Laboratorio de Oncofarmacología Traslacional Centro de Investigación del Cáncer CSIC-Universidad...
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Laboratorio de Oncofarmacología Traslacional Centro de Investigación del Cáncer CSIC-Universidad de Salamanca
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Laboratorio de Oncofarmacología
Traslacional
Centro de Investigación del CáncerCSIC-Universidad de Salamanca
Procedimiento general
• Diseño y desarrollo
Compañías farmacéuticas
Ambiente académico / universitario
“In vitro”
“In vivo”
• Estudio preclínicos
• Estudios clínicos
Eficacia en líneas celulares
Citotoxicidad MTT
Proliferación BrdU (ELISA)
Eficacia en líneas celulares
SensibleResistent
e
MM1S MM1R
RPMI-8226RPMI-LR5
RPMI-Dox40
U266U266-LR7
U266-Dox40
OPM-1
OPM-2
MM144
INA-6
NCI-H929
Modelos celulares sensibles y resistentes a fármacos convencionales.
Eficacia en células de pacientes
Aspirado de MO
Citometría de flujo
Cultivo con fármaco
Marcaje simultáneo
AcMo Anexina V
Apoptosis
Identificación de
poblaciones
Lisis de hematíes: NH4Cl
Mecanismo de acción
En todos los fármacos se analizarán vías generales, y en cada uno de ellos se realizarán estudios complementarios en función de sus dianas biológicas específicas.
a. Estudios de apoptosis: Se utilizarán técnicas de Anexina-V por citometría de flujo y Western-Blot para conocer las principales proteínas implicadas en la muerte celular.
b. Análisis del ciclo celular mediante citometría de flujo, y en caso de observar alguna alteración importante se analizarán las principales proteínas de ciclo celular mediante Western-Blot.
Mecanismo de acción
c. Estudios de vías de señalización celular: Asimismo se estudiarán mediante Western-Blot el efecto causado por el tratamiento con las drogas sobre las vías más importantes de proliferación celular como son Erk, PI3K/AKT, NFkB, JAK/STAT.
d. Estudios de farmacogenómica: Se analizarán las modificaciones producidas en el perfil de expresión génica por los fármacos que se van a estudiar. En muchos casos, estos estudios serán el punto de partida para la realización de otros estudios más específicos que delinearán mejor el mecanismo de acción.
Estudios “in vivo”
• Ratones
CB17-SCID, nudeHembras4-6 semanas
Xenoinjertos de células tumorales
Monitorización
Peso corporal
Volumen
tumoral
Supervivencia
Ratones modificados genéticamente
• Ratones HER2, BRCA1/p53 condicional
Estudios “in vivo”
Estudios de bioluminiscencia
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WARNING: Saturated Luminescent Image
bkg subflat-fieldedcosmic
AEW541 50 mg/ml
Evaluación de Eficacia Preclínica de
8 fármacos de UNIVALI (Brasil)
en Mieloma Múltiple y Cáncer de Mama Triple Negativo
Laboratorio de Oncofarmacología TraslacionalCentro de Investigación del Cáncer (CIC-
IBMCC)Salamanca
Eficacia Preclínica de
8 fármacos de UNIVALI (Brasil)
en dos modelos celulares de Mieloma Múltiple
83%
Eficacia de CH3ACIB en MM1S
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
CH3ACIB;MM1S cells;96w;30.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
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TT
Met
abo
liza
tio
n
24 h 100,00 92,97 87,47 87,03 84,62
48 h 100,00 98,12 96,80 95,86 94,92
72 h 100,00 99,69 97,17 92,88 89,01
Control 10nM 100 nM 1 uM 10 uM
83%
Eficacia de CH3ACIBPZ en MM1S
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
CH3ACIBPZ;MM1S cells;96w;30.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
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100,00
% M
TT
Met
abo
liza
tio
n
24 h 100,00 93,85 93,41 92,97 91,65
48 h 100,00 95,86 93,60 87,38 87,19
72 h 100,00 93,40 92,46 92,36 91,73
Control 10nM 100 nM 1 uM 10 uM
83%
Eficacia de CH3ACIBPNH en MM1S
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
CH3ACIBPNH;MM1S cells;96w;30.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
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100,00
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Met
abo
liza
tio
n
24h 100,00 99,78 99,12 96,06 95,40
48h 100,00 96,51 93,02 92,64 90,12
72h 100,00 95,21 96,22 95,84 93,95
Control 10nM 100 nM 1 uM 10 uM
Eficacia de ClisCTCH3B en MM1S
ClisCTCH3B;MM1S cells;96w;30.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
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100,00
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TT
Met
abo
liza
tio
n
24 h 100,00 92,09 92,75 90,99 88,79
48 h 100,00 99,06 90,77 89,45 89,08
72 h 100,00 91,83 91,10 88,48 86,28
Control 10nM 100 nM 1 uM 10 uM
83%
Eficacia de CINFM en MM1S
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
CINFM;MM1S cells;96w;30.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
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n
24 h 100,00 95,19 94,09 91,25 44,20
48 h 100,00 100,19 87,79 87,40 27,52
72 h 100,00 96,73 94,33 85,01 15,37
Control 10nM 100 nM 1 uM 10 uM
83%
Eficacia de DCINFM en MM1S
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
DCINFM;MM1S cells;96w;30.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
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abo
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n
24 h 100,00 99,12 95,40 92,56 47,26
48 h 100,00 99,81 91,28 89,34 33,53
72 h 100,00 98,11 96,60 86,52 23,43
Control 10nM 100 nM 1 uM 10 uM
83%
Eficacia de TZDCIA en MM1S
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
TZDCIA;MM1S cells;96w;30.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
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10,00
20,00
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50,00
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70,00
80,00
90,00
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TT
Met
abo
liza
tio
n
24 h 100,00 94,29 93,19 88,79 84,18
48 h 100,00 98,12 97,36 97,36 89,64
72 h 100,00 94,35 94,03 91,41 89,53
Control 10nM 100 nM 1 uM 10 uM
83%
Eficacia de TZDSO2CIA en MM1S
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
TZDSO2CIA;MM1S cells;96w;30.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
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10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
70,00
80,00
90,00
100,00
% M
TT
Met
abo
liza
tio
n
24 h 100,00 98,02 93,19 90,77 89,45
48 h 100,00 95,10 94,92 93,97 89,08
72 h 100,00 95,92 94,35 94,03 85,55
Control 10nM 100 nM 1 uM 10 uM
83%
Eficacia de CH3ACIB en RPMI8226
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
CH3ACIB;RPMI cells;96w;20.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
0,00
10,00
20,00
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40,00
50,00
60,00
70,00
80,00
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100,00
% M
TT
Met
abo
liza
tio
n
24 h 100,00 97,49 95,33 94,43 93,72
48 h 100,00 92,01 90,61 89,85 89,47
72 h 100,00 99,32 92,47 90,24 86,90
Control 10nM 100 nM 1 uM 10 uM
83%
Eficacia de CH3ACIBPZ en RPMI8226
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
CH3ACIBPZ;RPMI cells;96w;20.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
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10,00
20,00
30,00
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80,00
90,00
100,00
% M
TT
Met
abo
liza
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n
24 h 100,00 94,97 94,79 91,38 86,71
48 h 100,00 90,74 93,78 94,80 96,57
72 h 100,00 94,52 93,92 89,90 87,84
Control 10nM 100 nM 1 uM 10 uM
83%
Eficacia de CH3ACIBPNH en RPMI8226
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
CH3ACIBPNH;RPMI cells;96w;20.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
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10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
70,00
80,00
90,00
100,00
% M
TT
Met
abo
liza
tio
n
24 h 100,00 91,37 91,21 87,79 87,13
48 h 100,00 98,80 95,59 93,98 91,84
72 h 100,00 97,65 97,37 99,57 90,05
Control 10nM 100 nM 1 uM 10 uM
83%
Eficacia de ClisCTCH3B en RPMI8226
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
ClisCTCH3B;RPMI cells;96w;20.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
0,00
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
70,00
80,00
90,00
100,00
% M
TT
Met
abo
liza
tio
n
24 h 100,00 99,28 98,92 95,51 89,95
48 h 100,00 97,59 89,72 95,43 79,70
72 h 100,00 94,69 86,99 85,45 74,57
Control 10nM 100 nM 1 uM 10 uM
83%
Eficacia de CINFM en RPMI8226
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
CINFM;RPMI cells;96w;20.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
0,00
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
70,00
80,00
90,00
100,00
% M
TT
Met
abo
liza
tio
n
24 h 100,00 97,72 96,25 87,95 27,52
48 h 100,00 96,79 97,46 86,10 25,53
72 h 100,00 97,09 96,73 85,22 24,09
Control 10nM 100 nM 1 uM 10 uM
83%
Eficacia de DCINFM en RPMI8226
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
DCINFM;RPMI cells;96w;30.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
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10,00
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40,00
50,00
60,00
70,00
80,00
90,00
100,00
% M
TT
Met
abo
liza
tio
n
24 h 100,00 96,30 94,37 93,89 81,19
48 h 100,00 95,81 92,40 85,45 75,62
72 h 100,00 97,04 95,90 95,23 73,85
Control 10nM 100 nM 1 uM 10 uM
83%
Eficacia de TZDCIA en RPMI8226
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
TZDCIA;RPMI cells;96w;20.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
0,00
10,00
20,00
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100,00
% M
TT
Met
abo
liza
tio
n
24 h 100,00 97,31 93,54 93,00 92,46
48 h 100,00 95,18 92,01 91,50 89,97
72 h 100,00 92,21 88,53 88,44 87,67
Control 10nM 100 nM 1 uM 10 uM
83%
Eficacia de TZDSO2CIA en RPMI8226
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
TZDSO2CIA;RPMI cells;96w;20.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
0,00
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
70,00
80,00
90,00
100,00
% M
TT
Met
abo
liza
tio
n
24 h 100,00 97,49 95,69 95,51 92,10
48 h 100,00 91,88 93,65 92,64 92,13
72 h 100,00 94,61 92,29 82,11 73,72
Control 10nM 100 nM 1 uM 10 uM
Evaluación de Eficacia Preclínica de
8 fármacos de UNIVALI (Brasil)
en Cáncer de Mama Triple Negativo
83%
Eficacia de CH3ACIB en MDAMB231
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
CH3ACIB;MDAMB231 cells;24w;10.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
0,00
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
70,00
80,00
90,00
100,00
% M
TT
Met
abo
liza
tio
n
24 h 100,00 89,87 89,14 85,63 82,98
48 h 100,00 88,64 82,99 82,66 78,70
72 h 100,00 90,89 88,09 85,21 41,10
Control 10 nM 100 nM 1 uM 10 uM
83%
Eficacia de CH3ACIBPZ en MDAMB231
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
CH3ACIBPZ;MDAMB231 cells;24w;10.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
0,00
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
70,00
80,00
90,00
100,00
% M
TT
Met
abo
liza
tio
n
24 h 100,00 98,44 95,70 88,67 83,98
48 h 100,00 91,00 88,10 86,90 83,33
72 h 100,00 90,63 87,34 81,97 78,97
Control 10 nM 100 nM 1 uM 10 uM
83%
Eficacia de CH3ACIBPNH en MDAMB231
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
CH3ACIBPNH;MDAMB231 cells;24w;10.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
0,00
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
70,00
80,00
90,00
100,00
% M
TT
Met
abo
liza
tio
n
24 h 100,00 96,04 94,37 91,56 91,65
48 h 100,00 94,74 94,80 93,71 78,79
72 h 100,00 90,78 90,51 85,96 65,98
Control 10 nM 100 nM 1 uM 10 uM
83%
Eficacia de ClisCTCH3B en MDAMB231
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
ClisCTCH3B;MDAMB231 cells;24w;10.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
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10,00
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% M
TT
Met
abo
liza
tio
n
24 h 100,00 94,46 94,82 93,42 76,59
48 h 100,00 97,31 98,53 96,29 65,54
72 h 100,00 88,17 86,98 86,79 54,77
Control 10 nM 100 nM 1 uM 10 uM
83%
Eficacia de CINFM en MDAMB231
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
CINFM;MDAMB231 cells;24w;10.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
0,00
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
70,00
80,00
90,00
100,00
% M
TT
Met
abo
liza
tio
n
24 h 100,00 91,78 91,54 88,96 88,49
48 h 100,00 90,53 89,55 86,39 85,13
72 h 100,00 90,17 89,41 84,73 84,48
Control 10 nM 100 nM 1 uM 10 uM
83%
Eficacia de DCINFM en MDAMB231
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
DCINFM;MDAMB231 cells;24w;10.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
0,00
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
70,00
80,00
90,00
100,00
% M
TT
Met
abo
liza
tio
n
24 h 100,00 97,07 97,03 95,07 94,49
48 h 100,00 94,92 93,57 93,31 91,06
72 h 100,00 95,91 95,28 90,80 88,27
Control 10 nM 100 nM 1 uM 10 uM
83%
Eficacia de TZDCIA en MDAMB231
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
TZDCIA;MDAMB231 cells;24w;10.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
0,00
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
70,00
80,00
90,00
100,00
% M
TT
Met
abo
liza
tio
n
24 h 100,00 96,77 96,35 94,35 93,46
48 h 100,00 90,36 91,61 90,92 89,29
72 h 100,00 92,59 91,48 92,85 89,12
Control 10 nM 100 nM 1 uM 10 uM
83%
Eficacia de TZDSO2CIA en MDAMB231
24.38 % Anexina +23.14 % Anexina +
TZDSO2CIA;MDAMB231 cells;24w;10.000 cells/w;24-48-72h;20-11-12
0,00
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
70,00
80,00
90,00
100,00
% M
TT
Met
abo
liza
tio
n
24 h 100,00 91,40 90,79 89,54 87,65
48 h 100,00 90,07 89,98 86,78 85,87
72 h 100,00 86,35 82,52 80,69 76,86
Control 10 nM 100 nM 1 uM 10 uM
