Introducción a la Histología

& Técnicas Histológicas

Angel Cordova Ramos

Facúltad de Odontología UAdeC

Ciencia que se encarga del estudio de los tejidos. (micro anatomía)

Ciencia que estudia el desarrollo de los tejidos y su organización para formar órganos.

Conceptos

• Tejido: Conjunto de células de la misma naturaleza, diferenciadas de un modo determinado, ordenadas regularmente, con un comportamiento fisiológico común

• Célula: Es la unidad estructural y funcional de todo ser vivo.

Antecedentes

• Pre microscópico: Observación y comparación, agrupación tejidos distintos.

• Microscópico: 1665 Cuando Marcelo Malpighi fundador de la disciplina estudia por primera vez tejidos vivos.Al principio se clasificaron 21 grupos de tejidos en la actualidad se redujo a 4.

• Microscopía electrónica: 1932 construcción primer microscopio electrónico, brinda una rica variedad de detalles que no se conocían en su totalidad

La Histología de hoy

La histología a presenciado su auge en nuestra época el avance tecnológico permite a médicos, microbiólogos, y otros profesionales, realizar diversos estudios fidedignos y complejos.

La histología se encuentra relacionado con muchas otras disciplinas como la bioquímica, patología, fisiología e inmunología; creando nuevas técnicas como la histoquímica, la inmunohistoquímica

¿Qué es un Corte Histológico?

Para cortar el tejido se requiere de un instrumento de precisión llamado micrótomo que hace cortes de aprox. 20 micrómetros de grosor y podrá observarse con un microscopio compuesto.

Preparación de un corte histológico

• Extracción

• Corte

• Fijación (formaldehido)

• Deshidratación (alcohol etílico)

• Aclaramiento (xilol o benzol)

• Inclusión

• Micrótomo

• Porta objetos

• Extracción de parafina

• Tinción

Fijación

Trata de tener el tejido lo mas parecido posible, como si estuviera vivo.

En los fijadores mas populares es conocido:

• Formol

• Formaldehido

• Glutaraldehido

El fijador debe de tener un gran poder de penetración, poder balancear el pH, y no alterar la estructura del tejido.

Deshidratación

Se sumerge el tejido en Alcohol, con la finalidad de hacer desaparecer el agua del tejido y sustituirla por alcohol.

Aclaración

Se sustituye el alcohol por un xilol para que sea visible en la parafina.

Inclusión

Se Pone el tejido en un molde de parafina y esta ocupara el espacio de donde se encontraba el agua y al enfriase da rigidez al tejido (Taco).

Tinción

Las tinciones son esenciales para la correcta apreciación de los tejidos ya que la mayoría de ellos son incoloros

Los componentes de los tejidos que se tiñen con colorantes básicos se denominan basófilos, mientras que los que se unen con colorantes básicos se denominan acidófilos

• Colorantes básicos: Azul de toluidina, azul de metileno, hematoxilina.

• Colorantes ácidos: Naranja G, fucsina, eosina.

MICROTOMOS PARA PARAFINA

• Los microtomos para cortar material incluido en parafina son probablemente los más usados en los laboratorios de histología. Todos poseen varias partes comunes: una cuchilla, un portabloques y un sistema mecánico que permite acercar el bloque de parafina a la cuchilla una distancia que se corresponde con el grosor de la sección que pretendemos obtener y realizar el corte.

VIBRATOMO

Puede haber varias razones para evitar la inclusión de un tejido del que posteriormente obtener secciones. Durante los procesos de inclusión, como las inclusiones en parafina o en resinas tipo epoxy, se ha de someter a las muestras a deshidratación. Esto ocasiona a veces daño en algunas moléculas o regiones moleculares que son las que queremos detectar posteriormente con técnicas como la inmunocitoquímica. Además, para observar algunas características tisulares o celulares se requieren secciones gruesas del orden de 50 µm, a veces de 100 o 200 µm. Por ejemplo, para estudiar la organización espacial de determinadas células como las neuronas.

CRIOTOMOS

• La congelación de los tejidos es una manerarápida de endurecerlos sin necesidad de inclusión, por lo que la preservación molecular es máxima. Muy importante si el procesamiento posterior requiere el reconocimiento molecular. Igual preservación se consigue con los cortes de vibratomo, pero las muestras congeladas pueden cortarse en secciones más finas, del orden de varias, cosa muy difícil con el vibratomo. Otra ventaja de la obtención de secciones mediante congelación es que la calidad de las secciones no depende del tipo de tejido 

ULTRAMICROTOMO

Para la observación con detalle de la ultraestructura celular es necesario realizar secciones muy delgadas denominadas ultrafinas, del orden de nanometros, y observarlas con el microscopio electrónico de transmisión. Para ello se incluye nuestra muestra en resina, generalmente de tipo epoxy, que una vez polimerzada resulta en un bloque de gran dureza. La obtención de secciones ultrafinas se lleva a cabo con un aparato denominado ultramicrotomo.