NUEVOS MARCADORES Y NO TAN NUEVOS EN INMUNOHISTOQUIMICA

DRA. ALEJANDRA ZARATE OSORNOHOSPITAL ESPAÑOL DE MEXICO

OCTUBRE 2017

INMUNOHISTOQUIMICA, REGLAS• La IHQ se integra, NO REEMPLAZA a la

morfología• NO HAY UN ANTICUERPO ESPECIFICO de una

entidad• Se deben de solicitar perfiles (varios

anticuerpos) deben INCLUIR AL MENOS UN ANTICUERPO NEGATIVO

• Sitio de reacción– Filamentos intermedios– Antígenos nucleares– Marcadores de organelos– Antígenos membranosos

FILAMENTOS INTERMEDIOS

• Citoqueratinas• Vimentina• Proteína ácida

fibrilar glial• Actina de músculo

liso• Desmina• H-caldesmon

CK

Desmina

ANTÍGENOS NUCLEARES

• Proteínas relacionadas con el ciclo celular (Ki-67)

• Factores de transcripción nuclear (TTF-1, CDX-2, PAX-8, SAT-B2)

• Productos de genes supresores de tumor (p53)

• Enzimas nucleares (TdT, MLH-1, PMS-2)

• Receptores de hormonas esteroides (RE, RP)

• Proteínas que se unen al Ca (S-100)• Virus (HSV, CMV, etc)

CDX2

TdT

MARCADORES ESPECÍFICOS DE ORGANELOS

• Gp100 (HMB-45): premelanosomas

• vWf: – cuerpos de Weibel-Palade

• CD68, lisozima: – lisosomas

• Proteína mitocondriales:– bcl-2

• Gránulos citotóxicos: – TIA-1, granzima B,

perforina• Gránulos de centro denso:

– cromogranina A– sinaptofisina

Bcl-2

Sinaptofisina

ANTÍGENOS MEMBRANOSOS

• Moléculas de adhesión celular (e-caderina) y al citoesqueleto (B-catenina)

• Receptores de transmembrana (HER-2, EGFR)

• Antígenos de los leucocitos

CD20

CD56

INTERPRETACION DE IHQ

Casisiempre

positivo

Usualmente positivo

No contributoria

Usualmente negativo

Casi siempre negativo

Dr. Allen GownPhenopath LaboratoriesSeattle, Washington

MARCADORES DE USO RECIENTE

• Tracto digestivo: CDX-2, Villina, SAT-B2 y HER-2– Inestabilidad de microsatélites: MLH-1, MSH-2, MSH-6

y PMS-2• Hígado: HepPar-1, Arginasa 1 y Glipican 3• Pulmón: TTF-1 y Napsin-A, proteína p40• Células germinales: OCT-4, SALL4, Glipican 3• Varios: GATA-3, PAX-8• Sarcomas: MUC4, DOG-1, INI1, IDH-1 Y IDH-2• Sistema Nervioso Central: IDH1, IDH2, ATRX y 1p/19Q• Linfomas: c-myc

CK20

Villina

CDX-2

SAT-B2

• Proteína 2 especial rica en AT• Special AT-rich sequencial binding protein-2• Células epiteliales glandulares de TGI inferior• Preservada en neoplasias colorectales• Altamente sensible y específico (85%)• Con CK20: 95%

SAT-B2 CDX-2

HER-2 IN GASTRIC CANCER

Path Case Rev 2014;19:245-251

HER-2 EN ADENOCARCINOMA GASTRICOCRITERIOS PARA LA INTERPRETACION DEL c-erbB-2 EN CANCER GASTRICO

Calificación Especimen quirúrgico-patrón detinción

Biopsia-patrón de tinción Sobreexpresión

0 Sin reactividad o reactividadmembranosa en menos del 10%de las células

Sin reactividad en ninguna de lascélulas

Negativo

1+ Reactividad membranosaincompleta débilmenteperceptible en >10% de las células

Un grupo de células neoplásicas conreactividad membranosa incompleta,débilmente perceptible, independientedel porcentaje

Negativo

2+ Reactividad membranosacompleta débil a moderada,basolateral o lateral en >10% delas células

Un grupo de células neoplásicas conreactividad membranosa completa,débil a moderada, lateral o basolateral,independiente del porcentaje

Equívoco

3+ Reactividad membranosacompleta, fuerte, basolateral olateral en >10% de las células

Un grupo de células neoplásicas conreactividad membranosa completa yfuerte, lateral o basolateral,independiente del porcentaje

Positivo

Rüschoff J, Hanna W, Bilous M y cols. HER2 testing in gastric cancer: a practical approach. Modern Pathology 2012;25:637-650.

HER-2

CK 7

CK 20

MMR INESTABILIDAD DE MICROSATELITES

• Detección por IHQ de MMR: – MLH-1, MSH-2, MSH-6 y PMS-2

• Todas se expresan en todos los tejidos• MSH2-MLH1 son los constituyentes

dominantes de sus pares respectivos (MSH6 y PMS2)

• 90% de casos de síndrome de Lynch por IHQ

MLH1

PMS2

MSH2

MSH6

CARCINOMA HEPATOCELULARMEJORES MARCADORES

• Hep-Par1• Arginasa-1• CEA+, CD10+ en

canalículos biliares• CK 7 y 20 negativos• MOC 31 negativo

(Am J Surg Pathol 2010;34:1147–1154)

ARGINASA-1

• Antígeno específico de los hepatocitos

• Sintetasa fosfato-carbamoil del ciclo de la urea

• Expresión citoplásmica difusa – normal y neoplásico

• Sensibilidad y especificidad > 90%

Arginasa-1 HepPar-1

CEA pc CD10

GLIPICAN 3Proteoglicanos heparan-sulfato• Embrión:

– Crecimiento celular– Diferenciación– Migración

• TEJIDOS ADULTOS: CELULAS NEOPLASICAS– Hepatocarcinoma– Melanoma– Tumor de senos endodérmicos– Carcinoma ovárico

endometrioide y células claras– Ca de células de Merkel

• Focal a difuso, débil a fuerte

• Expresión en hepatocitos: evolución a procesos malignos

MARCADORES DE CANCER PULMONARNAPSIN-A

• CK 7 y TTF-1• NAPSIN-A

– Novel AsparticProteinases of thePepsin Family

– Más sensible y específico que TTF-1

– Tinción citoplásmicagranular

– Positivo en:• Tumores renales• Ca células claras ovario• Macrófagos

(Adv Anat Pathol 2012;19:66–73)

NAPSIN-A

• Pulmón y riñones• Expresión

regulada por TTF-1• Neumocitos

alveolares tipo II• Negativos:

– Neuroendocrinos– Mmucinoso– Células pequeñas – Escamoso

CK 5/6

P40

ALK Y CARCINOMA DE PULMON DE CELULAS NO PEQUEÑAS

PDL-1 EN CARCINOMA DE PULMON

PDL-1 IHQ

PhenopathLaboratories, Seattle WA

PDL-1

Ca Imm Res 2016

MARCADORES DE USO RECIENTE

• Tracto digestivo: CDX-2 y Villina, HER-2• Pulmón: TTF-1 y Napsin-A, proteína p40,

PDL-1• Hígado: HepPar-1, Arginasa 1 y Glipican 3• Células germinales: OCT-4, SALL4, Glipican 3• Sarcomas: MUC4, DOG-1, INI1, IDH-1 Y IDH-2• Sistema Nervioso Central: IDH1 y IDH2• Inestabilidad de microsatélites: MLH-1, MSH-

2, MSH-6 y PMS-2

MARCADORES DE USO RECIENTE

• Tracto digestivo: CDX-2, SAT-B2 y Villina, HER-2

• Pulmón: TTF-1 y Napsin-A, proteína p40• Hígado: HepPar-1, Arginasa 1 y Glipican 3• Células germinales: OCT-3/4, SALL4, Glipican

3• Varios: PAX-8• Sarcomas: MUC4, DOG-1, INI1, IDH-1 Y IDH-2• Sistema Nervioso Central: IDH1 y IDH2• Inestabilidad de microsatélites: MLH-1, MSH-

2 MSH-6 y PMS-2

MARCADORES DE USO RECIENTE

• Tracto digestivo: CDX-2 y Villina, HER-2• Pulmón: TTF-1 y Napsin-A, proteína p40• Hígado: HepPar-1, Arginasa 1 y Glipican 3• Células germinales: OCT-4, SALL4, Glipican 3• Varios: PAX-8• Sarcomas: MUC4, DOG-1, INI1, IDH-1 Y IDH-2• Sistema Nervioso Central: IDH1 y IDH2• Inestabilidad de microsatélites: MLH-1, MSH-

2, MSH-6 y PMS-2

TUMORES DE CELULAS GERMINALESOCT-4, SALL4 y GLIPICAN 3

• OCT-4 – FT expresado en células madre y germinales– Muy sensible y específico

• SALL 4– FT, cromosoma 20– Circuito regulatorio con OCT3-4– pluripotencia de células primitivas embrionarias– Todos los tumores de células germinales

• Glipican 3– Tumor de senos endodérmicos– Hepatocarcinomas

SALL-4 CK AE1/3 CD30

CKAE1/3Glipican 3 AFT

TUMORES DE CELULAS GERMINALES

OCT-3/4 SALL 4 CD30 CK AE1/3 Glipican 3 CD117 PLAP

Disgerminoma/Seminoma

+ + - -/+ - +/- +/-

Ca Embrionario + + + + - - +Saco Vitelino - + - + + - -Coriocarcinoma - + - + - - -Teratoma - + - + - - -Neoplasia Intratubular

-/+ + - - - +/- +/-

GATA-3• Factor de transcripción• Familia G-A-T-A

– Urotelio– Ductos mamarios– Mucosa escamosa– Linfocitos T– Ca renal cromófobo– Mesoteliomas– Epitelio escamoso– Páncreas

GATA 3

MARCADORES DE USO RECIENTE

• Tracto digestivo: CDX-2 y Villina, HER-2• Pulmón: TTF-1 y Napsin-A, proteína p40• Hígado: HepPar-1, Arginasa 1 y Glipican 3• Células germinales: OCT-1, SALL3, Glipican 3• Varios: PAX-8• Sarcomas: MUC4, DOG-1, INI1, IDH-1 Y IDH-2• Sistema Nervioso Central: IDH1 y IDH2• Inestabilidad de microsatélites: MLH-1, MSH-

2, MSH-6 y PMS-2

INI-1• INI1: miembro del complejo remodelante multi-

subunidad de cromatina SWI/SNF• Brazo largo del cromosoma 22• Expresión nuclear en todos los tejidos y células

normales (control interno positivo)• Inactivación:

– Tumores rabdoides malignos de la infancia (renal y SNC) – Sarcoma epitelioide– Tumor fibromixoide osificante de partes blandas – Ca mioepitelial de partes blandas– Propensión a citomorfología rabdoide

(Am J Surg Pathol 2011;35:e47–e63)

TUMOR RABDOIDE MALIGNO

SARCOMA EPITELIOIDEINI1

Modern Pathology (2005) 18, 951–958.

Beta-catenina• Adhesión y signalización• Fibromatosis:

– Mutación en la vía APC/beta catenina

• Acumulación nuclear anormal – Fibromatosis mesentérica– GIST– Mesenteritis

esclerosante

B-catenina nuclearTUMORES POSITIVOS

• Fibromatosis de tipo desmoide

• Tumor fibroso solitario• Sarcoma del estroma

endometrial• Sarcoma sinovial• Tumores epiteliales

– Adenocarcinoma colorrectal– Adenocarcinoma

endometrial– Carcinoma pancréatico sólido

pseudopapilar

CK 7 TLE-1

SARCOMA SINOVIAL: FISH t(X;18)

MUC-4 SARCOMA FIBROMIXOIDE DE BAJO GRADO

MUC4

AEM CD34

AML

TUMOR MIOFIBROBLASTICO INFLAMATORIO

AML

AEM ALK

SISTEMA NERVIOSO CENTRAL

• IDH• ATR-X• Deleción 1p/19q• Proteína p53• Ki-67

IDH-1 Mutación gen isocitrato

deshidrgenasa-1 dependientede NADP+ Citoplasma y núcleo (débil) 70-80% OMS II-III 50-80% GBM secundarios 5% GBM primarios

Rara/ausente en niños Oligodendrogliomas:

asociación con codeleción(1p/19q)

Mejor pronóstico Ausencia no excluye glioma Adv Anat

Pathol2012;19:239-49

Adv AnatPathol2015;22:50-58

ATR-X

• Proteína mutada en algunos gliomas• Alfa talasemia/síndrome de retraso mental

ligada a X• Deficiencia/pérdida/mutación

– Crecimiento rápido– Inestabilidad genética– Más susceptibles a tratamiento (Rx y CHO)

• Mutuamente excluyentes con la deleción1p/19q

OLIGODENDROGLIOMA DELECION 1p/19q

C-myc y linfomas

FISH PARA C-MYC

FISH PARA C-MYC

MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCION

MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCION