o fijación de iodo en la superficie de la molécula de amilosa, lo

cual solo ocurre en frio (a temperatura ambiente) La amilosa en disolución coloidal y en

presencia de iodo se colorea de azul toma color azul, la amilopectina da una coloración rojo

violácea.

Figura N° 5. Fragmento de la molécula del almidón (amilopectina)

En el círculo un monómero de glucosa.

PROCEDIMIENTO

- Colocar los componentes indicados en la tabla 4, adicionar el reactivo de lugol y

observar los primeros cambios de coloración.

Tabla N° 3. Reconocimiento del almidón


1 2 3

Solución de almidón 2% 1 ml

Papa rallada 1 ml

Albúmina 1 ml

Reactivo de Lugol 3 gotas 3 gotas 3 gotas


11

- Mezclar por inversión y anotar los resultados, será positivo si se torna azul, violáceo.

- Calentar suavemente, sin que llegue a hervir, hasta que pierda el color.

- Enfriar el tubo de ensayo en agua fría, observar como a los 2-3 minutos reaparece el color azul

GRAFICAR / ESQUEMATIZAR / ANOTAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS


12

RECONOCIMIENTO DE PROTEÍNAS (IV) FUNDAMENTO Las proteínas son macromoléculas formadas por la unión de muchos aminoácidos (figura 6) por

enlace peptídico (estructura primaria). Además pueden darse uniones por enlaces débiles de

distinta naturaleza que hacen que la proteína adquiera una conformación tridimensional

característica (estructura terciaria) ver la figura 7. Las variaciones de pH, temperatura o

concentración salina pueden destruir esos enlaces débiles de manera que la proteína pierde

su conformación y se dice que se desnaturaliza.

Figura N°6. Unidad de la proteína:

aminoácido

Figura N°7. Estructura de las proteínas

Las proteínas debido al gran tamaño de sus moléculas forman con el agua soluciones

coloidales que pueden precipitar formándose coágulos al ser calentadas a temperaturas

superiores a 70°C o al ser tratadas con soluciones salinas, acidas, alcoholes, etc.

Una de las reacciones coloreadas específicas de las proteínas, que sirven para su

identificación, cabe resaltar la reacción de Biuret (figura 8). Esta reacción los producen los

péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ello se debe a la presencia del enlace

peptídico CO-NH que se destruye al liberarse los aminoácidos

Reacción de Biuret (figura 8)

Se debe a los componentes que presenta: el hidróxido de sodio y sulfato de cobre (II); el cual el

agente denaturante de las proteínas es el hidróxido y el reactante es el sulfato de cobre. Las

proteínas después de ser denaturadas facilitan la interacción del Cu con los pares de

electrones sin compartir del grupo amino del péptido mediante enlaces de coordinación con la

formación de un complejo coloreado púrpura – violáceo, cuya intensidad depende de la

concentración de proteínas.


13

Figura N°8. Complejo de cobre formado en la reacción de Biuret

PROCEDIMIENTO

- Rotular tres tubos de ensayo, en el primero agregar 2 ml de albúmina (huevo), en el

segundo tubo 2 ml de leche, y en el tercero 2 ml de la solución de almidón.

- Añadir 0.5 ml de hidróxido de sodio (NaOH) al 5%, y 0.5ml de sulfato de cobre

(Cu2SO4) al 1% a cada tubo.

Tabla N°4. Ensayos de proteínas


1 2 3

Albúmina (huevo) 2 ml

Caseína (lácteo) 2 ml

Sol. almidón 2 ml

NaOH 5% 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml

Rvo. Biuret: Cu2SO4 1%

0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml

- Observe la formación del color violeta en los tubos que presentan proteínas, siendo

Biuret (+), de no haber un cambio de color será Biuret (-).

GRAFICAR/ESQUEMATIZAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS


14

RECONOCIMIENTO DE LÍPIDOS (V)

FUNDAMENTO

Los lípidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en

pequeñísimas gotas formando una emulsión de aspecto lechoso que es transitoria, pues al

dejarlo en reposo desaparece por la reagrupación de las gotitas de grasa en una capa que por

su menor densidad se sitúa sobre el agua. Las grasas son solubles en disolventes orgánicos.

En este experimento el reconocimiento de lípidos será por la prueba de solubilidad,

identificando el comportamiento de las moléculas de aceite con el agua, las cuales no se

homogenizan, debido a que estas presentan características diferenciales, mientras que el agua

es polar, el aceite es no polar, esto hace que microscópicamente se note que el aceite forme

micelas en solución acuosa. Donde las colas hidrofóbicas de las moléculas de aceite se

“esconden” del agua adoptando la forma de micelas.

PROCEDIMIENTO

Tabla 8. Reconocimientos de lípidos por solubilidad


1 2 3

Aceite 1 ml 1 ml 1 ml

Agregar por las paredes del tubo cada componente:

Agua destilada 2 ml

Acetona 2 ml

Cloroformo 2 ml

- Rotular los tubos y en cada uno de ellos adicionar 1 ml de aceite

- Luego por las paredes de cada tubo adicionar: 2ml de agua para el primer tubo, 2ml de

cloroformo para el segundo tubo y cloroformo para el tercer tubo

- NO HOMOGENIZAR! Hacer la primera observación.

- Mezclar por inversión cada tubo, dejar en reposo por 5 minutos

- Anotar las observaciones respectivas.

Tabla 9. Resultados de la solubilidad de los lípidos

Muestra Aceite

+ agua destilada Aceite

+ acetona Aceite

+ cloroformo

Soluble

GRAFICAR/ESQUEMATIZAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS


15


INFORME DEL LABORATORIO Nº 1


1 Resumen (1p)

Nombre del alumno (Apellidos, Nombre)

Pre informe (4 p)

Informe (12 p)

Desempeño (4 p)

Nota


16

2 Objetivos específicos (1p)

3 Datos y observaciones experimentales (4 p)

Experimento N° 1: Identificación de Azucares Reductores

Tabla N°1. Resultados de azucares reductores

GLÚCIDO glucosa maltosa lactosa fructuosa galactosa sacarosa

Reductor

Importante: Es necesario indicar la formación de precipitado y la cantidad con un signo (+++).


17

Experimento N° 2: Reconocimiento del Almidón

Tabla N°2. Resultado de reconocimiento del almidón

Muestra almidón papa Clara de huevo

Reacción al lugol

Experimento N° 3: Reconocimiento de polisacáridos: Almidón

Tabla N°3. Resultado de reconocimiento del almidón

Muestra almidón papa huevo

Almidones?

Importante: Es necesario indicar la intensidad del color con un signo (+++).


18

Experimento N° 4: Reconocimiento de Proteínas

Tabla N°4. Ensayos de proteínas

Muestra albúmina caseína almidón

Proteínas

Importante: Es necesario indicar la intensidad del color con un signo (+++).

Experimento N° 5: Reconocimiento de Lípidos

Tabla N°5. Resultados de la solubilidad de los lípidos

Muestra Aceite

+ agua destilada Aceite

+ acetona Aceite

+ cloroformo

Soluble


19

4 Discusión de observaciones, datos y resultados (3 p)


20

5. Conclusiones (2 p)

6. Cuestionario (1.5 p)

1. ¿Qué azúcares son reductores?

2. ¿Qué función tiene el ácido clorhídrico?

3. Al trabajar con el lugol ¿Por qué se da el cambio de coloración después de sometido al

calor? Fundamente su respuesta.

4. ¿Qué es la desnaturalización?

5. ¿Qué la provocado que la desnaturalización en la muestra?

6. ¿Cuál de las muestras empleadas tiene mayor cantidad de proteínas?

7. ¿Qué es una emulsión transitoria?

8. ¿Qué es una emulsión permanente?

9. ¿Con cuál de los solventes orgánicos fue soluble el aceite?

10. En nuestro sistema digestivo que enzima se encarga de solubilizar las grasas que

consumimos?

7. Bibliografía (0.5 p)


21


ANEXO 1

PREPARACION DE REACTIVOS

LABORATORIO: RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS

a. Soluciones de azucares ó glúcidos al 1%

Glucosa, maltosa, lactosa, fructuosa, galactosa, sacarosa, almidón.

Se pesa 1 gramo de un glúcido y se disuelve en 100 ml de agua destilada, agitando

hasta disolverse por completo.

Se vierte en un frasco limpio y se rotula, indicando la fecha de preparación.

Así para cada uno de ellos.

Para el caso del almidón, debe emplearse agua destilada caliente y agitación constante

b. Solución de almidón al 2%

Se pesa 2 gramos de almidón y se disuelve en 100 ml de agua destilada caliente y en

agitación constante.

c. Hidróxido de sodio al 5%

Se pesa 5 gramos de NaOH y se disuelve en 100 ml de agua destilada.

d. Reactivo de Fehling

Solución A: solución al 3% de sulfato cúprico cristalizado

Pesar 30 g de sulfato cúprico Cu2SO4 y aforar en un litro con agua

destilada

Solución B: solución al 15% de sal de Rochelle (tartrato de sodio y potasio) en

solución acuosa al 5% de hidróxido de sodio NaOH.

Preparar un litro de hidróxido de sodio al 5% (50 grs en 1 L) y adicionarle

150 g de tartrato de sodio y potasio

e. Solución de lugol: yodo/yoduro de potasio

Adicionar 2 g de yoduro de potasio y1 g de yodo a 80 ml de agua destilada, agitar hasta

solubilizar los reactivos Aforar 100ml de agua.

f. Reactivo de Biuret

Solución A: 17.3 g de sulfato de cobre Cu2SO4 en 100 de agua destilada caliente

Solución B: 17.3 g de citrato sódico Na2CO3y 100 g de bicarbonato de sodio anhidro

NaHCO3 en 800 ml de agua destilada caliente.

Se mezclan ambas soluciones, se enrazan a un litro y se ponen en un matraz cubierto

para evitar la acción de la luz. El reactivo se guarda en un frasco color ámbar.


22



EXTRACCION DE ADN ANIMAL


Grupo:

Fecha:



1. Realice el DIAGRAMA DE FLUJO de los experimentos a desarrollar PROCEDIMIENTO,

realice un esquema de trabajo de cada experimento.


misma. (2 puntos)

Ejemplo:


2. Cuestionario:

¿Qué es el ADN basura? ¿Qué es código genético? ¿Cuántos genes tiene el hombre? ¿Hay espacio vacío entre los átomos en una doble hélice de ADN?


A

B

C


23



EXTRACCIÓN DE ADN ANIMAL

INTRODUCCIÓN El ADN es una cadena de nucleótidos, es un polinucleótido. Esta

cadena está formada por muchas unidades de nucleótidos unidas entre

sí, por un enlace peptídico, y cada nucleótido está formado por un

azúcar (desoxirribosa), una base nitrogenada (que puede ser adenina

(A), timina (T), citosina (C) ó guanina (G)) y un grupo fosfato que actúa

como la unión de nucleótidos. Ver la figura 1.

La secuencia del ADN se especifica nombrando sólo la secuencia de

sus bases. La disposición secuencial de estas cuatro bases a lo largo

de la cadena, es decir, el ordenamiento de los nucleótidos, es la que

codifica la información genética.

El ADN se presenta como una doble cadena de nucleótidos, en la que

las dos hebras están unidas entre sí por enlaces. El ADN forma el gen,

que es la unidad básica de la herencia.

Figura 1. Estructura del ADN

El ADN tiene algunas propiedades por las que es importante en la evolución:

1) Almacena información,

2) Es una molécula estable, por lo que no cambia (muta) con mucha frecuencia.

3) En ocasiones ocurren pequeños cambios en el ADN que dan lugar a la variación

necesaria para que se produzca la selección natural.

En las plantas, los animales y los hongos, el ADN se encuentra mayormente en el núcleo de las

células. Para extraer el ADN de las células vegetales hay que romper la fuerte pared celular

exterior, emulsionar los lípidos de la membrana plasmática y la envoltura nuclear.

La extracción del ADN celular es una etapa clave en muchos procedimientos de biología

molecular y aplicaciones de ingeniería genética. El método varía dependiendo de la célula o

tejido desde donde se necesita extraer el DNA, sin embargo, cualquier protocolo tiene las

siguientes etapas básicas:

Primero las células deben ser homogenizadas, lisadas (rotas) para liberar el núcleo (si está

presente). El núcleo también debe ser roto para liberar el DNA. En este punto el DNA debe ser

protegido de enzimas que podrían degradarlo (nucleasas). Una vez que el DNA es liberado.

Debe ser precipitado con alcohol (etanol) para purificarlo y concentrarlo. Dependiendo de las

aplicaciones posteriores, puede ser necesario someter el DNA a etapas de purificación

adicionales. Usualmente el DNA extraído se analiza mediante electroforesis en geles de

agarosa y/o espectrometría UV.

OBJETIVOS

Lograr la extracción y visualización de ADN de una muestra animal.


24

MATERIALES Y REACTIVOS

Vasos de precipitado de: 500, 250 y 100 ml; probetas de 100 y 50 ml, 2 pipetas graduadas de

10 ml, 1 propipeta,1 pisceta, 1 pipeta pasteur, 2 tubos de ensayo de 15 ml, 1 gotero, 1 gradilla,

1 varilla de vidrio, 1 embudo, gasa, papel filtro, hielo, shampoo de color claro,

cloruro de sodio 2M, alcohol a bajas temperaturas (muy frio: 0° C), azul de metileno.

Por grupo: gasa, alcohol de 96° C muestra animal: hígado de pollo

FUNDAMENTO

El ADN se encuentra en el interior del núcleo celular, disperso y replegado, unido a proteínas

para formar la cromatina. Para extraerlo es necesario homogenizar el tejido y romper las

células para separar el núcleo, al lograrlo se libera el ADN, se debe separar de las proteínas y

precipitarlo para extraerlo de la solución. Se visualizara como un agregado de fibras

blanquecinas que se podrán adherir a una varilla de vidrio.

EXTRACCION DE ADN ANIMAL

PROCEDIMIENTO

A cada paso indicado, escriba la finalidad

1. Triturar una porción de hígado de pollo (20 grs) con 50 ml de agua destilada fría en un mortero, añadir 1 gramo de arena fina, seguir homogenizando.

2. Filtrar 1 vez el homogenizado en una gasa contenido sobre un embudo en la probeta de 50 ml, para obtener la “suspensión”

3. En un vaso precipitado de 50 ml colocar 5 ml de la suspensión, adicionar 5 ml de NaCl 2M frio y agitar. Este vaso deberá estar contenido en otro vaso precipitado de 500 ml que contenga hielo.

4. Añadir 1 ml de detergente (shampoo en solución fría) y remover suavemente con la varilla

de vidrio, mezclando, y evitando la formación de espuma. Repetir el procedimiento 3 veces

dejando reposar un minuto cada vez. Si de forma espuma retirarla con la pipeta pasteur.

Trasvasar el material contenido en el vaso precipitado de 50 ml a un tubo de ensayo

grande.

5. Añadir 10 ml de alcohol frio, inclinando el tubo de ensayo y dejando resbalar muy lentamente el alcohol por la pared, para formar una capa sobre la solución. Dejar reposar, no mover, evitando que se mezclen ambas soluciones. Porque?

6. El ADN aparecerá poco a poco lentamente en la interfase de agua-alcohol en forma de grumos blancos. Se favorece la precipitación y recolección así se va recogiendo mediante la varilla de vidrio o un hisopo largo, introduciéndola lentamente bajo la interfase y haciéndola girar suavemente mientras se extrae. Así se conseguirá que se adhiera a la varilla unas hebras blancas, poco a poco se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN. Pasado un minuto, retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedará adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodón mojado.

7. Tomar una muestra de ADN, depositarlo sobre un portaobjetos y teñir con azul de metileno durante 3 minutos. Secar la lámina y observarla al microscopio. Describir la muestra al microscopio.


25




1. Resumen (1p)


Pre informe (4 p)

Informe (12 p)

Desempeño (4 p)

Nota


26

2. Objetivos específicos (1p)

3. Datos y observaciones experimentales (4 p)

Experimento: EXTRACCION DE ADN ANIMAL

3.1 Triturar una porción de hígado de pollo (20 grs) con 50 ml de agua destilada fría

en un mortero, añadir 1 gramo de arena fina, seguir homogenizando.

3.2 Filtrar 1 vez el homogenizado en una gasa contenido sobre un embudo en la

probeta de 50 ml, para obtener la “suspensión”.


27

3.3 En un vaso precipitado de 50 ml colocar 5 ml de la suspensión, adicionar 5 ml de

NaCl 2M frio y agitar. Este vaso deberá estar contenido en otro vaso precipitado

de 500 ml que contenga hielo.

3.4 Añadir 1 ml de detergente (shampoo en solución fría) y remover suavemente con

la varilla de vidrio, mezclando, y evitando la formación de espuma. Repetir el

procedimiento 3 veces dejando reposar un minuto cada vez. Si de forma espuma

retirarla con la pipeta pasteur. (Trasvasar el material contenido en el vaso

precipitado de 50 ml a un tubo de ensayo grande)


28

3.5 Añadir 10 ml de alcohol frio, inclinando el tubo de ensayo y dejando resbalar muy

lentamente el alcohol por la pared, para formar una capa sobre la solución. Dejar

reposar, no mover, evitando que se mezclen ambas soluciones. Porque?

3.6 El ADN aparecerá poco a poco lentamente en la interfase de agua-alcohol en

forma de grumos blancos. Se favorece la precipitación y recolección así se va

recogiendo mediante la varilla de vidrio o un hisopo largo, introduciéndola

lentamente bajo la interfase y haciéndola girar suavemente mientras se extrae.

Así se conseguirá que se adhiera a la varilla unas hebras blancas, poco a poco

se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN. Pasado un minuto,

retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedará

adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodón mojado.


29

3.7 Tomar una muestra de ADN, depositarlo sobre un portaobjetos y teñir con azul

de metileno durante 3 minutos. Secar la lámina y observarla al microscopio.

Describir la muestra al microscopio.

4. Discusión de observaciones, datos y resultados (3 p)


30



31

6. Cuestionario (1.5 p)

a. Explique, cómo se puede determinar la concentración del ADN. b. Presente un diagrama de flujo de la extracción de ADN en una muestra de sangre, piel o cabellos? c. ¿Cómo se puede preservar el ADN después de haberlo extraído? d. ¿Cuál es la diferencia de extraer ADN animal, vegetal y bacteriano? (señalarlas) e. ¿Cuál es la importancia de estudiar el ADN en muestras arqueológicas? Y en la actualidad?



32



AMILASA SALIVAL


Grupo:

Fecha:



1. Realice el DIAGRAMA DE FLUJO del experimento a desarrollar: PROCEDIMIENTO


misma. (2 puntos)

Ejemplo:


2. Cuestionario:

a. ¿Qué es la amilasa salival?, ¿Cuál es su función?

b. ¿Cuáles son las propiedades de las enzimas?

c. ¿Qué es anabolismo?

d. ¿Qué es catabolismo?


A

B

C


33



AMILASA SALIVAL

INTRODUCCIÓN

Propiedades del almidón.

El almidón es el polisacárido de reserva más abundante en vegetales y constituye la principal

fuente de nutrición glucídica para la humanidad. Los almidones están constituidos por una

mezcla de dos componentes:

a-amilosa: cadena lineal de unas 200 unidades de D-glucosa unidas por enlaces α(1-4)

amilopectina: cadena lineal de D-glucosas unidas por enlaces tipo α (1-4) con numerosas

ramificaciones α (1-6). El polímero contiene unas 1000 unidades de glucosa.

La proporción en que se mezclan la a-amilosa y la amilopectina para formar el almidón

depende de la especie vegetal en que aparece el almidón. La α -amilosa se disuelve fácilmente

en agua, adquiriendo una estructura secundaria característica, de forma helicoidal, en la que

cada vuelta de hélice comprende seis unidades glucosa.

Esta estructura secundaria, en la que los grupos hidroxilo que dan hacia afuera, permite que el

iodo, al penetrar en el interior del helicoide, confiera a la disolución una coloración azul violácea

intensa característica que permite la identificación positiva de trazas de almidón. Como esta

coloración no es resultado de ninguna interacción covalente, el calentamiento origina la

desestabilización del helicoide y la pérdida de color, que se recupera al enfriar lentamente la

disolución. La variación en el pH tiene un efecto análogo.

Estructura repetitiva de la amilosa.

Hidrólisis del almidón.

El almidón puede hidrolizarse por medios químicos o enzimáticos. La ebullición con ácidos o

álcalis hidroliza aleatoriamente los enlaces glucosídicos entre unidades de glucosa, dando

polisacáridos de longitud intermedia denominados dextrinas, cada vez menores hasta la

obtención de unidades de glucosa individuales.

Los compuestos que se obtienen en la hidrólisis del almidón y el color que producen con el iodo

son los siguientes:

Almidón (azul).

Amilodextrinas (violeta).


34

Eritrodextrinas (rojo).

Acrodextrinas (incoloro*).

Maltosa (incoloro*).

Glucosa (incoloro*).

* Tener en cuenta el ligero color amarillo propio del iodo.

El almidón también puede hidrolizarse enzimáticamente.

Uno de los enzimas que hidrolizan el almidón es la amilasa, que se halla presente en el jugo

pancreático y la saliva. Este enzima ataca al azar los enlaces α(1-4) del interior de la cadena.

Así, rinde finalmente unidades de glucosa libre y maltosa. La amilasa no ataca los enlaces

α(1-6), base de las ramificaciones de la amilopectina.

Estos enlaces pueden ser hidrolizados por otro enzima desramificador. La ptialina o amilasa

salival es una proteína enzimática presente en la saliva. Como todo enzima, la acción que

ejerce sobre su sustrato (almidón) depende de una serie de parámetros: pH, temperatura,

concentración de enzima...

OBJETIVOS

Ver el efecto del pH y la temperatura sobre la actividad enzimática.

Ver el efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática.

COMPARAR y DISCUTIR los resultados de la actividad de la amilasa a los diferentes

pH. Deducir el pH en el cual la enzima es más activa.

PROCEDIMIENTO

I. OBTENCIÓN DEL ENZIMA.

1. Tras enjuagar la boca, se mastica un trozo de papel de filtro para estimular la salivación. Los

líquidos segregados se van pasando a un embudo con un filtro humedecido colocado sobre un

tubo de ensayo, hasta recoger la suficiente cantidad de saliva para realizar la práctica.

2. La saliva así obtenida se diluye 1:10 con agua destilada, obteniendo así la preparación de

enzima base.

II. EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD AMILASA SALIVAL.

1. Tomar tres tubos de ensayo y añadir respectivamente:

1 2 3

ClH 0.1 N 2 ml NaOH 0.1 N 2 ml Agua destilada 2 ml

Almidón 2% 2 ml Almidón 2% 2 ml Almidón 2% 2 ml

Saliva diluida 1:10 2 ml Saliva diluida 1:10 2 ml Saliva diluida 1:10 2 ml

2. Agitar bien y medir rápidamente el pH de cada tubo. Para medir el pH, se toma una gota de

la disolución con una varilla limpia y seca y se humedece con ella un trocito de papel

indicador de pH, comparando el color obtenido con el de la escala.


35

Los tres tubos se colocan en un baño de agua termostatizado a 37ºC durante 15minutos,

dejando que la amilasa vaya hidrolizando al almidón. Una vez transcurridos los 15 minutos,

se sacan los tubos y se efectúan las pruebas del iodo y de Benedict

Prueba del iodo o del lugol: permite identificar la presencia de almidón que con este reactivo

da un color azul-violeta característico. Tomar 1 ml de muestra de cada uno delos tubos y

añadirle unas gotas de la disolución de iodo iodurada. Si la actividad enzimática de la

amilasa no se ve afectada, catalizará la hidrólisis del almidón y por tanto la prueba del iodo

será negativa.

Prueba de Benedict: permite identificar a los azúcares reductores, obtenidos por hidrólisis del

almidón, que con esta prueba dan una coloración rojiza (el almidón no tiene poder reductor).

Tomar 1 ml de muestra de cada uno de los tubos y seguir el protocolo para la reacción de

Benedict en la práctica de azúcares.

III. INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA EN LA VELOCIDAD ENZIMÁTICA.

1. Preparar 8 tubos: cuatro de ellos con 2ml de almidón 2% y los otros cuatro con 2 ml de

saliva diluida 1:10.

2. Colocar dos tubos, uno conteniendo almidón y la otra saliva, a cada una de las cuatro

temperaturas siguientes (marcar cada pareja de tubos según la temperatura a la que se

ensaya):

en baño de hielo (OºC, si se añade un poco de agua al hielo enfría más;

cuidar que los tubos no vuelquen)

a temperatura ambiente (20ºC)

en baño a 37ºC

a ebullición en baño María* (100ºC).

3. Mantener así los tubos durante 15 minutos para que alcancen la temperatura del

experimento.

4. Añadir al tubo que contiene el almidón el contenido del tubo que tiene la saliva, agitar bien y

dejar que siga a su temperatura correspondiente. Empezar a contar el tiempo (los tubos

deben mantenerse bien inmersos en los respectivos baños para que la acción de la amilasa

tenga lugar a las temperaturas indicadas).

Transcurridos 0, 2, 4, 6 y 8 minutos coger una muestra de 0,5 ml de cada tubo y ponerla en

la placa de pocillos.

* En el caso del baño María basta con 5 minutos.

5. Añadir a cada muestra unas gotas de reactivo de iodo. Una vez realizada la prueba

ANALICE los distintos cambios de color observados y la razón de estos.

Cuando el almidón está hidrolizado no produce ningún cambio de color a la solución de iodo

(punto acromático). El tiempo necesario para alcanzar tal punto da idea de la actividad de la

enzima. La inversa de dicho tiempo equivale a la velocidad de la reacción enzimática.


36



ESCUELA PROFESIONAL DE QUÍMICA

BIOLOGÍA (CH 061)


AMILASA SALIVAL

1. Resumen (1p)


Pre informe (4 p)

Informe (12 p)

Desempeño (4 p)

Nota


37



Experimento II: EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD AMILASA SALIVAL

Tabla N°1 Resultados del efecto del pH sobre la actividad

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

pH

Prueba de Lugol

Benedict


38

Experimento II: EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD AMILASA SALIVAL

Tabla N°2 Resultados de la temperatura óptima para la actividad de la enzima

0º C Ambiente:

º C 37º C 100º C

0´

1´

2´

4´

6´

8´


39



40


6. Cuestionario (1.5 p) a. ¿Qué es y qué hace un enzima?

b. El enzima empleado en esta práctica se denomina:

c. Su sustrato es:

d. ¿Cuáles son las funciones de la enzima trabajada?

e. ¿Cuál es la estructura molecular de la enzima trabajada?

f. ¿Qué reactivo se emplea para la identificación del almidón? Explicar

brevemente como actúa.



41




BIOLOGÍA (CH 061)


CONTROL MICROBIOLOGICO AMBIENTAL

Recuerde que el PREINFORME debe de entregarlo de manera individual, el día de realización

del laboratorio, se presenta en hojas A4 bond, que tiene un peso máximo de 4 ptos. sobre la

nota del Laboratorio.

1. Realice el DIAGRAMA DE FLUJO del experimento a desarrollar: PROCEDIMIENTO


misma. (2 puntos)

Ejemplo:


2. Cuestionario:

a. Defina las 11 siguientes palabras: hongo, levadura, colonia, micelio, hifas, esporas,

cepa, agar, microbiota, aerobiosis, unidades formadoras de colonias (UFC)

b. ¿Cuál es la composición del agar Sabouraud?

c. ¿En qué condiciones se favorece el crecimiento de hongos?


REVISAR: Referencias Bibliografías al estilo Vancouver, en:

http://www.unap.cl/p4_biblio/docs/Normas_VANCOUVER.pdf

A

B

C


42




INTRODUCCION

Los microorganismos se encuentran presentes en todos los ambientes: en el aire, en el agua,

en la superficie de los objetos e incluso sobre nuestra piel. La evaluación de la calidad

microbiológica del ambiente nos indica la cantidad de microorganismos que están presentes en

un área determinada. Los microorganismos generalmente no están flotando en el aire sino que

se encuentran sobre partículas inertes, por ejemplo polvo, gotas de agua, etc. que le sirven

como medio de transporte, las cuales pueden depositarse sobre las superficies; es por ello que

mientras más limpia es un área, menor será el número de microorganismos presentes en el

aire de la misma.

Cuando se trabaja en microbiología de alimentos es importante determinar el grado de

contaminación ambiental. Las condiciones higiénicas del lugar de trabajo (utensilios,

superficies, etc.) y del propio manipulador van a depender en parte el número y tipo

de microorganismos del alimento.

Análisis del aire: El aire, además de partículas en suspensión, es portador de bacterias o sus

esporas. Por ello puede ser causa tanto de contaminación de alimentos y superficies como de

infecciones en el hombre (patologías respiratorias, etc.). Existen diferentes métodos que

permiten evaluar la calidad microbiológica del aire.

Técnica: Sedimentación en placa

La técnica de sedimentación por gravedad permite determinar la carga microbiana de un

ambiente problema. Este tipo de control es característico de la evaluación de la calidad

microbiológica de zonas estériles en la industria alimentaria, farmacéutica y en estudios de la

microbiota en ambientes naturales. Esta técnica consiste en exponer placas con un medio

nutritivo sólido al ambiente durante un periodo determinado, los microorganismos suspendidos

en el polvo o aerosoles sedimentan sobre la superficie de este medio.

Pasado el tiempo de toma de muestra ambiental, la placa debe mantenerse cerrada y se

incubara en las condiciones que favorezcan el tipo de microorganismos que deseemos

estudiar, en temperatura ambiente y en aerobiosis, pues estas son las condiciones que

prefieren los microorganismos ambientales.

OBJETIVO

Evaluar la calidad microbiológica del aire de un área determinada.

Caracterizar (macroscópicamente) y contabilizar las colonias fúngicas.

Observar microscópicamente la diversidad de colonias fúngicas.


43

MATERIALES Y REACTIVOS

Muestras: HONGOS

Lugar de muestreo: lugares seleccionados en la facultad (indicados en la placa Petri).

Placa Petri con medio de cultivo: agar Sabouraud (libre de microorganismos).

Asas de siembra, laminas portaobjetos, lamina cubreobjetos, azul de lactofenol, microscopio.

PROCEDIMIENTO

1. Destapar 1 placa de agar Sabouraud, durante 30 minutos en el lugar cuyo nivel de

contaminación se desee examinar, lugar seleccionado e indicado en la placa.

2. Tapar la placa y encintar con parafilm

3. Incubar durante 48 horas, a 25 ± 2 ºC.

4. Efectuar la observación y calcular el número de microorganismos que caen por cm2

durante 1 minuto.

5. Realizar una caracterización de los hongos que han crecido en las placas (diferenciar: la

colonia: color, volumen (elevada o plana), estructura (algodonosa o costrosa), filamentos

(presencia o ausencia), tamaño…

6. Preparación de una muestra sobre la lámina portaobjetos: colocar una tira de cinta

adhesiva sobre el micelio, con el fin de que las hifas y las esporas queden adheridas a ella.

Se coloca una gota de: azul de lactofenol y sobre ella se coloca la cinta adhesiva, para

luego observarla al microscopio.

7. Identificar el tipo de hongo (ver el anexo).

GRUPO TIEMPO DE EXPOSICION 15 MINUTOS

LUGAR DE EXPOSICION DE LA PLACA

1 Aula de clases R1-125

2 Aula de clases del cuarto piso

3 Laboratorio 33

4 Sala de computo

5 Biblioteca

6 Baño de damas

7 Baño de caballeros

8 Pasillo del segundo piso (escuelas)

9 Pasillo del tercer piso (of. profesores)

10 Pasillo del cuarto piso (aulas)

CALCULO DEL NÚMERO DE MICROORGANISMOS POR CM2

Para calcular la cantidad de microorganismos que cayeron en la placa por unidad de tiempo:

Contar el número de colonias en la placa. Este número se expresa como ufc (unidades formadoras de colonias), ya que varios microorganismos podrían estar juntos y al multiplicarse sólo se verá una colonia.

Calcular el área de la placa (A): A = πr2

Para una placa de 9 cm de diámetro el área es: A = 3,14 x 4,52 cm2 = 63,62 cm

2


44

Calcular el número de microorganismos que caen en el área por unidad de tiempo. Se puede expresar en: ufc/ placa/min; ufc/ cm

2/min; ufc/área total/min.

Ejemplo Se expone una placa de 9 cm de diámetro en un área durante 30 minutos. Se incuba 24 horas a 32,5 +/- 2°C y se cuentan 25 colonias. Calcular el número de: ufc/placa/min y ufc/cm

2/min.

Calculo: 25 ufc………….30 min

X ……………. 1 min X = 0,833 ufc/placa/min

Si deseamos expresar los valores en ufc/cm2/min

0,833 ufc……….63,62 cm2

X………….. 1 cm2

X = 0,0131 ufc/cm2/min

Es importante asegurarse al momento de comparar los resultados,

que éstos estén expresados en los mismos parámetros


45




BIOLOGÍA (CH 061)



1. Resumen (1p)


Pre informe (4 p)

Informe (12 p)

Desempeño (4 p)

Nota


46



Tabla N°1 Datos del estudio

DATOS

Área evaluada

Fecha

Tiempo de exposición

Tabla N°2 Resultados del N° de microorganismos por cm2 a las 24 horas

DATOS N° de UFC/cm2

Numero de microorganismos

Numero de Hongos


47

Tabla N°3 Resultados del N° de microorganismos por cm2 a las 24 horas

GRUPO

TIEMPO DE EXPOSICION 30 MINUTOS

LUGAR DE EXPOSICION DE LA

PLACA

N° de UFC

microorganismos

por cm2

N° de UFC

Hongos

por cm2

1 Aula de clases R1-125

2 Aula de clases del cuarto piso

3 Laboratorio 33

4 Sala de computo

5 Biblioteca

6 Baño de damas

7 Baño de caballeros

8 Pasillo del segundo piso (escuelas)

9 Pasillo del tercer piso (of. profesores)

10 Pasillo del cuarto piso (aulas)


48



49


6. Cuestionario (1.5 p) a. ¿Qué es esterilidad microbiológica? b. Explique la esterilización de calor seco y calor húmedo. Para que se emplea cada

uno. c. ¿Qué son los medios de cultivo? d. ¿Cómo se clasifican los medios de cultivo? e. ¿Cómo se reproducen los hongos? f. ¿Es importante el control microbiológico de los ambientes?



50


ANEXO 4


GUIA DE LOS PRINCIPALES HONGOS AMBIENTALES

Figura N° 1. Control microbiológico ambiental

Aspecto típico de una placa de sedimentación mostrando

la diversidad microbiana de un ambientes

Figura N° 2. Estructura de un hongo microscópico

Hifas


51

Figura N° 3. Aspergillus tiene cerca de 200 sp.; A. niger; A. fumigatus…

Figura N° 4. Penicillium sp. 150 sp. ; P. notatum; P. chrysogenum, P. funiculosum…

Figura N° 5. Rhizopus nigricans Figura N° 6. Fusarium sp. Figura N° 7. Cladosporium sp.

Practica Biologia 2013-II (1-4)

Documents

Transcript of Practica Biologia 2013-II (1-4)