Las envueltas de los clusters de subtipo F1 de reciente expansión en

Europa Occidental presentan una utilización diferente de CCR5 frente a

las envueltas de subtipo BDr. Javier García Pérez

Instituto de Salud Carlos III. CNMLaboratorio de Inmunopatología del Sida

Diciembre 2019AIDS Immunopathology Unit

GeSIDA 2019

Introducción

AIDS Immunopathology Unit

Año de diagnóstico

% f

orm

a ge

né

tica

Año de diagnóstico

% f

orm

a ge

né

tica

Formas genéticas de VIH en Galicia

Formas genéticas de VIH en País Vasco

Delgado et al., Gesida 2017

Delgado et al., Plos One, 2015

Vinken et al., Frontiers in Microbiology, 2019

Cluster F1_1

Belgian clade

Spanish clade

GeSIDA 2019

Introducción

AIDS Immunopathology Unit

Respuesta a terapia ARV

P=0,032

P=0,01

P=0,01

P=0,03

Cuevas et al., Gesida 2017 y 2018.

Cluster F1_1

CCR5 CXCR4

Alto % de tropismo dual en cluster F1_1

R 5 X 4R 5

69 %

31 %

0

2 0

4 0

6 0

8 0

1 0 0

1 2 0

Semana

% C

V i

nd

ete

cta

ble

B

F1

12 24 36 48

0

2 0 0

4 0 0

6 0 0

8 0 0

1 0 0 0

Semana

Pro

me

dio

CD

4+

B

F1

12 24 36 48

Cid-Silva et al., AIDS, 2018.

Peor respuesta al tratamiento del cluster F1_1 GeSIDA 2019

AIDS Immunopathology Unit

Not I*

Xho I

gag vifvpr

tatLac Z

rev

nefLTR LTR

vpu

Renilla

pol

Sac II*PO F1_3

PO F1_1

PO B

pNL4.3-lacZenv-Ren

Métodos

10

16

9

INFECCIÓN

TRANSFECCIÓN 293T

PBMCsHEK293T-CCR5+CD4

TZM-blU87-R5/X4

Affinofile

Tropismo

Capacidad Replicativa

Eficacia de utilización de los receptores

Susceptibilidad a Maraviroc

Selección de pacientes GeSIDA 2019

Resultados

AIDS Immunopathology Unit

Sub B + controles Cluster F1_1 Cluster F1_3

Infe

cció

n (

RLU

s)

Infe

cció

n (

RLU

s)

Infe

cció

n (

RLU

s)

Infe

cció

n (

RLU

s)

Infe

cció

n (

RLU

s)

Infe

cció

n (

RLU

s)

PB

MC

sU

87

R5

/X4

1 4 5 9

10

11

12

22

26

27

36

38

46

49

58

59

0

2 0 0 0

4 0 0 0

6 0 0 0

8 0 0 0

1 0 0 0 0

DMSO

MVC

AMD

MVC+AMD

1 3 4 5 9

10

11

12

14

BX

08

NL

4.3

VS

V

0

2 0 0 0

4 0 0 0

6 0 0 0

8 0 0 0

1 0 0 0 0

DMSO

MVC

AMD

MVC+AMD

24

25

28

30

39

43

60

64

65

66

0

2 0 0 0

4 0 0 0

6 0 0 0

8 0 0 0

1 0 0 0 0

DMSO

MVC

AMD

MVC+AMD

1 3 4 5 9

10

11

12

14

BX

08

NL

4.3

VS

V

0

1 0 0 0 0 0

2 0 0 0 0 0

3 0 0 0 0 0

4 0 0 0 0 0

5 0 0 0 0 0

6 0 0 0 0 0

7 0 0 0 0 0

R5 DMSOR5 MVCX4 DMSO

X4 AMD

1 4 5 9

10

11

12

22

26

27

36

38

46

49

58

59

0

1 0 0 0 0 0

2 0 0 0 0 0

3 0 0 0 0 0

4 0 0 0 0 0

5 0 0 0 0 0

6 0 0 0 0 0

7 0 0 0 0 0

R5 DMSOR5 MVC

X4 DMSOX4 AMD

24

25

28

30

39

43

60

64

65

66

0

1 0 0 0 0 0

2 0 0 0 0 0

3 0 0 0 0 0

4 0 0 0 0 0

5 0 0 0 0 0

6 0 0 0 0 0

7 0 0 0 0 0

R5 DMSOR5 MVCX4 DMSO

X4 AMD

R 5 X 4R 5 R 5 X 4R 5 R 5 X 4R 5

89 %

11 %

69 %

31 %

100 %

Análisis del tropismo R5/X4

CCR5 CXCR4

MVC AMDGeSIDA 2019

Resultados

AIDS Immunopathology Unit

su

b B

F1_1

F1_3

0

1 0 0 0 0

2 0 0 0 0

3 0 0 0 0

su

b B

F1_1

F1_3

-1 0 0 0 0 0

0

1 0 0 0 0 0

2 0 0 0 0 0

3 0 0 0 0 0

Cap

Rep

licat

iva

(RLU

s)

Cap

Rep

licat

iva

(RLU

s)

Cap

Rep

licat

iva

(RLU

s)

TZM-bl PBMCs HEK293T-CCR5+CD4

PO

B

F1_1

F1_3

0

5 0 0 0 0

1 0 0 0 0 0

1 5 0 0 0 0

Análisis de la capacidad replicativaGeSIDA 2019

Resultados

AIDS Immunopathology Unit

Affinofile CD4bajo/CCR5alto Affinofile CD4alto/CCR5bajo

% In

fecc

ión

(R

elat

ivo

a c

élu

las

CD

4al

to/C

CR

5al

to)

% In

fecc

ión

(R

elat

ivo

a c

élu

las

CD

4al

to/C

CR

5al

to)

su

b B

F1_1

F1_3

-2

0

2

4

6

su

b B

F1_1

F1_3

4 0

5 0

6 0

7 0

8 0

Análisis de la eficacia de utilización de CD4 y CCR5 en células Affinofile

Johnston S H et al. J. Virol. 2009

5ng/ml

1,25ng/ml

0ng/ml

0

20000

40000

60000

80000

100000

120000

140000

160000

2u

M

1u

M

0,5

uM

0,2

5u

M

0,1

25

uM

0u

M

CCR5

5ng/ml

1,25ng/ml

0ng/ml

0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

350000

400000

2u

M

1u

M

0,5

uM

0,2

5u

M

0,1

25

uM

0u

M

CD4

Expresión de receptores

GeSIDA 2019

Resultados

AIDS Immunopathology Unit

%In

hib

ició

n (

25

nM

MV

C)

HEK293T-CCR5+CD4

su

b B

F1_1

F1_3

0

2 0

4 0

6 0

8 0

1 0 0

1 2 0

HEK293T-CCR5+CD4

%In

hib

ició

n (

10μ

M M

VC

)

Análisis de la susceptibilidad a Maraviroc

-1 3 -1 2 -1 1 -1 0 -9 -8 -7 -6 -5

0

2 0

4 0

6 0

8 0

1 0 0

M V C ( lo g ,M )

% I

nh

ibit

ion

(M

VC

)

MVCMPI

IC50GeSIDA 2019

Conclusiones

AIDS Immunopathology Unit

La capacidad de las envueltas de los cluster de subtipo

F1 para utilizar el receptor CCR5 unido a MVC en

comparación con las envueltas de subtipo B sugiere un

reconocimiento más heterogéneo del receptor.

MVC MVC MVC

sub B F1_1 F1_3

GeSIDA 2019

Gracias!!!

AIDS Immunopathology Unit

Inmunopatología del Sida (ISCIII)

Almudena Cascajero

José Alcamí.

Nuria González

Francisco Díez-Fuertes

Mayte Pérez- Olmeda

SpanishHIV/AIDSResearchNetwork

Mercedes Bermejo

Mayte Cuevas

Javier Cañada

Mónica Sánchez

Elena Delgado

Miguel Thomson

Biología y Variabilidad del VIHGeSIDA 2019