Manual Bacteriologia

0

CONTENIDO

Pg. SUBCOMPETENCIA 1 ................................................................................................................ 1

PRCTICA 1. COPROCULTIVO E INFECCIONES GASTROINTESTINALES ........................ 1

PRACTICA 2. UROCULTIVO E INFECCIONES DE LAS VAS URINARIAS ........................ 13

PRCTICA 3. EXUDADO FARNGEO Y NASOFARNGEO ................................................. 23

SUBCOMPETENCIA 2 ............................................................................................................. 29

PRCTICA 4. SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS (ANTIBIOGRAMA) .............. 29

PRCTICA 5. INFECCIONES DE VAS RESPIRATORIAS BAJAS (CULTIVO DE ESPUTO)

................................................................................................................................................... 33

PRCTICA 6. BSQUEDA E IDENTIFICACIN DE Mycobacterium tuberculosis

................................................................................................................................................... 39

PRCTICA 7. DIAGNSTICO DE ENFERMEDADES MENNGEAS

(CULTIVO DE LCR) .................................................................................................................. 46

PRCTICA 8. HEMOCULTIVO Y CULTIVO DE MDULA SEA ........................................ 51

PRCTICA 9. INFECCIONES DEL APARATO GENITAL: EXUDADO CERVICO VAGINAL Y

EXUDADO URETRAL .............................................................................................................. 57

PRCTICA 10. CULTIVO DE EXUDADO OCULAR, INFECCIONES OCULARES.............. 66

PRCTICA 11. EXUDADO TICO (ODO MEDIO) INFECCIONES TICAS .................... 71

PRCTICA 12. CULTIVO DE HERIDAS ................................................................................ 75

BIBLIOGRAFIA GENERAL.......................................................................................................80

ANEXOS

ANEXO I. INSTRUMENTOS DE EVALUACIN ................................................................ 82

ANEXO II. LINEAMIENTOS GENERALES EN MATERIA DE SEGURIDAD E HIGIENE A

SEGUIR EN LOS LABORATORIOS .................................................................................... 86

1

SUBCOMPETENCIA 1

PRCTICA 1. COPROCULTIVO E INFECCIONES GASTROINTESTINALES

1.1 GENERALIDADES

El estudio de las bacterias responsables de cuadros clnicos gastrointestinales se

realiza fundamentalmente mediante el cultivo de la materia fecal (coprocultivo).

Las enfermedades diarreicas agudas representan una de las principales causa de

defuncin en nuestro Pas. Las vas gastrointestinales son el hbitat natural de

una extensa variedad de microorganismos, la mayora de las bacterias de la flora

entrica residente corresponden a miembros de la familia Enterobacteriaceae,

(Escherichia coli, Proteus etc.) aunque tambin son abundantes Enterococcus

faecalis, diversas especies de Staphylococcus, Mvcobacterium y especies

anaerobias. Siendo de mayor relevancia diagnstica las enterobacterias

patgenas como: Shigella, Salmonella, Yersinia, Escherichia coli, esta ltima

aunque se considera parte de la flora algunos serotipos denominados

enteropatgenos son capaces de producir gastroenteritis, principalmente en

lactantes en forma de brotes epidmicos. Adems de otros gneros de

importancia mdica como Vibrio, Campylobacter y Helicobacter que pertenecen a

otras familias.

1.2 OBJETIVO

Realizar el coprocultivo correctamente para que ste sirva como apoyo al

diagnstico clnico en caso de gastroenteritis.

2

1.3 MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

Gradillas

Bao mara

Porta y cubre-objetos

Marcador de vidrio

Placas de Petri con Agar: Mac

Conkey, S.S, XLD, Sulfito de

Bismuto, Entrico de Hektoen,

EMB, Campy-BAP, TCBS. Gelosa

sangre de Carnero

Caldo selenito o tetrationato

en tubos de 13x100 con 2 mL.

Tubos con: Caldo soya

tripticasa, Agua Peptonada

alcalina (APA) a pH 9.0

Pruebas bioqumicas en tubos de

13x100 con medio de: TSI LIA,

MIO, urea de Christensen, Citrato

de Simmons.

Colorante de Azul de Metileno

Antisueros para la Serotipificacin

de Salmonella, E. coli y Shigella

Solucin salina isotnica en tubos

de 13x100 con 2mL

Aceite de Inmersin.

Frasco con Benzal

Buffer de PBS

Solucin de Iodo

Juego de colorantes de Gram

Taxos de Oxidasa

1.4 PROCEDIMIENTO

Toma y transporte de muestra para coprocultivo

1. Obtener las muestras al inicio del cuadro clnico antes de iniciar el

tratamiento antimicrobiano.

2. Tomar la muestra de heces directamente en un frasco limpio de boca

ancha y con tapa hermtica, de preferencia debe usarse estril y

desechable.

3. Cuando se trate de lactantes tomar la muestra directamente del recto

usando sonda K31 conectada a una jeringa estril e introducindole

solucin salina isotnica.

3

4. Sembrar de inmediato, si la muestra se toma en el mismo laboratorio

donde se va a procesar el aislamiento, no es necesario usar medio de

transporte.

5. En estudios de campo o cuando el laboratorio no est cercano, tomar la

muestra con un hisopo que debe quedar bien impregnado de materia

fecal.

6. Colocar el hisopo en un medio de transporte como el de Cary-Blair o el de

Stuart-Amies.

7. Refrigerar la muestra slo en ocasiones extremas.

Manejo de las heces fecales

1. La observacin directa de las heces es de suma importancia dado que se

debe observar s presenta moco, sangre, y si son liquidas, pastosas, o

diferente color.

2. La observacin directa de la muestra con una gota de azul de metileno nos

orienta para saber si existen leucocitos polimorfonucleares, si existen

parsitos, eritrocitos y el tipo de flora la nica excepcin es el diagnstico

presuntivo de Campylobacter el cual puede lograrse si la preparacin se

observan dentro de las dos primeras horas de haber obtenido las

muestras, como formas vibrinicas y helicoidales.

3. La tincin de Gram en frotes de materia fecal es importante para

corroborar la presencia de Campylobacter en sus formas vibrinicas y

helicoidales, comprobar la presencia de clulas indicativas de inflamacin,

eritrocitos etc.

4. En el diagrama No 1 y 2 se muestran los pasos a seguir para el aislamiento

de enterobacterias. (Con nfasis en Salmonella, Shigella, E. coli, Yersinia

enterocolitica, adems de Vibrio y Campylobacter.)

5. La materia fecal se siembra directamente con un asa y la cantidad de

muestra depende el tipo de medio de cultivo usado. El mtodo usado es

4

por la tcnica de estra cruzada esterilizando el asa en cada seccin de la

placa y separando la estra.

6. Las placas se incuban a 37 C durante 18-24 Hrs.

7. Al mismo tiempo que las placas sembrar el tubo de enriquecimiento con

muestra fecal usando una cantidad pesada de inoculo, la proporcin ideal

es de 10% peso/volumen, este puede ser caldo tetrationato o caldo

telurito. S se sospecha de Vibrio sembrar la muestra en un tubo con agua

peptonada alcalina (APA) Despus se incuba a 37C durante 12-18 hrs.

8. A partir de la siembra directa de los medios diferenciales y selectivos

seleccionar por lo menos dos o tres colonias no fermentadores de lactosa

Lac (-) o productoras de H2S morfolgicamente acorde a las

enteropatgenas

9. A partir de una sola colonia aislada en los medios que se indicaron, se

siembran los tubos de bioqumicas y se incuban de 18-24 h a 37 C.

10. La interpretacin de estos resultados se hace de acuerdo al diagrama 2

11. Realizar la prueba de Oxidasa de la colonia sospechosa, la cual se hace con

el crecimiento del tubo de LIA.

12. Del tubo de enriquecimiento despus de incubado se siembran las placas

de los medios ya mencionado y se incuba de 18-24 h.

13. Pasado este tiempo se escogen colonias sospechosas Lactosas (-) y se

siembra el set de pruebas bioqumicas.

14. Nuevamente la interpretacin de resultados se hace de acuerdo al

diagrama.

5

Figura 1. Identificacin de bacterias patgenas gastrointestinales.

6

Figura 2. Identificacin de Salmonella, Shigella y E. coli.

Serotipificacin de Salmonella

1. Una vez que se ha determinado la presencia de Salmonella en la muestra

clnica, se serotipifica primero los grupos somticos B, C1, C2 D O E. (que son

los ms frecuentes en Mxico) Se utilizan los antisueros correspondientes.

2. Si hay reaccin cruzada, la suspensin bacteriana se hierve por 10 min en

bao mara, se centrifuga a 3,500 rpm por 10 min y se desecha el sobrante. El

sedimento se resuspende en solucin salina y se repite el punto 1.

3. Una vez determinado el grupo somtico se busca el grupo flagelar al que

pertenece la cepa. A partir de la de una suspensin en solucin salina o del

7

tubo de TSI, se siembra un tubo con caldo Soya tripticasa se incuba 37 C del

8-24 h.

4. Se agrega un volumen igual de solucin salina formalizada al 0.6% y se deja

reposar cuando menos 2 o 24 horas .Este es el antgeno formalinizado.

5. En un tubo se colocan 0.1 mL de antisuero flagelar que corresponde al grupo

somtico y se agrega 0.9 mi del antgeno formalinizado. Se agita

vigorosamente, se incuba una hora a 50C en bao mara y con cuidado se

sacan los tubos procurando no agitarlos y leer.

POSITIVA = Aglutinacin con formacin de un inoculo que se deshace al

agitar.

NEGATIVA = Sin aglutinacin.

6. La mayora de los cultivos de Salmonella presentan dos niveles y para

identificar al serotipo que pertenecen es necesario identificar ambos.

Serotipificacin de Shigella

1.- El serotipo de las cepas de Shigella se determina utilizando los antisueros

siguientes:

Polivalente A 1-7: S. dysenteriae

Polivalente B 1-5: S. flexneri

Polivalente C 1-7: S. boydii

Monovalente B-6: S. flexneri tipo 6

Monovalente S. sonnei I-II

Monovalente S. dysenteriae 8, 9 y 10

2.- Se utiliza el mtodo descrito de aglutinacin bacteriana.

Serotipificacin de cepas de Escherichia coli enteropatgena

Con las cepas de Escherichia coli aisladas de nios con diarrea con moco y

sangre, especialmente los menores de un ao, se hace una suspensin bacteriana

en PBS a partir del tubo con TSI y se realiza una prueba de aglutinacin

8

bacteriana con un antisuero polivalente contra los tipos A, B o C de E. coli (cepas

de E. coli enteropatgenas o EPEC).

Identificacin de Campylobacter jejuni

La identificacin de Campylobacter es posible realizarla presuntivamente de la

materia fecal con observar al microscopio su morfologa, en el diagrama No 1 se

puede observar.

Identificacin de Vibrio cholerae

Proceder como la siguiente figura:

Figura 3. Aislamiento de Vibrio cholerae

9

Reporte del coprocultivo

Realizar un informe del estudio para el mdico incluyendo los siguientes datos:

1. Nombre completo del Paciente.

2. Edad y sexo del mismo.

3. Tipo de cultivo

4. Si la muestra contena microorganismos de la flora normal, o las bacterias

patgenas a nivel intestinal.

5. Las caractersticas principales de la muestra

6. Sus observaciones con las diferentes tinciones.

7. Si existe algn comentario se le realiza al mdico con sus respectivas

sugerencias.

8. Firmar el resultado de responsable de los datos

9. Se aisl Flora Intestinal Normal.

Preparacin de un frotis y de un fresco fecal

Tambin en un coprocultivo no se debe descartar la observacin de protozoos y

otros microorganismos, realizando una preparacin en fresco de las heces

fecales, como se muestra en el diagrama 4. Para la bsqueda de

polimorfonucleares se realiza un frotis de moco fecal.

10

Figura 4. Procedimiento para Amiba en fresco y frotis de moco fecal.

1.5 CUESTIONARIO

1.- Cules son las caractersticas en la morfologa colonial de Salmonella y

Shigella en los diferentes medios de cultivo que les diferencia de la mayora de

las bacterias de la familia Enterobacteriaceae?

2.- Qu cuidados debe tener un paciente a la hora de recolectar su muestra

fecal para coprocultivo?

3.- Qu es infeccin intestinal y cmo se puede diagnosticar?

4.- Qu otras cepas de E. coli son consideradas patgenas?

11

1.6 TRATAMIENTO Y DISPOSICION DE RESIDUOS

Figura 5. Diagrama ecolgico: aislamiento e identificacin de bacterias.

D1. Inactivar con Hipoclorito de sodio al 5% durante 10-15 min y desechar en

el retrete.

D2. Esterilizar en autoclave 121C, 15 min y deschar como residuo orgnico.

D3. Inactivar con Hipoclorito de sodio al 5% durante 10-15 min. Lavar y secar

para su reuso.

D4. Esterilizar en autoclave 121C, 15 min y desechar como residuo orgnico.

D5. Colectar los residuos en recipientes, etiquetar y confinar en almacen

temporal hasta su desecho final como RP.

D6. Esterilizar en autoclave 121C, 15 min y deschar como residuo orgnico,

lavar y secar los tubos para su reuso.

1.7 EVALUACIN

Ver Anexo I: Instrumentos de evaluacin.

12

1.8 BIBLIOGRAFA

1.- Koneman EW, Allen SD, Jamda WM, Scneckenherger PC, Win W.

(1999).Diagnstico Microbiolgico. Texto y Atlas color. 5 Edicin. Ed. Mdica

Panamericana, SA de CV. Buenos Aires Argentina.

2.- Molina J. Manjarrez M. Tay J. (2010) Microbiologa, Bacteriologa y Virologa.

Mndez editores. Mxico DF.

13

SUBCOMPETENCIA 1

PRCTICA 2. UROCULTIVO E INFECCIONES DE LAS VAS

URINARIAS

2.1 GENERALIDADES

Las vas urinarias normalmente son estriles por encima del nivel de la uretra

distal, se entiende la aparicin de bacterias definindose la infeccin de stas

como la presencia de un gran nmero de bacterias en la orina. Las infecciones de

las vas urinarias son muy frecuentes, y presentan una marcada resistencia al

tratamiento y muchas de ellas con tendencia a recidivar especialmente en las

personas del sexo femenino, considerndose riesgosas porque pueden

evolucionar a enfermedades renales graves, como pielonefritis, presentndose

en algunos casos de manera asintomtica, o como enfermedad aguda o crnica.

Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo,

las infecciones crnicas por varios microorganismos.

Las bacterias que con mayor frecuencia se aslan de la orina de pacientes son:

E. coli, Staphylococcus, Proteus, Enterococcus faecalis, Salmonella, Pseudomonas,

Mycobacterium, ocasionalmente Neisseria gonorrhoeae, Candida albicans.

2.2 OBJETIVO

Realizar correctamente un urocultivo para que ste sirva como apoyo al

diagnstico clnico en caso de infecciones de vas urinarias.

14

2.3 MATERIALES, EQUIPOS, Y REACTIVO

Placas de Petri con Agar:

MacConkey, Sal y Manitol,

Gelosa sangre de carnero,

Thayer, Martn, Dnasa.

Tubos de 13 x 100 con medio de

Biggy, pruebas bioqumicas: TSI,

LIA, MIO, Urea y C. Simmons.

Cuenta colonias

Asa calibrada. Juego de colorantes de Gram

Taxos de catalasa, oxidasa,

PN, ESD, Bacitracina 0.04 U

Porta-objetos y cubreobjetos.

Pipetas estriles

. Matraz de Agar Nutritivo

estril.

Solucin Salina Isotnica.

2.4 PROCEDIMIENTO

Requisitos de la toma de muestra

Para lograr que el cultivo de orina sea veraz es de suma importancia que las

muestras sean obtenidas en forma correcta, as como en condiciones ptimas

para un buen resultado confiable. Como se ver ms adelante.

Tcnica del chorro medio

Debido que la uretra est contaminada por bacterias, especialmente cerca del

orificio externo, es importante hacer una desinfeccin local antes de tomar la

muestra para eliminar todo tipo de contaminacin, este mtodo es importante en

pacientes que tiene control de su vaciamiento vesical. En recin nacidos y

ancianos est tcnica se dificulta por su edad.

Indicar al paciente que se realice un aseo escrupuloso de genitales con agua y

jabn o con cloruro de benzalconio diluido 1:1000.

Se prefiere obtener la primera orina de la maana (la parte media de la miccin

desechando el primer chorro as como la ltima parte de la miccin).

15

La muestra de orina se recoge en un frasco de boca ancha estril y desechable, en

los bebes se usan bolsas recolectoras estriles.

No deben pasar ms de dos horas, entre la toma de muestra y su proceso, ya que

la orina es un excelente medio de cultivo.

El paciente no debe estar ingiriendo medicamentos antimicrobianos.

La muestra al llegar al laboratorio se debe identificar en forma correcta con los

datos del paciente como nombre, edad, sexo.

Es importante seguir los pasos de los esquemas ms adelante para la toma de

muestra tanto para el sexo femenino como masculino.

Aspiracin suprapbica

Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal Mdico. Se usa

para obtener el diagnstico exacto en los recin nacidos y en los nios pequeos,

es una forma de demostrar el origen de la infeccin de la vejiga y la bacteriuria

con microorganismos que se originan ms all de la vejiga, as como la bsqueda

de bacterias anaerobias.

Hacer una puncin directa en la vejiga a travs de la pared abdominal con aguja y

jeringa.

Este tipo de mtodos se considera muy agresivo.

Cateterismo

Es poco recomendable por el peligro de acarrear agentes infecciosos, por lo cual

debe hacerse en forma muy cuidadosa.

Utilizar un catter estril, que se introduce por el meato urinario, el cual debe ser

desinfectado escrupulosamente.

Aspirar la orina y se coloca en un frasco estril.

16

Transporte de la muestra

Dado que la orina es un excelente medio de cultivo y las bacterias se multiplican

rpidamente s la muestra se deja a temperatura ambiente durante un tiempo

corto.

En caso que el laboratorio no est cerca las muestras se deben transportar

inmediatamente en menos de una hora o en su defecto en refrigerantes que

obtengan una temperatura de 4C para que la cuenta bacteriana se mantenga con

el nmero de bacterias en forma constante.

Pueden utilizar sistemas de transporte de orina que hay en el mercado.

Asilamiento e identificacin

1,. Inocular la muestra en los medios de cultivo seleccionados

2.- incubar a 37C durante 24 hrs

3.- Tomar una colonia susceptible de ser la causante de infeccin y realizar una

tincin de Gram.

4.- Inocular la Pruebas bioqumicas con la o las colonias sospechosas.

5.- Interpretar los resultados de la Pruebas bioqumicas.

Mtodo del asa calibrada

1. Inocular un volumen conocido de orina en la placa basndose en el uso del asa

calibrada.

2. Agitar la orina, y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que

solo entre la rueda y se descarga en lnea rectas en el centro de la placa y se

estra.

3. Incubar las placas a 37C por 24 hrs.

4. Contar el nmero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las

unidades formadoras de colonias por mL. UFC/mL.

5. Identificar el microorganismo segn sus caractersticas.

17

Mtodo de dilucin con pipeta

1. Se coloca 0.1 mi de orina en 9.9 mL de solucin salina isotnica (dilucin 10)

se homogeneiza el tubo perfectamente.

2. Con una pipeta estril se toman 0.1 mL de esta dilucin y se transfiere a un

segundo tubo conteniendo 9.9 mL de solucin salina isotnica (dilucin 10 a)

3. Se toman 0.1 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios

de cultivo seleccionados.

4. La suspensin bacteriana se extiende rotando las placas suavemente, se incuba

a37C de 18-24hrs.

5. Se cuenta el nmero de colonias de acuerdo al factor de dilucin

correspondiente.

Mtodo de vaciado en placa

Se coloca 1 mL. de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas

de Petri estriles.

Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45C se rota suavemente la

placa para que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio.

3. Se incuba las placas a 37C de 18-24 h.

4. Se cuentan el nmero de colonias.

5. De acuerdo al factor de dilucin se calcula las UFC/ ML

En el siguiente esquema se muestra la forma correcta de recolectar las muestras

de orinas para un urocultivo.

Recoleccin de muestras de orina en Varones:

1.- Realice un aseo del rea pbica con jabn y abundante agua. Cualquier

residuo de jabn puede causar errores en el anlisis. Seque perfectamente el

rea pbica.

2.-En pacientes no circuncidados se retrae la piel que cubre la cabeza del glande

con un movimiento hacia atrs para exponer el meato uretral (figura 6).

18

Figura 6. Exposicin del meato urinario en pacientes no circuncidados.

3.- Debe realizar una limpieza con una gasa (de preferencia estril) empezando

por la punta y recorriendo hacia la base. La limpieza se repite empleando una

segunda gasa (figura 7).

Figura 7. Limpieza del meato uretral.

4.- Se inicia la miccin sin recolectar la primera fraccin, la cual se desecha en el

excusado.

5.-En el recipiente que se le proporciono en el laboratorio. Recolecte la fraccin

del chorro medio.

6.- Retire el vaso recolector del chorro y termine de orinar desechando la

fraccin final en el excusado.

Recoleccin de muestras de orina en mujeres

1.- Realice un aseo del rea pbica con jabn y abundante agua. Cualquier

residuo de jabn puede causar errores en el anlisis. Seque perfectamente el

rea pbica.

19

2.- Debe sentarse en el excusado con las piernas separadas y con los dedos

separar los labios mayores que cubren la vagina. Al separar los labios mayores

con los dedos pulgar e ndice quedara al descubierto el orificio urinario (figura 8).

Figura 8.Exposicion del meato urinario.

3.- Con una gasa (de preferencia estril) se realiza una limpieza en la parte

interna de los labios genitales (meato urinario) y el rea que lo rodea con un

movimiento de adelante hacia atrs. Este procedimiento debe repetirse con una

segunda gasa.(figura 9)

Figura 9. Limpieza del meato urinario.

4.-Manteniendo los labios del rea genital separados se debe iniciar la miccin.

Se inicia la miccin sin recolectar la primera fraccin, la cual se desecha en el

excusado.

5- En el recipiente que se le proporciono en el laboratorio, recolecte la

fraccin del chorro medio.

20

Figura 10. Recoleccin de la muestra.

6- Retire el vaso recolector del chorro y termine de orinar desechando la fraccin

final en el excusado.

Reporte

Una parte importante del urocultivo es la interpretacin de los resultados. El

criterio de 100,000 o ms grmenes por mL de orina para el diagnstico de la

bacteriuria significativa es primariamente de ndole operacional, cuando se

emplea el mtodo del vaciado asptico para recoger las muestras. Actualmente

se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria verdadera.

La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden

sobradamente el 1, 000,000 de colonias por mL; menos de 10,000 UFC/ mL se

considera negativo. Sin embargo es muy importante el criterio del mdico de

acuerdo al estado clnico de su paciente.

La forma del reporte es de la siguiente forma:

Nombre del Paciente, edad fecha

Nombre del mdico

Tipo de Estudio: Por ejemplo, se aisl E. coli 650, 000 UFC/mL. Negativo a las 48

hrs. de incubacin.

Firma del Responsable.

21

2.5 CUESTIONARIO

1.- Explique la importancia clnica del aislamiento e identificacin de este grupo

de bacilos Gram-negativos no fermentadores (Pseudonomas) en un laboratorio

de bacteriologa clnica.

2.- Por qu es comn encontrarla en un urocultivo Escherichia coli?

3.- Qu microorganismos son los ms frecuentes de aislar en un urocultivo?

4.- Qu es una bacteriuria y qu la causa?

5.- Cmo se debe recolectar una muestra de orina en nios menores de 5 aos,

para la realizacin de un urocultivo?


Figura 11. Diagrama ecolgico: Aislamiento e identificacin de bacterias.


el retrete.


para su reuso.


22





2.7 EVALUACIN


2.8 BIBLIOGRAFA




2.- Nom. 087. Norma oficial Mexicana para el manejo de RPBI.

3.- Prescott LM, Harley JP, Klein DA (2004). Microbiologa. 5ta. Edicin. Ed. Mc

Graw-Hill Interamericana. Madrid Espaa.

23

SUBCOMPETENCIA 1

PRCTICA 3. EXUDADO FARNGEO Y NASOFARNGEO

3.1 GENERALIDADES

El estudio del exudado farngeo y nasofarngeo es importante para el diagnstico

de ciertas infecciones consideradas dentro de las principales causas de

morbilidad y mortalidad en todo el mundo. Dentro de las principales bacterias

patgenas causantes de infeccin estn los estreptococos, adems de otras

enfermedades no bacterianas como la difteria, la tosferina y la candidiasis. Es

muy importante conocer la flora normal en las vas respiratorias altas y bajas para

un buen reporte, ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a

los patgenos de los comensales con ayuda del cultivo.

El exudado farngeo y nasofarngeo son las muestras clnicas ms empleadas para

el estudio bacteriolgico de una infeccin de vas respiratorias superiores y es

requisito importante que sean tomadas en forma adecuada para garantizar

resultados confiables y correctos.

3.2 OBJETIVO

Realizar los exudados farngeo y nasofarngeo correctamente para que ste sirva

como apoyo al diagnstico clnico en caso de enfermedades de vas respiratorias.


Placas de Petri con Agar: Tubos de 13 x 100 con caldo Soya

24

Sangre de camero al 5%, Sal y

Manitol, MacConkey, Thayer-

Martin, Hemina bacitracina

extracto de levadura(GHBL).

medio de Biggy

Tripticasa ,pruebas bioqumicas. TSI,

LIA, MIO, CS y Urea

Tubos de Caldo soya tripticasa con

6.5 % NaCl

Sensidiscos de Optoquina

Matraz con 15 mi de agar de

Soya tripticasa

Hisopos estriles

Sensidiscos de Novobiocina

Abatelenguas estriles Colorantes de Gram.

Frasco con cloro Sensidiscos de Bacitracina de 0.04 U

3.4 PROCEDIMIENTO

Toma y transporte de la muestra:

Exudado farngeo:

Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro clnico antes de

empezar cualquier tratamiento.

1. Indicar al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal.

2. No haber ingerido ningn tipo de alimento.

3. No haber ingerido ningn antimicrobiano.

4.- Inclinar la cabeza del paciente hacia atrs y se revisa con una lmpara la zona

afectada

5. Empujar la lenguas hacia abajo con un abatelenguas estril que permita mejor

visin.

6. Introducir un hisopo hacia las amgdalas, sin tocar la lengua para nada; frotar

suavemente la zona afectada.

7. Evitar tocar la lengua, los dientes o la mucosa.

25

Exudado nasofarngeo:

1. Utilizar un hisopo que sea de algodn tratado, de alginato de calcio o en su

defecto de dacrn que su mango sea flexible que no lastime al paciente.

2. Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando

de tocar solo el extremo posterior del mango y evitar tocar solo los cornetes.

3. Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con

movimiento rpido.

Transporte de la muestra:

1. En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deber depositar

en medio de transporte.

2. El mdico debe indicar en base al cuadro clnico, el germen que sospecha, para

aplicar los requerimientos de cada una de las bacterias en la siembra y

procesamiento de las muestras inmediatamente.

Seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta prctica. Aunque el uso de

gelosa sangre de camero es obligado para la bsqueda de Streptococcus beta

hemoltico.

1. Se toma la muestra como ya se indico anteriormente se siembra en los

medios como son: Gelosa sangre de carnero, Thayer Martin, Sal y Manitol etc.

2. Se incuban 24 h a 37C

3. Hacer frotes y teir por tcnica de Gram., Ziehl Neelsen, Giemsa para

investigar asociacin con fusoespirilar.

4. S en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir

un diagrama de trabajo especfico para su identificacin as como el aviso

inmediato a las autoridades de la S.S.A.

5. Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos

patgenos.

6. Es importante en nios menores de cinco dos aos 1 investigacin de

Haemophilus influenzae.

26

7. Es de gran trascendencia epidemiolgica determinar la presencia de

portadores de Neisseria meningitidis.

8. Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante

sembrar las muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama

especfico para su identificacin as como el aviso de los casos a la S.S.A.

Reporte:

El reporte al mdico es de acuerdo a nuestros resultados, es importante tomar en

cuenta la edad y sexo del paciente.

1. Se aisl Flora Normal

2. Se identific el siguiente microorganismo, se pone gnero y especie

3. Es posible encontrar ms de un microorganismo patgeno en un cultivo

4. De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene ms de una

bacteria patgena a cada una se les realiza su antibiograma

3.5 CUESTIONARIO

1.- Explique la importancia clnica del aislamiento e identificacin de este grupo

de microorganismos causantes de enfermedades de vas respiratorias, en un

laboratorio de bacteriologa clnica.

2.- Por qu es necesario realizar un antibiograma?

3.- Qu microorganismos son los ms frecuentes de aislar en un exudado

nasofarngeo?

4.- Qu otras enfermedades son causadas por microorganismos en vas

respiratorias, tanto altas como bajas?

27


Figura 12. Diagrama ecolgico: Aislamiento e identificacin de bacterias.


el retrete.



para su reuso.






3.7 EVALUACIN


28

3.8 BIBLIOGRAFA







29

SUBCOMPETENCIA 2

PRCTICA 4. SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS (ANTIBIOGRAMA)

4.1 GENERALIDADES

Plantear la necesidad de saber cul es el antimicrobiano que se debe utilizar para

eliminar el microorganismo que est provocando la infeccin, es de suma

importancia en pacientes cuyas terapias antimicrobianas han tenido poco xito.

Principalmente en pacientes hospitalizados. Para esto es necesario conocer:

1. La susceptibilidad del microorganismo "in vitro"

2. La relacin de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la

misma especie.

3. Las propiedades farmacolgicas de los antimicrobianos, incluyendo su

toxicidad, distribucin, absorcin y excrecin.

4. Experiencia clnica en el tratamiento

5. Historia natural del proceso patolgico.

6. El estado inmune del husped

Al determinar la susceptibilidad a los microorganismos "in vitro", el laboratorio

dar una pauta a seguir sobre el tratamiento, sin dejar de considerar las

diferencias en su actividad in vitro.

Para este tipo de estudios existen varios mtodos como son:

1. Dilucin seriada en tubo; 2. Dilucin seriada en placa; 3. Difusin en discos de

papel filtro; 4. Sistemas automatizados.

La seleccin del mtodo depender de:

1. Nmero de pruebas que se procesen diariamente.

2. Tipo de microorganismo que se trata, del sitio que se aisle, tipo de

patogenicidad etc.

3. Equipo automatizado que se cuente.

30

4.2 OBJETIVO

Adquirir la destreza para la realizacin de antibiogramas, as como una buena

lectura del antibiograma, para apoyar en el diagnstico clnico.


Placas con medio de Mueller-

Hinton de 15 cm de dimetro

Placas con medio de Mueller-Hinton

con sangre de camero

Tubos con 4 mL de caldo

Mueller Hinton

Hisopos estriles

Solucin salina isotnica estril

Pinzas

Tubo del Nefelmetro de Mac

Farland al 0.5%

Sensidiscos para grampositivos y

gramnegativos

Regla transparente

Cepas control

4.4 PROCEDIMIENTO

1. Tocar con un asa en punta 4 5 colonias morfolgicamente iguales e inocular

en un tubo con caldo Mueller-Hinton

2. Incubar a 35C que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)

3. Ajustar la turbiedad tomando como referencia el tubo 0.5 del Nefelmetro.

4. Introducir el hisopo en el caldo con la suspensin bacteriana, quitar el exceso

de caldo en las paredes del tubo.

5. Sembrar uniformemente el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en

tres direcciones y al final pasar el hisopo en el borde de la placa.

6. Distribuidos los sensidiscos uniformemente o en su defecto usar un

dispensador automtico.

7. Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35C.

31

8.- Medir los halos de inhibicin con la regla.

9. Interpretar los dimetros de las zonas de inhibicin de las cepas con base a las

tablas del fabricante.

Reporte

Informar la actividad de los antibiticos contra los microorganismos empleados

Revisar los resultados de las cepas control.

Probar el comportamiento hacia otros antibiticos si la cepa es de

microorganismos resistentes a la penicilina

Usar eritromicina y tetraciclinas como alternativa s el paciente es sensible a la

penicilina.

Reportar gnero y especie de la bacteria y los resultados del antibiograma.

4.5 CUESTIONARIO

1.- Explique la importancia clnica de realizar un antibiograma.

2.- Qu es un antibitico?

3.- Cules son los mtodos de cuantificacin de microorganismos de acuerdo a

la sensibilidad o resistencia los antimicrobianos?

4.6 TRATAMIENTO Y DISPOSICIN DE RESIDUOS

Figura 13. Diagrama ecolgico : Aislamiento e identificacin de bacterias

32


D2. Esterilizar en autoclave 121C, 15 min y deschar como residuo orgnico el

medio de cultivo. Lavar y secar los tubos para su reuso.


4.7 EVALUACIN


4.8 BIBLIOGRAFA




2.- Holt, J., Krieg. N. et al.(1994). Manual Determinativo de bacteriologa de

Bergey. 10 Edicin. Editorial Lippincott Williams an Wilkins. Philadelphia USA.

3.- Mandigan MT, Martinko JM, Parker J (1999).Brock. Biologa de los

Microorganismos. Ed. Prentice Hall. 8va Edicin. Madrid.

33

SUBCOMPETENCIA 2

PRCTICA 5. INFECCIONES DE VAS RESPIRATORIAS BAJAS (CULTIVO DE ESPUTO)

5.1 GENERALIDADES

Las infecciones de las vas respiratorias inferiores son causa importante de

enfermedad y muerte a nivel nacional. Siendo la tuberculosis en sus diferentes

cuadros agudos, una de las ms frecuentes.

De los principales agentes bacterianos asociados a neumonas sobre salen en

primer trmino Streptococcus pneumoniae. Klebsiella pneumoniae,

Haemophilus influenzae: bacterias del tipo anaerobio tienen un papel

importante en algunas muestras, por lo que se recomienda la bsqueda de

Chlamvdia pneumoniae Mvcoplasma pneumoniae que se asocia con neumonas

atpicas, Francisella tularensis, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa,

levaduras del tipo de Candida albicans.

En este tipo de estudios el reporte preliminar de las tinciones para el inicio del

manejo antimicrobiano es de suma importancia.

El esputo puede no ser el espcimen de eleccin para determinar el agente

etiolgico en una neumona, sangre, lavado o aspirado transtraqueal pueden ser

ms adecuados. Secreciones del tracto respiratorio bajo de pacientes con datos

de infeccin, deben presentar alta cantidad de leucocitos y ausencia de clulas

epiteliales. La presencia de estas indica contaminacin de secrecin de

orofaringe.

34

5.2 OBJETIVO

Realizar de manera correcta un esputo, estudio que sirva para cultivar e

identificar las bacterias que se encuentran en las vas bajas respiratorias,

para contribuir al diagnstico clnico.


Placas de Agar Sangre de

camero, Mac Conkey, agar

cetrimida, agar de Sal y Manitol,

agar Thayer Martn, agar

Levinthal, medio de Lowensten

Jensen.

Placas de gelosa sangre en base

Columbia con cido nalidxico y

colisima.


Pipetas Pasteur estriles

Centrifuga

Tubos con medio de Biggy y

tubos de 13 x 100 mm con

pruebas bioqumicas: TSI, UREA,

CS, LIA yMIO

Tubos estriles de plstico

desechable

Juego de colorantes de.Gram, ZiehI-

Neelsen.

. Aceite de inmersin

Taxos de optoquina y bacitracina de

0.04 U y 10 U

Microscopio

5.4 PROCEDIMIENTO

Toma de muestra y transporte

Esputo.- Tomar las muestras al inicio del cuadro clnico sin que se haya

administrado algn antimicrobiano.

1. La muestra debe ser la primera de la maana (al despertase el paciente en

caso que el paciente no espectore se le puede ayudar con nebulizaciones).

2. La muestra se recoge en un frasco estril de boca ancha biodegradable con

capacidad de 30-50 ml. de material transparente y de tapa de rosca.

35

3. La muestra no debe contener saliva, seleccionar aquel producto que

microscpicamente en el examen en fresco resulte representativa por su

elevado nmero de leucocitos y bajo nmero de clulas epiteliales.

4. Procesarse lo antes posible la muestra al llegar al laboratorio.

Lavado o cepillado bronquial

Este tipo de muestras solo son tomadas por un mdico en condiciones aspticas,

evitando la contaminacin con la flora de la cavidad oral.

Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA, Cncer o enfermedad

obstructiva crnica (EPOC).

La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio con las

medidas de seguridad pertinentes: Uso de campana de seguridad, guantes

desechables, cubrebocas y lentes protectores, o en su defecto mascarillas.

Seleccin de la muestra

1. Examinar la muestra microscpicamente para identificar la presencia de sangre

y material purulento as como el color de la misma.

2. Tomar de la porcin ms purulenta o con restos de sangre y a partir de esta

porcin hacer una tincin de ZiehI-Neelsen, tincin de Gram y el examen en

fresco el cual una vez puesto el cubre-objetos se presiona de tal forma que la

muestra se distribuya.

3. Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucin de las clulas

tipo.

4. Examinar por la ptica de Normarsky. Hay que seleccionar 10 campos

representativos y en ellos se cuentan el nmero y proporcin de leucocitos, de

clulas epiteliales de descamacin. Segn los resultados se clasifican de

acuerdo a Welch y Kelly.

5. Cultivar las muestras que sean de clase III. Rechazar las muestras que sean de

clase I y II, no se deben cultivar.

36

Nota. Indicar el motivo del rechazo de la muestra al mdico y solicitar una nueva

muestra; anexarla leyenda: "La muestra no fue aceptada para el cultivo debido a

la presencia de ms de 25 clulas epiteliales por campo microscpico (lOOx).

6. Inocular la porcin sobrante del material purulento en los medios de cultivo

adecuados por estra cruzada, no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa

sangre de camero para certificar la hemolisis.

7. Incubar las placas con sangre a 35-37 C en atmsfera parcial de C02 .

8. Se identifican las bacterias de acuerdo a su gnero y especie.

9. Inocular con pipeta estril el medio de Lowenstein-Jensen

Reporte

1. Proporcionar un informe preliminar despus de la observacin de los cultivos.

2. La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada.

3. Si no se observan microorganismos al trmino de la incubacin y la

identificacin de los microorganismos patgenos que ya se realiz .se debe

enviar el informe final con fecha y firma del responsable. Se debe informar el

cultivo p/e Negativo a bsqueda de S. pvogenes.

4. Si no hay crecimiento despus de dos das el informe final es el siguiente: No

hubo crecimiento bacteriano a las 48 hrs. de incubacin.

5.5 CUESTIONARIO

1.- Por qu es importante realizar un esputo?

2.- Qu otras muestras pueden servir para el diagnstico de alguna enfermedad

de vas respiratorias bajas?

3.- Qu errores se pueden cometer a la hora de realizar el reporte?

4.- Por qu se debe tener cuidado al trabajar con esputos?

37


Figura 14.Diagrama ecolgico: Aislamiento e identificacin de bacterias


el retrete.



para su reuso.






5.7 EVALUACIN


38

5.8 BIBLIOGRAFA




2.- Mac Faddin JF, (2003). Pruebas Bioqumicas para la Identificacin de bacterias

de importancia clnica. 3 Edicin. ED. Mdica Panamericana.




39

SUBCOMPETENCIA 2

PRCTICA 6. BSQUEDA E IDENTIFICACIN DE Mycobacterium tuberculosis

6.1 GENERALIDADES

La tuberculosis en nuestro pas, es actualmente uno de los problemas ms

importantes de salud en los ltimos 5 aos y su resurgimiento se da a partir

de la epidemia de VIH que ataca a todo el mundo.

El diagnstico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos

biolgicos como son: esputo, orina, lavado gstrico, raspado larngeo, lavado

o cepillado bronquial, materia fecal, sangre menstrual, heridas.

6.2 OBJETIVO

Realizar correctamente la bsqueda e identificacin de Mycobacterium

tuberculosis en diferentes productos biolgicos para un acertado diagnstico

clnico.


Tubos estriles de tapn de

rosca de plstico

biodegradable de 40 mL

Cubrebocas o en su defecto mascarilla

Tubos con medio de Lowestein-

Jensen

Frascos estriles Agitador vortex

Equipo de ZiehI-Neelsen Equipo de Auramina Rodamina

NaOH al 4% Pipetas Pasteur estriles

40

Frasco con fenol al 10% Pinzas

Guantes desechables Microscopio

Aceite de inmersin Porta-objetos.

6.4 PROCEDIMIENTO

Requisitos indispensables a cubrir en la toma de muestra.-: 1. Calidad de la

muestra; 2. Cantidad; 3. Envase estril y desechable.

Esputo.- Usar frasco estril biodegradable de boca ancha.

Usar de preferencia la primera de la maana; enviarlas al laboratorio; agregar

carbonato de sodio con la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora

asociada, y disminuir el mal olor.

Usar hisopo larngeo o nasofarngeo en caso de nios.

Orina.- Usar frasco estril de boca ancha y lavado estricto de genitales.

Usar orina de 24hrs o la primera de la maana.

Lavado gstrico.- El muestreo solo lo efecta el mdico utilizando una sonda

gstrica estril y desechable.

Poner el contenido del lavado gstrico en un frasco estril

Procesar las muestras el mismo da que se toman; se trabaja el sedimento.

Lavado cepillado bronquial y pleural.- El mdico deber realizar el muestreo en

frasco estril en sala de operaciones bajo condiciones de asepsia.

Procesar el mismo da que se reciben; trabajar con el sedimento de la misma.

Heces fecales.- La muestra se colecta en frasco estril desechable.

Preparar una suspensin gruesa de materia fecal y solucin salina.

41

Agregar un volumen igual de ter.

Agitar y centrifugar a 3000 rpm durante 5 min. y eliminar el sobrenadante.

Utilizar la capa gelatinosa.

Realizar la tincin de BAAR.

Aadir al resto de las heces NaOH al 4% y seguir los pasos igual que el esputo.

Lquido cefalorraqudeo.- La muestra es obtenida por el mdico en forma

asptica en tubos estriles.

Centrifugar la muestra

Realizar las tinciones y siembra del sedimento se

Teir y sembrar las muestra el mismo da que se recibe.

Tejidos.- Colectar en frasco estril de boca ancha.

Tomar fragmentos de tejidos y triturar en un mortero estril.

Hacer frotis delgados.

Sembrar la muestra en forma directa.

Baciloscopa directa del esputo

1. Hacer un frotis de la porcin purulenta, usando un aplicador de madera.

2. Extender en forma uniforme.

3. Desechar el aplicador dentro del frasco de la muestra.

4. Dejar secar el frote al aire.

5. Fijar al calor.

6. Teir por la tcnica que se tenga para la bsqueda de BAAR.

Esquema de lectura dl portaobjetos teido:

Informe de la baciloscopia en la bsqueda de BAAR para diagnstico de

tuberculosis:

Ausencia de BAAR: NSEABAAR (No se observaron BAAR en todo el frote)

42

BAAR -. Se anota la cifra exacta en 100 campos de inmersin

BAAR+ en 100 campos de inmersin

Tomado de Intemational and Unin Againts Tuberculosis 1977

Concentracin y cultivo del esputo

Dado las caractersticas de las muestras es importante las indicaciones para

prepararlas y poder sembrar en el medio selectivo.

Mtodo de Petroff modificado.

1. Transferir 2 mL del esputo a un tubo de tapn de rosca de plstico desechable

y mezclar con un volumen igual de NaOH al 4% o con rojo de fenol.

2. Agitar el tubo en vortex durante 20 seg. .Incubar a 37 C por 15 min.

3. Centrifugar a 3,000 r.p.m. durante 15 min. (Por ningn motivo se debe abrir la

centrifuga si no se ha detenido completamente).

4. Decantar cuidadosamente el sobrenadante.

5. Neutralizar cuidadosamente el sedimento con HCl 1N o con H2S04 al 8%.

Hasta que el pH final no sea inferior a 6.5, ni superior a 7.2.

6. Sembrar de 7 a 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur estril en dos tubos

con medio de Lowenstein-Jensen .

7. Hacer dos frotis con el sedimento y teir con Ziehl-Neelsen para la bsqueda

de BAAR (puede ser tambin con auramina rodamina).

8. Incubar los tubos a 37C en posicin horizontal con la tapa floja durante 24 a

48 hasta que se evapore el inculo. Posteriormente apretar la tapa para evitar

que la muestra se evapore, incubar durante 60 das.

9. Revisar cada semana hasta la semana ocho, s no hay desarrollo informar como

presuntiva negativa. Reportar como negativo despus de 60 das de

incubacin.

10. Si hay crecimiento, identificar a M. tuberculosis; las caractersticas del

crecimiento son masas pequeas, de superficie mate y consistencia crea.

11. Informar gnero y especie del m.o wncontrado.

43

Tratamiento de la orina

1. Recibir la muestra de preferencia la primera orina de la maana en un frasco

estril de boca ancha.

2. Centrifugar a 3000 r.p.m. por 30 min.

3. Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original, cuidar de limpiar

la boca del tubo con fenol al 10%. Hacer el frotis con el sedimento.

4. Tratar el resto del sedimento con NaOH al 4%, Agregando un volumen 1 a 1 al

volumen del sedimento.

5. Dejar reposar 15min a 37C

6. Seguir los mismos pasos que para la tcnica del esputo para sembrar el

sedimento con pipeta Pasteur estril.

7. Realizar la baciloscopia del sedimento.

Reporte

En caso de tener BAAR positivo reportar previa correlacionarlo con el cultivo.

6.5 CUESTIONARIO

1.- A qu se debe que la tuberculosis sea considerada actualmente como una

enfermedad emergente?

2.- Qu otras muestras pueden servir para el diagnstico?


4.- Por qu se debe tener cuidado al manejar pacientes tuberculosos?

44

6.6 TRATAMIENTO Y DISPOSICIN DE RESIDUOS

Figura 15. Diagrama ecolgico. Aislamiento e identificacin de bacterias


el retrete.


para su reuso.


lavar y secar los tubos para su reuso..



6.7 EVALUACIN


6.8 BIBLIOGRAFA






45




Bergey. 10a. Edicin. Editorial Lippincott Williams an Wilkins. Philadelphia USA.

46

SUBCOMPETENCIA 2

PRCTICA 7. DIAGNSTICO DE ENFERMEDADES MENNGEAS (CULTIVO DE LCR)

7.1 GENERALIDADES

En la historia se daba por hecho que la funcin primordial del LCR era la de

proteccin del SNC y la regulacin de su volumen, en 1926 Cushing propuso la

idea de que el LCR representaba la "Tercera Circulacin".

Recientemente se sabe que el LCR contribuye en el transporte de molculas

como hormonas y aminas de accin neutral activas a travs del encfalo.

La meningitis es la patologa que ms comnmente se presenta a este nivel,

debido a que los microorganismos responsables de esta forma clnica pueden

alcanzar el SNC a travs de la va hematgena (bacteriemia o septicemia) o

invadir directamente el cerebro (otitis, fracturas de crneo etc.)

El diagnstico de las enfermedades del SNC se apoya en el examen integral del

LCR en esta tarea, tanto el mdico como el qumico son responsables de la

utilidad del examen. El mdico desde la toma de la muestra, la medicin de la

presin intracerebral etc. y el qumico como realizador directo de los anlisis

citoqumicos y microbiolgicos del LCR.

7.2 OBJETIVO

Realizar en forma correcta el cultivo de lquido cefalorraqudeo para el

diagnstico de enfermedades menngeas.

47


Placas con agar sangre de

carnero, Mac Conkey, Sal y

Manitol, Medio de Thayer-

Martin (sin inhibidor), gelosa

de Levinthal.


Equipo de Coaglutinacin

Centrfuga.

Tubos con medio de Lowensten-

Jensen, con caldo tioglicolato, con

Pruebas bioqumicas: TSI, LIA. MIO

CS. Urea

Tubos de 13x 100 mm con base CTA

conteniendo: glucosa, sacarosa,

maltosa, fructuosa al 1%.

Reactivo de Kovacs

. Pipetas Pasteur estril Aceite de Inmersin.

Tinta china (Marca Pelikan) Equipo de tincin de Gram

Equipo de tincin Auramina

rodamina.

Taxos de bacitracina y optoquina.

7.4 PROCEDIMIENTO

Toma y transporte de la muestra

1. El LCR es obtenido por un Mdico a travs de puncin lumbar, buscando un

volumen aproximado de 5 a 10 mL de LCR.

2. Distribuir la muestra de LCR en 3 tubos estriles, uno de los cuales ser usado

para el estudio citoqumico mientras que el otro se utilizar para el estudio

microbiolgico y el tercero para el diagnstico rpido.

3. Es muy importante que las muestras sean acompaadas de un resumen clnico

que incluye antecedentes de importancia epidemiolgica.

4. El examen citoqumico y bacteriolgico del LCR es el requisito indispensable

para identificar al microorganismos causal de las meningitis de cualquier

etiologa en particular de las bacterianas.

Tcnica:

1. Manejar el LCR en condiciones de esterilidad,

48

2. Reportar en forma inmediata el resultado de las tinciones y la prueba de

coaglutinacin para el inmediato manejo del paciente.

3. Reportar las caractersticas principales del LCR como son: color aspecto,

presencia de sangre, de cogulos o pelculas.

4. Si a primera vista la muestra es purulenta puede examinarse

inmediatamente en forma directa, de lo contrario es de suma importancia

centrifugar el LCR a 3000 r.p.m. por 5 a 10 min.

5. Separar el sobrenadante y usar el sedimento para el cultivo y las

diferentes tinciones.

6. Observar las tinciones primeramente con el objetivo de 40x y

posteriormente con el objetivo 100x. Reportar en forma inmediata.

7. Incubar las placas de gelosa sangre Levinthal y Thayer-Martn a 37C en

atmsfera parcial de C02 por tres das con una revisin diaria.

8. En caso de sospechar de meningitis por Micobacterias, se siembra el

sedimento en el medio de Lowenstein-Jensen con pipeta Pasteur esta se debe

incubar por 6 semanas con revisin diaria del mismo.

9. Realizar con el sobrenadante la prueba de coaglutinacin.

10. Reportar el resultado de esta prueba junto con las tinciones.

Reporte:

1. Reportar cualquier presencia de microorganismo se el LCR.

2. Reportar resultados de cada tincin y el estudio de coaglutinacin.

3. Reportar los resultados del estudio citoqumico junto con el bacteriolgico.

4. Reportar la bacteria encontrado as como su antibiograma.

5. Reportar cultivos sin crecimiento como Negativos a los tres das de incubacin.

Resultados ideales e interpretacin:

Consultar en internet los resultados normales y compararlos con la

interpretacin de cada prueba.

49

7.5 CUESTIONARIO

1.- Por qu es importante realizar el estudio de LCR?

2.- Qu enfermedades menngeas existen, solo los nombres?


4.- Por qu se debe tener cuidado al trabajar con LCR?


Figura 16. Diagrama ecolgico.Aislamiento e identificacin de bacterias


el retrete.



para su reuso.


50








7.7 EVALUACIN


7.8 BIBLIOGRAFA









Bergey. 10a. Edicin. Editorial Lippincott Williams an Wilkins. Philadelphia USA.

.

51

SUBCOMPETENCIA 2

PRCTICA 8. HEMOCULTIVO Y CULTIVO DE MDULA SEA

8.1 GENERALIDADES

El cultivo de sangre apoya el diagnstico de las infecciones sistmicas que

presentan en su evolucin una etapa de bacteriemia septicemia.

La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccin activa y

diseminada en los tejidos; esta situacin puede originarse por:

BACTERIEMIA: Puede ser transitorio como resultado de un fenmeno comn

como el cepillarse los dientes.

La bacteriemia persistente o recurrente implica la evolucin de algunas

enfermedades como infeccin de vas urinarias, en infeccin de heridas.

SEPTICEMIA: Presencia de bacterias en sangre y tejidos, acompaado por ataque

al estado general, las bacterias se multiplican en forma activa liberando toxinas,

originando manifestaciones clnicas de magnitud diversa (local y sistmica).

PIEMIA: Formacin de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano

en pacientes comprometidos como son recin nacidos, personas de la tercera

edad, as como inmunosuprimidos se pueden presentar focos spticos, y poner

en peligro su vida.

8.2 OBJETIVO

Realizar correctamente un hemocultivo y cultivo de mdula sea, a travs de las

tcnicas especializadas, para la contribucin de un diagnstico adecuado.

52


Placas de Agar sangre de

camero, Mac Conkey, Sal y

Manitol, Levnthal, Thayer-

Martn y Placas de agar Brucella

Frasco con tintura de Iodo

Pruebas bioqumicas: TSI, MIO, LIA,

CS y Urea

Microscopio

Torniquete y torundas con alcohol

Agujas estriles calibre 21

Medio difsico de Ruiz

Castaeda.

Sensidiscos de Bacitracina y

Optoquina.Taxos de oxidasa

Jeringas estriles y desechables de

5 o 10 MI

Equipo de tincin de Gram

8.4 PROCEDIMIENTO

Toma de muestra y transporte:

Este tipo de muestra est indicado en casos de fiebre, hipotermia, sensacin de

enfriamiento, calosfros, postracin, hipotensin, fiebre prolongada e

intermitente con soplo cardiaco perceptible.

1. Tomar la muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del periodo

febril, antes de llegar al pico.

2. El nmero e intervalos de los cultivos depende del cuadro clnico del

paciente as como de su gravedad.

3. Es importante saber el tipo de botella de Hemocultivo que se puede

actualmente usar ya que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la

accin de los antimicrobianos as como el complemento y la fagocitosis.

4. Puede usarse mdula sea lo que aumentara las posibilidades de obtener

un buen diagnstico.

53

5. Seleccionar el sitio de toma de muestra, evitar tomar muestras de catter

intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda

obtenerse por venopuntura.

6. Limpiar el sitio de venopuntura vigorosamente con torundas impregnadas

de etanol al 70% o con tintura de yodo en alcohol.

7. Esperar que seque sin soplar.

8. Por ningn motivo se debe tocar el sitio despus de que me desinfectado.

9. Limpiar el tapn de las botellas o tubos de cultivo con alcohol-Iodo.

10. Extraer la sangre, en volumen acorde a la edad del paciente y marca de la

botella usada. El volumen recomendado es: niosos de 1 a 3 mL, adultos de 5 mL

en adelante.

11. Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva.

Mezclar bien en forma homognea para evitar que se coagule.

12. Mantener la botella inoculada horizontalmente con la parte slida hacia

abajo durante 20 minutos.

13. Incubar la botella a 37C durante 6 semanas en forma vertical,

Hemocultvo Lquido

1. Tomar la muestra cmo se indic anteriormente.

2. Incubar a 37C en aerobiosis; inspeccionar las botellas al menos una vez al da

durante 3 das y luego 2 a 3 veces por semana hasta completar 21 das.

Botella de Cultivo Bifsico

1. Emplear botellas de Ruz Castaeda modificada o medios bifsicos

comerciales.

2. Tomar la muestra de sangre como se ndic anteriormente.

3. Inocular la sangre en la botella e incubar a 37C durante 7 das o dejar hasta 45

das en caso que se sospeche de Brucella.

4. Incubar en atmsfera de C02 al 5-10%.

54

5. Inspeccionar los frascos a diario buscando colonias en la superficie del medio

como seal de un cultivo positivo.

6. Realizar tincin de Gram en cultivos positivos.

7. Realizar resiembras en los medios indicados.

En ausencia de crecimiento visible se efectan resiembras a las 48 h, y luego

cada semana hasta completar los 21 das, aunque puede continuar por 45 das, y

solo despus de este tiempo se puede descartar y considerar negativo.

Mtodo de Lisis

1. Tomar los tubos que contienen sustancias hemolizantes.

2. Concentrar los m.o. por centrifugacin a 3000 rpm durante 30 min.

3. Inocular el sedimento en las diferentes placas de cultivo.

Mtodo de Fluorescencia

1. Inocular la muestra en las botellas de acuerdo al tipo de paciente, este tipo de

botellas tiene medios de cultivo para bacterias aerobias, anaerobias y hongos.

2. Incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37C y

rotando suavemente.

3. En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de

fluorescencia la que se va aumentando por el incremento de C02 implcito por el

propio metabolismo bacteriano esto lo realiza cada 10 min. La alarma avisa al

qumico la posicin de la botella con crecimiento.

4. Realizar las resiembras en los medios ya descritos.

Reporte:

Es poco frecuente encontrarse dos o ms especies bacterianas diferentes en un

cultivo de sangre, en la mayora de los casos se trata de alguna contaminacin y

esto sucede principalmente por una mala toma de muestra.

S no hay crecimiento a los 45 das hay que dar como negativo el cultivo y se

desecha la botella.

55

En el caso de haber crecimiento se identifica a el agente etiolgico con las

pruebas requeridas por el mismo.

Es importante mantener informado al mdico como va el hemocultvo de sus

pacientes principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva.




8.5 CUESTIONARIO

1.- Qu es un hemocultivo?

2.- Qu microorganismos pueden aislarse de un hemocultivo?

3.- Qu errores se pueden cometer a la hora de realizar los anlisis?

4.- Por qu se debe tener cuidado al trabajar con sangre?


Figura 17. Diagrama ecolgico.Aislamiento e identificacin de bacterias

56


el retrete.



para su reuso.






8.7 EVALUACIN


8.8 BIBLIOGRAFA




2.- Mandigan MT, Martinko JM, Parker J (1999).Brock. Biologa de los

Microorganismos. Ed. Prentice Hall. 8va Edicin. Madrid.




57

SUBCOMPETENCIA 2

PRCTICA 9. INFECCIONES DEL APARATO GENITAL: EXUDADO CERVICO VAGINAL Y EXUDADO URETRAL

9.1 GENERALIDADES

Los principales agentes asociados a las enfermedades de transmisin sexual ETS

incluyen virus, bacterias, hongos, protozoarios y ectoparsitos los cuales estn

involucrados en varios sndromes, por lo que la participacin del laboratorio en el

diagnstico es relevante.

En general la identificacin de las bacterias productoras de ETS no siempre es a

travs de cultivos, en algunos casos se requiere de tcnicas inmunolgicas.

Como el caso de Treponema pallidum ya que no existe ningn medio sinttico

para su aislamiento Chlamvdia trachomatis que por ser una bacteria intracelular

obligada requiere de clulas vivas para su multiplicacin, de tinciones especiales

o bien de tcnicas de hibridacin para su identificacin. Las infecciones agudas

pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar secuelas

graves en tanto que la infeccin puede tener caractersticas metastsicas y

transmitirse por va sangunea a otros rganos y tejidos.

9.2 OBJETIVO

Realizar en forma correcta exudados cervico vaginal y uretral para el diagnstico

de infecciones del aparato genital.

58


Espejos vaginales estriles y

desechables.

Hisopos especiales de alginato

de calcio o de dacron.

Tubos con solucin salina estril Porta y cubre objetos nuevos

Placas de gelosa sangre de camero

Equipo para detectar Clamidia

(Mtodo de Elisa)

Papel pH

Placas de agar sangre humano en

base agar Columbia, Thayer-

Martin, Sal y Manitol, Mac

Conkey, Dnasa con indicador

Tubos de Biggy, Tubos en base de

CTA conteniendo: GIucosa,

Maltosa Fructuosa, Sacarosa y

Raffinosa.

Tubos de 13 x 100 mm de

bioqumicas con: TSI, LIA, MIO, CS

y Urea

Cubrebocas

Guantes desechables estril Lentes protectores

Sabanas desechables Taxos de oxidasa y de optoquina

Tubos con caldo soya triplicas con

NaCl al 6%

Frasco con solucin de KOH al

10%.

Tubos con 0.5 mL de solucin

acuosa al 1% de hipurato de

sodio.

Juegos de colorantes de Gram

Solucin de ninhidrina al 3.5%

en acetona butanol 1:1 v/v

Tincin de Giemsa y Tincin de

Papanicolau.

9.4 PROCEDIMIENTO

Toma y transporte de la muestra:

1. Tomar la muestra cuando la sintomatologa existe y obligatoriamente en los

contactos de la pareja sexual.

2. El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano.

3. Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de

algnato de calcio, de dacrn o tratados con solucione Buffer.

59

4. Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y

en forma inmediata.

Muestras de canal anal

1. Colocar al paciente en posicin boca abajo

2. Insertar un hisopo aproximadamente 3 cm dentro del canal anal.

3. Rotar con cuidado el hisopo sobre las criptas del anillo anal y se espera unos

30 segundos para que se absorba la muestra.

Muestras de faringe

1. Tomar con un hisopo de algodn de la parte posterior de la faringe.

Muestras de lesiones

1. Obtener las muestras directamente de las lesiones (chancro).

2. Limpiar la superficie de la lesin suavemente con gasa humedecida en

solucin salina estril.

3. Presionar el chancro con el pulgar y el ndice para producir la salida del

lquido.

4. Tocar suavemente el lquido de la lesin con un cubreobjetos limpio.

5. Colocar sobre una gota de solucin salina previamente colocada sobre un

portaobjeto.

6. Observar en el microscopio de campo obscuro.

7. Sembrar la muestra tomada directamente de la lesin si es necesario.

Tcnica:

Medicin del pH:

Es importante la medicin del pH vaginal directamente de endocervix al igual

que el de uretra.

60

Prueba de KOH

1. Realizar esta prueba con la secrecin que queda en el espejo, agregar unas

gotas de KOH al 10%, reportar positivas si desprende un olor caracterstico a

"pescado" el cual se debe a aminas voltiles.

Observacin en fresco

Son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe secrecin vaginal

y en el caso de tricomoniasis, vaginosis bacteriana y candidiasis, as como en la

trichomomasis en pacientes masculinos.

1. Colocar las muestras recolectadas en un tubo con solucin salina isotnica.

2. Tomar una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubrir.

3. Observar al microscopio en objetivo de 40 x y con poca iluminacin.

4. Reportar si se observan Trichomonas vaginalis, levaduras, clulas clave,

leucocitos, bacilos de Dderlein

Observacin de tinciones

1. Realizar un extendido de la muestra tomada directamente a lo largo del

portaobjetos de tal manera que si hay leucocitos y clulas e extiendan

adecuadamente y conserven as su integridad.

2. Realizar la tincin de Gram y reportar la flora bacteriana existente, si hay

levaduras, si hay clulas clave, la cantidad de bacilos de Dderlein, si hay

leucocitos y eritrocitos.

3. Reportar los diplococos Gram negativos intracelulares presuntivos de N.

gonorrhoeae en el caso de muestras obtenidas de uretra.

4. Fijar y proceder de acuerdo a la tcnica los frotis que a usarse para pruebas de

inmunofluorescencia directa o indirecta.

5. Observar en campo obscuro.

61

Aislamiento

1. Sembrar las muestras directamente en el medio de cultivo en forma adecuada.

En el caso de Thayer-Martn se debe sembrar en forma de Z con el hisopo y

posteriormente estrar con el asa.

2. Incubar en atmsfera parcial de C02 a 37 C las placas de Gelosa sangre, de

Thayer Martn, de gelosa chocolate y del medio de Casman.

3. Revisar las placas despus de la incubacin y realizar la tincin de Gram.

Exudado uretral

1. Es un examen de laboratorio que se lleva a cabo en los hombres adultos y

jvenes para identificar organismos en la uretra y en el aparato genital que

causan infeccin.

2. Este examen se realiza cuando se presenta uretritis la cual es una infeccin

caracterizado por la aparicin de exudado uretral.

3. Las uretritis pueden no ser infecciosas, sin embargo la mayora estn

producidas por infecciones de transmisin sexual.

4. Toma de muestra:

5. Se recomienda al paciente no orinar por lo menos una hora antes de tomar la

muestra.

6. En casos de gonorrea, cuando se produce un exudado abundante, presionar

ligeramente la uretra con el fin de expulsarlo, recoger con un hisopo de

alginato estril y depositar en el medio de transporte de Stuart.

7. Al sospechar de infeccin por clamidia, emplear hisopo de alginato de calcio

adecuado para toma de muestras en varones, introducir de 2 a 4 cm en la

uretra y frotar las paredes haciendo girar el hisopo durante 5 a 10 segundos;

con esta muestra se deben hacer de inmediato frotes en portaobjetos limpios

que se fijan con acetona.

8. Enviar el tubo y las preparaciones lo antes posible de modo que no lleguen al

laboratorio despus de 24 horas.

62

Reporte para el exudado vaginal

En este tipo de reporte es importante informarle a l mdico lo siguiente:

1. Edad del paciente.

2. Sexo del mismo.

3. Tipo de muestra.

4. Ao en el que se realiz

5. Que se observo en la toma de muestra p/e Como se encuentra el

endocervix. Si hay lceras, cantidad de flujo, olor, etc.

6. pH Vaginal

7. Tincin de Gram directa.

8. Examen en fresco

9. Resultado del cultivo

10. Antibiograma

11 .Bsqueda de Chiamydia trachomatis.

12. Bsqueda de Treponema pallidum.

13. Firma del responsable

Reporte para el exudado uretral

La presencia de ms de 4 PMN/c y diplococcos Gram negativos intracelulares,

indicara uretritis por Neisseria gonorrhoeae.

Si alguna de las tcnicas especiales es positiva se informar: para Chlamydia

trachomatis (ELISA positiva, PCR positiva).

Con estos informes se valorar clnicamente al paciente.




63

Figura 18.Diagrama de flujo del exudado uretral

9.5 CUESTIONARIO

1.- Qu importancia tiene el Haemophilus ducreyi (bacilo de Ducrey) en un

exudado vaginal o uretral?

2.- Cules pueden ser infecciones causadas por Clamydia trachomatis?


4.- Por qu se debe tener cuidado al trabajar con exudados?

64


Figura 19. Diagrama ecolgico: del aislamiento e identificacin de bacterias


el retrete.



para su reuso.






9.7 EVALUACIN


65

9.8 BIBLIOGRAFA









66

SUBCOMPETENCIA 2

PRCTICA 10. CULTIVO DE EXUDADO OCULAR, INFECCIONES OCULARES

10.1 GENERALIDADES

Las infecciones oculares se manifiestan comnmente por el constante lagrimeo.

Los microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del

paciente y su localidad.

Considerndose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recin nacidos por

las posibles secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos

Una de las principales molestias que presentan los pacientes sobre problemas

oculares es la conjuntivitis, muy extendida entre la poblacin de ambos sexos y

de todas las edades.

Cualquier infeccin en la conjuntiva del recin nacido se denomina oftalma del

recin nacido. Los ojos del beb se contaminan, por lo general, con el agente

infeccioso durante el paso a travs del conducto del parto

Las causas de oftalma del recin nacido son: Neisseria gonorrhoeae, Bacterias

oportunistas como estafilococos, Streptococcus pneumoniae, estreptococo A y B

y algunos gramnegativos como Pseudomonas aeruginosa, Neisseria meningitidis.,

Chlamydia trachomatis y Herpesvirus humano tipo 2 (herpes genital).

10.2 OBJETIVO

Realizar correctamente el exudado ocular para contribuir a un diagnstico clnico

acertado de infecciones oculares.

67


Hisopos estriles de alginato de

calcio o de dacrn.

Guantes estriles y desechables

Taxos de optoquina y bacitracna

Placas de Gelosa sangre de

camero.

Tubos de 13 x 100 con medio

Bggy, bioqumicas : TSI,LIA, MIO,

CS y Urea

Placas de Agar; Sal y manitol, Mac

Conkey, Thayer Martn, Levinthal,

Dnasa

Equipo para bsqueda de

Chlamydia

Reactivo de oxidasa.

10.4 PROCEDIMIENTO

Toma de muestra:

1. Indicar al paciente que se debe abstener de aplicar soluciones antispticas o

en su defecto antimicrobiano. En ambos ojos.

2. No debe ir con pintura.

3. No llevar puestos lentes de contactos si usa.

4. Realizar con un hisopo delgado de algnato de calcio o de dacrn la toma de

muestra.

5. Tomar en la porcin anterior del saco conjuntival inferior y superior de ambos

ojos.

6. Realizar un ligero raspado.

7. Identificar el ojo de donde procede la muestra; rotular como ojo derecho o

izquierdo.

En caso de que el paciente tenga lesiones ulcerosas en cornea solo deber

tomarlas un mdico Oftalmlogo.

68

Tcnica:

1. La muestra se toma del sito de dao y se siembra en los medios de cultivo

indicados.

2. Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran.

3. Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincin de Gram.

4. Se identifica el crecimiento segn el diagrama.

5. Para bsqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto

por mtodos de inmunofluorescencia.

Reporte:

Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada

para su tratamiento inmediato.

Reportar el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la

identificacin.

Reportar el antibiograma en este tipo de muestra.

10.5 CUESTIONARIO

1.- Qu es la Blefaritis ulcerosa o estafiloccica?

2.- Dependiendo del tipo de glndulas afectadas hay dos tipos de orzuelo,

cules son?



69


Figura 20. Diagrama ecolgico: del aislamiento e identificacin de bacterias


el retrete.



para su reuso.






10.7 EVALUACIN


70

10.8 BIBLIOGRAFA








71

SUBCOMPETENCIA 2

PRCTICA 11. EXUDADO TICO (ODO MEDIO) INFECCIONES TICAS

11.1 GENERALIDADES

Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones ms frecuentes

estn la de los odos ya sean por su forma crnica o aguda. El cuadro inicial puede

asociarse a infecciones respiratorias mal cuidadas, en nios por la introduccin

de objetos extraos p/e botones, frijoles etc.

Las infecciones de odo son frecuentemente asociados a S. pneumoniae, H.

influenzae y Branhamella catharralis, con menos frecuencia Staphylococcus

aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae.

11.2 OBJETIVO

Realizar correctamente el exudado tico (odo medio) para contribuir a un

diagnstico clnico acertado de infecciones ticas.


Guantes estriles desechables.

Reactivo para catalasa

Hisopos delgados de alginato de

calcio o de dacron.

Gasas estriles.

Colorantes de Gram

Tubos

Placas de agar: Sangre de camero.,

Sal y Manitol, Mac Conjkey,

Levinthal, Dnasa

Tubos de 13 x 100 con medio Taxos de optoquina

72

Biggy pruebas bioqumicas:

TSI, LIA, MIO CS y Urea.

Reactivo para oxidasa

Tubos con 0/F con glucosa al 1%

Taxos con bacitracina.

11.4 PROCEDIMIENTO

Toma de muestra:

1. Indicar al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos.

2. Introducir el hisopo teniendo cuidado de no lastimar, indicando el paciente

hasta donde soporta el hisopo.

3. Diferenciar los tubos del odo derecho e izquierdo.

4. Limpiar el odo con solucin de cloruro de benzalconio 1:1000 para eliminar la

flora contaminante en las infecciones crnicas.

Cuando se trata de perforaciones del tmpano la muestra debe ser tomada por el

otorrinolaringlogo

Tcnica:

Sembrar la en forma inmediata despus de la toma de muestra en los medios de

cultivos indicados.

Efectuar tincin de Gram a Cualquier crecimiento y realizar la identificacin.

Reporte:

En el reporte al mdico se debe indicar:

1. El resultado por separado de cada odo

2. Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra.

3. Si se encontr algn objeto extrao.

4. Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre

positivo.

73

5. S no se asla ningn microorganismo se reporta como negativo a las 72 horas

de incubacin.




11.5 CUESTIONARIO

1.- Qu es la mastoiditis?

2.- Qu es la otitis media aguda?



11.6 TRATAMIENTO Y DISPOSICION DE

Manual Bacteriologia

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