ESTUDIO CITOQUÍMICOESTUDIO CITOQUÍMICODEDE

LIQUIDOS SEROSOSLIQUIDOS SEROSOS

Lic. Mercedes Catani Dra. Rosario San Martín

Dr. Isidoro Prudente Dra. Silvia Zunino Torres

Hospital de Clínicas.

Departamento de Laboratorio Clínico.

Repartición Hematología y Citología.

LÍQUIDO SEROSO:

Se denomina así al líquido que normalmente se encuentra en las cavidades serosas:

-Cavidad pleural: 10-20 ml

-Cavidad peritoneal: 50 ml

-Cavidad pericárdica: 100 ml

DERRAME SEROSO: DERRAME SEROSO:

Acumulación patológica de líquido en una cavidad serosa

Pleural (derrame pleural)Pericárdica (derrame pericárdico)Peritoneal (ascitis)

Capilar sistémico

serosa visceral

serosa parietal

Presión hidrostática

Presión coloidosmótica

Capilar pulmonar

c. linfático

MECANISMOS DE FORMACIÓN DE DERRAMES MECANISMOS DE FORMACIÓN DE DERRAMES SEROSOSSEROSOS

p. hidrostática

p. coloidosmótica

permeabilidad capilar

obstrucción del drenaje linfático

InsuficienciaCardíacaCongestiva

S.nefróticoCirrosis

InfeccionesE.. InflamatoriasNeoplasias

Neoplasias

Traumatismo

TRASUDADO

EXUDADO

Los derrames serosos pueden presentarse como complicación de distintas patologías.

Su estudio citoquímico y bacteriológico no sólo proporciona una orientación diagnóstica sino que en algunas situaciones determina conductas terapéuticas.

Examen macroscópicoExamen macroscópico

ASPECTO

Hemorrágico Punción traumática, derrames neoplásicos, traumatismos, TEP

Hemático o serohemático No tiene valor diagnóstico

Turbio Sobrenadante límpido: células

Sobrenadante turbio: bacterias

lípidos

Opalescente, lechoso Derrames quilosos y seudoquilosos.

Examen químicoExamen químico

1. Parámetros bioquímicos utilizados para diferenciar trasudados y exudados

2. Parámetros bioquímicos para determinar la etiología de un exudado

Criterios de LightCriterios de Light

Proteínas líquido pleural

Proteínas séricas

LDH liquído pleural

LDH sérica

LDH en líquido pleural 200 UI / L

> 0.5

> 0.6

> Se considera que el líquido es un exudado cuando cumple uno o más de estos criterios

60 mg / dl 60 mg / dlColesterol *

200 U / L 200 U / LLDH

30 g / L 30 g / LProteínas

ExudadoTrasudado

* Sólo en líquidos pleurales , en líquidos de ascitis se utiliza como criterio para diferenciar derrames neoplásicos de no neoplásicos

PARÁMETROS BIOQUÍMICOS UTILIZADOS PARA DIFERENCIAR TRASUDADOS de EXUDADOS

PLEURALES

PARAMETROS UTILIZADOS EN LIQUIDOS PARAMETROS UTILIZADOS EN LIQUIDOS DE ASCITISDE ASCITIS

Gradiente de Albúmina

Albúmina sérica – albúmina líquido :>= 1.1 g/l = HTTP< 1.1 g/l = no HTP

Etiología de un exudado Etiología de un exudado pleuralpleural

Parámetros bioquímicos Parámetros bioquímicos

GLUCOSApHTRIGLICÉRIDOSAMILASACREATININA

•DERRAMES PARANEUMÓNICOS COMPLICADOS

•BK

•ENF. REUMÁTICAS

•NEOPLASIAS

GLUCOSAGLUCOSA

Su concentración es similar a la plasmática en los trasudados y en la mayoría de los exudados

Valores 60 mg/dl pueden verse:

•DERRAMES PARANEUMÓNICOS COMPLICADOS

•BK

•Enf. Reumáticas

•Neoplasias

•Acidosis sistémica

pHpH Sólo tiene valor diagnóstico cuando se

determina en las mismas condiciones que el pH arterial

Valores 7.2 pueden observarse en:

TriglicéridosTriglicéridos Su determinación está indicada en líquidos de aspecto

opalescente o lechoso y en aquellos con sobrenadante turbio.

Permite diferenciar: - derrames quilosos (obstrucción del drenaje linfático con acumulación de linfa –neoplasias-) -seudoquilosos ( por acumulación de colesterol – BK, AR-).

Valores entre 50-110 mg/dl : estudio de quilomicrones

quiloso seudoquiloso

TG 110 mg/dl 50 mg/dl

Líquido de AscitisLíquido de AscitisParámetros BioquímicosParámetros Bioquímicos

Gradiente de Albúmina

Albúmina sérica – albúmina líquido :>= 1.1 g/l = HTTP< 1.1 g/l = no HTP

AmilasaAmilasa

Valores de amilasa mayores al límite superior normal en suero pueden verse en derrames causados por:

•Pancreatitis

•Rotura esofágica

•Neoplasias

Urea y creatininaUrea y creatinina

Su determinación está indicada ante la sospecha de presencia de orina en la cavidad serosa (estallido vesical, posoperatorio de cirugía abdominal).

Se encuentran valores aumentados de urea y creatinina en el líquido seroso y valores normales de creatinina en sangre.

Citología de líquidos decavidades serosas

Citología de líquidos decavidades serosas

Normalmente procedentes de:

• revestimiento seroso : célula mesotelial • sistema monocítico / macrofágico

• capilares subserosos

Célula mesotelialCélula mesotelial

NORMAL

• Redondeada• 18 a 40 u (25 u)• Núcleo central ovoide• 2 a 3 nucléolos• Citoplasma denso adelgazado en periferia• Aisladas o en grupos de menos de 12 células

(ventana)

Célula mesotelialCélula mesotelialREACTIVA• Mayor basofilia citoplásmica• Bordes bien delimitados• Discreto grado de anisocariosis

Célula mesotelialCélula mesotelial

INVOLUTIVA• Derrames crónicos• Degeneración vacuolar

MacrófagoMacrófago• 45 % células normales en peritoneo. (CD68+)• 15 – 100 u (30 u)• Núcleo excéntrico arriñonado• Citop. claro,finamente vacuolado (encaje)• Material fagocitado• Formas multinucleadas

y gigantes sólo en

serositis reumática

Células procedentes deCélulas procedentes decapilares subserososcapilares subserosos

• Glóbulos rojos. Punción (1 ul/mm3) Hemorragia.• PMN. % variable. Inflamación. Infarto.• Linfocitos. Procesos benignos: Formas T NA. viral, TBC, neoplasias• Eosinófilos. (10%) Infección viral, parasitaria, mesenquimopatías, TEP, Ntx, Htx.

Cuadros citológicos patológicosCuadros citológicos patológicos

Células en proporciones variables dependiendo de la causa, duración y complicaciones del derrame.

• Inflamación . Inespecífica . Específica• TBC• TEP• Cirrosis hepática• Derrames neoplásicos

InflamaciónInflamación• Inespecífica. -células mesoteliales y PMN

- IC - NA - sobreinfección PMN +50%: - pleura: empiema - ascitis: PBE : recuento en cámara de Neubauer PMN > 250/ mm3 - DPCA: GB > 100/ mm3 50% PMN

InflamaciónInflamación

- AR - macrófagos

- m. gigantes multinucleados

- material necrótico granular• Específica. eosinófilo.

- LES - cél.LE 30% pleuritis lúpica.

- cél. mesoteliales y eosinófilos

TBCTBC• En pleura - infiltrado linfocitario crónico sin

reacción mesotelial.• En peritoneo - infiltrado linfocitario crónico con

reacción mesotelial y macrofágica.

TEPTEP

Necrosis hemorrágica subpleural con reacción

inflamatoria perilesional.

• Citología pleomórfica : - fondo hemorrágico.

- reacción mesotelial a/v con

alt. citomorfológicas.

- macrófagos con gránulos

de hemosiderina.

- PMN y linfocitos.

Cirrosis hepáticaCirrosis hepática

Celularidad pleomórfica: células mesoteliales, macrófagos, linfocitos, y PMN.

Puede observarse hepatocitos como células epiteliales poliédricas con núcleo central y disposición acinar (no debe confundirse con metástasis)

Derrame neoplásicoDerrame neoplásico

• Mayor frecuencia corresponde a adenocarcinomas

de pulmón, mama, ovario.• Tendencia a formar grupos celulares cohesivos,

tridimensionales o seudoacinos, cuyas células

presentan variadas atipías citomorfológicas.• El mesotelioma ( neoplasia de la serosa ) es muy

poco frecuente.

MARCADORES MARCADORES TUMORALESTUMORALES

MARCADORES MARCADORES TUMORALESTUMORALES

• Sustancia producida por la célula neoplásica que refleja su crecimiento y/o actividad, y permite conocer la presencia, evolución o respuesta terapéutica de un tumor maligno.

• Incluye: 1)productos detectables in situ en el tumor o sus metástasis y 2) productos liberados a la sangre y detectables en suero.

• Al 1º grupo dedicaremos nuestra atención.

INMUNOCITOQUIMICAINMUNOCITOQUIMICA

• .Definición: técnica que hace visible una reacción antígeno - anticuerpo en muestras citológicas.

• .Inmunohistoquímica (IHQ): si dicha reacción se realiza sobre tejidos.

• .Aporta mayor sensibilidad diagnóstica a los criterios exclusivamente morfológicos.

METODOLOGIAMETODOLOGIA

• Se utilizan Ac Monoclonales (Moabs): poseen alta homogeneidad de lugares específicos de unión con el antígeno.

• Los antígenos no deben ser destruidos ni enmascarados por los procedimientos técnicos.

• Fijador: debe estar en función de los grupos reactivos antigénicos que se pretende demostrar.

METODOLOGIAMETODOLOGIA

• Fijador: debe buscar un equilibrio entre la preservación de la morfología y la inmunoreactividad.

• Se clasifican: 1) actúan por precipitación 2) actúan estableciendo uniones cruzadas.

• Sistemas de revelado: hacen visible la reacción (IFD, IFI).

• Aplicable a PAAF, derrames, bloques celulares, improntas, etc.

PANELES DE PANELES DE ANTICUERPOSANTICUERPOS

• Los paneles de Moabs se realizan siguiendo 2 líneas: 1) por ANTIGENOS a estudiar

2) por TUMORES a detectar. • 1)Por Antígenos a detectar: • Ag Oncofetales : AFP, CEA.• Mucinas: MUC1, MUC2, MUC3A, (CA-125,

CA15-3, CA 27-29).• Citoqueratinas: 8, 18, 19, (CIFRA, TPS, TPA).• Enzimas e inhibidores: NSE, SCC.

Tumores a estudiarTumores a estudiar

CQ VM LCA HMB45

Carcinoma + - - -

Linfoma - + + -

Sarcoma - + + -

Melanoma - + + +

Adenocarcinoma vs Adenocarcinoma vs MesoteliomaMesotelioma

AdenoC Mesotel.

CEA + -

CQ B Peso + +

CQ A Peso - +

CD 15 + -

B 72.3 + -

Desmina - +

PROTOCOLO DE PROTOCOLO DE PROCESAMIENTO DE PROCESAMIENTO DE LIQUIDOS SEROSOSLIQUIDOS SEROSOS

PROTOCOLO DE PROTOCOLO DE PROCESAMIENTO DE PROCESAMIENTO DE LIQUIDOS SEROSOSLIQUIDOS SEROSOS

•Recepción de la muestraLos líquidos obtenidos por punción serán

remitidos rápidamente al laboratorio en 4 tubosa) tubo estéril para estudio bacteriológico.b) tubo seco sin anticoagulante para estudio

bioquímico.c) tubo con anticoagulante para estudio citológico.d) tubo en anaerobiosis para determinación de pH.

ProcesamientoProcesamiento

1) Macroscopía• color• aspecto• presencia o no de coágulo• presencia de restos tisulares

2) Centrifugación • convencional 2500 rpm 10’

ProcesamientoProcesamiento

3) Postcentrifugado• sobrenadante - color - aspecto

• sedimento - volumen - características -hemático - capa blanca celular

ProcesamientoProcesamiento

4) Estudio bioquímico del sobrenadante• glucosa• proteínas totales• colesterol• LDH• Tg (sobrenadante turbio)• otras determinaciones - amilasa, urea, iones, etc.

ProcesamientoProcesamiento

5) Citología• Frotis del sedimento resuspendido de centrifugación convencional.

• Citocentrifugación Se realiza de rutina excepto en líquidos muy

hemorrágicos o purulentos, o con una gran capa celular en el sedimento convencional.

Se resuspende el sedimento en 250ul de sobrenadante y se carga la cápsula.

Ventajas de la citocentrifugaciónVentajas de la citocentrifugación

• Mayor concentración celular.• Disposición celular en monocapa evitando el

solapamiento.• Conserva intacta la morfología celular. • Permite realización de técnicas inmunocito-

químicas.

• La citocentrifugación siempre debe ser realizada en forma paralela a la centrifugación convencional que aporta la noción cuantitativa de los elementos celulares.

• De una serie de citologías de líquidos serosos que fueron negativas para atipías citomorfológicas

mediante centrifugación convencional , 36 % resultaron positivos para citocentrifugación.

ProcesamientoProcesamiento

6 ) Secado de lo frotis al aire y tinción con

MGG.

Los tiempos de tinción son similares a los

empleados en extendidos hematológicos,

debiéndose acortar a la mitad la etapa de

Giemsa.

Confección del informeConfección del informe• Nombre del paciente• Procedencia• Datos filiatorios• Tipo de material• Estudio realizado - macroscopía - bioquímica - citología - en suma diagnóstico• Fecha• Firma responsable