Metodología
-
Upload
fernando-lopez-marquez -
Category
Documents
-
view
215 -
download
2
description
Transcript of Metodología
![Page 1: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/1.jpg)
Metodología.
Condiciones de fermentación
Precultivo.
Para disminuir la fase de adaptación del microorganismo al medio de
fermentación, las levaduras fueron previamente activadas por medio de un
precultivo. Se tomaron tres asadas de los tubos inclinados de conservación las
cuales fueron incubadas en un matraz Erlenmeyer de 250 mL (100 mL de medio e
incubado a 250 rpm y 30° C). Después de 12 h de incubación, 6 x 106 células
viables/mL fueron tomadas e inoculadas en un segundo matraz. Después de 12 h,
el mismo número de células fueron tomadas para las cinéticas con jugo de
cebolla.
Efecto del tratamiento térmico en el jugo de cebolla.
Con el fin de evaluar el efecto térmico en el procesamiento del jugo de cebolla
sobre el crecimiento de C cerevisiae y B bruxellensis, se realizaron cinéticas
empleando jugo de cebolla esterilizado a diferentes tiempos () o tratado
térmicamente a 90° C por 15 minutos. Los experimentos se realizaron por
duplicado en matraces Erlenmeyer de 500 mL (250 mL de medio e incubado a 250
rpm y 30° C). Los tiempos de fermentación fueron 36 y 72 h para S. cerevisiae y B
bruxellensis, respectivamente.
Efecto de nutrientes.
![Page 2: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/2.jpg)
Para evaluar el efecto de los nutrientes, se realizaron cinéticas añadiendo
cantidades conocidas de nutrientes al jugo de cebolla. Se establecieron un total de
8 experimentos (Tabla x)
Tabla x
Cinética Nutriente
I Jugo de cebolla Sin nutrientes
II Jugo de cebolla + 2gL-1 de (NH4)2S04
III Jugo de cebolla + 5 gL-1de KH2PO4
IV Jugo de cebolla + 0.4 gL-1 de MgS04.7H20.
V Jugo e cebolla +
2 gL-1 de (NH4)2S04 + 5 gL-1 de
KH2PO4
VI Jugo de cebolla +
2 gL-1 de (NH4)2S04 + 0.4 gL-1 de
MgS04.7H20.
VII Jugo de cebolla +5 gL-1 de KH2PO4 + 0.4 gL-1 de
MgS04.7H20.
VIII Jugo de cebolla + 2 gL-1 de (NH4)2S04 + 5 gL-1 de
KH2PO4 + 0.4 gL-1 de MgS04.7H20.
![Page 3: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/3.jpg)
Efecto del oxígeno.
Para evaluar el efecto del oxígeno en la actividad fermentativa de B bruxellensis
IHEM-6037 se realizaron cinéticas en matraces de 500 mL a diferentes relaciones
entre el volumen total y el volumen de medio (Vt/Vm). Las relaciones Vt/Vm
fueron 2, 3.3, 5 y 10.
Resultados.
Efecto térmico en el jugo de cebolla sobre el crecimiento de S. cerevisiae
ITV01
Se presentan los resultados del efecto térmico en el jugo de cebolla sobre el
crecimiento de S cerevisiae. Como ya se mencionó en metodología se planteó
usar tres tiempos de esterilización y un calentamiento a 90° C por 15 min, sin
embargo, los experimentos empleando éste último tratamiento no se realizaron
debido a que los cultivos con se contaminaron. El pH en todos los experimentos
fue aproximadamente de 4.5.
Primeramente se expone el efecto en el consumo de azúcares fermentables,
considerados como la suma de glucosa y fructosa. La figura x muestra el consumo
de azúcares en los tres tratamientos. Como se puede observar el tratamiento III
presentó inicialmente mayor cantidad de azúcares que los otros dos tratamientos.
Esto probablemente se deba a que el tiempo en los tratamientos I y II no fue
suficiente para hidrolizar la sacarosa presente. El total de azúcares fermentables
![Page 4: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/4.jpg)
inicial (68.77 gL-1) en el tratamiento III fue similar al encontrado por Horiuchi et
al., (2000), sin embargo esta cantidad aumentó ligeramente (hasta 73 gL-1) a las 4
h debido, probablemente, a la actividad de la invertasa extracelular de la levadura
(D’amore et al., 1988; sugar utilisation by yeast during fermentation. La cantidad
de fructosa y glucosa en el tratamiento III es cerca de 2.2 veces mayor que en los
otros dos experimentos. En los tratamientos I y II sólo se registró un pequeño
aumento en las concentraciones de glucosa y fructosa entre las horas 2 y 4, de
menos de 1 gL-1. En todos los experimentos el consumo de glucosa fue
ligeramente más rápido que el consumo de fructosa, lo que concuerda con lo
reportado en otros trabajos (Fernández, et al., 2011: citar trabajo de Lorena ; D’
Amore, et al., 1988:Sugar utilization by yeast during fermentation; Cason et al.,
1986:on the difference rates of fructose and glucose utilisation in saccharomyces
cerevisiae)
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 400
10
20
30
40
50
60
70
80
Trat. ITrat. IITrat. III
t (h)
Azúc
ares
tota
les (
gL-1
)
![Page 5: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/5.jpg)
Figura x.- Consumo de azúcares totales por S. crevisisiae ITV-01 en jugo de
cebolla tratado a diferentes tiempos de esterilización.
Por otro lado, la producción de biomasa y etanol se presentan en las figuras x y x.
Como se puede observar las mayores concentraciones se obtuvieron en el
tratamiento III, 32.8 gL-1 de etanol (, aproximadamente a las 17 horas y 12.5 gL-1
de biomasa aproximadamente a las 30 h. La incapacidad de S. cerevisiae para
crecer en los experimentos con los tratamientos I y II, puede deberse a la
presencia de compuestos derivados de la aliina (producidos durante el
procesamiento mecánico) que no fueron volatilizados durante la esterilización.
Horiuchi reportó problemas para hacer crecer a S. cerevisiae en jugo de cebolla
sin esterilizar, sin embargo no profundizó en este hecho.
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 400
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Trat. ITrat. IITrat. III
t (h)
EtO
H (g
l-1)
![Page 6: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/6.jpg)
La tabla x, muestra algunos parámetros cinéticos y estequiométricos de las tres
cinéticas realizadas.
Tratamientoµ
(h-1)
Vs
(gg-1h-1)
Vp
(gg-1h-1)Yx/s Yp/s
P
(gL-1h-1)
I 0.37 0.826 0.4+0.001 0.27 0.4 0.94
II 0.33 1.11 0.42+0.003 0.25 0.42 0.67
III 0.62 1.48 0.66+/- 0.0012 0.18 0.45 2.07
Los valores calculados que en términos cinéticos y de productividades, el
tratamiento III fue superior a los otros, indicando que el mejor tiempo de
esterilización de jugo de cebolla es de 20 min. Por otro lado, los rendimientos de
biomasa con respecto a sustrato son cerca de 50 % mayores en los tratamientos I
y II que en el tratamiento III, mientras que los rendimientos de producto con
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 400
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Trata. ITrata. IITrata. III
t (h)
Biom
asa
(gL-
1)
![Page 7: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/7.jpg)
respecto a sustrato son similares en los tres casos. Cabe señalar que los
rendimientos del glicerol producido son también similares en todos los
experimentos.
Esto podría indicar que el metabolismo de los azúcares no fue inhibido en ninguno
de los casos. Estos resultados, junto al hecho de que las glucosa y fructosa fuesen
consumidas en su totalidad en los experimentos I y II, y que aparentemente no se
vio reflejado un aumento considerable de éstos por acción hidrolítica de la
invertasa extracelular, podría indicar la incapacidad de la levadura para utilizar la
totalidad de la sacarosa presente en el jugo de cebolla esterilizado por debajo de
los 20 min. Algunos trabajos reportan la represión de la expresión de invertasa por
diferentes motivos, como la presencia de urea o por altas concentraciones de
glucosa, lo que promovería el transporte de sacarosa dentro de la célula (Santos
et al., Uptake of sucrose by saccharomyces cerevisiae, 1982;), sin embargo,
dicho proceso es energéticamente desfavorable y contrariamente, se produciría
una disminución en rendimiento de biomasa y un aumento en el rendimiento de
etanol (Basso et al., Topology and kinetics of sucrose metabolism in
saccharomyces crevisiae for improved ethaol yiedl: Chase et al., 1982: The non
competitive inhibition and irreversible inactivation of yeast invertase by urea) lo que
en este caso no ocurrió. A partir de estos resultados se concluye que el mejor
tiempo de esterilización del jugo de cebolla para el crecimiento y fermentación con
S. cerevisiae es de 20 min.
Efecto de los nutrientes en S. cerevisiae ITV-01.
![Page 8: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/8.jpg)
En esta sección se evaluó el efecto de la adición de nutrientes sobre el jugo de
cebolla. Los experimentos fueron realizados empleando jugo de cebolla
esterilizado durante 20 min de acuerdo con los resultados de la sección anterior.
Las figuras x muestran el consumo de azúcares, producción de biomasa y la
producción de etanol. El consumo de los azúcares totales fue similar en todos los
casos, y se llevó a cabo dentro de las 4 y 16 h. Las velocidades de consumo
sustrato estuvieron en un rango 1.5 y 1.7 gg-1h-1.
En cuanto a la producción de biomasa la figura x muestra que aproximadamente a
entre las 16 se alcanzaron los máximos valores. La concentración final en todos
los tratamientos estuvo entre 10.2 y 11.6 gL-1, con una viabilidad mayor al 90% en
todos los casos después de las 36 h.
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 400
2
4
6
8
10
12
IIIIIIIVVVIVIIVIII
t (h)
Azúc
ares
tota
les (
gL-1
)
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 400
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
IIIIIIIVVVIVIIVIII
t (h)
Biom
asa
(gL-
1)
![Page 9: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/9.jpg)
De la misma forma, la producción de etanol al parecer tampoco fue afectada por la
adición de nutrientes, obteniéndose valores entre 24 y 28 gL-1 de Etanol entre las
12 y 16 h.
La tabla x muestra los rendimientos y productividades en estos experimentos
Tratamiento µ Yx/s YP/S P
I 0.17 0.18 0.4 2.1
II 0.14 0.17 0.4 1.32
III 0.14 0.16 0.4 1.54
IV 0.14 0.17 0.4 1.47
V 0.13 0.18 0.4 1.54
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 400
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
IIIIIIIVVVIVIIVIII
t (h)
Biom
asa
(gL-
1)
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 400
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
IIIIIIIVVVIVIIVIII
t (h)
EtO
H (g
L-1)
![Page 10: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/10.jpg)
VI 0.14 0.16 0.4 1.52
VII 0.14 0.17 0.38 1.46
VIII 0.14 0.17 0.37 1.46
Las velocidades específicas de crecimiento, así como los rendimientos de
biomasa y producto fueron similares, lo que sugeriría que la adición de nutrientes,
y en concreto, de sulfato de amonio, no tuvieron en efecto en el crecimiento y el
metabolismo. Estos resultados coinciden por los obtenidos por Mendes – Fereira
et al., (2004), los cuales encontraron que las velocidades específicas de
crecimiento no se ven afectadas por la cantidad de nitrógeno presente inicialmente
en el medio. Estos mismos autores encontraron que la cantidad mínima de
nitrógeno requerido para el crecimiento y producción de etanol es de 0.267 gL-1,
por lo que estos requerimientos se ven cubiertos en un medio complejo como lo
es el jugo de cebolla, el cual contiene cerca de 3.77 gL-1 de aminoácidos
(Horiuchi, 1999). Además, estos autores encontraron que el consumo de glucosa
y el tiempo de fermentación dependen de la cantidad de nitrógeno disponible, al
menos en un rango de 0.267 – a 0.8 gL-1; sin embargo este fenómeno no se
registró en este trabajo, lo que sugeriría que la cantidad de aminoácidos presente
sobrepasa el límite donde se presenta este fenómeno. En otro trabajo realizado
por Fernández et al., (2010), empleando la misma cepa que en este estudio, se
realizaron experimentos añadiendo diferentes concentraciones de sulfato de
amonio, extracto de levadura, urea y fosfato de potasio a soluciones de melazas
tipo “B” provenientes caña de azúcar, encontrando que no existieron diferencias
en la producción de biomasa y etanol en todos los tratamientos, sin embargo, las
![Page 11: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/11.jpg)
velocidades específicas de crecimiento se vieron favorecidas en aquellos
experimentos con adición de fuente de nitrógeno.
Brettanomyces bruxellensis IHEM-6037.
Tratamiento térmico
Resultados similares a los anteriores se presentaron con B. bruxellensis IHEM-
6037. Las figuras X muestran el efecto del tratamiento térmico en el jugo de
cebolla sobre el crecimiento de B bruxellensis. Se puede apreciar que los
azúcares son consumidos cas en su totalidad a las 20 h en el tratamiento III,
mientras que el consumo de éstos en los tratamientos I y II se da hasta las 24 h.
Muy por arriba de éstos se encontró el consumo en el tratamiento IV, donde se dio
hasta las 40 h. Aguilar
La producción de biomasa también se vio afectada. El máximo valor obtenido se
presentó, en el tratamiento III (19.5 gL-1), y fue disminuyendo conforme a la
disminución del tiempo al que fueron sometidos los tratamientos (15.77, 11.4 y
8.28 gL-1 en los tratamientos II, I y IV respectivamente). Además se puede
apreciar una fase lag de 24 h en el tratamiento IV, lo que representaría el doble
que en los demás tratamientos. Después de las 36 h en los tratamientos I, II y IV
se presentó una disminución en la viabilidad de 90 a 80 %.
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 600
10
20
30
40
50
60
70
80
IIIIIIIV
t (h)
Azúc
ares
tota
les
(gL-
1)
![Page 12: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/12.jpg)
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 600
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
IIIIIIIV
t (h)
Biom
asa
(gL-
1)
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 600
10
20
30
40
50
60
70
80
IIIIIIIV
t (h)
Azúc
ares
tota
les
(gL-
1)
![Page 13: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/13.jpg)
Contrario a los resultados obtenidos con S. cerevisiae, la producción de etanol con
B bruxellensis no se vio afectada en términos absolutos en los cuatro
tratamientos, pero sí en el tiempo de fermentación. Es decir, la concentración final
fue similar en todos los casos (20 gL-1, aproximadamente), pero esta cantidad es
alcanzada a las 18 h en el tratamiento III, 24 h en el II, 32 h en el I y a las 40 h en
el I.
Para visualizar mejor estos resultados la tabla x muestra algunos parámetros
estequiométricos y cinéticos de estos experimentos.
Tratamiento µ VS VP YX/S YP/S Pt16
I0.03+-
0.005
-0.53 +-
0.250.24 0.21 0.37 0.91
II0.03 +-
0.01-0.55+0.18 0.18 0.3 0.34 0.66
III 0.058 +- -1.18+-0.2 0.38 0.28 0.29 0.465
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 600
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
IIIIIIIV
t (h)
EtO
H (g
L-1)
![Page 14: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/14.jpg)
0.01
IV0.028+ --
0.01-0.44 +- 0.2 0.24 0.15 0.36 0.051
Los resultados revelan varias cosas. La primera que el tiempo de esterilización
tuvo un efecto positivo en las velocidades específicas, de producción y consumo
de sustrato. En cuanto al rendimiento de biomasa y etanol no se observa
claramente algún efecto. Al parecer el tiempo de esterilización favoreció el
rendimiento en biomasa (los mejores fueron los obtenidos en los tratamientos II y
III), sin embargo ésto no se vio reflejado en el rendimiento de etanol (tanto en I, II y
IV, se obtuvieron rendimientos mayores que con el tratamiento III), debido a que
en términos absolutos la concentración de etanol fue similar en todos los casos.
Estos rendimientos más altos sugerirían probablemente que la sacarosa no
hidrolizada por el efecto térmico fue consumida y empleada en la producción de
etanol por sobre la producción de biomasa. Debido a que B bruxellensis
probablemente no exprese la invertasa extracelularmente o que la velocidad de
consumo sea mayor a la hidrólisis, (Aguilar et al., 2003) no se registró un aumento
de azúcares totales, lo que explicaría el incremento en el rendimiento de etanol.
Además, la disminución en las velocidades específicas y en la producción de
biomasa, además del aumento de la fase de adpatación podría indicar algún tipo
de inhibición en el crecimiento por los componentes no volatilizados del jugo de
cebolla (Horiuchi, 1999).
Efecto de los nutrientes
![Page 15: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/15.jpg)
Al igual que en la sección anterior, los resultados en torno al efecto de los
nutrientes son prácticamente iguales que en S. cerevisiae. La tabla X muestra los
valores de algunos parámetros cinéticos y estequiométricos de las 8 cinéticas
realizadas.
Tratamientoµ
(h-1)
VS
(gg-1h-1)
VP
(gg-1h-1)
YX/S
(gg-1)
YP/S
(gg-1)
P
(gL-1)
I 0.27 0.31 1
II 0.3 0.31 1
III 0.29 0.31 0.9
IV 0.29 0.33 0.97
V 0.29 0.31 1
VI 0.3 0.32 0.96
VII 0.28 0.32 1
VIII 0.27 0.31 0.91
Así como en los cultivos de S. cerevisiae la adición de nutrientes en el jugo de
cebolla no tuvo efecto alguno sobre el metabolismo y crecimiento, tampoco en B
bruxellensis se observó un efecto de éstos. La tabla x muestra que los valores de
los parámetros cinéticos y estequiométricos son similares en los 8 experimnentos.
Aguilar et al.,(2000) determinó que tanto el sulfato de amonio y el extracto de
levadura (componente rico en aminoácidos y vitaminas) son esenciales para el
crecimiento de esta cepa , por lo que el alto contenido nutrimental del jugo de
![Page 16: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/16.jpg)
cebolla provee (en especial por el alto contenido de aminoácidos, ácidos orgánicos
y minerales.) a la levadura de todos los requerimientos necesarios.
Efecto de la aireación en B bruxellensis.
A continuación se expone el resultado de los experimentos realizados en
condiciones de semiaerobiosis, variando el volumen del medio. Las figuras X
muestran la producción de etanol, biomasa y ácido acético.
0 20 40 60 80 100 120 1400
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
R = 10R = 5R = 3.3R = 2
t (h)
EtO
H (g
L-1)
![Page 17: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/17.jpg)
0 20 40 60 80 100 120 1400
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
R = 10R = 5R = 3.3R = 2
t (h)
Biom
asa
(gL-
1)
0 20 40 60 80 100 120 1400
0.5
1
1.5
2
2.5
3
R = 10R = 5R = 3.3 R = 2
t (h)
Ácid
o ac
ético
(gL-
1)
Podemos apreciar en las Figuras anteriores 4 etapas (al menos
fenomenológicamente) de la evolución de las cinéticas. Una primera etapa
consistió en la producción paralela de biomasa, etanol, y una pequeña cantidad de
ácido acético (menor a 0.2 gL-1), así como el consumo de los azúcares totales
(gráfica no mostrada) ocurrida durante las primeras 20 h (8 h de fase de
![Page 18: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/18.jpg)
adaptación), aproximadamente. Una segunda etapa se aprecia de las 20 a 40 h
donde no ocurre síntesis de biomasa (segunda fase lag), pero sí un consumo lento
de etanol y paralelamente, la producción de ácido acético (en los experimentos
R10 y R5, al parecer en R2 y R3.3 esto ocurre después). En esta etapa se alcanzó
una máxima concentración de 2.1 gL-1 en R10 y 0.47 gL-1 en R5. Una tercera
etapa comienza con la reanudación de síntesis de biomasa y el consumo de
etanol (más rápido que en la etapa anterior) y de ácido acético. Dentro de esta
última etapa se aprecian que la síntesis de biomasa pasa a una tercera fase lag,
para luego nuevamente crecer (lentamente).
Etapas similares fueron reportadas para B. intermedius en condiciones de
aireación por Wijsman et al., (1984), con la diferencia que la cantidad de ácido
acético fue superior a la de este trabajo. En efecto, la cantidad de ácido acético
producido está muy por debajo por lo reportado en otros trabajos para esta misma
cepa, empleando flujos de aire controlado (0.015 gg-1 contra 0.15 gg-1 obtenido
por Ortiz, et al., 2013). Al parecer las condiciones de semiaerobiosis no fueron
suficientes para que se presentaran cantidades altas ácido acético (efecto Custer).
Aguilar et al., (2003) encontró que bajas tasas de aireación (0.05 y 0.1 vvm, OTR=
21.4 y 43 mg O2/L, respectivamente) favorecen la síntesis de biomasa sobre la
producción de ácido acético y etanol y que a esas condiciones el O2 se vuelve un
factor limitante (la concentración de O2 a cierto tiempo se vuelve cero). Para
poder estudiar con más detalle si el jugo de cebolla es adecuado para la
producción de ácido acético, se necesitarán realizar experimentos en biorreactor y
con flujos de aire controlado.
![Page 19: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/19.jpg)
Conclusiones.
Debido a los componentes inhibitorios (Horichi, 1999) el jugo de cebolla tiene que
ser esterilizado para poder volatilizar estos compuestos. El mejor tiempo de
esterilización de jugo de cebolla encontrado en este trabajo para el crecimiento de
S. cerevisiae ITV01 y B bruxellensis IHEM-6037 es de 20 min.
Por otra parte, dada el contenido nutrimental del jugo de cebolla (2.77 gL-1 de
aminoácidos) se encontró que la adición de los nutrientes probados no tuvo efecto
sobre la fermentación del mismo con ninguna de las dos levaduras.
Finalmente, las condiciones de semiaerobiosis probadas no arrojaron un valor
considerable de ácido acético, por lo que se requerirán experimentos posteriores
(por ejemplo, emplear un flujo de 0.6 vvm y/o añadir glucosa para obtener
mayores rendimientos de ácido acético).
![Page 20: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/20.jpg)
![Page 21: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/21.jpg)
![Page 22: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/22.jpg)
![Page 23: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/23.jpg)
![Page 24: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/24.jpg)
![Page 25: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/25.jpg)
![Page 26: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/26.jpg)
![Page 27: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/27.jpg)
![Page 28: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/28.jpg)
![Page 29: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/29.jpg)
![Page 30: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/30.jpg)
![Page 31: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/31.jpg)
![Page 32: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/32.jpg)
![Page 33: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/33.jpg)
![Page 34: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/34.jpg)
![Page 35: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/35.jpg)
![Page 36: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/36.jpg)
![Page 37: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/37.jpg)
![Page 38: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/38.jpg)
![Page 39: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/39.jpg)
![Page 40: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/40.jpg)
![Page 41: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/41.jpg)
![Page 42: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/42.jpg)
![Page 43: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/43.jpg)
![Page 44: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/44.jpg)
![Page 45: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/45.jpg)
![Page 46: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/46.jpg)
![Page 47: Metodología](https://reader036.fdocuments.ec/reader036/viewer/2022081603/5695cfee1a28ab9b02902b0b/html5/thumbnails/47.jpg)
El tiempo de fermentación empleado fue de 36 h para S. cerevisiae y 72 h para B
bruxellensis.
Resultados.