INTRODUCCIÓN A LA HISTOLOGÍA

Y TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

QUE ES LA HISTOLOGÍA?o Es la disciplina que estudia todo lo

relacionado con los tejidos orgánicos: su estructura microscópica, su desarrollo y sus funciones.

o Su estudio no se detiene en los tejidos, sino que va más allá, observando también las células interiormente

CONCEPTOS

Tejidos

• Estructuras constituidas por un conjunto organizado de células iguales.

• Es una agrupación de diversos tejidos que forman una unidad estructural encargada del cumplimiento de una función en un organismo pluricelular.

Órganos Sistemas

• Conjunto de órganos y estructuras similares que trabajan en relación para cumplir alguna función fisiológica en un ser vivo.

CIENCIAS CON LAS QUE SE RELACIONA

• Anatomía• Fisiología• Biología• Citología

• Bioquímica• Patología• Ontología• Odontología

TÉCNICAS HISTOLOGICAS

ETAPAS PARA LA PREPARACIÓN DE UN CORTE HISTOLÓGICO

• Fijación• Deshidratación• Aclaración• Inclusión• Corte• Coloración

• FIJACIÓN

El tejido obtenido se coloca en una sustancia fijadora para evitar los cambios post-mortem y para conservar la forma original del tejido.

El mas común utilizado es el formol. También se utiliza glutaralehido para proteínas y osmio para lípidos

Puede realizarse por inmersión, perfusión y mediante vapores

• DESHIDRATACIÓN

Se utiliza una serie gradual de soluciones acuosas con una concentración de menor a mayor, como el alcohol etílico

La deshidratación gradual se hace para evitar la deformación del tejido debido a la rápida salida de agua

• ACLARACIÓN

Se debe sumergir el tejido en un liquido que pueda ser mezclado tanto en la inclusión como en la deshidratación

El liquido mas común utilizado es el Xilol. También están el cloroformo, benceno y tolueno

• INCLUSIÓN

Tiene como finalidad proporcionar al tejido un soporte fijo para poder realizar un corte muy fino

Se forman bloques de parafina dentro de los cuales están las muestras a estudiar Después de la inclusión y el secado, la muestra se pone a congelar para pasar al

corte

• CORTEEl instrumento que se usa para hacer cortes se llama micrótomoSe realizan los cortes muy delgados de acuerdo a lo requerido, y

van desde los .5 micras hasta 8 u 10 micras.Los cortes se ponen en un baño de flotación y se pescan con un

portaobjetos. Se clasifica con el tejido y el tipo de tinción que se va a utilizar

TIPOS DE MICRÓTOMOS

Parafina

• Se utiliza en tejidos blancos y la pieza es la que se desplaza. En ocasiones puede que la cuchilla también se desplace

• Se utiliza para tejidos frescos/congelados.

• Es una cuchilla que se desliza y que esta conectada a una botella de gas carbónico que a su salida, congela la muestra

Congelación Criostato

• Es para muestras frescas y cuenta con una cámara de congelación

• El corte se adhiere a la cuchilla desde el portaobjetos sin tocarla, por efecto de diferencia de temperaturas

• COLORACIÓN

Los colorantes mas usados son Hematoxilina y eosina

Se utiliza para diferenciar en los tejidos las diferentes estructuras y sustancias

Se utilizan colorantes específicos para identificar ciertas estructuras

Colorantes con afinidades especificas:

Proteínas: Se tiñen de rojo con eosina Ácidos nucleicos: se tiñen de azul con

hematoxilina Hueso: depósitos de calcio se tiñe azul con

hematoxilina y las sustancias periféricas rojas con eosina

Lípidos: se tiñen negro con tetra oxido de osmio

Carbohidratos: se tiñen purpura con hematoxilina

Mucopolisacaridos: se tiñen de rojo con toluidina

TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

Cultivo de células• Celulas y tejidos se cultivan en soluciones

como sales, aminoácidos y vitaminas.

• Al estar las células separadas se ponen en suspensión o sobre una placa de Petri, donde se adhieren formando una única capa celular

Fraccionamiento celular• Proceso físico donde se utiliza el

centrifugado para separar los orgánulos y los componentes celulares

• Después son examinados en un microscopio eléctrico para comprobar su pureza y composición química