Practica 4 histologia animal

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histologia

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FACULTAD DE INGENIERA MARTIMA Y CIENCIAS DEL MARFICHA DE LA PRCTICA PARA LABORATORIO

CDIGO

MATERIAHISTOLOGIA ANIMAL03814

LABORATORIOPREPARACIN DE CORTES HISTOLGICOS

NOMBRE DE LA PRCTICAPREPARACIN DE BLOQUES Y CORTES EN EL MICRTOMO

OBJETIVOS GENERALES:

Aprender cmo preparar bloques de parafina con las muestras de tejidos en corte transversal o longitudinal, para hacer los respectivos cortes en el micrtomo y obtener lminas de parafina con tejidos en placas para su continua observacin y anlisis en el microscopio

INTRODUCCION:

Las parafinas son hidrocarburos saturados provenientes de la destilacin del petrleo. Generalmente son sustancias slidas a temperatura ambiente. Existen diferentes tipos de parafina que se caracterizan por sus puntos de fusin.

La penetracin de la parafina al interior de los tejidos se efecta cuando sta se encuentre en estado lquido. Las parafinas, se disuelven usando estufas que las mantienen en ese estado, esta diluida se coloca en tres recipientes dentro de la estufa.

El ltimo de ellos servir para contener a las muestras antes del proceso de formacin de los bloques de parafina. En el interior de la estufa debe existir otro recipiente conteniendo parafina lquida pura, que se emplear para la formacin de los bloques. El tiempo que permanezcan las muestras dentro de los recipientes de parafina depender de la naturaleza del tejido y el tamao de las muestras. Se sugieren los siguientes lapsos:

1) Primer bao de parafina------------------1 a 1.5 horas 2) Segundo bao de parafina----------------1 a 1.5 horas 3) Tercer bao de parafina-----------------30 a 60 minutos

La inclusin o formacin del bloque de parafina se efecta empleando moldes de diversos materiales y diferentes reas y profundidades. Pueden ser de papel, metal o plstico. El bloque de parafina debe contener la muestra correctamente orientada para facilitar la obtencin de las secciones o cortes.

Se aplican los siguientes procesamientos para la formacin del bloque

El molde elegido se llena con parafina caliente pura con una pinza calentada en un mechero se toma una pieza de tejido del tercer recipiente se orienta una de sus superficies (aquella que se pondr en contacto con el filo de la navaja) se sumerge al interior del molde, en el que la parafina ha empezado a solidificarse y se le aplica una leve presin. Despus los moldes se enfran de inmediato (se sumergen en agua fra o se introducen en el refrigerador) para que la parafina se solidifique de manera homognea.

Muestra el mtodo adecuado en la colocacin de los bloques con tejidos para el correcto corte de las lminas de parafina

MicrtomoLos micrtomos son instrumentos de corte para la elaboracin de preparados que se usan en la microscopa. Para cumplir con las altas exigencias de tales preparados, los micrtomos permiten realizar cortes extremadamente finos.Los micrtomos se clasifican de acuerdo a la manera como se desplaza el bloque que contiene el tejido incluido; as, existen:a) Micrtomo de rotacin tipo Minot.b) Micrtomo de deslizamiento.Cules son sus partes?

Qu es lo primero que se deben fijar antes de realizar los cortes en el micrtomo?

Lo principal es la fijacin, es el paso ms importante al llevar a cabo las tcnicas de preparacin de muestras histolgicas. No importa el cuidado con el que procese y seccione las muestras de tejido, los detalles morfolgicos esenciales slo se mostrarn si el tejido se fija de manera adecuada y rpida.Despus al momento ya de obtener los bloques de parafina con las muestras de tejidos, se ajusta la cuchilla del micrtomo para el continuo corte de las lminas, estas deben realizarse con cuidado procurando que el micrtomo este en 5mm, que es el grosor con el que es ms preciso observar los cortes histolgicos de los tejidos y determinar un diagnstico.

Tcnica de pescar Una vez ya sacada la lmina con parafina y la muestra a travs del micrtomo, se la coloca en un portaobjeto esta es calentada a su vez en una estufa en donde se quedara ms adherida al portaobjeto, luego se realiza un bao en agua a 40 aproximadamente, procurar que esta se desplace cuidadosamente y una vez humedecida completamente se la vuelve a retorna a la placa y se la coloca en reposo, para su fijacin en el portaobjetos.

EQUIPOS Y MATERIALES

Parafina Moldes Cassettes Micrtomo Portaobjeto Agua Pinzas Estufa

PROCEDIMIENTO1. Una vez ya dada los baos de parafina y haberlas dejado en congelacin, se obtiene los bloques que estn listos para el corte en el micrtomo 2. Antes de proceder a cortar, se debe fijar bien el bloque de manera adecuada para hacer un corte, luego se debe ajustar la cuchilla del micrtomo y observar q este que este en posicin para realizar el corte 3. Una vez hecho esto se debe ajustar el grosor de tu corte en nuestro caso es 5mm, procedemos a cortar hasta encontrar una lmina lo suficientemente factible para realizar la tincin 4. Una vez ya realizado esto con ayuda de una pinza o bistur se lo coloca cuidadosamente en una placa portaobjeto, tratando de que este lo ms laminar posible 5. Una vez hecho esto se lo deja en reposo y se procede a realizar la tcnica de pesca, en donde en agua tibia se deja caer la lmina de parafina con la muestra, mediante la tcnica de barrido6. Una vez ya extendida completamente se le vuelve a regresar al portaobjeto tratando de no daar la lmina de parafina, una vez ya obtenido nuevamente la lmina en el portaobjetos, se lo deja en reposo en una estufa de aproximadamente a unos 62 C.7. Una vez ya hecho esto, y obtenido la lmina ya fijada, est lista para la tincin de hematoxilina & eosina

GRAFICOS

Grafico 2: se observa diferentes lminas de parafina con muestra Grafico 1: se observa el micrtomo y su correcto ajustamiento antes de empezar a cortar

Grafico 4: se toma en cuenta la temperatura para la tcnica de barrido o de pescar. Esta debe estar a una temperatura aproximada de 62 CGrafico 3: se observa el micrtomo mientras realiza un corte de parafina con muestra, este corte demuestra cierto fallo debido a que tiene fisuras en su composicin

CONCLUSION

Se obtuvo bloques factibles para los cortes en micrtomo, usando la forma rustica del bao de parafina y se pudo realizar la tcnica de pescar para la fijacin de la muestras en parafina en la placa portaobjetos Se pudo obtener lminas factibles para la tincin, sin embargo hubo algunas que no eran buenas debido a que la fijacin no era buena, de todos modos se pudo elaborar la prctica sin ningn problema. Se pudo manipular el micrtomo para aprender a realizar los cortes histolgicos de una manera adecuada para obtener nuestras muestras factibles a tincin y observacin de tejidos

RECOMENDACIONES Supervise la temperatura con cuidado. Asegrese de que el agua est limpia y de que no tenga burbujas ni residuos de la Seccin (para evitar una contaminacin entre s). Coloque las secciones con el lado liso (brillante) hacia abajo. Coloque las secciones en la superficie del agua con un movimiento de barrido suave. Las secciones se pueden daar con mucha facilidad al quitar las arrugas o burbujas con un cepillo o pinzas. Examine cada seccin mientras flota en la superficie del agua, ya que las imperfecciones se pueden ver fcilmente. Deje la muestra seccionada en la superficie del agua el tiempo suficiente para que se alise. Una expansin excesiva puede estropear la morfologa en secciones sensibles. Para propiciar un drenaje eficiente y para prevenir que la seccin se caiga del portaobjetos, extraiga los portaobjetos del agua en posicin vertical. BibliografaMejia. (2009). web.uvigo. Obtenido de http://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/1-proceso.php