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PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
UN METABOLITO SECUNDARIO ANTIBACTERIANO DE Penicillium
verrucosum
Juan Ernesto Baquero, Rubén D. Torrenegra, Martín Bayona
Proyecto Colciencias – Universidad Javeriana,Cod. 1203-12-10404
OBJETIVOS ESPECIFICOS• Identificar la especie de Penicillium spg 28 obtenida
del banco de cepas del Grupo (GIBUJ).• Evaluar diferentes medios de cultivo para la
fermentación de metabolitos secundarios por Penicillium spg 28
• Extraer y purificar por métodos químicos las sustancias producidas por Penicillium spg 28
• Evaluar la actividad antimicrobiana de las sustancias producidas frente a E.coli y S. aureus.
Penicillium sp.
Reino: FungiSubdivisión:DeuteromicotinaClase: HyphomycetidaeOrden: MonilialesFamilia: MoniliaceaeGénero: Penicillium
Barnett,1998
Penicillium sp.
• Hongo filamentoso• Heterótrofo• Aerobio facultativo• Temperatura óptima 22
– 30 ºC• ph óptimo 5.6, crecen
pH 2.0 a 9.0
• Producen sustancias antimicrobianas
• DegradanCelulosaQuitinaAlmidónAzucareslignina
CARACTERÍSTICAS MICROSCÓPICAS
• Conidioforo hialino , tabicado libremente ramificado y dan lugar a fialides ramificadas con cadenas de esporas
Características Macroscópicas Penicillium sp
• Inicialmente son blancas y vellosas
• Las esporas son pigmentadas de color verde, azul verdosa, amarillas
• La superficie de la colonia puede ser algodonosa aterciopelada o pulverulenta
• Presentar exudados en la superficie y
• Pigmentación en el reverso
Conservada Activación Cultivo Identificaciónen suelo de la cepa monospórico
Centrifugación Obtención de esporas
Preinóculo
E X P E R I M E N T A C I O N
CULTIVO SEPARACIÓN Y PURIFICACION
IDENTIFICACION
FILTRACIÓN
IR, RMN,MASAS
Pruebas Antimicrobianas
EXTRACCIÓN
BIOMASA
Conidioforo alargadofino y septado Penicillium verrucosumTriverticilado se ramifica2 ramas7 a 8 métulasFialides en forma depico de botellaConidias esféricas en cadenas
Hoestria y Samson 1981, Samson 1989 ,
Pitt 1988, Gums and Domsch 1980, Barnett 1998.
MEDIO CZAPECK• 2.5 cm en 14 días• Textura rugosa pulvurulenta• Verde oscuro• Borde blanco aterciopelado• Esporulación moderada• Reverso rugoso incoloro• Difusión de pigmento amarilloPenicillium verrucosum
Pitt, 1988, Samsom 1989, Hoestria,Samsom 1981
Extracto de malta• 3.0 cm en 14 días• Verde oscuro• Textura plana
pulverulenta• Borde blanco
aterciopelado• Reverso plano• Difusión de pigmento
amarillo
Pitt, 1988, Samsom 1989, Hoestria,Samsom 1981
Penicillium verrucosum
RENDIMIENTO
0.845 0.0760.97% 0.035%45.5%B. alfa
0,10 (-)0.85% (-)42.6%PGS
Rendimiento de sustancia (mg)/Biomasa g.J1 J2
Rendimientodel Producto/SustratoJ1 J2
Rendimientode Biomasa/Sustrato
Medio de cultivo
DICLOROMETANOCristales transparentes Forma de agujas.
SOLUBILIDADMetanol, Acetona, Cloroformo.
PUNTO DE FUSIÓN136º C
Rf: 0.5Diclorometano-metanol (9.0:
1.0), en CCD bajo luz U.V de onda corta - U.V onda larga
Reacción con Vainillina-acido sulfúrico:
morado oscuro en CCD.
MICROFUSIÓN SODICANo hay presencia de halogenos y Nitrógeno
ACETATO DE ETILO Rf=0.09cristales blancos Diclorometano -metanol
de forma asimétrica (9.0: 1.0)CCD bajo
luz U.V de onda cortaSOLUBILIDAD
AcetonaVainillina- acido sulfúrico
no revela colorPUNTO DE FUSIÓN
192 ºC.
Estria # Bacteria 200µg J1(radio) (mm)
1 Staphylococcus aureus 18
2 Staphylococcusepidermis 15
3 Streptococcus mutans 18
4 Streptococcus salivarius 17
5 Streptococcus pyogenes 15
6 Streptococcus sp. 15
7 Bacillus subtilis 20
1 2
3 4
765
66
-E.coli
-Citrobacter freundii
-Shigella
-Pseudomona aureginosa
-Proteus
-Salmonella enteritidis
J1 200 µg (mm) Bacteria
Gram negativas
50µg
25µg Eritromicina
40µg
2110 14 18S.aureusHALO(mm)
Control ERITROMICINA
15µg
J1µg
25 40 50
Microorganismo
C.M.I Staphylococcus aureus
• CMI= 13.3µg/ml• CMB= 16.6µg/ml
0.02C. esterilidad0.0223.3
1.15C+
0.02200.0516.60.0913.30.38100.756.670.953.361.11.66AbsJ1 µg/ml