INTERES MICROBIOLOGICO DEL ESPUTO

La mucosa que reviste el tracto respiratorio segrega, normalmente, un sustancia mucinosa que contiene algunos leucocitos y células de las capas superficiales; cuando sale al exterior, arrastra partículas extrañas que proceden de las vías respiratorias altas y, en determinadas circunstancias, contiene microorganismos cuya detección reviste interés semiológico. El esputo esta constituido por las secreciones de las vías respiratorias inferiores que llegan a la boca mediante la expectoración.

El estudio microbiológico del esputo es un tema totalmente sometido a discusión y revisión, y que muchos autores afirman que no tiene prácticamente valor alguno, mientras que otros, sobre todo los de la escuela inglesa, mantienen que se puede obtener una información muy útil si se toman las medidas adecuadas para su recolección. De todas maneras, el cultivo del esputo es una practica habitual que, si no se efectua con sumo cuidado y se valora con extremado rigor, puede ser fuente de errores y rara vez ofrece información de interés.

Desde el punto de vista microbiológico, el esputo puede aportar datos para el diagnostico de infecciones del tracto respiratorio inferior, tales como neumonía, bronquitis crónica y tuberculosis pulmonar. El esputo, sin embargo, no es valido para el estudio de algunos procesos respiratiorios específicos: difteria, tosferina, tonsilitis, angina de Plaut Vicent, gonococia faríngea y abscesos pulmonares; tampoco en el esputo se deben investigar anaerobios, por la posibilidad de encontrarlos como parte de la flora anaerobia comensal del tracto respiratorio alto

FLORA NORMAL Y PATOLOGICA DEL ESPUTO

Los microorganismos comensales que suelen aparecer en el esputo son los mismos del tracto respiratorio alto, pues la traquea, bronquios y pulmones son normalmente esteriles. Esta flora esta constituida principalmente por:

Cocos grampositivos: diversas especies de estreptococos saprofito, Streptococcus pneumoniae hasta en un 20-40% de la flora, Staphylococcus aureus, estafilococos coagulasa negativa y micrococos.

Cocos gramnegativos: neisserias saprofitas, Neisseria meningitidis hasta en un 5-20% de la flora, sobre todo en época de epidemia, especies de Veillonella.

Bacilos grampositivos: corinebacterias saprofitas, Lactobacillus y Actinomyces. Bacilos gramnegativos: Haemophilus, enterobacterias, Bacteroides y

Fusobacterium. Levaduras: varias especies del genero Candida, incluida C. albicans.

Los microorganismos que se asocian frecuentemente con neumonía son: Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae y Staphylococcus aureus, a consecuencia de su capacidad para resistir la fagocitosis por la producción de capsula o la elaboración de enzimas que destruyen se puede encontrar Haemophilus influenzae y Moraxella Catarrhalis, aprovechando la alteración previa de los tejidos. Estos últimos se aíslan con frecuencia en la exacerbación de la bronquitis crónica en

adultos, en algunos casos de bronconeumonía y como causantes de bronquitis espática en niños.

Las neumonías se suelen clasificar desde el punto de vista etiológico en dos grandes grupos, que implican distintas actitudes terapéuticas: de adquisición estrahospitalaria, con una etiología similar a la que hemos descrito, y de adqusicion nosocomial, donde predominan los bacilos gramnegativos. En pacientes sometidos a tratamiento inmunosupresor, esteroidico, o a terapia antimicrobiana intensa y prolongada, el esputo ofrece una orientación sobre el asentamiento de flora potencialmente patógena, con el consiguiente desplazamiento de la flora saprofita normal. En el esputo de estos pacientes se aíslan cultivos puros o predomienantes de diversas enterobacterias, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, Acinetobacter y otros microorganismos oportunistas. En los pacientes hospitalizados sometidos a respiración aisistida(ventilación mecánica) son frecuentes las neumonías por aspiración, cuya etiología es muy variada, incluyendo anaerobios. En el esputo de los pacientes con fibrosis quística pancreática ( mucoviscidosis) es muy común el aislamiento de Pseudomonas aeruginosa ( colonias mucoides) y Staphylococcus aureus, como colonizadores respiratorios.

Excepto Mycobacterium tuberculosis, todos los patógenos pulmonares pueden aislarse del tracto respiratorio alto de individuos sanos, por lo que su presencia en escasa cantidad en el esputo no es, pues, evidencia suficiente de que estén causando infección. En la mayoría de los procesos infecciosos la sospecha de algún patógeno guarda casi siempre relación con su abundancia, por lo que, a veces, es interesante cuantificar la flora por técnicas especiales de cultivo.

A pesar de todo lo expuesto, la mayoría de las infecciones respiratorias están causadas por virus ( virus respiratorio sincitial, virus de la influenza) y bacterias difíciles de cultivar, como Legionella pneumophila, Mycoplasma pneumoniae, Coxiella burnetii, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia psittaci; en ocasiones, están implicados agentes de diagnostico complicado (Pneumocystis carinii) o raros (Nocardia asteroides, Cryptococcus neoformans). En estos casos el cultivo del esputo no aporta datos para el diagnostico y es mas aconsejable el uso de métodos inmunológicos.

RECOLECCION DEL ESPUTO

Existen diversas metodologías para la recogida del esputo, las cuales se emplean dependiendo de cada situación clínica. En cualquier caso, una vez obtenida la muestra, esta debe procesarse lo mas rápidamente posible por el deterioro celular que conlleva su retraso. Unicamente el examen directo para investigación de M. tuberculosis puede dilatarse 24horas si la muestra ha sido refrigerada.

Expectoracion: El esputo expectorado se contamina a menudo en la orofaringe y es difícil determinar cual de los muchos patógenos potenciales aislados es responsable de la posible infección respiratoria. Por ello, la recogida del esputo

por expectoración espontanea ha de hacerse cuidadosamente, siguiendo las recomendaciones que exponemos a continuación:

Recoger los esputos matinales, en ayunas, pues son los mas concentrados y representativos.

Enjuagar la boca con agua, previamente a la recogida, para eliminar la flora acumulada en la cavidad oral. No usar para el enjuague liquidos que contengan antisépticos.

Provocar la expectoración mediante tos profunda. Depositar las secreciones expectoradas en un recipiente esteril de boca ancha

y cierre hermético. Enviar al laboratorio con rapidez o refrigerar.

En aquellos paciente, mujeres y niños, cuya expectoración es nula o poco productiva, puede estimularse esta colocando al paciente en una postura que facilite el drenaje y golpeando suavemente el torax en la zona que se sospecha la infección. Tambien es útil obtener la muestra mediante previa inhalación de un aerosol tibio nebulizado que contenga un agente mucolitico (N-acetil-L-cisteina al 20% o el compuesto por glicerol al 1% en solución salina calentada a 37ºC) con el fin de humedecer el aire que llega al tracto respiratorio inferior y aumentar la capacidad de los cilios para ascender las secreciones deshidratadas y viscosas. No son validos los vapores de glicol utilizados en la obtención de muestras para estudios citológicos, ya que son bactericidas. La muestra asi obtenida se conoce como “esputo inducido”.

En casos especiales, sobre todo en niños pequeños, puede recurrirse a la toma directa de las secreciones a nivel de la laringe, ayudadose de un esobillon laríngeo especial, o bien practicar un escobillonaje nasofaríngeo.

2. Broncoscopia

Consiste en la toma directa por aspiración a nivel de los bronquios con la ayuda de un fibrobroncoscopio. El fibroncoscopio es una canula que se introduce por la boca, a través de la traquea, hasta los bronquios. La broncoscopia siempre será efectuada por un especialista ya que supone una agrasion. Esta operación tiene menos posibilidades de contaminar la muestra, pero el aspirado no siempre contiene la flora del tracto respiratorio inferior, que puede contaminarse por la introducción del catéter de forma inadecuada. Esta indicada en pacientes inmunodeprimidos y ante sospecha de nocardiosis, micosis o neumonía atípica, asi como para el diagnostico de neumonía por Legionella y Pneumocystis. Para la neumonía bacteriana tiene un valor muy controvertido; pero cuando se acompaña de cultivo cuantitativo adquiere una buena sensibilidad y especificidad.

El material tomado por broncoscopia se denomina aspirado broncoalveolar (BAS); si se favorece la formación de secreciones por la introducción previa de soluciones, el material obtenido se denomina lavado broncoalveolar (BAL).

Otra modalidad de broncoscopia utiliza el llamado cepillo telescopado ocluido (CTO), que efectua un arrastre selectivo de las secreciones bronquiales.

3. Aspiracion o puncion transtraqueal (PTT)

La aspiración transtraqueal se realiza por puncion con aguja fina (PAF) o introducción de un catéter a través de la traquea (PAT); su fin es aspirar secreciones libres de contaminación orofaringea, aun que en bronquíticos crónicos y pacientes hospitalizados se pueden arrastrar patógenos que colonizan el árbol bronquial. Este método solamente se emplea en infecciones graves, cuando la muestra obtenida por otros medios no ofrece resultados fiables, o cuando se sospecha infección por anaerobios; esta contraninidcado en pacientes con diátesis hemorrágica, tos incontrolable o hipoxemia aguda. El procedimiento no es totalmente inofensivo, las posibles complicaciones influyen enfisema subcutáneo y mediatinico, hemorragia e infección de pared.

4. Aspiracion o puncion transpulmonar

Se utiliza cuando fallan los demás métodos, en enfermos con fracaso terapéutico y procesos cavitados. La muestra obtenida carece de posible contaminación con las secreciones de todo el tracto respiratorio. La técnica debe realizarse bajo guía radiológica, con anestesia local; su principal complicación es el neumotórax.

En determinados casos, cuando la vida del paciente depende de un diagnostico correcto, la punción pulmonar se sustituye por toracotomía a cielo abierto para obtener una biopsia del parénquima pulmonar.

CARACTERISTICAS MACROSCOPICAS DEL ESPUTO

1. Aspecto

El esputo puede presentar aspecto mucoso o vítreo, casi transparente. Este esputo se expulsa con dificultad, se adhiere al recipiente donde ha sido recogido y suele contener escasas células y croorganismos, pues corresponde al comienzo de un proceso inflamatorio limitado a las capas superficiales de la mucosa.

El esputo purulento presenta un aspecto mas o menos fluido y su coloración es amarillo-verdosa. Es rico en células, leucocitos y microorganismos, indicativos de la existencia de un proceso supurado.

El esputo mucopurulento es opaco, amarillento o amarillento-verdoso y mal trabado. Su maor o menor fluidez o viscosidad depende de las proporciones de pus y moco. Generalmente ofrece aspecto numular o globuloso, y nada entre la serosidad. Este esputo es también rico en células y microorganismos procedentes del periodo final de un proceso inflamatorio y del vaciamiento de cavidades patológicas.

El esputo seroso o seroalbuminoso ofrece aspecto de clara de huevo. Se elimina en los procesos inflamatorios muy agudos y, en grandes cantidades, en el edema del pulmón.

El esputo sanguinolento es muy variado, según su origen. La sangre procedente de hemoptisis puede formar estrías o estar mas o menos entremezclada.

CARACTERISTICAS MICROSCOPICAS DEL ESPUTO

La observación microscópica del esputo puede ofrecer una orientación valiosa y es de gran interés en la valoración de la calidad de la muestra.

Mediante tinción de Giemsa o cualquiera de sus varientes, y rutinariamente con la tinción de Gram, podemos observar: fibras y retículos de moco, cristales, células de descamación del epitelio de la boca y tracto respiratorio, hematíes, leucocitos, bacterias, hongos y parasitos. El esputo que no presenta contaminación manifiesta del epitelio bucal puede contener un aumento de células polinuclears en los procesos inflamatorios, o de eosinofilos en los cuadros alérgicos.

Aparte de los casos aislados en los que se visualizan elementos anormales que ayudan a establecer el diagnostico, o en el caso particular de Mycobacterium tuberculosis, la microscopia del esputo es importante para la valoración clínica de las muestras en base a su contenido y proporción de leucocitos y células epiteliales. Usando el objetivo de 100x podemos establecer la siguiente clasificación:

En los tres últimos casos, la muestra se considera inadecuada para el cultivo y debe solicitarse una nueva muestra.

CULTIVO DEL ESPUTO

El cultivo del esputo debe practicarse a partir de las porciones purulentas o mas sospechosas, despreciado la saliva y el moco, En el caso de esputos demasiado consistentes es aconsejable una fluidificación previa, añadiendo N-acetil-cisteina. Una vez fluidificados, no debe dilatarse el cultivo para impedir el sobrecrecimiento de bacterias no deseables.

La inoculación se hace directamente sobre placas de agar sangre, agar chocolate y un medio para enterobacterias (agar de Mac Conkey); algunos autores añaden una placa de agar manitol salado. En determinados casos, según la sospecha clínica, pueden inocularse medios para Legionella (agar CYE) y para levaduras (agar de Sabouraud),

aunque el esputo no es una muestra idónea para la investigación de estos patógenos. La siembra se hace por técnicas de aislamiento.

Las placas se incuban según el medio: 24-48 horas en atmosfera de CO2, las que contienen sangre; 24 horas en atmosfera ambientales las de agar de Sabouraud.

1. Crecimiento en agar sangre

En medio tiene por objeto la valoración global de la flora y la diferenciación de los cocos grampositivos, según las características de las colonias y las propiedades hemolíticas; la valoración de un aislalmiento como patógeno debe hacerse con suma precaucion. Como norma general, solo debe considerarse el crecimiento en cultivo puro o predominante ( superior a los 2/3 de la flora total) de un patógeno potencial, en estrecha asociación con leucocitos polimorfonucleares. En otros casos, se tendrá en cuenta la situación clínica del paciente o la conveniencia de conocer la flora que coloniza el tracto respiratorio.

Se deben diferenciar las colonias alfahemoliticas, puntiformes o pequeñas, secas y opacas, pertenecientes a especies de estreptococos del grupos viridans, de las colonias pequeñas o medianas, lisas, brillantes, húmedas y con tendencia a la autolisis, correspondientes a Streptococcus pneumoniae. La prueba de la optoquina nos ayuda a establecer la diferenciación. Es muy importante detectar la resistencia a penicilina en S. pneumoniae por las implicaciones terapéuticas comprende el examen microscópico y el cultivo: las pruebas de hipersensibilidad y la inoculación a animales, son pruebas complementarias.

Las muestras para el diagnostico de tuberculosis pulmonar pueden ser variadas:

El esputo se recoge de la manera usual, pero conviene analizar hasta tres muestras matinales, tomadas en días consecutivos o alternos, con el fin de aumentar las posibilidades de detectar la emisión de bacilos. Si la observación microspica es positiva, el cultivo es opcional para el diagnostico.

En niños o en pacientes cuya expectoración no es productiva se recurre al lavado gástrico donde se encuentran los bacilos deglutidos. En estos casos, se procede a la realización del cultivo pues la observación microscópica puede evidenciar micobacterias saprofitas (M. gastri) indistinguibles morfológicamente de M. tuberculosis. La muestra debe procesarse con rapidez para que los bacilos no pierdan viabilidad: si no es posible, es conveniente neutralizar la acidez añadiendo un volumen igual de fosfato trisodico al 10% o 1,5ml de fosfoto disodico por cada 40ml de jugo gástrico.

Si existe derrame pleural se puede efectuar cultivo del mismo tras concentración, teniendo en cuenta que esta muestra es muy pobre en bacilos y que al laboratorio solamente llega una parte de la cantidad extraida. Es necesario procesar al menos 50ml para que los resultados sean representativos. El cultivo de la biopsia pleural es mas efectivo.

El hallazgo de bacilos en una muestra de heces sugiere la posibilidad de que puedan proceder de la deglución de esputos, aunque el analaisis de esta muestra es preferible para el diagnostico de tuberculosis intestinal.

El manejo de estas muestras debe hacerse con rigurosas medidas de prevención para evitar el contagio. Si es posible, en un reciento cerrado, bajo compana o cabina de seguridad y con mascarilla.

1. Examen microscópico

El examen microscópico no permite más que la apreciación de bacilos, su cantidad y, en ningún caso, su identificación a nivel de especie. La negatividad de un examen no excluye la existencia de la enfermedad.

El examen microscópico se efectúa tras tinción de Ziehl-Neelsen, a partir de las porciones más purulentas del esputo y del concentrado del líquido pleural. La búsqueda de bacilos debe ser exhaustiva a lo largo de toda la extensión del frotis, e incluso conviene examinar dos frotis de la muestra. El resultado suele expresarse de forma cuantitativa, contabilizando el número de bacilos por línea del frotis si estos son abundantes (por ejemplo, 32 BAAR/1L =32bacilos de media en cada línea), otras veces, se informa el número de bacilos por campo o número de campos (por ejemplo, 3BAAR/campo, 3 BAAR/100 campos), o simplemente como abundantes o escasos BAAR; está extendido reflejar el resultado negativo como: no se observan BAAR.

Cuando el número de muestras a examinar es elevado resulta más rentable realizar una tinción de fluorescencia con auramina O. La tinción fluorescente tiene la ventaja de una mayor rapidez y sensibilidad pero requiere microscopio especial y cierta experiencia del analista. Se busca la fluorescencia llamada secundaria, producida por un reactivo fluorocromo que impregna las micobacterias. En caso de positividad, puede aplicarse una tinción de ácido-alcohol resistencia sobre el mismo frotis sometido a tinción de fluorescencia.

GARCIA MARTOS y colaboradores, “Microbiología Clínica y práctica”, 5ta Edición, Editorial Díaz de Santos S.A., España, 2010. Pág. 165-170

ESPUTO

Es el exceso de secreciones traqueobronquiales. Una persona adulta, en condiciones normales produce en promedio 100ml de secreciones, que pueden ser deglutidas o expectoradas. El esputo puede estar compuesto de saliva, moco o pus y contener microorganismos, sangre o partículas inhaladas. Al examinar el esputo debe tener en cuenta el color, consistencia, la cantidad y la fuente (via aérea superior o via aérea inferior). En algunas personas con absceso pulmonar, el olor del esputo es fétido.

En pacientes con sospecha de tuberculosis y en aquellos en los cuales se quiere aclarar el microorganismo que está produciendo la infección, es necesario analizar la muestra de

esputo; esta se toma preferiblemente en las horas de la mañana. El usuario debe lavarse la boca y después de toser se recoge la expectoración en un recipiente esterilizado (frasco) que, luego, es enviado a bacteriología para su análisis respectivo.

LESMES, DAZA; “Evaluación Clínico-funcional del Movimiento Corporal Humano”, Editorial Medica Panamericana, Colombia Bogotá 2009, pág. 79-80.

COLOR ESPUTO

En condiciones patológicas el esputo puede ser:

Amarillo: Nos indica que contiene una gran cantidad de células epiteliales y con frecuencia pus. Se observa en las bronquitis crónicas y en el fumador.

Marron: El esputo herrumbroso se debe a la hemoglobina descompuesta. Se observa en la neumonía producida por el neumococo o en la gangrena pulmonar (o gaseosa).

Rosado: Aparece en el edema agudo de pulmón, en un constipado común (debido a un golpe de tos fuerte se produce la rotura de algún vaso o capilar sanguineo).

Rojo Brillante: Se denomina también hemoptisis; se detecta en hemorragia reciente, secundaria a diversas enfermedades como la tuberculosis o el cáncer de pulmón. Siempre que en un paciente aparezca este tipo de esputo es necesario averiguar la causa.

Gris negruzco: Aparece en cualquier tipo de neumoconiosis (silicosis, siderosis, etc.)

OLOR

Generalmente en los esputos normales y patológicos no se detecta ningún olor; pero si se ha producido una descomposición bacteriana tanto dentro del cuerpo como después de la expectoración pueden presentar diferentes olores. La gangrena pulmonar y los abscesos pulmonares pueden presentar un olor putrefacto.

MASAS GASEOSAS

Estan constituidas por fragmentos de tejido pulmonar necrótico, observado principalmente en enfermedades como el cáncer de pulmón, la gangrena pulmonar y, aveces, en la tuberculosis.

BRONCOLITOS

Generalmente se forman por calcificación del tejido infectado o necrótico en el interior de un bronquio. Son mas frecuentes en el cáncer de pulmón y en la tuberculosis.

CUERPOS EXTRANOS

En algunos casos se pueden expulsar cuerpos extraños durante un ataque violentos de tos. En los niños puede ser cualquier objeto (botones, frutos secos…) que se hayan llevado a la boca o inhalado. En adultos los cuerpos extraños mas frecuentes son partículas de alimentos y contenido gástrico aspirados durante convulsiones o anestesia quirúrgica.

ESPUTO

Cualquier alteración en aparato respiratorio puede dar lugar a un aumento de estas secreciones (traqueo-bronquiales), que se eliminan al exterior (fuera de las vías aéreas inferiores) mediante un golpe de tos o con la expectoración; a estas secreciones se les denomina esputos.

COMPOSICION QUIMICA

La composición química del esputo muestra que esta formado aproximadamente de un 95% de agua y un 5% de solidos. Los solidos son principalmente hidratos de carbono, proteínas, lípidos y ADN.

ANALISIS MICROSCOPICO

Los análisis microscópicos mas frecuentes que se realizan en el esputo son: análisis citológico y microbiológico.

Preparacion de la muestra para el análisis citológico y microscopia directa del análisis microbiológico.

Para el examen en fresco: Poner la muestra (pequeña cantidad de esputo) en el centro de un

portaobjeto con un asa de platino o siembra. El porta debe estar limpio y seco. Anadir una gota de acido acético diluido. Poner suavemente sobre el porta un cubreobjeto, procurando evitar

las burbujas de aire. En algunos casos, las muestras se pueden colorear con azul de metileno, añadiendo una gota del mismo antes de colocar el cubre.

Para el examen con tinción: Diluir la muestra (esputo) si es muy espesa con una gota de agua

destilada estéril, colocada en el porta. Llevar la muestra con el asa de platino extendiéndolo sobre la

superficie del porta, consiguiendo una capa fina (frotis por estiramiento).

Dejar secar a temperatura ambiente o con la estufa a 37oC. Fijar con calor en el mechero Bunsen (lámpara de alcohol). Colorear o teñir con el reactivo más adecuado.

ANALISIS CITOLOGICO

La muestra debe ser reciente para evitar la citolisis; a ser posible la obtención de la misma debe hacerse mediante broncoscopia, en especial para la determinación de células neoplásicas. Las células qu se analizan son;

Células neoplásicas:Para la determinación de tumores. El hallazgo de estas células es positivo en el 75% de los casos y permiten un diagnostico precoz del cáncer. Tenir la muestra con el método de Papanicolau.Un aumento de células epiteliales nos indica infecciones del aparato respiratorio. Tenir la muestra con Panoptico rápido o Papanicolau.

Células hemáticas:La determinación de eritrocitos tiene importancia en las hemoptisis; la de leucocitos en todas las enfermedades infecciosas y la de eosinofilos en el asma bronquial (alergias).Como método de tinción se utilizan: el método Panoptico, Giemsa, etc.

ANALISIS MICROBIOLOGICO

Microscopia directa

Para la determinación de neumococos, estreptococos y estafilococos, tenir la muestra con la tinción diferencial de Gram. Su determinación tiene importancia para hallar el microorganismo patógeno especifico causante de las infecciones del aparato respiratorio, en especial de la neumonía.

El bacilo de Koch (BK) tiene importancia para el diagnostico de la tuberculosis pulmonar; el BK presente en el esputo indica tuberculosis abierta. La tinción utilizada es la de Ziehl de hongos; tiene importancia para determinar la micosis pulmonares. Se puede analizar con tinción Gram o preparar la muestra en fresco. Es necesario que el paciente, además de cepillarse los dientes y enjuagarse la boca, realice gargarismos con lugol (antimicotico), para evitar la contaminación con los hongos de la boca.

Para la determinación del equinococo causante del quiste hidatídico, se hace un examen en fresco. La presencia de los mismos en la muestra es un valor importante para el diagnostico.

CULTIVO

El mas usual es el de Lowenstein para determinar el BK

PREPARACION DE LA MUESTRA

Homogeneizar: Es necario homogeneizar el esputo antes de la siembra. Existen diferentes técnicas. Una de las mas utilizadas es la fluidificación del esputo con Fluimicil (expectorante) u otro mucolitico, agitación y centrifugación de la muestra a poca velocidad y poco tiempo.

Descontaminar: Es necesario mezclar igual volumen de reactivo de descontaminación (contiene citrato sódico al 2,94% e hidróxido sódico al 4%) que esputo (a partes iguales). Agitar durante 20 segundos en Mixer y centrifugar 15 minutos a 4000rpm (las revoluciones pueden variar en función del radio de la centrifuga).

Sembrar: dos tubos Lowenstein con tres gotas de la muestra (se puede recoger en una jeringa). Tambien se siembra en agar sangre y agar chocolate. De la muestra homogeneizada se puede utilizar para hacer un examen en fresco y tinción para la microscopia directa del BK.

Incubar: Se incuba durante 8 semanas a 37oC.

SILVA MARIA DEL CARMEN Y COLABORADORES, “Técnicos Especialistas de Laboratorio del Servicio Vasco de Salud Osakidetza”, Editorial MAD, España 2008 pág. 450-452

ESPUTO

Las normas de recogida se detallan en el apartado siguiente de estudio de micobacterias. Es preferible realizar la toma antes de instaurar tratamiento antibotico. No es útil para estudio de anaerobios. La expectoración debe rechazarse hasta obtener un esputo de

calidad suficiente. En niños pequenos o pacientes que no expectoran o tragan sus esputos, puede realizarse una asipiracion gatrica tras un periodo de ayuno de ocho horas.

Esputo inducido: De no producirse la expectoración espontanea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de suero fisiológico esteril (15ml durante 10 minutos). El esputo que se recoja debe enviarse rápidamente al laboratorio antes de dos horas. Si no es posible, conservar en frigorífico a 4º C.

Es la muestra mas numerosa y epidemiológicamente mas importante que se remite para estudio de micobacterias.

TOMA DE LA MUESTRA

Obtener esputo tras expectoración profunda, preferentemente matinal, y después de haberse enjuagado la boca con agua. No cepillar los dientes.

Se recogerá en envase esteril de boca ancha. Se realizaran tres tomas, recogidas en días consecutivos (cada dia una), y se

enviaran inmediatamente al laboratorio para su procesamiento si el paciente esta ingresado, si es ambulante guardara las dos primeras tomas en nevera a 4oC, no congelador, y al tercer dia las traerá todas juntas.

A la recepción de la muestra debemos:

o Verificar la existencia de muestra en el frasco.

o Que no sea saliva pues disminuye la calidad y rentabilidad de la muestra.

La buena calidad de las muestras de esputo depende de una cuidadosa instrucción del paciente, para que proporcionen un espécimen después de una expectoración profunda.

En esta muestra se pueden encontrar fases larvarias de Ascaris, ancilostomas y Strongiloides o huevos de Paragonimus Westermani. La sensibilidad para detectar Pneumocystis carinii es baja y es preferible recurrir a la broncoscopia. El diagnostico se realiza mediante la observación del fresco o con la ayuda de tinciones permanentes (Giemsa o metenamina de plata).

MUESTRA RESPIRATORIAS

Punción de senos, aspirado transtraqueal, punción pulmonar directa.

Cultivo: Agar sangre, Agar chocolate para la detección de Neumococo, Haemophilus spp y hongos; el resto de bacterias que forman parte de la flora normal del tracto respiratorio superior y de la boca.

ESPINA FERNANDEZ Y COLABORADORES, “Gestión de la calidad en el Laboratorio Clínico”, Editorial Panamericana, Buenos Aires 2008, pág. 452-453.

ESPUTO

PROCEDIMIENTO DE OBTENCION

EXPECTORACION ESPONTANEA:

1. Indicar al paciente que se ponga de pie.2. Solicitar que haga un movimiento inspiratorio profundo, llenando de aire los

pulmones.3. Indicar al paciente que vacie los pulmones con una sola espiración, tosiendo al

mismo tiempo tan fuerte y profundamente como pueda.4. Solicitar que escupa en el interior del recipiente rotulado.5. Tapar el recipiente y en una bolsa plástica llevarla al laboratorio

inmediatamente.

EXPECTORACION INDUCIDA

Cuando el paciente no logra expectorar y es necesario el examen de esputo, se puede inducir la obtención de la muestra de la siguiente manera:

1. Acostar al paciente boca abajo sobre una camilla o cama, haciendo que su cabeza rebase el borde.

2. Colocar una almohada doblada doblada debajo del torax para lograr un plano inclinado, de modo que la base del torax quede mas alto que la boca, asimismo pedir que deje caer ambos brazos y la cabeza hacia el piso.

3. Indicar al paciente que inspire, retenga el aire y luego lo expulse con fuerza hasta obtener la expectoración.

4. Espcupira en el recipiente rotulado que deberá estar sobre un papel periódico en el piso.

REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

http://bvs.minsa.gob.pe/local/PSNB/704_MS-PSNB459-2.pdf

Hernández, R., Fernández, C. y Baptista, P, Metodología de la Investigación. Editorial McGraw-Hill Interamericana, México, 2006