InstitutodeFisiopatologíayBioquímica Clínica … · Brites y Berg; el de Gastroenterología y...

Acta Bioquím Clín Latinoam 2010; 44 (3): 385-433

Bioquímica Clínica

Instituto de Fisiopatología y BioquímicaClínica - INFIBIOC de la Universidad deBuenos Aires.

Historia y actividades actuales

Regina Luisa Wigdorovitz de Wikinski1, Gustavo Alberto Negri2

1. Doctora en Farmacia y Bioquímica. ProfesoraTitular Emérita.

2. Doctor en Bioquímica. Profesor Titular

Instituto de Fisiopatología y Bioquímica Clínica-INFIBIOCFacultad de Farmacia y Bioquímica – Universi-dad de Buenos AiresJunín 956 – CABA (1113)Córdoba 2351 – CABA (1110)www.Facultad de Farmacia y Bioquímica.Sitios de Interés. Institutos, INFIBIOCE-mail: [email protected]

Información Institucional

Por resolución 2283/07 del Consejo Superior de la Universidadde Buenos Aires se aprobó la creación del Instituto de Fisiopatologíay Bioquímica Clínica (INFIBIOC) dependiente de la UBA y se de-signaron Directora y Subdirector a la Dra. Regina Wikinski y al Dr.Gustavo A. Negri, respectivamente. Por una resolución posterior delConsejo Superior de la UBA, la próxima designación del Directorserá por concurso y la del Subdirector por elección del Comité Aca-démico.

INFIBIOC es el ámbito académico donde se desarrollan las in-vestigaciones sobre temas de Fisiopatología y Bioquímica Clínica,promoviendo su interacción y la evolución de ambas disciplinas. Asíse generan líneas cuyo avance es favorecido por su pertenencia a unInstituto que obedece a un decidido interés por la investigación ytiene pautas de evaluación externa que priorizan la producción desus integrantes, su calidad y su impacto en la sociedad, que se venreflejadas en la formación de tesistas y personal docente y técnico delos grupos que lo conforman.

El INFIBIOC cuenta con 14 grupos de estudio e investigación con-solidados y 8 en formación (así calificados según las pautas de laUBA), evaluados y subsidiados por UBA, Consejo Nacional de In-vestigaciones Científicas y Tecnológicas (CONICET), Agencia Na-cional de Promoción Científica y Tecnológica (ANPCyT), BecasCarrillo-Oñativia, Fundación Roemmers y otros incluídos en pro-yectos internacionales.

Pertenecen al INFIBIOC diferentes grupos de las cátedras del De-partamento de Bioquímica Clínica, de Fisiopatología, AnatomíaMacro y Microscópica y Farmacología, de la Facultad de Farmacia yBioquímica. A éstos se suma en el año 2008 el grupo adscripto diri-gido por la Profesora Titular Consulta Dra. Nilda Fink de la Univer-sidad Nacional de La Plata (UNLP).

Acta Bioquímica Clínica LatinoamericanaIncorporada al Chemical Abstract Service.Código bibliográfico: ABCLDL.IISSSSNN 00332255--22995577IISSSSNN 11885511--66111144 eenn llíínneeaaIISSSSNN 11885522--339966XX ((CCDD--RROOMM))


386 Instituto de Fisiopatología y Bioquímica Clínica

En abril de 2008 se eligió el Comité Académico consti-tuido por la Directora, el Subdirector, la Directora delDpto. de Bioquímica Clínica (Profesora Dra. Angela M.R.Famiglietti), y representantes de los investigadores, profe-sionales, docentes y becarios. En 2008 se agregaron los 8grupos en formación ya mencionados, 6 de ellos consti-tuidos por integrantes de los grupos consolidados, que ini-ciaron nuevas líneas de trabajo subsidiadas por UBACYT,CONICET, Roemmers y Carrillo-Oñativia. Desde 2007 serealizan los seminarios de investigación los primeros jue-ves de cada mes en el aula 10 del primer piso del Hospitalde Clínicas a las 14.15 h. Durante el primer año cadagrupo presentó sus líneas de investigación, y en los años si-guientes los tesistas y becarios continuaron informando ydiscutiendo el estado de avance de sus trabajos.

En la disertación y asistencia a los seminarios partici-pan también integrantes nacionales y extranjeros deotros institutos y universidades. Entre los invitados secontó con investigadores de la Universidad Católica deChile y de las Universidades de Bologna y de Bari (Italia).En 2009 se realizó un Homenaje a la Trayectoria del Dr.Juan Miguel Castagnino con la intervención del DecanoDr. Alberto Boveris, el Subdirector de INFIBIOC Dr. Gus-tavo Negri y la presentación del homenajeado a cargo delDr. Marco Pizzolato. En esa oportunidad el Dr. Juan Mi-guel Castagnino disertó sobre temas de Proteómica. En2010 el Instituto, la Facultad de Farmacia y Bioquímica yla Fundación Bioquímica Argentina invitaron al Dr. T. Na-kajima (Japón) como Profesor Honorario. El SeminarioExtraordinario fue presentado por el Decano Dr. AlbertoBoveris, la Dra. Laura Schreier y consistió en una diserta-ción del Dr. Nakajima sobre Remanentes de Lipoproteínasy Aterosclerosis. La visita del Dr. Nakajima promovió uninteresante intercambio científico en INFIBIOC.

La difusión de los seminarios se realiza por correoelectrónico “a todos” en la Facultad de Farmacia y Bio-química, y además existen recordatorios impresos.

Breve historia del InstitutoEn la FFyB numerosos grupos de investigadores tra-

bajaban en Laboratorios registrados en la UBA, comogrupos independientes desde el punto de vista de la in-vestigación, como parte de los Departamentos que seconstituyeron en la Facultad en 1993. Debido a que enel Estatuto de la UBA figuran los Institutos como uni-dades donde se realiza investigación, pero como noexistía una reglamentación que les diera normativa, laSecretaría de Ciencia y Técnica y algunos miembros dela Comisión de Investigaciones trabajaron en la redac-ción de la resolución (CS) 5042/ 05 que finalmente ledio marco a los Institutos de la Universidad. Esa regla-mentación fue modificada recientemente y este Insti-tuto se atiene a las nuevas normas.

En la Facultad de Farmacia y Bioquímica, por otrolado, los grupos y Laboratorios que se dedicaban a ladocencia y a la investigación tuvieron la oportunidadde organizarse a través de objetivos comunes. El INFI-BIOC es uno de los Institutos de la UBA que se creó enel marco de la Resolución 5402/05. Los grupos tuvie-ron proyectos y subsidios a partir de la Secretaría deCiencia y Técnica de la UBA, generalmente al regresode los futuros directores de sus estadías de formaciónen diferentes laboratorios de los Estados Unidos, Fran-cia, Italia, Canadá y otros países. Los grupos se forma-ron coincidentemente con la designación de losdocentes que forman parte de INFIBIOC, destacán-dose el grupo del Dr. Marco Pizzolato en Proteínas yDisproteinemias, el Laboratorio de Lípidos y Lipopro-teínas fundado por la Dra. Regina Wikinski y dirigidoen la actualidad por la Dra. Laura Schreier con el ase-soramiento de la Dra. Wikinski, que incluye los pro-yectos nuevos de los Dres. Brites y Berg; el deGastroenterología y Enzimología Clínica dirigido porel Dr. Gustavo Negri, el de Microbiología, actualmentedirigido por los Dres. Ramón de Torres, Angela Fami-glietti, Carlos Vay y Marcelo Rodríguez Fermepin; losDres. Gabriela Mendeluk y Luis Palaoro dirigen elgrupo de Citología y Reproducción, y la Dra. Marta A.Carballo el de Citogenética Toxicológica. Esos gruposencontraron coincidencias en sus objetivos con los delos Dres. Belisario Fernández, Profesor Consulto de Fi-siopatología, con el del Dr. Carlos Taira en Farmacolo-gía Cardiovascular y con los de los Dres. Ana M. Puyó,y Horacio Peredo. Tiempo después se incorporaron losDres. M. Cecilia Carreras y Alberto Lazarowski. Todosestos grupos tenían subsidios de la UBA, varios deANPCyT y de CONICET, su existencia como grupos in-dependientes era ampliamente reconocida y la creacióndel Instituto retomó los vínculos preexistentes, los pusoen comunicación más estrecha y creó nuevos lazos. La co-operación para la realización de seminarios mensuales,la participación en proyectos compartidos, el asesora-miento metodológico y el uso de las aulas y equipa-miento creciente, demuestran que este Instituto teníaantecedentes de trabajo y creatividad colaborativos, y quefue necesaria la voluntad consensuada para que tuvieravida formal. En el año 2008 se adscribió el grupo de He-matología Básica y Clínica dirigido por la Profesora Con-sulta Dra. Nilda Fink de la UNLP, aportando nuevostemas y una visión estratégica en Bioquímica.

El claustro de investigadores formados, que poseentítulo académico de Doctor está constituido por 46personas, 3 de ellos defendieron sus tesis doctoralesen el año 2010, dos de los anteriores becarios de CO-NICET obtuvieron becas post-doctorales. En el INFI-BIOC hay 11 miembros de CONICET, 8 de ellos sondirectores de grupos de investigación consolidados oen formación.

INFIBIOQ 387


Personal Docentes No docentes Institución origen* Total

Investigadores 46 - UBA, UNLP, CONICET 46

Auxiliares 54 - UBA, UNLP, CONICET 54

Becarios 31 - UBA, CONICET, ANPCYT,UNLP, UNL 31

Técnicos 2 1 UBA, CONICET 3

Administrativos 1 compartido con DBC UBA 1

Total 133 2 135

* UBA, CONICET, ANPCYT, OTRAS (especificar) DBC Depto. de Bioquímica Clínica, Fac. de Farmacia y Bioquímica, UBA.

Director

Nombre y apellido Título (grado más alto) Cargo docente Dedicación Condición*

Regina Wigdorovitz-Wikinski Doctora en Farmacia Profesora Titular Exclusiva Extraordinarioy Bioquímica-UBA Emérita

* Extraordinario, regular, interino, ad honorem

Sub-Director

Nombre y apellido Título (grado más alto) Cargo docente Dedicación Condición*

Gustavo A. Negri Doctor en Bioquímica-UBA Profesor Titular Exclusiva Regular

* Extraordinario, regular, interino, ad honorem

Grupos de investigaciónDirector/a Número de integrantesDra. Laura Schreier/Dra. Regina Wikinski * 8Dra. Gabriela Berg + 4Dr.Fernando Brites + 5Dr. Gustavo A. Negri* 6Dr. Marco Pizzolato* 5Dra. María Cecilia Carreras * 5Dra. Angela Famiglietti * 7Dr. Ramón de Torres* 5Dr. Carlos Vay* 8Dr. Marcelo Rodríguez Fermepin + 6Dr. Belisario Fernández* 9Dr. Martín Rodríguez Fermepin + 3Dr. Carlos Taira * 7Dr. Christian Höcht+ 5Dra. Nilda Fink * 3Dr. Alberto Lazarowski + 5Dra. Gabriela Mendeluk/Dr. Luis Palaoro* 8Dr. Daniel Bustos + 4Espec. Alejandra Scazziota + 5Dra. Ana María Puyó/Dr.Horacio Peredo * 5Dra. Marta Carballo * 5Dra. Susana Cavallero/Dr. Marcelo Choi + 3

* Grupo consolidado , + Grupo en formación. De acuerdo con las pautas de la UBA son grupos consolidadosaquéllos que vienen desarrollando una línea de trabajo y están dirigidos por investigadores que han estado acargo de dichos grupos en Programas de Investigación anteriores, con resultados aprobados. Los grupos enformación están dirigidos por investigadores pertenecientes a grupos consolidados, que no habían dirigido gru-pos anteriormente. En algunos casos, los grupos en formación están a cargo de investigadores que ya han te-nido proyectos acreditados por CONICET, ANPCYT y otras fuentes de financiamiento. Generalmente losdirectores de los grupos en formación prefieren seguir siendo, además, integrantes de grupos consolidados.

Integrantes

Campo cientígco/áreas de investigación de la BioquímicaClínica, Fisiopatología y FarmacologíaCardiovascular

• Lipoproteínas y Aterosclerosis• Gastroenterología y Enzimología Clínica• Proteínas y Gammapatías monoclonales• Microbiología e Inmunología Clínica• Péptidos Natriuréticos, Angiotensina y Factores Neu-

rotróficos en diversos estados fisiológicos y fisiopato-lógicos

• Citogenética Humana y Genética Toxicológica. CI-GETOX

• Estudios mitocondriales y marcadores tisulares en en-fermedades inflamatorias y tumorales

• Farmacología cardiovascular• Citología exfoliativa y de la reproducción• Síndrome Metabólico Experimental• Hematología Básica y Clínica• Hematología Aplicada• Variabilidad Biológica• Hemostasia y Trombosis

Recursos Físicos (laboratorios, aulas,salas de conferencias/eventos,bibliotecas, equipos informáticos,instrumental, hemerotecas, centros dedocumentación, otros)

El INFIBIOC cuenta con laboratorios, aulas, biblio-teca, el Servicio Informático de Laboratorio que conectaalrededor de 55 computadoras. La Facultad de Farmaciay Bioquímica presta Servicios a través de la Secretaría deInformática y se recurre a los distintos LANAIS cuando esnecesario. El instrumental se comparte entre el Depar-

tamento de Bioquímica Clínica (DBC) y los grupos delas cátedras de Fisiopatología, Anatomía Macro- y Mi-croscópica y de Farmacología Cardiovascular. La sede delos últimos tres grupos se encuentra en la calle Junín 956,en tanto que el DBC funciona en los pisos primero, ter-cero y sexto del Hospital de Clínicas José de San Martín,Córdoba 2351. El origen de los equipos es variado; algu-nos pertenecen al instrumental del DBC que se utilizapara asistencia, docencia e investigación. Otros equiposse adquirieron con subsidios de UBA, CONICET,ANPCYT. Los equipos comprados con subsidios UBA fue-ron donados reglamentariamente a la Facultad de Far-macia y Bioquímica. Otros equipos como el citómetro deflujo, se compró durante el Decanato de la Dra. Wikinski;el CONICET lo puso bajo su dirección y se ubicó en elInstituto de Inmunidad Humoral-IDEHU UBA-CONI-CET. Su utilización es supervisada por las ProfesorasDras. Silvia Hajos, Juliana Leoni y Regina Wikinski. Esteequipo fue donado al CONICET.

El aula 10 del Hospital de Clínicas es utilizada para larealización de los seminarios generales. En el sector do-cente del DBC se encuentra un aula para la reunión degrupos más pequeños. Ambas aulas cuentan con equiposde proyección y medios audiovisuales. Para eventos es-peciales se utiliza la Sala de Conferencias de la Facultad.

Los laboratorios del DBC, de las cátedras de Fisio-patología, Anatomía y Farmacología, y sus bioteriosdonde desempeñan sus actividades de investigación losmiembros del INFIBIOC, se encuentran en el edificiode la Facultad de Farmacia y Bioquímica. Cada gruporecibe algunas revistas especializadas que se compar-ten a pedido. En el mismo piso del INFIBIOC funcionala Biblioteca Central del Hospital de Clínicas, que estáen red con otras bibliotecas. Se utiliza habitualmente laBiblioteca de la Facultad de Farmacia y Bioquímica,aunque las consultas por Internet de las revistas queposeen convenio con la UBA es el medio más fre-cuente. El equipamiento es amplio y variado, deacuerdo con las necesidades de los grupos y se com-parte, sin restricciones.



INFIBIOQ 389


Proyectos de investigación acreditados

Proyectos UBACYT vigentes

Código

B070

B403

B401

B108

B084

B046

B093

B102

B113

B040

B077

B411

B031

B106

B415

B405

B069

Título del Proyecto

Aterogenicidad de VLDL en la esteatosis hepática no-alcoholica asociada al síndromemetabólico.

Factores de riesgo de enfermedad cardiovascular e indicadores de resistencia insu-línica en pacientes con acromegalia activa.

Rol de la obesidad y la insulino-resistencia en el desarrollo y severidad del cáncer depróstata.

Viejos patógenos con nuevos problemas.

Emergencia de nuevos patógenos con dificultades diagnósticas.

Evaluación de factores de la respuesta inflamatoria como predictores de problemasgestacionales y parto.

Estudio de la interacción mieloperoxidasa-ceruloplasmina en enfermedades infla-matorias. De la fisiopatología a la bioquímica clínica.

Parámetros bioquímicos como factores de pronóstico en pacientes con mieloma múl-tiple pos-trasplante autólogo de médula ósea (tamo).

Péptidos natriuréticos y angiotensinas: Efectos fisiológicos y su participación en pa-tologías cardiovasculares y renales.

La exposición a xenobióticos y la inducción de modificaciones en el material gené-tico: evaluaciones in vivo e in vitro y su relación con mecanismos de resistencia.

Adrenoceptores y receptores AT1: estudios farmacológicos en la hipertensión expe-rimental.

Adrenérgicos de tercera generación en modelos de hipertensión experimental.

El Laboratorio de fertilidad en el desarrollo y aplicación de la tecnología bioquímicaen la era del ICSI.

Estudio de las alteraciones centrales y periféricas en el modelo de síndrome meta-bólico por sobrecarga de fructosa en la rata. Efecto de agentes insulino-sensibiliza-dores e hipolipemiantes.

Efectos de la UDP-glucosa y otros nucleótidos de purina como agonistas extracelu-lares sobre la actividad funcional de los leucocitos PMN.

Utilidad de los datos de variabilidad biológica en la validación diagnóstica y la in-terpretación fisiopatológica.

Efectos de la heparina de bajo peso molecular sobre las propiedades hemostáticase inflamatorias en mujeres con abortos recurrentes.

Directores/ Codirectores

Dra. Laura Schreier, Dra. Regina Wikinski

Fernando Brites

Gabriela Berg.

Angela Famiglietti.

Carlos Alberto Vay.

Ramón A. De Torres

Gustavo A. NegriMaría B. Di Carlo

Marco A Pizzolato

Belisario E Fernández

Marta Carballo

Carlos Alberto Taira

Christian Höcht

Gabriela R. MendelukLuis Palaoro

Ana M. Puyó

Alberto Lazarowski.

Daniel Bustos

Alejandra Scazziota

Proyectos UBACYT – Programación Cientígca 2008-2010 y otros vigentes durante el período considerado(2006-2010)



Código

B810

B106

B014

B080

B049

Programa de Promocion de la Uni-versidad Argentina,Secretaría de PolíticasUniversitarias, Minis-terio de Educación dela Nación.

Programa de Promo-cion de la UniversidadArgentina, Secretaríade Políticas Universi-tarias, Ministerio deEducación de la Na-ción.

Universidad Nacionaldel Sur

ANPCYT 2008-2011

CONICET- PIP 0931-2009-2011

Título del Proyecto

Caracterización de cepas de Chlamydia trachomatis de origen genital y ocular, es-tudio de los genes que dirigen el tropismo celular diferencial.

Implicancia de las enzimas neutrofílicas en distintos procesos fisiopatológicos.Interacción mieloperoxidasa-ceruloplasmina sérica.

Péptidos natriuréticos y angiotensinas: Efectos fisiológicos y su participación enpatologías. UBACYT 2004-08.

Patógenos oportunistas y emergentes en la infección humana. Identificación, sen-sibilidad a los antimicrobianos e impacto clínico

Importancia de las colonizaciones e infecciones genitales en la gestación y elparto. Utilización racional de antimicrobianos en el manejo del problema.

Ampliación de una Red Sudamericana para la Cooperación en la InvestigaciónBásica y Epidemiológica de las Infecciones por Clamidias- 2009.

Fortalecimiento de una Red Sudamericana para la Cooperación en la InvestigaciónBásica y Epidemiológica de las Infecciones por Clamidias- 2008.

Prevalencia de la Infección por Chlamydia trachomatis en mujeres en edad fértil.24/ZB28

Características y disfuncionalidad de VLDL en el síndrome metabólico asociado aesteatosis hepática no alcohólica. / PICT

Biomarcadores de enfermedad cardiovascular aterosclerótica asociados a resis-tencia insulínica: alteraciones de las funciones antiinflamatoria y antiapoptóticade HDL.

Director/a

Marcelo Rodríguez Fermepin

Gustavo A. Negri

Belisario E Fernández

Carlos Alberto Vay.

Ramón A. de Torres




Dra. Laura Schreier; Grupo Resp: R. Wikinski, G. Berg, F. Brites, LSchreier

Fernando Brites

Proyectos UBACYT – Programación Cientígca 2006-2009

INFIBIOQ 391


4.1.2 Otros proyectos

Proyecto Título

Patógenos oportunistas y emergentesen la infección humana. Identigca-ción, sensibilidad a los antimicrobia-nos e impacto clínico

Importancia de las colonizaciones e in-fecciones genitales en la gestación yel parto. Utilización racional de anti-microbianos en el manejo del pro-blema.

Ampliación de una Red Sudamerica-na para la Cooperación en la Investi-gación Básica y Epidemiológica de lasInfecciones por Clamidias” 2009

Fortalecimiento de una Red Sud-americana para la Cooperación en laInvestigación Básica y Epidemiológi-ca de las Infecciones por Clamidias

Prevalencia de la Infección porChlamydia trachomatis en Mujeres enEdad Fértil

Características y disfuncionalidad deVLDL en el síndrome metabólico aso-ciado a esteatosis hepática no alco-hólica.

Biomarcadores de enfermedad car-diovascular aterosclerótica asociadosa resistencia insulínica: alteracionesde las funciones antiinhamatoria y an-tiapoptótica de HDL

Alteraciones de la funcionalidad deHDL en inhamación crónica asociadaa elevado riesgo de enfermedad car-diovascular.

Factores de riesgo emergentes en co-ronariopatías. Moléculas de adhesión,hipertrigliceridemias y alteracionesmolecul.ares de HDL.

Lipoproteínas atípicas, ácidos grasoslibres e injuria endotelial asociados aresistencia insulínica y procesos ate-rogénicos.

Vigentes 2009*

X

X 2008-2011

X 2009-2011

X 2009-2010

Concluidos (2007-09)*

X 2004-2007

X 2004-2007

X 2008

X 2006-2008

X 2005-2008

X 2004-2007

Fuentes de 7nanciación Código. Directores (resolución Nº)

UBACYT B 080 Director: Carlos Alberto Vay

UBACyT B049 Director: Prof. Dr. Ramón Ade Torres

Programa de Promoción de la UniversidadArgentina, Secretaría de Politicas Univer-sitarias, Ministerio de Educación de la Na-ción. 2009. Director: Prof. Dr. Marcelo Ro-dríguez

Programa de Promoción de la UniversidadArgentina, Secretaría de Politicas Univer-sitarias, Ministerio de Educación de la Na-ción. 2008. Director: Prof. Dr. Marcelo Ro-dríguez Fermepin.

Universidad Nacional del Sur. 24/ZB28. Di-rector: Prof. Dr. Marcelo Rodríguez Ferme-pin.

ANPCyT/ PICT 195 Directora: Dra. LauraSchreier; Grupo Resp: R. Wikinski, G.Berg, F. Brites, L Schreier

CONICET PIP 0931 Director: Dr. Fernan-do Brites. Investigadores: Prof. Dra. LauraSchreier

INSERM (Francia) – CONICET Responsa-ble francés: Prof. Dr. John Chapman. Res-ponsable argentino: Prof. Dr. FernandoBrites.

CONICET PIP 6111 Res 3003/06 DirectoraProf. Dra. Regina Wikinski. Investigador Fer-nando Brites

UBACyT. /B069Directora Prof. Dra. Regina Wikinski.



4.1.2 Otros proyectos

Proyecto Título

Procesos aterogénicos en la postme-nopausia: Remanentes de VLDL, su-bespecies de LDL, marcadores de in-juria endotelial y de matriz subendo-telial.

Efectos gsiológicos de los Péptidos Na-triuréticos ANF, BNP y CNP y la An-giotensina II. Su participación en pa-tologías cardiovasculares y renales.

Participación de los péptidos natriu-réticos y angiotensinas en la hiper-tensión arterial, la hipertroga de mio-cardio y en la gsiología y el daño renal.

Participación de péptidos natriuréticosy angiotensinas en la hipertensión ar-terial, la hipertroga de miocardio y enla gsiopatología del daño renal.

Evaluación riesgo-benegcio en el con-sumo de plantas medicinales de la Flia.Verbenaceae de la Flora Argentina: im-portancia de los polifenoles

Aneuploidogénesis, hot spots genómi-cos y estrés oxidativo como herra-mientas para la evaluación de daño porxenobióticos

La translocación de óxido nítrico sin-tasa inducible como mecanismo deldaño nitrosativo mitocondrial en la en-dotoxemia

La translocación mitocondrial de óxi-do nítrico sintasa inducible es res-ponsable del daño mitocondrial en laendotoxemia

Oxido nítrico mitocondrial y los límitesdel crecimiento.

Modelo de síndrome metabólico por so-brecarga de fructosa en la rata: alte-raciones centrales y periféricas e im-plicancias farmacológicas

Estudio de sustancias vasoactivas enmodelos de alteración metabólica enla rata. Efectos del vanadio y de las tia-zolidindionas

Vigentes 2009*

X 2005-2009

X 2009-2011

X 2007-2010

X 2006-2009

X 2009-2012

X 2009-2011

Concluidos (2007-09)*

X 2004-2008

X 2003-2008

X 2004-2007

X 2005-2008

Fuentes de 7nanciación Código. Directores (resolución Nº)

ANPCYT / PICT 14299 II.3 (Salud), Director: Prof. Dra R. Wikinski.

ANPCYT PICT/05-13775. DirectorProf. Dr. Belisario E Fernández

CONICET7PIP 6161. Director Prof. Dr.Belisario E Fernández.

CONICET PIP 112-200801-01337. Prof.Dr. Belisario E Fernández.,

ANPCYT PICT ET 38238 – Director Prof.Dra. Marta Carballo

UBACYT B034 - Director Prof. Dra. MartaCarballo

ANPCYT7PICT/14199 Director Prof. Dra.María Cecilia Carreras

CONICET/ PIP 2005 Nº5495. Director:Prof. Dra. María Cecilia Carreras

ANPCYT PICT./ 01625.Director: Prof. Dra. María Cecilia Carreras

ANPCYT./PICT 07/00994. Director Dr. Car-los Alberto Taira. Grupo responsable: Dr. Car-los A. Taira, Dra. Ana M. Puyó, Dr. HoracioA. Peredo, Dr. Christian Höcht.

CONICET/PIP Dr. Horacio Peredo.

SEMINARIOS de INFIBIOC

Graciela Inés López1*

1. Bioquímica, Especialista en Bioquímica Clínica, Áreas QuímicaClínica y Gestión de Calidad y Auditoría, UBA

* Coordinadora de Seminarios de INFIBIOC. Jefe de Trabajos Prác-ticos del Departamento de Bioquímica Clínica de la Facultad deFarmacia y Bioquímica, Coordinadora Asistencial del Area Lípidosy Lipoproteínas del Hospital de Clínicas José de San Martín. E-mail: [email protected]

Los seminarios del Instituto son un lugar de encuen-tro, foro de análisis y debate para los miembros de losgrupos de investigación que lo integran. Están abiertospara todos los investigadores con líneas afines, interesa-dos en participar en un espacio de intercambio, refle-xión y aprendizaje.

Los disertantes, en su mayoría becarios, exponen re-sultados preliminares sobre su hipótesis de tesis doctoral,luego se realiza una discusión con preguntas del audi-torio que invitan al disertante a un entrenamiento razo-nado y propuestas para nuevos experimentos que enri-quecen, tanto al disertante como a los concurrentes.

La diversidad de los temas, que van desde ensayos ex-perimentales con animales, órganos o tejidos hasta es-tudios clínicos con parámetros poco conocidos que re-quieren validación, se enriquece en algunas oportunidadescuando se utilizan aparatos de diseño propio. También

se presentan experiencias con herramientas metodoló-gicas y tecnologías que brindan elementos de aplicaciónpara la práctica clínica, tanto en el diagnóstico como enel tratamiento, teniendo en cuenta que los seminarios serealizan en el marco de un hospital universitario, el Hos-pital de Clínicas de la Universidad de Buenos Aires.

Como parte del programa de seminarios se ha contadocon la participación de especialistas nacionales como elDr. Juan Miguel Castagnino a quien se le ha realizado unHomenaje a su Trayectoria, y que nos brindó una Con-ferencia Extraordinaria sobre Proteómica y metodologíapara el estudio de proteínas.

También se ha contado con la visita de investigadoresde otras universidades, como el Dr. Nakajima en el mesde mayo del 2010, del Lipid Metabolism Laboratory de Ka-nazawa University, Japón que brindó una Conferencia so-bre el "Rol de las lipoproteínas remanentes postprandia-les en la Ateroesclerosis".

También entre los disertantes contamos con investi-gadores de otros institutos que dan a conocer sus expe-riencias, desde la investigación básica, clínica o epide-miológica afianzando los lazos académicos y profundizandola integración de la comunidad científica en la Argenti-na. Los grupos de investigación que integran el institu-to son la estructura básica y constitutiva de los seminariosmensuales. De las inquietudes e intereses de sus miem-bros depende el repertorio de temas, donde la prepara-ción, participación y aporte de cada asistente determinala calidad de la discusión, y, por lo tanto, de la construcciónconceptual.

INFIBIOQ 393


Tipo de publicación Total

Libros 7Capítulos de libro 40Artículos en revistas especializadas 237Publicaciones de actas en congresos (1) 220Presentaciones en reuniones científicas (2) 387

Publicaciones internacionales

Con referato Sin referato207

Publicaciones nacionales

Con referato Sin referato30

(1) se registran conferencias y relatos unipersonales. (2) se registran comunicaciones de resultados de trabajos científicos

CORRESPONDENCIA

PROF. DRA.REGINA W DE WIKINSKIJunin 956 – CABA (1113)[email protected] - [email protected]

Publicaciones (2007-2009)

Se registran solamente las publicaciones con referato que figuran en índices internacionales.

Utilidad de los datos devariabilidad biológica(VB) en la validacióndiagnóstica y lainterpretaciónfisiopatológica de lainformación producidapor el Laboratorio Clínico

Daniel Nicolás Bustos1, Marcela Pandolfo2,Sandra Muzietti2, Beatriz Caracciolo2

1. Dr. de la Universidad de Buenos Aires2. Bioquímica

Lugar de trabajo: Instituto de Fisiopatología y Bioquímica Clínica-INFIBIOC y Departamento de Bioquímica Clínica de la Facultad deFarmacia y Bioquímica.Universidad de Buenos Aires.E-mail: [email protected]

Cuando en el Laboratorio Clínico se mide una mag-nitud biológica en una muestra obtenida de un indivi-duo, en general esta muestra es procesada una sola vezy el resultado informado es uno de los resultados posi-bles de un grupo de valores que se habrían obtenido sila muestra hubiera sido procesada varias veces. Si se re-pitiera la medición de la magnitud se encontraría queel nuevo valor es semejante al primero, pero no igual.Esto es debido a que la inmensa mayoría de las magni-tudes biológicas humanas están sujetas a la propia va-riabilidad biológica (VB) del analito en cuestión y su me-dición, a la variabilidad metrológica.

La variabilidad biológica está definida como “la fluc-tuación del valor de un analito alrededor de un puntohomeostático”. La VB tiene dos componentes: VB in-traindividual (dentro del mismo individuo) y VB inte-rindividual (entre diferentes individuos).

Los datos de VB han sido utilizados como especifi-cación de calidad analítica, para establecer la signifi-cancia de un resultado seriado y para establecer la uti-lidad de los valores de referencia poblacionales.

En el caso de la interpretación de los resultados se-riados, el dato de variabilidad biológica es de gran im-portancia puesto que el resultado obtenido será signifi-cativamente diferente al anterior, siempre que el datosupere a la VB intraindividual del analito y a la variaciónmetrológica. En algunos analitos, como la medición delinfocitos TCD4+, un cambio significativo en relación aldato previo es de fundamental importancia para el tra-tamiento del paciente. Como se puede ver, los datos deVB son de fundamental importancia en la interpreta-ción de la información proveniente del laboratorio clí-nico.

Pese a la importancia de la VB en la interpretación fi-siopatológica de los resultados del laboratorio, hay ana-litos para los cuales el dato de VB no ha sido obtenidoy por otro lado, hay datos de VB obtenidos sobre po-blaciones de sujetos enfermos, como la VB de linfocitosTCD4+ que fue obtenida de sujetos asintomáticos coninfección por VIH.

Otro de los problemas es que en la base de datos noexisten criterios de partición por sexo de la VB de al-gunos analitos en los cuales los intervalos de referenciason diferentes en hombres y mujeres, por lo que pro-bablemente también la VB sea distinta.

Los datos de VB podrían también ser de importanciacomo especificación de calidad en todas las etapas degestión de un laboratorio clínico: como la estabilidad delos analitos en tubo primario o como límite de errorcuando dos instrumentos miden el mismo analito.

El objetivo de nuestro grupo de trabajo es obtener da-tos de VB, estudiar la VB, en hombres y mujeres, deaquellos analitos en los que los valores de referencia sondiferentes por sexo y utilizar los datos de VB en la vali-dación diagnóstica y la interpretación fisiopatológica dela información producida por el laboratorio clínico.

Referencia bibliográgca

Caracciolo MB, Muzietti SD, Pandolfo MS, Negri GA, BustosDN. Estabilidad de muestras conservadas en tubo prima-rio: un estudio de 35 analitos de química clínica. Acta Bio-quím Clín Latinoam 2007; 41(3): 353-8.



GRUPO DE MICROBIOLOGÍA

Parasitología: ¿reinvindicadao subestimada?Claudia Irene Menghi1, Claudia Liliana Gatta2

1. Dra. en Bioquímica. A cargo del Área Parasitología del Departa-mento de Bioquímica Clínica, Facultad de Farmacia y Bioquímica,Universidad de Buenos Aires.

2. Bioquímica. Área Parasitología del Departamento de BioquímicaClínica, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Bue-nos Aires.

Lugar de realización: Instituto de Fisiopatología y Bioquímica Clínica–INFIBIOC– Universidad de Buenos Aires.

Correspondencia: Claudia Irene Menghi. Junín 956, CABA.E-mail: [email protected]

“Mas naides se crea ofendido Pues a ninguno incomodoY si opino de este modo,Por encontrarlo oportuno,No es para mal de ninguno Sino para bien de todos.”

José Hernández,Martín Fierro

En los últimos años la parasitología ha ido evolucio-nando hasta convertirse en una disciplina que abarca lasrelaciones parásito-hospedador-ambiente. La historia dela parasitología revela que ya las culturas china, india, per-sa y egipcia conocían algunos parásitos macroscópicos comoascaridios, tenias, piojos, moscas, mosquitos y ciertas en-fermedades parasitarias como esquistosomosis y paludis-mo, junto con los extractos naturales utilizados para su tra-tamiento. El término “parásito” es una voz griega que sig-nifica (“para”, junto a y “sitos”, trigo, comida), y se aplicabainicialmente a los empleados públicos y sacerdotes que vi-vían a costa de las ofrendas. De allí surgió en Grecia el vo-cablo “parasiteo” que se refería a aquellos empleados pú-blicos que “comían” a costa del Estado: cualquier alusióncon respecto a nuestra actualidad es mera coincidencia.Fue en Grecia donde Hipócrates informó la existencia deAscaris lumbricoides, tenias, oxiuros y quistes hidatídicos endiversos animales y el hombre. Con la expansión colonialde los siglos XV-XVI se conocieron numerosos padeci-mientos exóticos que dieron origen a la medicina tropi-cal. Así, por ejemplo Diego Álvarez Chanca, primer médicograduado que vino al Nuevo Mundo acompañando a Co-lón en el segundo viaje en 1493, brindó la primera noti-cia del paludismo que padeció en América el almirante.Anthony van Leeuwenhoeck en los siglos XVI-XVII fue

quien logró los mayores avances en la construcción de mi-croscopios y realizó observaciones sobre todo tipo de ma-teriales, inclusive sus propias heces. Sus observaciones so-bre “animálculos muy pequeños” lo convirtieron en el pri-mer microscopista del mundo y fundador de la protozoo-logía. En la Argentina, uno de los hitos más importantes dela parasitología se remonta a 1926 con Salvador Mazza y Fla-vio Niño quienes al frente de la Misión Universitaria paraEstudios de la Patología Regional Argentina (MEPRA), diag-nosticaron hasta 1946 más de un millar de casos agudos delMal de Chagas. Los trabajos efectuados por Mazza revali-daron la obra de Carlos Chagas de Brasil.

Diversos fueron los caminos que llevaron a la situa-ción actual de la parasitología.

El progreso de las metodologías ayudó considerable-mente en la evolución de esta disciplina desde lo más ele-mental, como el método de Baermann, hasta los másgrandes avances en las técnicas moleculares. Se lograronprogresos en cuanto a la especificidad y sensibilidad delos métodos diagnósticos, tanto en la identificación de losantígenos específicos como en las técnicas de ADN. Gra-cias a la microscopía electrónica se pudo conocer, entreotras, la estructura del complejo apical de los esporozoí-tos de algunos grupos confusos, lo que llevó a Levine acrear el Phylum Apicomplexa en 1970. Estos hallazgospermitieron esclarecer relaciones, antes desconocidas,entre diversos grupos de protozoarios. La introducciónde modelos matemáticos de predicción epidemiológicapermitió anticipar el riesgo de brotes epidémicos de pa-rasitosis y diseñar medidas de lucha y así constituir un im-portante aporte a la medicina preventiva.

Pero el avance de la tecnología no debe obnubilarnos.No es exacto hablar de “nuevas” y “viejas “herramientasen parasitología como quien descarta un papel en elcesto. Ambas herramientas se complementan y cobranmayor o menor importancia según las condiciones socio-económico-ambientales donde se apliquen.

En la actualidad, muchos son los escenarios dondeparticipan distintos enfoques parasitológicos: los proble-mas ecológicos tales como la contaminación de aguas porparásitos intestinales, la contaminación de efluentes y sudescarga en los ríos con las consiguientes repercusionessobre la salud de las poblaciones y la contaminación delos alimentos con parásitos durante los procesos de ma-nipulación y almacenamiento. Otros factores son loscambios climáticos debidos al calentamiento global, quefavorecen el aumento de la incidencia de enfermedadesparasitarias infrecuentes en ciertas regiones, y finalmente,la aparición de parásitos oportunistas que comprometenla salud de los enfermos inmunodeprimidos.

En virtud de lo expuesto, ¿no cabría reinvindicar a laparasitología en la Argentina que ha venido boqueando,tratando de subsistir en las apretadas horas cátedra de en-señanza en las universidades y en la actividad diaria de hos-pitales y laboratorios clínicos? Su rica historia lo confirmay su importancia en la clínica y diagnóstico lo justifica.

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Referencias bibliográgcas

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Resumen de Proyectosdel Grupo de Citología

Dr Luis Alberto Palaoro1, Dra Gabriela Ruth Mendeluk2

1. Dr. de la Universidad de Buenos Aires2. Dra. de la Universidad de Buenos Aires

Lugar de Trabajo: Instituto de Fisiopatología y Bioquímica Clínica-INFIBIOC-UBA y Departamento de Bioquímica Clínica de la Facul-tad de Farmacia y Bioquímica. Universidad de Buenos AiresE-mail: [email protected]

El Área de Citología del Departamento de BioquímicaClínica de la Facultad de Farmacia y Bioquímica (UBA)comprende dos sub-áreas: Citología Oncológica y Fertilidad Mas-culina, con varias líneas de investigación que se desarrollande manera independiente o conjunta, y en ocasiones in-terrelacionándose con otros sitios de investigación.

Área Citología Oncológica

La relación del virus de Papiloma Humano (HPV) yel cáncer de cuello uterino ha sido probada en nume-rosos trabajos (1)(2). Desde hace años, este Laboratorioha realizado diversos aportes en el tema (3-10) Actual-mente está trabajando sobre la expresión de un marca-dor de proliferación celular (AgNOR) y de una proteínade un gen supresor (p16) en biopsias provenientes de le-siones intraepiteliales de bajo grado de cuello uterino(LSIL), para conocer el potencial evolutivo de estas le-siones que aún tienen un comportamiento incierto.

Esta línea de investigación requiere de la intervenciónde otras áreas: Cátedra de Ginecología del Hospital deClínicas José de San Martín y Cátedra de Virología de laFacultad de Farmacia y Bioquímica (UBA).

Como parte de este proyecto se desarrollan en esteGrupo de trabajo una Tesis Doctoral y una Tesis de Maes-tría en Biología Molecular.

Otro proyecto, que ha sido presentado para solicitaruna Beca Doctoral es el Estudio de los cambios en la ex-presión de moléculas de adhesión en testículo y cuellouterino durante los procesos de transformación hasta laetapa de invasión. Se estudiarán ciertas moléculas de ad-hesión en tumores germinales de testículo y en patolo-gías no neoplásicas para intentar dilucidar las causas dela diferente capacidad exfoliativa en ambas condicio-nes, y la modificación de las uniones intercelulares en le-siones intraepiteliales de cuello uterino. Los cambiosen el citoesqueleto favorecerían la movilidad celular y elposterior proceso invasivo (11)

El conocimiento de la modificación de las moléculasde adhesión podría ser de utilidad como factor pronós-tico de las lesiones intraepiteliales de cuello uterino, au-mentando la sensibilidad del método citológico.

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11.Shimoyama Y, Hirohashi S, Hirano S, Noguchi M, Shi-mosato Y, Takeichi M. Cadherin cell-adhesion moleculesin human epithelial tissues and carcinomas. Cancer Res1989; 49: 2128-33.



Área de Fertilidad Masculina

La microinyección de gametas (ICSI) surgió en 1992en Bélgica (1) y revolucionó el tratamiento en Andro-logía. Estudios de mapeo testicular permiten identificarfocos de espermatogénesis de donde aislar gametas aúnen pacientes azoospérmicos, lográndose fertilizacionesexitosas. Sin embargo, poder saltear los procesos de fer-tilización natural demoró el avance del conocimiento bá-sico en fertilidad y la posibilidad de su abordaje desde laprevención o la medicina clínica. La era del ICSI es con-comitante con la era del mejoramiento de la calidad queintenta atribuir un valor clínico real a los estudios reali-zados en los pacientes, dando al médico herramientas ro-bustas a la hora de tomar decisiones.

En este Grupo se está desarrollando el proyecto en el la-boratorio de fertilidad en el desarrollo y aplicación de latecnología bioquímica en la era del ICSI, subsidiado porUBACYT (B0-31; 2008-2010). Abarca los problemas ac-tuales en el Laboratorio de Fertilidad Masculina; el estudiodel ADN, de la membrana plasmática, de la espermatogé-nesis, de los efectos hormonales, térmicos y ambientales enla fisiología y patología andrológica, así como la evaluaciónde la calidad de los procedimientos empleados. El objetivoúltimo es la mejora de los estudios en curso y el diseño denuevos análisis clínicos transferibles al diagnóstico y se-guimiento de los pacientes infértiles (2)(3).

Se estudian casos paradigmáticos: varicocele, tubercu-losis (4), microlitiasis (5), consumo de anabólicos (6), ta-baco (7)(8) antidepresivos (9). Trabajan en la mejora dela calidad (10) y la reflexión sobre el valor clínico del aná-lisis seminal (11-15) así como de los procedimientos em-pleados para mejorar las técnicas de enriquecimiento (16).

Respecto al estudio del ADN, se está poniendo a puntola determinación de bases oxidadas (Colaboración -Quí-mica Analítica, FFyB, UBA). Se utilizará como biomar-cador de factores ambientales que afectan la calidad es-permática y como predictor de éxito en programas defertilización asistida.

La propuesta consiste en estudiar la membrana esper-mática por métodos biofísicos y bioquímicos de alta com-plejidad (resonancia paramagnética electrónica y estu-dios de isomerización de ácidos grasos, respectivamente),trabajos en curso en colaboración con la Cátedra de Física,FFyB, UBA y la Universidad de Belgrano. Esta parte deltrabajo está relacionada al interés en lipidómica y uso diag-nóstico del análisis de lípidos en muestras biológicas, quees la base del acuerdo firmado entre el CNR (Italia) y laUniversidad de Belgrano. El plan ha dado lugar a la pre-sentación de una Solicitud de Financiamiento para Pro-yectos de Investigación PIP 2010-2012 GI titulado: “La iso-merización lipídica catalizada por radicales tiílos, estudiosmecanísticos y aplicaciones clínicas” (Proyecto aprobado).

Para entender los efectos tóxicos ambientales y del es-tilo de vida sobre la espermatogénesis se desarrolló un

modelo experimental en ratones (Proyecto en colabo-ración con Citogenética, DBC, FFyB, UBA).

Se plantearon nuevas hipótesis para entender la aso-ciación entre hipotiroidismo y astenozoospermia (17-19)(Colaboración con Endocrinología, DBC, FFyB, UBA):a) Evaluar si los Ac- antitiroideos tienen reacción cruzadacon los espermatozoides, b) Estudiar el efecto directo delas hormonas tiroideas sobre la cinética espermática.Está en curso el análisis de las modificaciones en el es-queleto de actina de las células epiteliales de epidídimode ratas hipotiroideas.

Cabe destacar que este laboratorio realiza tareas asis-tenciales que comprenden Análisis Clínicos (Área Cito-logía) en cumplimiento de lo asignado por el convenioFFyB y Hospital de Clínicas “José de San Martín” - UBA.Resolución (CD) Nº 203/94. Desde el año 1994 en elmarco del Programa de Vinculación y Transferencia Tec-nológica de la Facultad de Farmacia y Bioquímica, si-guiendo los lineamientos del convenio de Asesorías Téc-nicas y Prácticas de Alta Complejidad (Res. C.S.1685/97) se realizan servicios a terceros o asesorías téc-nicas de determinaciones especiales y de alta compleji-dad en lo relativo a “Estudios funcionales de la GametaMasculina”. Se fueron incorporando distintas prestacio-nes, la evaluación y procesamiento de muestras de semenpara técnicas de fertilización asistida (2003), el estudiode fragmentación del ADN espermático por citometríade flujo (2007) y el análisis automatizado de muestras se-minales (2009). Se está realizando la puesta a punto dela metodología de Anexina V en semen para ser ofertadocomo marcador temprano de apoptosis. En septiembrede 2008 se generó una nueva figura, que se denominó“Entrenamiento en Servicio”. La idea es capacitar a pro-fesionales de instituciones que lo requieran en prácticaspuntuales que se realizan en este laboratorio. Se des-arrolló un Programa de Control de Calidad Externopara el Análisis Seminal (Convenio Marco FFyB,UBA-FABA) del cual participan 81 laboratorios distribuidos entodo el país (2005-actualidad).

Los integrantes de este grupo creen que hacen una in-vestigación acorde a las necesidades del país devolviendoa la comunidad su conocimiento en servicios y reali-mentándose, cumpliendo de ese modo con el circuito dela mejora continua.


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18.Del Rio AG, Blanco AM, Pignataro O, Niepomniszcze H,Juvenal G, Pisarev MA. High-affinity binding of t3 to epi-didymis nuclei. Arch Androl 2000; 44: 187-91.

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Lipotoxicidad hepáticaasociada a la insulino-resistencia. Su relación con el riesgocardiovascular

Laura E. Schreier1a*, Valeria Zago2a,Diego Lucero3a, Verónica Miksztowicz4*,Leonardo Cacciagiú3a

1 Doctora en Bioquímica. Profesora Titular del Departamento de Bio-química Clínica. Cátedra de Análisis Clínicos 1. Facultad de Far-macia y Bioquímica. Universidad de Buenos Aires.

2 Doctora de la Universidad de Buenos Aires. Jefa de Trabajos Prác-ticos. Departamento de Bioquímica Clínica. Cátedra de AnálisisClínicos 1. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Universidad deBuenos Aires.

3 Bioquímico. Ayudante de Primera. Departamento de BioquímicaClínica. Cátedra de Análisis Clínicos 1. Facultad de Farmacia y Bio-química. Universidad de Buenos Aires.

4 Bioquímica.

a Laboratorio de Lípidos y Lipoproteínas, Departamento de Bioquí-mica Clínica. Instituto de Fisiopatología y Bioquímica Clínica (IN-FIBIOC). Facultad de Farmacia y Bioquímica. Universidad deBuenos Aires. Junin 956. (1113). Ciudad Autónoma de Buenos Ai-res, Argentina. [email protected]

* A quien deberá ser dirigida la correspondencia, Laboratorio de Lí-pidos y Lipoproteínas, Departamento de Bioquímica Clínica, Fa-cultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires,Junin 956 (C1113AAD), Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Ar-gentina. E-mail: [email protected] Teléfono: 54 11 4964 8297.Fax: 54 11 5950 8691.

La capacidad que tiene el tejido adiposo de almace-nar gran cantidad de triglicéridos es única, en cambiootros tejidos, como el hepático o muscular, presentan



una capacidad limitada. Cuando el almacenamientode grasa en los tejidos no adiposos excede esa capaci-dad, sobreviene disfunción y posterior muerte celular,constituyendo un mecanismo conocido como lipotoxi-cidad.

Los estudios sobre patogénesis de la diabetes tipo 2 yla obesidad en animales, dan a conocer el concepto delipotoxicidad, definiéndola fundamentalmente comouna inducción de hiperinsulinemia / resistencia a la in-sulina por parte del aumento crónico de los ácidos gra-sos libres (AGL), generando una relación estrecha y cí-clica que conlleva al depósito graso en tejidos comomúsculo, páncreas o hígado (1).

Entre los hepatólogos, el hígado graso no-alcohólicoemerge como la condición hepática crónica más comúnen el mundo occidental. Llamativamente, su prevalenciaen la población general es semejante a la de la insulino-resistencia (IR), entre 20 a 30% según las diferentesfuentes (2)(3). Más aún, la enfermedad hepática grasano alcohólica (EHGNA) es notoriamente más frecuenteen pacientes con síndrome metabólico, obesos y diabé-ticos tipo 2, llegando a proporciones entre 50 y 75% (4).De hecho, estas entidades de IR constituyen un factor deriesgo de esteatohepatitis.

Si bien en la última década se ha avanzado conside-rablemente en el conocimiento fisiopatológico de losmecanismos que conducen a la EHGNA, aún existen al-gunos puntos oscuros y preguntas sin respuestas. Se re-conoce que la causa es multifactorial, pero la IR esesencial para la ocurrencia de una secuencia de even-tos que determinan una falla de control en el balanceentre la llegada de ácidos grasos al hígado, la síntesis in-trahepática y su oxidación y/o exportación desde el hí-gado, que conducirían a la acumulación hepática de tri-glicéridos.

Como se ha mencionado, un aspecto fundamental enla patogenia de la enfermedad es el incremento de losAGL circulantes en la IR, que son captados por el hígadoconformando el pool de ácidos grasos intrahepático, alcual también se suman los ácidos grasos provenientes dela dieta, de la lipólisis intravascular de lipoproteínas ri-cas en triglicéridos, y los aportados por la lipogénesis denovo, la cual en condiciones normales es baja. El pool deácidos grasos en el hígado tiene dos caminos destinata-rios: la oxidación (o catabolismo) y la esterificación(para almacenamiento o secreción). El balance de estosmecanismos va a depender principalmente del estadohormonal, nutricional y de la regulación por parte defactores de transcripción como el SREBP-1C (Sterol Re-gulatory Element Binding Protein -1C) (5)(6).

La apoproteína (apo) B es imprescindible para laformación de las VLDL, lipoproteínas ricas en triglicé-ridos de síntesis hepática. La regulación de la síntesis ydegradación de apo B es otro factor determinante parala formación de VLDL y su tasa de secreción. La prote-olisis o degradación de la apo B ocurre normalmente en

el retículo endoplásmico, pero puede ser previamenteprotegida por proteínas chaperonas como la Proteína deTransferencia Microsomal (MTP), conocida además porsu papel en el ensamblaje de triglicéridos y apo B paraconformar VLDL (7).

La coexistencia en los estados de IR del característicoaumento en circulación de lipoproteínas ricas en trigli-céridos, con la acumulación y depósito de grasa hepática,aparentan ser dos mecanismos opuestos que dificultan lacomprensión de un cuadro donde hay sobreproduccióny secreción de triglicéridos por un lado y depósito porotro. Estudios recientes tienden a demostrar que el poolde triglicéridos intracelular correlaciona con la secreciónde VLDL, es decir, más se deposita, más se secreta (8)(9).En estudios preliminares que se han llevado a cabo re-cientemente, se han observado alteraciones en la com-posición de las VLDL que podrían aumentar su poten-cial aterogénico en pacientes con sindrome metabólicoy con presencia EHGNA en comparación a los que pre-sentaban ausencia de EHGNA (10). El aumento de fac-tores metabólicos como la proteína transportadora decolesterol, (CETP) y la disminución de la adiponectinaen los pacientes con síndrome metabólico y EHGNA,constituirían factores predictores de las modificacionesaterogénicas de VLDL. Resta seguir investigando con elfin de dilucidar si la VLDL secretada en los estado de IRasociados a EHGNA presenta mayores alteraciones, o talvez las adquiere posteriormente en circulación, deter-minando un mayor potencial aterogénico.

La esteatosis hepática es también vulnerable a com-plicaciones secundarias que llevan a inflamación hepa-tocelular y fibrosis. Esto está vinculado con proteínasbioactivas como TNFα y su antagonista la adiponectina,generadas principalmente en el tejido adiposo visceral,que se encuentran involucradas en la patogénesis de laEHGNA, seguramente tras su llegada vía vena porta al hí-gado. El TNFα ejerce numerosas acciones como incre-mentar y mantener la IR e inhibir la oxidación de ácidosgrasos, favoreciendo así la esteatosis además de promo-ver la inflamación, mientras que la adiponectina tiene ac-ciones beneficiosas sobre el metabolismo, ya que au-menta la sensibilidad a la insulina, disminuye lalipogénesis, es citoprotectora y se comporta como anti-inflamatoria (11-13). La regulación de ambas citoquinasy la resultante en sus niveles determinarían la transi-ción desde la simple esteatosis a la esteatohepatitis.

El cuadro conformado por la disminución de adipo-nectina, comprobada en el plasma de pacientes conEHGNA aún en forma independiente de la IR, y por el au-mento de TNFα, proteína “C” reactiva –como marcadorde baja inflamación crónica-, del PAI-1 (inhibidor del ac-tivador del plasminógeno-1) y del fibrinógeno entre otros,condice con un conjunto de factores de conocido riesgocardiovascular estrechamente vinculados a la EHGNA ensus diversas formas (14)(15). Se suma a estos factores in-flamatorios y procoagulantes, la hiperglucemia, el au-

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mento de AGL y la sobreproducción de lipoproteínasmás aterogénicas. Cada factor por sí mismo y con efectossinérgicos entre sí pueden alterar la función endotelialmediante diversos mecanismos que acentúan, a su vez, elestado proinflamatorio y las complicaciones vasculares.

La ocurrencia de las asociaciones mencionadas hadado lugar a un creciente número de estudios y análisistendientes a revelar si la EHGNA, por sí misma, consti-tuye un nuevo factor de riesgo de aterosclerosis. Uno delos primeros estudios fue publicado en 2005 por Brea A,et al. que mostraron resultados significativos de un estu-dio caso-control, revelando que pacientes con EHGNA,no sólo comparten los factores de riesgo cardiometabó-licos asociados al síndrome metabólico, sino que tambiénpresentan un mayor engrosamiento intima-media de laarteria carótida y mayor prevalencia de placas ateroscle-róticas. La regresión logística y el análisis multivariadopermitieron afirmar que EHGNA es un predictor del en-grosamiento intimal y que sería una situación aterogé-nica más allá de la IR (16). Paralelamente, otros autoresdemostraron signos de disfunción endotelial incremen-tada, midiendo la vasodilatación dependiente del endo-telio de la arteria braquial post-isquemia en pacientescon esteatosis hepática no alcohólica, independiente-mente de la obesidad y la IR (17). Estos resultados indi-carían el desarrollo temprano de la aterosclerosis. Másrecientemente, un estudio observacional de cohorteprospectivo en más de 1600 sujetos de la población ge-neral, permitió afirmar que la presencia de EHGNA esun fuerte predictor de eventos cardiovasculares, de ma-nera más certera que el síndrome metabólico (18).

Por lo tanto, las evidencias de los últimos años sugie-ren que si bien los pacientes con simple hígado graso po-seen riesgo de desarrollar enfermedades hepáticas ter-minales como cirrosis y/o hepatocarcinoma, el riesgocardiovascular sería considerablemente más elevado.

Quedan aún interrogantes como cuál sería el evento fi-siopatológico inicial. ¿Es el síndrome metabólico el pre-cursor que promueve la EHGNA y la aterosclerosis o es laEHGNA que estimula el desarrollo del síndrome metabó-lico y la aterogénesis? Sin embargo, independientementedel mecanismo iniciador, el actual cúmulo de informaciónenfatiza la importancia de evaluar el riesgo cardiovasculartotal en pacientes con diagnóstico de EHGNA.


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Cáncer de Próstata: unestudio acerca de surelación con aspectosmetabólicos, hormonales,inhamatorios ypsicosociales

Halina Grosman1, Bibiana Fabre2, Viviana Mesch3, Gabriela Berg3

1. Bioquímica. Especialista en Bioquímica Clínica, Area Química Clí-nica

2. Bioquímica. Especialista en Bioquímica Clínica, Area Endocri-nología

3. Dra de la Universidad de Buenos Aires

Lugar de trabajo: INFIBIOC, UBA y Departamento de Bioquímica Clí-nica, Facultad de Farmacia y Bioquímica, UBAE-mail: [email protected]

El Cáncer de Próstata (CaP) es el segundo tumor demayor prevalencia entre los varones occidentales ma-yores de 50 años, precediéndole al cáncer de piel. Asi-mismo es también la tercera causa de muerte oncoló-gica en el varón, luego del cáncer de pulmón y decolon, dejando el lugar que ocupaba a fines del sigloXX. Esto se debe a la medida difundida del AntígenoProstático Específico (PSA), que junto al Examen Di-gital Rectal son las herramientas de primera línea en elscreening para la detección temprana de dicha patología,y a los tratamientos más efectivos en los tumores loca-lizados. Cuando el CaP es detectado sin manifestacionesclínicas, es curable en la mayoría de los casos. Por estasrazones es que en el Hospital de Clínicas “José de SanMartín” se llevan a cabo las Campañas de DetecciónTemprana del CaP, las cuales son gratuitas para los pa-cientes y se realizan en forma interdisciplinaria entre elServicio de Urología, el Departamento de BioquímicaClínica y el Servicio de Patología. Como el CaP tiene va-riabilidad racial, las Campañas arrojan datos que sirvencomo referencia de la población de la República Ar-gentina respecto de las enfermedades prostáticas, talcomo lo son ahora las detecciones registradas en otraspartes del mundo, con orígenes étnicos y raciales dis-tintos y con conductas alimentarias y estilos de vida di-ferentes a los de Argentina.

Por otra parte, en los últimos años se ha registradoun aumento considerable en la prevalencia de obesi-dad, considerándose en algunos países como una epi-

demia, especialmente en occidente. La obesidad, prin-cipalmente abdominal, comúnmente se asocia a dis-tintas patologías crónicas entre las que se encuentranla enfermedad cardiovascular, el síndrome metabólico,la diabetes y también algunos tipos de cáncer de natu-raleza hormono-dependiente. Específicamente en elCaP, la mayoría de los trabajos publicados describenuna asociación entre el grado de obesidad y la progre-sión del tumor, no así con el desarrollo del mismo.

El papel de factores psicosociales en el desarrollo depatologías crónicas como la obesidad, el síndrome me-tabólico y el cáncer es controvertido (1). La evidenciaactual indica que el estrés crónico tendría efectos sobreel desarrollo de obesidad abdominal y el síndrome me-tabólico, independientemente de la presencia de fac-tores de riesgo tradicionales como tabaquismo, dieta in-adecuada y sedentarismo. Esta asociación estaríamediada por la respuesta alterada al estrés crónico deleje Hipotálamo-Hipófiso-Adrenal (HHA), con una se-creción elevada de cortisol, el cual actúa sobre recep-tores específicos del tejido adiposo, promoviendo el de-pósito de triglicéridos en el adipocito y tambiénestimulando directamente la expresión del gen res-ponsable de la síntesis de leptina e inhibiendo al genresponsable de la síntesis de adiponectina. Otras cito-quinas pro-inflamatorias liberadas por el tejido adi-poso (IL-1, IL-6, TNF-α) estimularían la liberación dehormona liberadora de corticotrofina (CRH) o deACTH resultando en una mayor secreción de cortisol.De modo que estas citoquinas podrían ser el nexo en-tre estrés y adiposidad. A su vez, estados de depresióny ansiedad son inducidos o están asociados con elevadosniveles de citoquinas (1). A pesar de la evidencia cre-ciente del efecto del eje HHA sobre la adiposidad, elmecanismo biológico preciso y los biomarcadores in-volucrados aún no se conocen con certeza.

Varias líneas de evidencia sugieren que los factorespsicológicos o del comportamiento pueden influen-ciar la progresión y el pronóstico en algunos tumores.Una hiperactividad del eje HHA y del sistema simpa-toadrenal, debido al estrés y posible depresión, puedeninfluenciar la progresión del cáncer por estimulacióndel crecimiento tumoral o por inmunodepresión. Tantoel cortisol, que en estudios in vitro ha demostrado re-ducir la defensa celular contra tumores, como las cito-quinas, intervendrían como mediadores biológicos en-tre el estrés y el cáncer (1). Sin embargo, no hayestudios específicos del efecto del estrés crónico sobrela prevalencia y severidad del CaP. Numerosos interro-gantes aún no se han resuelto, entre ellos si el estréscrónico y la obesidad interactúan sinérgicamente en lapredicción del desarrollo y la severidad del CaP.

Ya desde el año 2006, distintos miembros del De-partamento de Bioquímica Clínica, estimulados por lacreación de INFIBIOC, conformaron un grupo multi-disciplinario que comenzó a evaluar la asociación entre

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obesidad, insulino-resistencia y CaP. Los resultados handemostrado que el CaP se asocia con niveles bajos decolesterol-HDL y aumento de la relación triglicéri-dos/col-HDL (2), un índice interesante dado que seconsidera un marcador secundario de insulino resis-tencia. Por su parte, los ensayos preliminares confir-maron también en esta población una asociación di-recta de adiponectina con col-HDL e inversa coninsulina. Asimismo, el grupo ha descrito un aumentodel índice de andrógenos libres y de estrógenos en lospacientes con CaP, independientemente del grado deobesidad y han encontrado valores de PCR-hs, marca-dor de inflamación, cercanos a los valores de riesgo ydescenso de adiponectina en estos pacientes. Estos re-sultados están relatados en un artículo recientementepublicado (3).

Durante el mes de mayo de 2009 se llevó a cabo laquinta Campaña de Detección Temprana del Cáncerde Próstata donde se evaluaron 2906 varones mayores de50 años. Esta amplia población permitió obtener mayorcantidad de muestras de pacientes con CaP para pro-fundizar los estudios que se vienen realizando desdehace ya 4 años, e incorporar el análisis acerca de la re-lación entre estrés crónico y desarrollo de obesidad yCaP. En este sentido, el grupo se ha contactado con el Dr.Yori Gidron, investigador en psiconeuroinmunología dela Free University of Brussels, Bélgica, quien forma parte denuestro grupo de trabajo, a cargo de la evaluación e in-terpretación de los eventos estresores y su correlacióncon el CaP y la obesidad.

El grupo considera que los resultados de estos estu-dios podrán tener impacto en la salud de la poblaciónmasculina mayor de 50 años, teniendo en cuenta la altaprevalencia, tanto de CaP como de obesidad abdominaly síndrome metabólico, en este grupo etario. Sobre la hi-pótesis de la existencia de una conexión endocrino-me-tabólica en el CaP y su asociación con el estrés crónico,y dada la alta frecuencia con que se presentan estas en-tidades, es importante poder evaluar y establecer facto-res de riesgo para el desarrollo y severidad del CaP. Losresultados obtenidos a partir de este proyecto justifica-rían el estudio más temprano de estos pacientes y per-mitirían desarrollar estrategias preventivas y/o terapéu-ticas para disminuir la incidencia de CaP, constituyendode esta forma un aporte importante en el campo de la Sa-lud Pública.


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Por qué medir los ácidosgrasos libresplasmáticos. Su participación en laresistencia a la insulina

Regina Wikinski1, Graciela Inés López2, Ana Inés González3;

1. Dra. en Farmacia y Bioquímica2. Bioquímica. Especialista en Bioquímica Clínica, áreas Química

Clínica y Gestión de Calidad y Auditoría3. Dra. de la Universidad de Buenos Aires, Área Bioquímica Clínica

Lugar de Trabajo. Instituto de Fisiopatología y Bioquímica Clínica-INFIBIOC, Grupo de Lipoproteínas y Aterosclerosis. Departamento deBioquímica Clínica, Facultad de Farmacia y Bioquímica. Universidadde Buenos Aires Autor responsable: Regina Wikinski, e-mail: [email protected]

DeFronzo define al conjunto de factores metabólicosy cardiovasculares que comprenden el Síndrome Meta-bólico, como síndrome de resistencia a la insulina. Se re-fiere así a una etiología patógena específica, más que aun conjunto difuso de factores, que pueden o no estarrelacionados con la misma fisiopatología de base (1). LaResistencia a la insulina (RI) es un síndrome de enormeimportancia, subyacente en los actuales desafíos a la sa-lud de la población mundial que incluyen síndromemetabólico, diabetes tipo 2 y su mayor prevalencia en ni-ños, hipertensión arterial, obesidad subcutánea y acu-mulación de grasa visceral, dislipemias con hipertrigli-ceridemia y colesterol-HDL bajo, enfermedadescardiovasculares y renales crónicas. También afecta auna importante proporción de mujeres postmenopáu-sicas.

Se define la RI como la falla en la respuesta de múl-tiples vías metabólicas insulino-dependientes en pre-sencia de niveles normales o elevados de insulinemia.Los mecanismos moleculares de RI, subyacen en las al-teraciones que aumentan el riesgo cardiovascular. Di-chos mecanismos son varios y sus biomarcadores quebuscan reemplazar al clamp euglucémico hiperinsuli-



némico de más difícil ejecución, reflejan esta multipli-cidad: HOMA IR, se calcula a partir de niveles elevadosde glucosa y/o insulina plasmáticas, ácidos grasos li-bres circulantes (FFA) aumentados señalan un procesolipolítico que no está balanceado por su captación tisu-lar, TG/ Colesterol-HDL depende menos de sus causasque de sus consecuencias, y disminución de adiponec-tina circulante, la cual todavía no tiene un punto decorte validado.

Desde 1963, el trabajo señero de Randle que fue labase de lo que se conoció en adelante como el ciclo¨Glucosa-Acidos grasos¨, puso de manifiesto la compe-tencia entre las dos fuentes más importantes de energía,la glucosa y los FFA en su utilización por tejidos insulinodependientes (2). La captación de FFA por el músculoesquelético involucra su entrada a la mitocondria parasu oxidación y producción de ATP, pero el exceso de áci-dos grasos impide la entrada de glucosa al tejido y au-menta la gluconeogénesis hepática, generando hiper-glucemia. FFA, en presencia de glucosa, estimulan laproducción pancreática de insulina. Por otro lado, hi-perglucemia e hiperinsulinemia inhiben la oxidaciónmitocondrial de FFA a través de la malonil-CoA que re-gula la carnitina palmitoil transferasa-1, un mecanismodescubierto en 1977 por McGarry y Foster que comple-mentan y refuerzan los trabajos pioneros de Randle (3).Ese tema fue revisado varias veces y recientemente se hademostrado que malonil-CoA-.carnitina palmitoiltrans-ferasa -1 modulan la oxidación de ácidos grasos de ca-dena larga de novo como oleato, convirtiéndose en unblanco para maniobras terapéuticas (4).

Todas las células presentan niveles bajos de recepto-res, pero las dependientes de insulina los tienen muy al-tos. El receptor de insulina es una proteína tetraméricaque consiste en dos subunidades extracelulares y dostransmembrana, conectadas por puentes disulfuro. Launión de insulina a las unidades extracelulares inducecambios conformacionales en las subunidades trans-membrana, afectando la vía de fosfoinositol-3-kinasa ,que se propaga hasta disminuir la fosforilación del sus-trato del receptor y otras proteínas de anclaje, impli-cando downregulation del gen del receptor (1)

El exceso de movilización de lípidos a las células demúsculo esquelético, adipocitos y hepatocitos, que de-penden de insulina para la captación de glucosa, afectala fosforilación de proteinkinasa C epsilon (PKCε) y su

traslocación a la región nuclear, lo cual reduce la acti-vación del promotor del receptor de insulina. En estavía intervienen lo ácidos grasos, regulando un grupode proteínas muy activas en el proceso de traslocación(HMGA1) (5). En relación con RI , injuria endoteliale inflamación y aterogénesis, se destaca la vía de laproteinkinasa activada por mitógenos (MAPK) a tra-vés de su constituyente activo, la proteína p38 que, enasociación con palmitato, duplica la apoptosis en cé-lulas endoteliales El palmitato también reduce la ac-tividad del inhibidor del factor nuclear kB no-depen-diente de p38 (6).

En este laboratorio, FFA se miden habitualmentecomo parte de los estudios del metabolismo en diabetes,síndrome metabólico, enfermedad renal crónica, pos-menopausia, esteatosis hepática y otros síndromes.

Por las razones expuestas, es importante incluir lamedida de FFA en la lista de analitos del laboratorio clí-nico, ya que pueden ser marcadores de estados meta-bólicos anormales y forman parte del cluster de factorescirculantes que permiten evaluar la fisiopatología de laRI además de los biomarcadores clásicos.


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Evaluación del efectoprotector renal ycardiovascular deNebivolol y Atenolol enratas Zucker DiabeticFatty

Jorge Toblli1, Margarita Angerosa2

1. Doctor en Medicina. Facultad de Medicina. UBA. Director del La-boratorio de Medicina Experimental del Hospital Alemán. Direc-tor de Proyectos Grupos Consolidados. UBACYT. UBA. Investiga-dor Clínico. CONICET.

2. Doctora de la Universidad de Buenos Aires. Área Bioquímica Clí-nica. Facultad de Farmacia y Bioquímica. UBA. Investigadora delLaboratorio de Medicina Experimental del Hospital Alemán. Co Di-rectora de Proyectos Grupos Consolidados. UBACYT. UBA. In-vestigadora del INFIBIOC

Lugar de Trabajo: INFIBIOC, Depto. de Bioquímica Clínica del Hos-pital de Clínicas (UBA) y Laboratorio de Medicina Experimental delHospital Alemán. Hospital Asociado a la Facultad de Medicina (UBA).E-mail: [email protected]

En la actualidad la asociación de obesidad, diabetesMellitus no insulino dependiente (NIDDM) e hiperten-sión arterial es altamente prevalente afectando a unagran parte de la población mundial. Estas morbilida-des, cuando están juntas constituyen el denominadoSíndrome Metabólico (MS), que está asociado estre-chamente al desarrollo de enfermedad cardiovascular yrenal con consecuencias deletéreas (1-5).

La activación del sistema nervioso simpático (SNS) esde suma importancia no sólo en la regulación hemodi-námica cardio-renal sino también en la actividad meta-bólica. Por lo tanto, la actividad simpática alterada ju-garía un rol en la etiología y/o complicaciones del MS.

Todavía no se ha resuelto si las alteraciones del SNScontribuyen al MS, o más aún, si son una consecuencia deello. La posibilidad de que un incremento primario en eltono simpático pueda contribuir al desarrollo de obesi-dad y MS, está apoyada por estudios longitudinales en va-rones japoneses. Masuo, et al. (6) informaron que valoreselevados de norepinefrina en el plasma a nivel basal pre-decían futuras lecturas de presión sanguínea elevada,ganancia de peso y valores de insulina más altos en los 5años siguientes de seguimiento. Varios componentes delMS pueden incrementarse debido a la actividad simpá-tica. La hiperinsulinemia, marcador de una sensibilidadreducida a la insulina, puede directamente estimular a laactividad del SNS en los seres humanos (7). Algunos

productos del tejido adiposo tales como la leptina y losácidos grasos no esterificados (NEFAs), pueden tambiéncontribuir a la activación neurogénica y a la resistencia deinsulina en personas con obesidad abdominal (8)(9).

Los antagonistas de receptor beta-adrenérgico, beta-bloqueantes (BB), son efectivos para el tratamiento de lahipertensión arterial, no obstante estos agentes son utili-zados con cierto cuidado en pacientes diabéticos debidoa los posibles efectos adversos sobre el metabolismo de hi-dratos de carbono y lípidos, como resistencia a insulina, in-tolerancia a la glucosa y dislipidemia. Los BB tradicionales,tanto selectivos como no selectivos, son verdaderamente va-soconstrictores debido a la actividad alfa-1 no bloqueada;sin embargo, los nuevos BB, denominados de tercera ge-neración los cuales presentan actividad vasodilatadora,como el Nebivolol (N), no están asociados con estos efec-tos metabólicos negativos. Actualmente se evidencia ciertatendencia en la práctica clínica para utilizar BB vasodila-tadores en el tratamiento de la hipertensión arterial con elpropósito de reducir el riesgo renal y cardiovascular es-pecialmente en la población de pacientes con DM.

La rata Zucker Diabetic Fatty (ZDF) es un modelo am-pliamente reconocido de obesidad, NIDDM, hiperten-sión arterial e hiperlipidemia (10-12). Consecuente-mente, es un atractivo modelo experimental parainvestigar el potencial daño renal y cardíaco relacio-nado con el “Síndrome Metabólico”. Al respecto, el ob-jetivo de nuestro proyecto es determinar en un estudioa largo plazo, si Nebivolol (N), es más efectivo que Ate-nolol (AT), clásico y ampliamente utilizado BB en con-trolar el deterioro funcional como morfológico a nivelrenal y cardiovascular en este modelo de rata represen-tativo del síndrome metabólico humano.

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La exposición axenobióticos y lainducción demodificaciones en elmaterial genético

Marta Ana Carballo1, Marcela Mabel López Nigro1

1. Dra de la Universidad de Buenos Aires

Lugar de trabajo: CIGETOX (Citogenética Humana y Genética Toxi-cológica) – INFIBIOC. Departamento de Bioquímica Clínica - Facul-tad de Farmacia y Bioquímica Universidad de Buenos Aires Junín956. 1113. CABA. Buenos Aires. Argentina. E-mail: [email protected]

Dado que la Salud se manifiesta como una relación ar-mónica entre el hombre y su ambiente, se debe focalizarla atención sobre tres objetivos indiscutibles: fomentar ymantener la salud del individuo, conservar el ambienteen equilibrio y atacar debidamente toda posible enfer-medad. En este último caso es necesario utilizar los me-dios y métodos de diagnóstico disponibles y crear los ne-

cesarios para lograr la prevención de la enfermedad o undiagnóstico temprano que permita reducir las fuentes deexposición generadoras de los desequilibrios referidoscomo pérdida de salud, sea individual o ambiental (1).

La Genética Toxicológica se ocupa del estudio delefecto mutagénico de los agentes químicos, físicos y/obiológicos, así como de las consecuencias que provocanla exposición a los mismos sobre los ecosistemas, el am-biente, los seres vivos y la salud humana. Por lo tanto, sonobjetivos fundamentales de la Genética Toxicológica laimplementación de métodos para el ensayo y evalua-ción del riesgo y la elucidación de la relación entre ge-notoxicidad e iniciación del proceso neoplásico (carci-nogénesis) (2).

El mayor desafío de esta área de la ciencia es identi-ficar las causas de enfermedades genéticas humanas, ini-ciadas tanto en células germinales como somáticas, y su-gerir el modo de disminuir su incidencia, así como proveerla información precisa sobre exposición y asesoramientode riesgo para una efectiva protección de la salud. Paraello, se debe identificar y estimar el impacto relativo de losagentes ambientales que inducen el posible daño genético.Esta presunción está basada en la necesidad de considerarque los agentes tóxicos ambientales causan una significa-tiva proporción de enfermedades genéticas que afectan alos seres vivos y en particular al hombre (3).

El uso de una batería de ensayos donde se combinenmetodologías citogenéticas, citológicas y moleculares,se orienta a la caracterización más estricta del daño in-ducido, su progresión y su posible relación con procesosoncogénicos. Al mismo tiempo es fundamental estable-cer si alguno de los elementos que forman parte denuestra cotidianeidad, se constituyen en agentes queresguarden el patrimonio genético de los individuos poractuar como inductores de reparación o por incremen-tar el sistema de defensa antioxidante (4).

Teniendo en cuenta los antecedentes previamentemencionados, el CIGETOX (Citogenética Humana y Ge-nética Toxicológica) se encuentra abocado a la búsqueday utilización de distintas herramientas para la caracteri-zación del daño genético en poblaciones expuestas (con-taminantes ambientales y plaguicidas), para detectar unametodología que permita caracterizar la susceptibilidadindividual frente a terapias medicamentosas (farmacoge-nética), así como en el estudio de recursos naturales de laflora que puedan ser utilizados para prevención de pro-cesos oxidativos y/o neoplásicos (antimutagénesis).

Los estudios de monitoreo de poblaciones utilizandolos biomarcadores apropiados proveen de herramientaspara un mejor entendimiento del riesgo potencial parala salud producto de la exposición a sustancias tóxicaspresentes en el ambiente (agua, aire y suelo).

En Argentina, los plaguicidas se han convertido en im-prescindibles en agricultura intensiva para mejorar laproducción, proteger los cultivos almacenados y con-trolar los vectores de enfermedades. Aunque el uso de

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plaguicidas es necesario, resulta fundamental evaluarlos riesgos para la salud en los seres humanos que estánprofesional y/o ambientalmente expuestos a estos agro-químicos. Esta exposición puede ocurrir durante la pre-paración de la mezcla, en el procesamiento de carga y/olavado de los equipos de fumigación y en el momento desu aplicación. La exposición crónica a los plaguicidas seencuentra asociada a daños en la salud que incluyen neu-rotoxicidad, efectos carcinogénicos e inmunológicos, al-teraciones de la reproducción y el desarrollo. Por lotanto, la caracterización de estos posibles efectos en po-blaciones expuestas de Argentina resulta imprescindible.

Se debe recordar que la toxicidad de muchos xeno-bióticos puede estar influenciada directa o indirecta-mente por ciertos mecanismos de defensa, constitutivoso genéticamente inducibles, presentes en las células.Además del ya conocido mecanismo de detoxificación delcitocromo P450, los transportadores de membrana celu-lar presentan un especial interés, ya que están involu-crados en este proceso mediante la absorción y excreciónde xenobióticos. Dentro de los transportadores se puedecitar la glicoproteína P (P-gp), miembro de la superfa-milia de proteínas transportadoras de membrana ATP-de-pendientes (5). Si se generan modificaciones en la ex-presión de esta glicoproteína por exposición a distintosxenobióticos, ya sea con un aumento o una disminu-ción, esto permitiría confirmar la hipótesis que sostieneque la P-gp sería la primera línea de defensa contra pro-ductos naturales y contaminantes antropogénicos.

Por otra parte, la evaluación riesgo-beneficio de gruposde plantas medicinales de la flora argentina de uso po-pular, de las cuales existe un conocimiento cabal sobre suscaracterísticas botánicas, pero se desconocen sus propie-dades tóxicas y/o beneficiosas, podrá dar como resultadodiversas premisas. De este modo se podrá contar con re-ferencias que avalen la escasa o nula toxicidad de estasplantas, como así también permitirán el mayor aprove-chamiento de estos recursos naturales renovables. Ade-más, los mismos conceptos se pueden aplicar a vegetalesintegrantes de nuestra dieta que carecen de gran consumoen nuestro medio pero se encuentran incorporados a ladieta mediterránea debido a sus propiedades benéficas.

Las evaluaciones toxicogenéticas permiten poner enevidencia daños en el momento de la exposición y vi-sualizar posibles daños a futuro, así como tomar medidaspreventivas e informar con respecto al riesgo de estar encontacto con ciertos agentes que pueden ser adversospara la salud.


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GRUPO DEMICROBIOLOGÍA

Emergencia de nuevospatógenos condificultades diagnósticasy terapéuticas

Carlos Alberto Vay1, Marisa Nancy Almuzara2,Claudia Miriam Barberis3

1. Dr. de la Universidad de Buenos Aires2. Bioquímica. Especialista en Bioquímica Clínica, Area Bacterio-

logía Clínica, Tesista de Doctorado3. Bioquímica. Especialista en Bioquímica Clínica, Area Bacterio-

logía Clínica, Tesista de Doctorado

Lugar de Trabajo: INFIBIOC, UBA y Departamento de Bioquímica Clí-nica, Universidad de Buenos Aires.

Dirección Postal: Avda Córdoba 2351 1 Piso Sector C CP (1120)Dirección electrónica: [email protected]

Las técnicas moleculares aplicadas a la microbiologíaclínica han permitido el descubrimiento de nuevos pató-genos. Algunos de ellos forman parte de la microbiota am-biental o de los sitios no estériles del cuerpo humano y apartir de allí pueden invadir tejidos estériles produciendoenfermedad infecciosa. Este comportamiento oportunistano siempre es documentado por los laboratorios clínicosdebido a la conjunción de varios factores negativos: el des-



conocimiento por parte del microbiólogo de la existenciade los mismos, la desjerarquización clínico-microbiológicadel hallazgo y la superposición de características fenotí-picas que solapan la correcta identificación

Entonces, la verdadera incidencia en la infección hu-mana de estos agentes es desconocida actualmente. Sóloalgunas publicaciones recientes mencionan y alertan so-bre la participación de estos nuevos patógenos en la en-fermedad infecciosa del hombre (1- 3).

Bacilos no fermentadores pertenecientes a la mismafamilia Alcaligenaceae (Achromobacter, Alcaligenes, Advenella,Kerstersia y Oligella) y Flavobacteriaceae (Elizabethkingia yChryseobacterium entre otros) representan un desafíodiagnóstico y aún es poco conocida la enfermedad in-fecciosa que ellos ocasionan, incluyendo la participa-ción en la colonización e infección respiratoria del pa-ciente con enfermedad fibroquística (4)(5). Noobstante, el número de publicaciones que relacionan alas acromobacterias, Chryseobacterium y Elizabethkingia conel paciente infectado ha aumentado considerablementeen los últimos años (2)( 6- 8).

Estudios de sensibilidad a los antimicrobianos sobreestos microorganismos han sido también publicados,pero en la mayoría de ellos se utilizaron métodos de di-lución. Poco se conoce acerca de la utilidad de los mé-todos de difusión, que son más sencillos de aplicar y es-tán al alcance de todos los laboratorios clínicos.Actualmente, el CLSI no ha brindado lineamientos paradeterminar las pruebas de sensibilidad por el método dedifusión para bacilos no fermentadores pertenecientes alas familias Alcaligenaceae y Flavobacteriaceae y de los gé-neros que integran los bacilos positivos difteroides(9)(10). Este grupo ha estudiado la correlación entre elmétodo de difusión y el de dilución en especies perte-necientes a diferentes clones del género Achromobacter.Los resultados obtenidos permitieron establecer puntosde corte para la prueba de sensibilidad por discos paralos antimicrobianos imipenem, meropenem, ertapenem,gentamicina, trimetoprima-sulfametoxazol, doxiciclina ytetraciclina. Este es el primer estudio que demuestraque la prueba de sensibilidad por difusión es aplicable aaislamientos clínicos de Achromobacter spp. (11).

Los mecanismos de resistencia adquirida a los carba-penemes han sido ampliamente estudiados en Pseudomo-nas aeruginosa y Acinetobacter spp, pero son escasas las pu-blicaciones referidas a la resistencia adquirida en otrosbacilos no fermentadores, como Pseudomonas putida(12)(13). Esta especie emerge en Argentina con resis-tencia adquirida a ambos carbapenemes: imipenem y me-ropenem (14). El primer aislamiento fue estudiado eneste laboratorio y correspondió a Pseudomonas putida por-tadora de una metalo-beta-lactamasa de tipo VIM-2 (15).

Entre los aislamientos de Pseudomona putida resistentesa ambos carbapenemes debido a la portación de carba-penemasa de tipo VIM-2, se encontró uno cuyas caracte-rísticas fenotípicas eran similares a esta especie, pero al-

gunas de ellas eran aberrantes. Entre las diferencias se des-tacaba la producción de un pigmento amarillo. La se-cuenciación del ARN ribosomal 16 s determinó que el mi-croorganismo presentaba más del 99% de homología conaislados de Pseudomonas putida y de Pseudomonas fulva. Lahibridización del ADN dilucidó que este aislamiento co-rrespondía a Pseudomonas fulva. Este microorganismo fuehallado en el cultivo del LCR de una niña con tumor delSNC y ocasionó una meningitis fatal pos neuroquirúr-gica. Es la primera vez que se documenta que esta bacte-ria ambiental causa infección en el hombre (16).

También se hallaron algunos aislamientos de Pseudo-monas putida resistentes a meropenem y sensibles a imi-penem. Esta disociación, no estudiada por otros investi-gadores, fue analizada por este grupo de trabajo. Elmecanismo que confiere esta resistencia no es debido auna carbapenemasa, sino a la sobre expresión de unabomba de eflujo de tipo Arp B, que afecta a selectiva-mente al meropenem (17)(18).

El laboratorio clínico debe estar alerta respecto de lasenfermedades infecciosas que son endémicas en otrasáreas geográficas y que pueden ser importadas a través delos viajes que realiza la población. En febrero de 2009, unpaciente de sexo masculino de 17 años, oriundo de la Re-pública Dominicana, fue derivado al Hospital de Clínicasde la Universidad de Buenos Aires para estadificación yevaluación del tratamiento más apropiado de su linfomade Hogdkin. En el momento de su ingreso el paciente pre-sentaba tumoraciones blandas con supuración espontáneay fiebre intermitente. De las supuraciones se aisló Bur-kholderia pseudomallei, agente etiológico de la melioidosis,enfermedad que aún no había sido documentada en Ar-gentina. En razón de la baja incidencia de Burkholderiapseudomallei en este continente y de la similitud fenotípicade esta especie con otras especies ambientales de Pseudo-monas o de Burkholderia, que suelen interpretarse comocontaminantes; el diagnóstico de esta enfermedad pudohaber sido subestimado (19).

Con respecto a los bacilos grampositivos difteroides sudiversidad actual y el lento desarrollo de algunas especieshan complicado notablemente la identificación prácticaen el laboratorio a través del fenotipo. Además de invo-lucrarse en la infección nosocomial, recientemente sehan descripto brotes de Corynebacterium striatum en lasunidades de cuidados intensivos en Italia, Holanda y Ar-gentina (20)( 21-23).

Mycobacterium fortuitum, M. chelonae y M. abscessus, son lasmicobacterias de crecimiento rápido de mayor importan-cia clínica. Estos bacilos grampositivos crecen sin mayor di-ficultad en medios de cultivo universales que utilizan en larutina los laboratorios clínicos. Este hecho implica quepuedan confundirse con especies de corinebacterias y suhallazgo desestimado por ser considerado una mera con-taminación. Las infecciones cutáneas producidas por estasespecies de Mycobacterium son hoy en día cada vez más fre-cuentes y a menudo evolucionan a abscesos subcutáneos

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que drenan espontáneamente (24). Estas infecciones sehan incrementado con las nuevas modas de embelleci-miento, tales como la mesoterapia, el rejuvenecimientode los tejidos por la aplicación de toxina botulínica y la co-locación de implantes mamarios (25). La identificación deestas micobacterias es particularmente importante para elpronóstico de la enfermedad, pues fracasa el tratamientotradicional antituberculoso y el tratamiento antibióticoadecuado está en relación a la micobacteria de rápido cre-cimiento aislada y a su perfil de resistencia impredecible(24)(25). En Buenos Aires se ha descripto por primera vezen el mundo, un importante brote relacionado a la meso-terapia, producido por una especie sumamente infrecuentede micobacteria de rápido desarrollo, multirresistente,Mycobacterium immunogenum (26).

La correlación del hallazgo de nuevos microorganismoscon los aspectos clínicos-epidemiológicos de cada pacienteermitirá develar el papel de estas nuevas bacterias en la en-fermedad infecciosa y establecer si existe relación entre es-pecie-sitio de infección, especie-enfermedad de base, eltipo de inmunidad afectada, los factores de riesgo y las pro-bables fuentes de infección, establecer el tratamiento ade-cuado sobre la base del conocimiento previo de su perfilo mecanismos de resistencia a los antibacterianos y en al-gunos casos conocer el pronóstico de la enfermedad.


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GASTROENTEROLOGÍA YENZIMOLOGÍA CLÍNICA

Estudio de la interacciónMieloperoxidasa-Ceruloplasmina enenfermedades inhamatorias.De la gsiopatología a labioquímica clínicaGustavo Alberto Negri1, María Beatriz Di Carlo2,Viviana Mónica Yapur3, María Fernanda Bustos3,Fabiana Lopez Mingorance3

1. Director-Doctor en Bioquímica.2. Codirector-Doctora de la Universidad de Buenos Aires.3. Integrante-Bioquímica.4. Integrante-Bioquímica.5. Integrante-Bioquímica.

Lugar de Trabajo: Área Gastroenterología y Enzimología Clínica - Dpto.Bioquímica Clínica - Facultad de Farmacia y Bioquímica – INFIBIOC.Dirección Postal: Dpto. Bioquímica Clínica - Hospital de Clínicas -Sector A- Córdoba 2153 – CABA (1113) – Argentina.E-mail: [email protected]; [email protected]

El proceso inflamatorio consiste en una serie de even-tos característicos, en los que se produce la activación deneutrófilos polimorfonucleares (PMN), macrófagos y lin-focitos, liberando enzimas lisosomales, radicales libres deloxígeno, sustancias vasoactivas y mediadores proinflama-torios. Dentro de este contexto se estudia principalmente,la interacción entre la mieloperoxidasa, constituyente en-zimático mayoritario de los PMN y su inhibidor natural laceruloplasmina, reactante de fase aguda (1).

La Mieloperoxidasa (MPO, peróxido de hidrógenoóxidorreductasa – EC 1.11.1.7), es una hemoenzima gli-cosilada que se encuentra principalmente en los gránulosazurófilos de los neutrófilos, monocitos y macrófagos (2).

Es constituyente del sistema inmune innato e intervieneen la producción de oxidantes potentes al amplificar el po-tencial oxidativo del agua oxigenada; y presenta una acti-vidad antimicrobiana (bactericida y viricida) al generarespecies cloradas. La acción catalítica la lleva a cabo a tra-vés del sistema MPO, mecanismo en el que se encuentraninvolucradas las diferentes formas de la enzima. Inter-viene en la conversión de: su sustrato natural (el peró-xido de hidrógeno) a agua, en presencia de ionescloruros (principalmente). Como producto final de im-portancia biológica se obtiene el ácido hipocloroso, co-nocido como el microbicida más importante obtenidopor el organismo, interviniendo en la fagocitosis de agen-tes agresores. La desregulación de este mecanismo con-lleva a la perpetuación del daño y su implicancia en lainjuria endotelial. Participa en el inicio y el desarrollo delproceso arteriosclerótico. Esta enzima es capaz de generaroxidantes y radicales difusibles mediante la peroxidación li-pídica y la modificación de proteínas estructurales (3-5).

Los posibles mecanismos en los que participa la MPOa nivel endotelial son: oxidación de la LDL; modifica-ción de la Apo A1 y formación de la HDL disfuncionaly promoción de la disfunción endotelial (6).

Las evidencias en animales de experimentación dancuenta de que la MPO junto a los productos de la oxida-ción forma parte de lesiones ateroscleróticas caracterís-ticas. En seres humanos, aumentos en los nivelessistémicos de MPO se correlacionan con riesgo cardio-vascular y presencia de lesión aterosclerótica, demostradaen estudios de diagnóstico por imágenes (angiografía).Por el contrario en individuos genéticamente deficien-tes en MPO o con polimorfismos genéticos que conlle-van a la reducción en la expresión de MPO, se observamenor prevalencia de enfermedad cardiovascular (7).

Es así como, más recientemente a la MPO se la reco-noce como marcador de: Inflamación, Estrés oxidativo,Estrés nitrosativo y Aterogénesis.

En cuanto a las enzimas relacionadas con la MPO, sedestacan a:

-Ceruloplasmina, en su unión a esta oxidasa se ha ob-servado regulación de la actividad extracelular deambas.

-NADPH oxidasa a través de la producción de especiesreactivas oxígeno,

-Superóxido dismutasa y Catalasa, producción y depu-ración del peróxido de hidrógeno,

- la iNOS por la formación de compuestos reactivosdel nitrógeno con la consecuente nitración de proteínas,incluida la MPO,

- proteasas como la Elastasa-PMN, la que en presencia delsistema MPO aumenta su acción proteolítica. En este sen-

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tido se ha demostrado in vitro que se produce el desbalancedel sistema proteasa-antiproteasa, cuando en el medio estápresente el sistema MPO, por oxidación de la antiproteasa(Alfa1antitripsina). Hemos demostrado in vivo tanto ensuero y tejidos de animales de experimentación con pan-creatitis aguda, como en el suero de pacientes sépticos yen las heces de pacientes con colitis ulcerosa, a través deeste fundamento la relación directa entre el aumento de laactividad proteolítica y la mayor actividad de elastasa-PMNcon la severidad de la enfermedad, considerando al des-balance proteasa antiproteasa como un factor etiológicomás del proceso inflamatorio.

- Metaloproteasas junto a ellas y otras moléculas inter-viene en la desestabilización de la placa ateromatosa.

Los mecanismos aterogénicos en los que la MPO estáinvolucrada se deben a la utilización del Cl- y generaciónde oxidantes activadores de la cascada de proteasas, yóxido nítrico ateroprotector con la formación de oxi-dantes derivados (8-10).

Con respecto a la Ceruloplasmina (Cp, ferroxidasa-I,EC 1.16.3.1.), su interés ha crecido en los últimos años de-bido a los avances en el conocimiento de su estructura yfunción. Es una abundante proteína plasmática azul quetransporta aproximadamente el 95% de cobre circulanteen el adulto normal. Fue purificada de la fracción alfa-2globulinas séricas, y es considerada una proteína de faseaguda. Aunque es sintetizada principalmente en el hígadootros tipos de células expresan la proteína (monocitos, as-trocitos, células de Sertoli). En ciertas condiciones fisio-patológicas puede iniciarse su expresión en tejidovascular. Interviene en la defensa contra el estrés oxida-tivo, inactivación de aminas biogénicas, angiogénesis, mo-dulación de la coagulación, transporte de cobre ymetabolismo del hierro. Es una multicobre oxidasa conpropiedades antioxidantes (actividad ferroxidasa). Sinembargo, se ha informado también que tiene actividadproxidante. Las múltiples funciones de la Cp no están deacuerdo con el paradigma (un gen, una proteína, unafunción). Es considerada una moonlighting protein, prote-ína multifuncional, que cambia su función en respuesta amodificaciones del sustrato, a la localización diferencial oexpresión diferencial (11-13).

La determinación de Cp en el laboratorio bioquímicoclínico se relaciona tradicionalmente con el diagnósticode la Enfermedad de Wilson y es solicitada por el hepa-tólogo para descartar dicho trastorno ante enfermedadhepática de origen desconocido, por el neurólogo anteciertos síntomas neuropsiquiátricos o por el oftalmólogoante la observación del anillo de Kayser Fleisher (14 - 15).

Múltiples estudios epidemiológicos demuestran queconcentraciones de Cp plasmática aumentadas están aso-ciadas con la enfermedad cardiovascular, dada la capaci-dad de la Cp, a través del cobre, de promover efectosvasculopáticos. Estos efectos son mediados por formaciónincrementada de especies reactivas del oxígeno. Hay tam-bién evidencia que factores de riesgo para enfermedad

cardiovascular (diabetes e hiperhomocisteinemia) pue-den aumentar el impacto vasculopático de la Cp (16). Lahiperglucemia es considerada la causa primaria de lascomplicaciones vasculares en la diabetes, y está asociadacon el estrés oxidativo, el aumento de los elementos traza,el metabolismo lipídico y alteraciones en las actividadesde las enzimas pancreáticas (17-18).

En el plasma interactúa con la MPO para inhibir su ac-tividad peroxidasa e impedir la formación de especies clo-radas. Estudios in vitro sobre las propiedades enzimáticasmuestran que la Cp puede comportarse como un inhibi-dor competitivo impidiendo la unión de sustratos aro-máticos al sitio activo de la MPO. Estas evidenciassugieren la presencia de un complejo Cp-MPO que puedeestar presente en sueros provenientes de pacientes conenfermedades inflamatorias crónicas como la enferme-dad cardiovascular y la aterosclerosis (19)(20).


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GRUPO DE MICROBIOLOGÍA EINMUNOLOGÍA CLÍNICA

Avances en el diagnósticode infecciones por losvirus dengue e Inhuenza A

Marcelo Rodríguez Fermepin1, María LucíaGallo Vaulet2, Andrea Carolina Entrocassi3,Rubén Salvador Absi4, Ana Inés Portu5,Gladys Orfus5

1. Dr. de la Universidad de Buenos Aires2. Bioquímica, Becaria Doctoral de la UBA3. Bioquímica y Farmacéutica, Becaria Doctoral de la UBA4. Bioquímico5. BioquímicaLugar de trabajo: INFIBIOC, UBA y Departamento de Bioquímica Clí-nica de la Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Bue-nos AiresE-mail: [email protected]

Durante el año 2009 ocurrieron dos emergencias sani-tarias en la República Argentina. En el verano 2008/09 seprodujo una epidemia de Dengue, con la aparición de ca-sos autóctonos en la Ciudad Autónoma de Buenos Aires.

Luego de unos meses, la población del país debió en-frentar otra epidemia, esta vez por una nueva cepa del vi-rus Influenza A (H1N1 pandémico).

Ante estas circunstancias, el Laboratorio de Inmuno-logía Clínica, Departamento de Bioquímica Clínica, de-bió implementar nuevas estrategias.

Diagnóstico de laboratorio ante lasinfecciones por Dengue

Inicialmente se implementó la detección de anticuer-pos específicos tipo IgM e IgG mediante la técnica deELISA (enzimoinmunoensayo). Esta metodología permiteel diagnóstico luego de la etapa aguda de la enfermedad(después del 5º día de la aparición de los síntomas).

Posteriormente, previniendo un nuevo brote de Den-gue en la Ciudad Autónoma de Buenos Aires, se des-arrolló la técnica de RT-PCR para el diagnóstico precoz,mediante la detección del virus en la fase aguda de la en-fermedad (durante la viremia, en los primeros 5 días deaparición de los síntomas). Esta metodología permite ti-pificar el virus detectado en una segunda ronda de am-plificación (1)(2).

Diagnóstico de laboratorio ante lasinfecciones por Inhuenza A

El diagnóstico de infecciones respiratorias virales serealiza en forma habitual desde el año 1996, mediante in-munofluorescencia directa con anticuerpos monoclo-nales específicos. Por esta metodología se pueden diag-nosticar las infecciones provocadas por los virus de:Influenza A, Influenza B, Parainfluenza 1, 2 y 3; Adeno-virus y Virus Sincicial Respiratorio, con elevada sensibili-dad y especificidad en los aspirados nasofaríngeos de lospacientes pediátricos.

A partir de la pandemia por Influenza A H1N1, en ju-nio de 2009, se quintuplicó el número de exámenes reali-zados con la incorporación del procesamiento de hisopa-dos nasales provenientes de pacientes adultos (estudiosposteriores refirieron una menor sensibilidad del hiso-pado nasal en adultos, motivo por el cual actualmente se re-comienda utilizarlo en pacientes adultos dentro de las pri-meras 48 - 72 horas de iniciada la sintomatología).

Esta metodología no permite la identificación específicadel virus de Influenza A H1N1, la que se realiza medianteRT-PCR en Tiempo Real. Durante la Emergencia Sanitarialas muestras se derivaron para su confirmación al Centro deReferencia ANLIS-MALBRÁN y posteriormente a los la-boratorios de Virología de los Hospitales Ricardo Gutiérrezy Francisco Muñiz, de acuerdo con la edad del paciente (3).

INFIBIOQ 411


Para cumplir con las condiciones de bioseguridad ne-cesarias para el trabajo con los especímenes clínicos, la Fa-cultad de Farmacia y Bioquímica adquirió dos cabinas de se-guridad biológica Clase II tipo A2 para ser instaladas en loslaboratorios de Inmunología Clínica y Bacteriología Clí-nica, los cuales procesan las muestras de los pacientes consospecha diagnóstica y requieren, para su manipulación, me-didas de bioseguridad y seguridad operativa adecuadas.

Mientras se avanza en la adquisición del equipamientonecesario para la realización de la metodología de refe-rencia (RT PCR en tiempo real), se desarrollaron otrosavances en el diagnóstico de infecciones virales respirato-rias. Por una parte, se incorporó al panel de virus respira-torios ya investigados, el diagnóstico de Metapneumovirushumano y se optimizó una PCR convencional con retro-transcripción para la detección específica del gen M (quecodifica para la proteína Matriz) de Influenza A con el pro-tocolo propuesto por la Red de Laboratorios de Influenzay Virus Respiratorios, ANLIS Malbrán que proveyó los par-tidores y los controles necesarios para su implementación.El mismo laboratorio de referencia llevó adelante un con-trol de calidad externo en el cual el Laboratorio de Inmu-nología Clínica obtuvo un 100% de concordancia. A par-tir de esa validación se inició el diagnóstico de infección porel virus Influenza A mediante esta metodología. Desdemayo de 2010, se han procesado más de 80 muestras y enninguna de ellas se detectó la cepa pandémica. Finalmente,otro hecho de importancia para el laboratorio, fue su in-corporación al Sistema Nacional de Vigilancia Laboratorial,SIVILA, dependiente del Ministerio de Salud de la Nación.

Todos estos avances han sido posibles gracias a la volun-tad y el esfuerzo de todos los integrantes del laboratorio.

La adquisición de los equipos pertinentes de PCR-RTse utilizará para centralizar todas las muestras provenien-tes de pacientes de la Red de Hospitales Universitarios(Instituto Lanari, Instituto de Tisioneumonología e Ins-tituto de Oncología Ángel Roffo) con sospecha de infec-ción por Influenza A H1N1.

Esta experiencia permite reforzar la idea de constituir,sólidamente, una Red de Hospitales Universitarios para co-ordinar actividades conjuntas y responder eficientementeante las demandas de nuevas emergencias sanitarias.

Referencias bibliográgcas1. Lanciotti RS, Calisher CH, Gubler DJ, Chang GJ, Vorndamt

V. Rapid Detection and typing of dengue viruses from clin-ical samples by using reverse transcriptase-polymerase chainreaction. J Clin Microbiol 1992; 30 (3): 545-51.

2. Barrero PR, Mistchenko AS. Genetic analysis of Denguevirus type 3 isolated in Buenos Aires, Argentina. Virus Res2008; 135: 83–8.

3. WHO information for laboratory diagnosis of pandemic(H1N1) 2009 virus in humans-revised. Disponible en:http://www.who.int/csr/resources/publications/swineflu/WHO_Diagnostic_RecommendationsH1N1_20090521.pdf

GRUPO DE MICROBIOLOGÍA

Resumen del Proyecto

Abordaje de nuevosproblemas en viejospatógenos con altoimpacto en la saludhumana

Ángela Famiglietti1, Beatriz Perazzi1, Susana García2

1. Doctora de la Universidad de Buenos Aires2. Especialista en Bioquímica Clínica, Área Bacteriología Clínica

Instituto de Fisiopatología y Bioquímica Clínica - INFIBIOC-UBA yDepartamento de Bioquímica Clínica, Facultad de Farmacia y Bio-química, Universidad de Buenos AiresE-mail: [email protected]

La interacción entre huésped y patógeno en la in-fección es un proceso dinámico y en continuo cambio.En los últimos años se ha asistido a la reconsideraciónde patógenos emergentes de baja virulencia, pero tam-bién a notables cambios en la epidemiología, presenta-ción clínica, virulencia y resistencia antibiótica en los mi-croorganismos relacionados con infecciones en el serhumano. En este contexto, es un desafío para el Labo-ratorio de Microbiología satisfacer las demandas dediagnóstico rápido, vigilancia y detección de la resis-tencia a los antimicrobianos, para sustentar los trata-mientos empíricos.

El presente proyecto propone estudiar de manera in-tegral los aspectos epidemiológicos y resistencia a los an-timicrobianos en los siguientes patógenos, entre otros:

Staphylococcus aureus: es un viejo patógeno que oca-siona infecciones leves a graves de piel y partes blandas,infecciones osteoarticulares y neumonía pos-influenza,entre otras. A partir del año 2005 se ha afrontado laemergencia de S. aureus meticilino -resistente adqui-rido en la comunidad (SAMR-AC), que causa las mismaspatologías, pero que revisten mayor gravedad y afectanespecialmente a pacientes pediátricos. Estos aisladospresentan resistencia a todos los antibióticos beta-lactá-micos sin resistencia asociada a otros antimicrobianos.Esta resistencia mediada por el gen mec A se ubica en el



cassette SCC mec tipo IV y V y frecuentemente poseen ungen codificante para un factor de virulencia específico,la leucocidina de Panton Valentine (LPV). Todos nues-tros aislamientos de SAMR-AC presentaron el cassetteSCC mec IV y sólo el 62% presentó la LPV. La clindami-cina y los macrólidos son las drogas más activas para eltratamiento de las infecciones de piel y partes blandaspor SAMR-AC, pero el amplio uso de estos antimicro-bianos ha seleccionado cepas resistentes con diferentesfenotipos. Se observó un 15% de resistencia a eritromi-cina de tipo inducible. Para aquellas infecciones gravesque comprometen la vida del paciente se debe recurrira vancomicina o antibióticos de última generación comolinezolid y daptomicina, con sus limitaciones terapéuti-cas. Y nuevamente el amplio uso de vancomicina fun-damentalmente a nivel hospitalario trae aparejada otraemergencia como la aparición de cepas de S. aureuscon sensibilidad disminuida a vancomicina (VISA) yHetero VISA donde fracasa el tratamiento con este an-timicrobiano. Cabe destacar que estas últimas ya fueronencontradas por este grupo de investigación.

Streptococcus pneumoniae: continúa siendo el principalresponsable de la neumonía adquirida en la comunidad(NAC), especialmente en la población pediátrica y ma-yores de 65 años y en pacientes con cuidados crónicosde la salud (NACS). Ha adquirido resistencia a todos losantimicrobianos empleados en su tratamiento, salvovancomicina. Este grupo ha demostrado que amoxici-lina, independientemente de la vía de administración,continúa siendo la droga de elección en esta patología;mientras que los macrólidos (eritromicina) deberían uti-lizarse con precaución, ya que se encontró un 19,2% deresistencia a eritromicina. La resistencia a levofloxacinafue 1,6% y aunque gatifloxacina y moxifloxacina conti-núan sensibles, debería desestimarse su uso en aquellosaislamientos resistentes a levofloxacina para prevenir laselección de resistencia.

Neisseria gonorrhoeae con resistencia a fluorquinolonas(NGRFQ): este grupo ha documentado 32,2% de resis-tencia a ciprofloxacina en HSH y 16% en heterosexua-les. Esta amplia circulación de NGRFQ lleva a desesti-mar el uso de fluorquinolonas en el tratamientoempírico de la gonorrea en nuestra población (1).

Trichomonas vaginalis: el diagnóstico de la infecciónpor Trichomonas vaginalis durante el embarazo revistegran importancia, ya que predispone a rotura prema-tura de membrana, labor pretérmino y bajo peso al na-cer. La trichomoniasis es una infección de transmisiónsexual que puede presentarse en forma asintomática enun 10 a un 50% de los casos. El diagnóstico a través del

examen microscópico presenta una baja sensibilidad(35-80%), sobre todo en pacientes asintomáticas, motivopor el cual es necesario implementar metodologías mássensibles. El cultivo en medio líquido es considerado elmétodo de mayor precisión (método de referencia)para el diagnóstico de trichomoniasis (2). Este grupodocumentó en embarazadas una prevalencia por cultivodel 4%. Cabe destacar que en la mitad de los casos lapresentación fue asintomática. Por la baja sensibilidadde los exámenes microscópicos, especialmente en pa-cientes asintomáticas, se recomienda la utilización delcultivo para su diagnóstico, con el objeto de instaurar unprecoz y adecuado tratamiento para prevenir posiblescomplicaciones maternas y perinatológicas.

Streptococcus agalactiae (EGB): la colonización porEGB durante el embarazo reviste gran importancia porla posibilidad de transmisión al neonato y además porser una causa frecuente de infecciones durante la ges-tación y el puerperio. Sin medidas de prevención, apro-ximadamente el 50% de las mujeres colonizadas trans-miten EGB a sus recién nacidos durante el parto y deestos neonatos colonizados, el 1 al 2% desarrollan unainfección precoz, como la neumonía, sepsis o meningi-tis, con una mortalidad de alrededor del 5%. La profi-laxis intraparto con penicilina o ampicilina previene lainfección neonatal, disminuyendo la incidencia anualde casos por debajo del 0,6‰. El grupo ha documen-tado entre 10 y 15% de portación de EGB en embara-zadas (3). Estos aislamientos fueron sensibles a penici-lina y observamos un 15% de resistencia a eritromicina,droga utilizada en aquellas pacientes alérgicas a peni-cilina. Se hace hincapié en la búsqueda sistemática deEGB en gestantes entre las 35 a 37 semanas y en la de-tección de la resistencia a macrólidos en las pacientesalérgicas a penicilina.


1. Garcia S, Casco R, Perazzi B, De Mier C, Vay C, Fami-glietti A. Resistencia de Neisseria gonorrhoeae a ciprof-floxacina según hábitos sexuales. Medicina (Buenos Ai-res) 2008; 68 (5): 358-62.

2. Perazzi B, Menghi C, Coppolillo E, Gatta G, Cora ElizethM, Vay C, et al. Investigación de Trichomonas vaginalisdurante el embarazo mediante diferentes metodologías.Rev Argent Microbiol 2007; 39: 99-104.

3. Perazzi B, Coppolillo E, García S, Cora Eliseht M, OrtizE, de Torres R, et al. Colonización por estreptococogrupo B en gestantes provenientes de un hospital uni-versitario. Rev Soc Obstet Ginecol (Buenos Aires). 2006;37 (198): 191-5.

INFIBIOQ 413


Biomarcadores y factoresde riesgo de enfermedadcardiovascular

Leonardo Gomez Rosso 1, Laura Boero2, Tomás Meroño3, Fernando Brites4

1. Dr. de la Universidad de Buenos Aires, becario Post-doctoral deCONICET.

2. Bioquímica, Especialista en Bioquímica Clínica, Area Endocri-nología, Tesista de Doctorado de la Universidad de Buenos Aires.

3. Bioquímico, Tesista de Doctorado de la Universidad de Buenos Ai-res, becario doctoral de CONICET.

4. Director del grupo en formación, Dr. de la Universidad de BuenosAires, Investigador Adjunto de CONICET

Lugar de trabajo: Grupo de Lipoproteínas y Aterosclerosis. Líneas deTrabajo: Hipertrigliceridemia, Resistencia insulínica, Endocrinopatías,Metabolismo del Hierro INFIBIOC-UBA, y Departamento de Bioquí-mica Clínica, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad deBuenos AiresE-mail: [email protected]

Con la finalidad de evaluar biomarcadores y factoresde riesgo de aterosclerosis, este grupo se encuentraavocado al estudio de distintas situaciones patológicas,algunas de ellas con elevada morbi-mortalidad por en-fermedad cardiovascular. Se destacan la hipertriglice-ridemia, endocrinopatías asociadas a resistencia insu-línica (Acromegalia y Síndrome de Cushing), ytrastornos del metabolismo del hierro (Anemia Ferro-pénica y Sobrecarga de Hierro).

Hipertrigliceridemia asociada aresistencia insulínica

Si bien durante los últimos años se han llevado acabo numerosos trabajos tendientes a caracterizar los dis-tintos factores de riesgo aterotrombóticos asociados a lahipertrigliceridemia, aún no se conoce con exactitud silas alteraciones descriptas se asocian inequívocamente ala hipertrigliceridema, independientemente de la pre-sencia de resistencia insulínica. Para dilucidar esta si-tuación se evaluaron pacientes con hipertrigliceridemiay resistencia insulínica (HTG-RI) en comparación con in-dividuos con hipertrigliceridemia sin resistencia insulí-nica (HTG-SRI) y sujetos normotrigliceridémicos sin re-sistencia insulínica (NTG-SRI).

De acuerdo con los resultados obtenidos hasta elmomento (1), al comparar ambos grupos de pacientesHTG con controles NTG-SRI, se observó: a) incrementode triglicéridos a expensas de la lipoproteína de muy

baja densidad (VLDL), b) disminución de colesterol dela lipoproteína de alta densidad (C-HDL), de conocidorol ateroprotector, c) disminución de adiponectina,principal adipoquina insulinosensibilizante y antiatero-génica, y d) aumento de la actividad de la proteínatransportadora de colesterol esterificado (CETP), res-ponsable de modular la composición química de las li-poproteínas. Por otro lado, la comparación del grupo depacientes HTG-RI con aquellos NTG-SRI, mostró au-mentos significativos de la circunferencia de cintura, delC-no-HDL, de la molécula de adhesión endotelial se-lectina E y de la lipoproteína de baja densidad (LDL)oxidada, marcador del proceso oxidativo que tiene lu-gar en el espacio subendotelial y base de la formaciónde la placa ateromatosa.

En conclusión, en los pacientes hipertrigliceridémi-cos, se detectaron alteraciones en el perfil lipoproteico,la adiponectina y la actividad de CETP. La presencia deRI en pacientes HTG se asoció a incremento de los ni-veles de C-no-HDL, de selectina E y de LDL oxidadas, loscuales constituyen fuertes bioindicadores de inflama-ción y activación endotelial. En consecuencia, el riesgode desarrollo de enfermedad cardiovascular de la HTGse vería acentuado por la RI.

Endocrinopatías asociadas aresistencia insulínica (Acromegalia ySíndrome de Cushing)

La enfermedad cardiovascular aterosclerótica es laprincipal complicación detectada en ciertas endocri-nopatías como la acromegalia y el síndrome de Cus-hing, lo cual contribuye a aumentar la morbi-mortali-dad en dichas patologías.

Muchos de los pacientes afectados por estas endo-crinopatías, cuyas etiologías son diferentes en referen-cia al eje hormonal afectado, eje somatotrófico en acro-megalia y eje adrenal en síndrome de Cushing,compartirían una alteración metabólica como es la re-sistencia insulínica. De los datos disponibles en la lite-ratura, resulta difícil discernir las alteraciones debidasa la resistencia insulínica de aquéllas generadas espe-cíficamente por las hormonas cuyo desbalance es pro-pio de las patologías en estudio (acromegalia y sín-drome de Cushing).

Surge, en consecuencia, la necesidad de caracterizarexhaustivamente los factores de riesgo y biomarcadoresde aterosclerosis, lipídicos y no lipídicos, clásicos yemergentes, así como los agentes ateroprotectores enpacientes con estas endocrinopatías.

Los resultados obtenidos en el estudio de pacientescon acromegalia activa (2) mostraron presencia de unperfil lipoproteico aterogénico caracterizado por in-cremento de triglicéridos asociado a disminución de C-



HDL y aumento de la actividad de CETP, parcialmenteresponsable de las alteraciones descriptas. Más aún, losniveles de LDL oxidada (3) se encontraban aumenta-dos, al igual que aquellos de la molécula de adhesiónVCAM-1 y de moléculas de adhesión localizadas en losleucocitos. Por otro lado, los pacientes acromegálicospresentaron elevación de endotelina 1, principal vaso-constrictor del organismo. En la mayoría de estos pa-cientes se observó resistencia insulínica (evaluada através del índice HOMA-R) la cual, de acuerdo con unanálisis de regresión lineal multivariado, se asociaría in-dependientemente al incremento de la LDL oxidada.

En los pacientes con síndrome de Cushing también sedetectó un perfil lipoproteico aterogénico en compara-ción con controles sanos pareados por sexo y edad. Aligual que en el estudio de acromegalia, la mayoría de lospacientes con síndrome de Cushing presentaron resis-tencia insulínica, en este caso asociada a aumento de losniveles de resistina.

Alteraciones del metabolismo del hierro

En referencia a la sobrecarga de hierro, desde elplanteo de la hipótesis del hierro que relaciona los ni-veles elevados con el riesgo de enfermedad cardiovas-cular, hasta la actualidad, los resultados de los estudiosepidemiológicos no han sido concluyentes. Por lo tanto,se planteó como objetivo determinar factores de riesgode enfermedad cardiovascular lipídicos y no lipídicos enpacientes de sexo masculino con sobrecarga de hierroy compararlos con controles sanos pareados por sexo yedad. Los pacientes con sobrecarga de hierro presen-taron resistencia insulínica, la dislipemia aterogénica ca-racterística de esta condición, y alteraciones en las acti-vidades de CETP, paraoxonasa 1 y fosfolipasa A2asociada a lipoproteínas (Lp-PLA2), actualmente con-siderada marcador específico del proceso inflamatoriovascular y de la vulnerabilidad de placa. Estas modifica-ciones metabólicas no sólo se asociaron a la resistenciainsulínica sino también a los niveles de ferritina, mar-cador de los depósitos titulares de hierro (4).

Por otro lado, la anemia por deficiencia de hierro es ac-tualmente una de las deficiencias de micronutrientes más

prevalentes en el mundo. En Argentina se informó unaprevalencia de un 20% en mujeres en edad fértil no em-barazadas. Informes previos sobre alteraciones en el per-fil lipoproteico en pacientes con anemia ferropénica encomparación con controles resultaron controvertidos. Noobstante, estudios realizados en la población general in-dicaron que la presencia de anemia se hallaba asociada amayor riesgo de enfermedad cardiovascular, tanto enhombres como en mujeres. El objetivo de este grupo con-siste en evaluar bioindicadores de inflamación y de en-fermedad cardiovascular en pacientes de sexo femeninocon anemia ferropénica en comparación con controles sa-nas. En los estudios realizados hasta el momento, las pa-cientes anémicas presentaron: a) aumento de triglicéridosy disminución de C-HDL, b) incremento de actividad deCETP, c) disminución de actividad de la enzima antioxi-dante paraoxonasa 1 y d) aumento de actividad de Lp-PLA2. En conclusión, la anemia por deficiencia de hierropodría representar un estado proaterogénico (5).


1. Gómez Rosso L, Meroño T, Benítez MB, López G, GiuntaG, D´Ambrosio ML, et al. Low adiponectin levels in primaryhypertriglyceridemic male patients. Nutr Metab CardiovascDis 2009; 19: 135-9.

2. Boero L, Manavela M, Gómez Rosso L, Insua C, Berardi V,Fornari MC, et al. Alterations in biomarkers of cardiovas-cular disease (CVD) in active acromegaly. Clin Endocrinol(Oxf) 2009; 70: 88-95.

3. Boero L, Cuniberti L, Magnani N, Manavela M, Yapur V,Bustos M, et al. Increased oxidized LDL associated withhigh ceruloplasmin activity in patients with active acro-megaly. Clin Endocrinol (Oxf) 2009; 72: 654-60.

4. Meroño T, Sorroche P, Gómez Rosso L, Casañas L, BoeroL, Arbelbide J, et al. Riesgo cardiovascular elevado en pa-cientes con sobrecarga de hierro. Bioquím Pat Clín 2009;73: 16-21.

5. Meroño T, Sorroche P, Gómez Rosso L, Casañas L, BoeroL, Arbelbide J, et al. Proatherogenic disturbances in lipo-protein profile, associated enzimes and transfer proteinsin women with iron deficiency anaemia. Clin Biochem2010; 43: 416-23.

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PROGRAMA DEHIPERTENSIÓN ARTERIAL

Grupos de Investigación enPéptidos Natriuréticos,Angiotensina y FactoresNeurotróficos en diversos estadosfisiológicos y fisiopatológicos.Grupo de FarmacologíaCardiovascularGrupo: Síndrome MetabólicoExperimental

Belisario Fernández1, Carlos Taira2, Ana María Puyó3, Martín RodríguezFermepin4, Horacio Peredo5

1. Dr. en Medicina, Investigador Principal del CONICET2. Dr. en Farmacia y Bioquímica, Investigador Independiente del CO-

NICET3. Dra de la Universidad de Buenos Aires.4. Dr de la Universidad de Buenos Aires.5. Dr. en Bioquímica, Investigador Principal del CONICET.

Lugar de trabajo: INFIBIOC-UBA y Departamentos de Ciencias Bio-lógicas y de Farmacología de la Facultad de Farmacia y Bioquímicade la Universidad de Buenos AiresE-mail: [email protected]

Los investigadores del INFIBIOC pertenecientes a lasCátedras de Fisiopatología, Farmacología y AnatomíaMacro y Microscópica se encuentran desarrollando unprograma que estudia aspectos fisiológicos, fisiopatoló-gicos y farmacológicos relacionados con la etiopatogeniay el desarrollo de la hipertensión arterial.

Los distintos grupos están integrados por docentes in-vestigadores de la UBA, pertenecientes a la Facultad deFarmacia y Bioquímica y por miembros de la Carrera delInvestigador Científico del CONICET, que participanen proyectos de investigación dirigidos por los Dres. Be-lisario Fernández, Carlos Taira, Ana María Puyó y Hora-cio Peredo, subvencionados por la Universidad de Bue-nos Aires, la ANPCYT y el CONICET, los que cuentancon becarios estudiantes y graduados doctorales y pos-doctorales, de estas Instituciones. Los estudios sobre lahipertensión arterial, están enfocados fundamental-mente en cuatro áreas de investigación básica experi-mental: a) cardiovascular; b) renal; c) endócrina y me-tabólica y d) sistema nervioso central.

Para las investigaciones se desarrollaron metodologíasaplicadas in vivo e in vitro, utilizándose diversas técnicas,entre las que se pueden mencionar, técnicas de biologíamolecular, inmunohistoquímica, radioquímica, ELISA,HPLC, enzimometría, radioinmunoensayo, microdiálisiscerebral e intraarterial, y ensayos biológicos mediante in-fusión y perfusión de drogas. Varios de los trabajos fue-ron realizados en colaboración con investigadores per-tenecientes a otros Institutos y Laboratorios de laUniversidad de Buenos Aires y del CONICET.

ÁREA CARDIOVASCULAR:Evolución de la síntesis y secrecióncardíaca de los Péptidos NatriuréticosANP y BNP durante el desarrollo de lahipertroga de miocardio

Se estudiaron las características y evolución de la sín-tesis y secreción de los Péptidos natriuréticos ANP yBNP en la hipertrofia de miocardio asociada a la hiper-tensión arterial. Se utilizaron modelos de sobrecarga devolumen que desarrollan hipertrofia de tipo excéntrica,modelos de sobrecarga de presión que desarrollan hi-pertrofia de tipo concéntrica y modelos mixtos con am-bas características y con secuencias opuestas. En ellos sevaloraron los perfiles de síntesis y secreción de los pépti-dos y su correlación con valores histomorfométricos, quecaracterizan a la hipertrofia de miocardio, y con registrosde la funcionalidad ventricular. Los resultados mostraronque el ANP se correlaciona con la hipertrofia asociada asobrecarga de volumen y el BNP con la hipertrofia aso-ciada a la sobrecarga de presión, pudiendo considerarseal ANP y al BNP como indicadores bioquímicos prácticospara tipificar la evolución de las hipertrofias de miocar-dio excéntricas y concéntricas respectivamente.

Los estudios constituyeron el tema de la Tesis Docto-rales de la Dra Susana Cavallero y de la Becaria CarolinaCerrudo, originaron 2 publicaciones y fueron realizadosen colaboración con el Dr. Ricardo Gelpi (Instituto dePatología, Facultad de Medicina, y la Dra. Cecilia Hertig(INGEBI, CONICET).

Propiedades farmacodinámicas in vivoe in vitro de bloqueantes beta-adrenérgicos de tercera generación enmodelos de hipertensión experimental

La meta de la presente línea es caracterizar la relaciónentre los niveles plasmáticos y los efectos cardiovascula-res del carvedilol y nebivolol mediante modelos PK-PDy evaluar la actividad de agonismo inverso de los mismos



en distintos modelos de hipertensión experimental. Enratas espontáneamente hipertensas, se estudia la aplica-bilidad de un modelo farmacodinámico Emax modifi-cado para el modelaje PK-PD del antagonista diltiazemen esas ratas. En ratas con hipertensión por coartaciónaórtica, se comparan diferentes modelos farmacodiná-micos para el modelaje PK-PD de verapamilo.

Efectos de fármacos antihipertensivossobre la variabilidad de la presiónarterial y frecuencia cardíaca enmodelos experimentales dehipertensión

El proyecto propone evaluar el efecto de diversos an-tihipertensivos, entre ellos el nebivolol (antagonista beta-adrenérgico de tercera generación), el irbesartán (an-tagonista de receptores angiotensinérgicos AT1), y elverapamilo (bloqueante de canales de calcio), sobre losdiferentes componentes de la variabilidad de la presiónarterial en diferentes modelos experimentales de enfer-medad cardiovascular. También tiene como propósito eldesarrollo de modelos PK-PD mecanicistas para la ca-racterización profunda del mecanismo de acción in vivode los distintos fármacos antihipertensivos bajo estudio.

AREA RENAL:Efectos inhamatorios y gbróticosrenales de una sobrecarga de sodio.Mecanismos gsiopatológicos y suprevención y/o reversión

Se estudiaron los efectos proinflamatorios de la ad-ministración aguda de una sobrecarga de sodio sobreel riñón. Se valoró también la inexistencia de daño his-tológico y de funcionamiento renal. La infusión agudade soluciones hipertónicas de cloruro de sodio produjoprecozmente, en tan sólo dos horas, la sobreexpre-sión en las células tubulares renales y en el intersticiorenal de los principales marcadores proinflamatorios yde fibrosis. El hecho de que se sobreexpresen factoresde hipoxia tisular (HIF), de transcripción nuclear(NFkB) y de crecimiento (Angiotensina II tisular), de-muestra que la sobrecarga de sodio desencadena, al in-crementar el flujo tubular y el trabajo reabsortivo, unacascada de eventos que se inicia por una hipoxia rela-tiva seguida de estrés oxidativo, inflamación tubular yfibrosis. Estos procesos fueron prevenidos y/o reverti-dos con la administración de ANP, bloqueantes de losreceptotes AT1 de la angiotensina II (losartan) y del es-trés oxidativo (tempol). Los estudios se continuaron en

períodos crónicos, obteniéndose resultados conse-cuentes con los del período agudo. Estos estudios cons-tituyeron el tema de las Tesis Doctorales de la Dra Ma-ría Inés Rosón y de la Farm. Silvana Della Penna yoriginaron 6 publicaciones.

Regulación hormonal del metabolismode la dopamina renal. Su incidenciasobre la actividad de la Na+, K+,ATPasa renal.

Se estudió la regulación hormonal del metabolismode la dopamina renal y la actividad de la Na+, K+ATPsarenal por los péptidos vasoactivos ANP y angiotensina IIy por el péptido natriurético renal urodilatin. Se de-mostró que los tres péptidos regulan el metabolismo dela dopamina renal y ejercen efectos directos e indirectossobre la bomba enzimática. El ANP y el urodilatin au-mentan la disponibilidad de DA tubular renal al au-mentar su captación y síntesis e inhibir su catabolismo,inhibiendo además indirectamente la actividad de laNa+, K+ATPsa renal. Estos afectos, fueron opuestos a losde la angiotensina II, natural antagonista fisiológico delos péptidos natriuréticos.

Se demostró, de esta manera, que los péptidos vaso-activos poseen efectos natriuréticos/antinatriuréticos di-rectos e indirectos. Estos últimos se producen a través dela dopamina renal, cuyo metabolismo regulan y de la so-bre activación/inhibición de la Na+, K+ATPsa renal. Es-tos estudios constituyeron el tema las Tesis Doctorales dela Dra Alicia Correa, el Dr. Marcelo Choi y la Bioq. Ma-risa Citarilla, dieron origen a 7 publicaciones y fueron re-alizados en colaboración con el Dr. Jorge Toblli (Facul-tad de Medicina-CONICET, Hospital Alemán).

AREA ENDÓCRINO- METABÓLICAModelo de síndrome metabólico porsobrecarga de fructosa en la rata:alteraciones centrales y periféricas eimplicancias farmacológicas

La sobrecarga dietaria de fructosa induce un cuadroexperimental de sindrome metabólico caracterizado porla presencia de resistencia a la insulina e incremento enla presión arterial (PA). La resistencia a la insulina es unfactor clave para el incremento patológico de la PA,pues estimula sistemas vasoconstrictores y antinatriuré-ticos que provocan cambios morfológicos en los vasossanguíneos, el sistema nervioso central, el riñón y el co-razón. El aumento de la sensibilidad a la insulina en res-puesta al tratamiento farmacológico, podría llevar a la re-versión del cuadro hipertensivo y del daño en órganos

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blanco. La insulina puede activar al sistema nerviososimpático (SNS) a través de vías neuronales intrahipo-talámicas, cuya lesión puede también revertir la hiper-tensión y el daño en órganos blanco.

Se estudiaron: a) el desarrollo de alteraciones meta-bólicas, cardiovasculares y morfológicas provocadas porla sobrecarga oral de fructosa en la rata; b) la expresióny fosforilación de intermediarios de las vías de señaliza-ción de la insulina (MAPK y PI3-K; c) las alteraciones enel metabolismo oxidativo; d) las alteraciones en la acti-vidad del sistema renina angiotensina y SNS; f) los efec-tos de la lesión de áreas hipotalámicas relacionadas conla insulina, sobre parámetros metabólicos y cardiovas-culares; g) los efectos de la resistencia a la insulina y dela dislipemia sobre el desarrollo de alteraciones meta-bólicas, hemodinámicas y estructurales.

Se comprobó que la sobrecarga de fructosa aumentóla trigliceridemia, los niveles plasmáticos de ANP y la PAy disminuyó la relajación de la aorta sometida a estímu-los contráctiles. En el lecho mesentérico se observó en-grosamiento de la túnica media y un incremento de la re-sistencia periférica, con alteraciones en la producción deprostanoides (PR): disminución de la liberación de va-sodilatadores (PGE2) y aumento de vasoconstrictores(tromboxano), lo que sumado a la disminución de otroprostanoide vasodilatador en aorta (PGI2) demuestra undisbalance que propende a aumentar la PA. Asimismo sedetectaron alteraciones en la liberación de prostanoidesen respuesta a la noradrenalina (aumentaron PGI2, TXy PGF2a) y a la angiotensina II (aumentaron PGF2a yPGE2), sugiriendo la existencia de un mecanismo com-pensador de la hipertensión.

También se encontraron alteraciones en el hipotá-lamo anterior, consistentes en una disminución en eltono simpato-inhibitorio de receptores β2-adrenérgicosy en los niveles de NA, conjuntamente con un incre-mento del tono β1-adrenérgico presor, de receptoresAT1 y de la respuesta presora central a la angiotensinaAII, todo lo cual incrementa la actividad simpática y laPA. Los trabajos se realizaron en colaboración con la Dra.Mónica Galleano y los Dres. Daniel Turyn y FernandoDominici (Departamentos de Físicoquímica y QuímicaBiológica de la FFyB-UBA) y el Dr. Alberto Monserrat(Facultad de Medicina, UBA). Estos estudios constitu-yeron el tema de la Tesis Doctoral del Dr. Marcos Mayery dieron origen a 8 publicaciones.

ÁREA SISTEMA NERVIOSO CENTRAL Regulación de la neurotransmisiónnoradrenérgica en el hipotálamo porlos factores neurotrógcos

Se estudiaron los efectos agudos o a corto plazo de di-versos factores de crecimiento (neurotrofinas), relacio-

nados con el desarrollo y la supervivencia neuronal, so-bre el metabolismo de la noradrenalina en el hipotá-lamo. Se demostró que diversos factores neurotróficoscomo el BDNF, GDNF, IL-6, CT-1, LIF y las Neurotrofi-nas 3 y 4 GDNF modulan la captación y/o la liberaciónestimulada presináptica de la noradrenalina en áreas hi-potalámicas estrechamente relacionadas con el con-trol de la actividad simpática y la presión arterial. Se ca-racterizaron el receptor (Trk B) y las distintas vías deseñalización intracelular (PLC y PI3K) involucradas enestos procesos Estos estudios constituyeron el tema dela Tesis Doctoral del Dr. Martín Rodríguez Fermepín yoriginaron 1 publicación.

Estudios farmacológicos en lahipertensión arterial experimental:participación de las víascatecolaminérgicas y otros sistemasen el SNC

En los modelos de hipertensión experimental estáncomprometidos los mecanismos regulatorios, el sis-tema nervioso central y también el tono autonómicoperiférico, los receptores vasculares y cardíacos. Estecompromiso orgánico estaría relacionado con los me-canismos y efectos de los fármacos. Por otra parte, es-tarían interviniendo también modificaciones en losmecanismos de distribución y eliminación de éstos.De ahí es que los cambios y adaptaciones del orga-nismo por esta patología influyen sobre los aspectosfarmacodinámicos y farmacocinéticos de las drogasantihipertensivas. Por ello se investiga cómo se rela-ciona el funcionamiento de vías aminérgicas y del sis-tema renina-angiotensina hipotalámicos y el compro-miso del corazón y vasos, la farmacodinamia y lafarmacocinética de fármacos antihipertensivos (blo-queantes β, antagonistas AT1, antihipertensivos de ac-ción central, etc) en modelos de hipertensión experi-mental.

Estudiando la hipertensión arterial a través de susmodelos experimentales (coartación de la aorta ab-dominal, el genético de ratas espontáneamente hi-pertensas, sobrecarga de fructosa y otros) y el de la-bilidad de presión arterial o de desnervaciónsinoaórtica, el objetivo es estudiar la participación delos adrenoceptores α y β (en especial el subtipo β3 car-díaco y vascular), y el sistema renina-angiotensina enla regulación de la presión arterial y en cambios es-tructurales cardíacos y vasculares y los cambios far-macodinámicos y farmacocinéticos de antihipertensi-vos tales como los antagonistas de adrenoceptores β desegunda y tercera generación y antagonistas de re-ceptores AT1.



COLABORACIONES

Mecanismos farmacocinéticos de lafármaco-resistencia aanticonvulsivantes en un modelo deconvulsión experimental

En relación con la aplicación de la técnica de mi-crodiálisis en estudios de Farmacocinética y Neurofar-macología, se está trabajando conjuntamente con elgrupo de la Dra. Elena Girardi del Instituto de BiologíaCelular “Dr. Eduardo De Robertis”, FM-UBA, tratandode dilucidar los mecanismos farmacocinéticos de lafármaco-rresistencia a anticonvulsivantes en un mo-delo de convulsión experimental por tratamiento con6-mercaptopurina. Para ello, se está estudiando la im-portancia de las bombas de extrusión (GlucoproteínaP) y de diversos transportadores en la concentración delos anticonvulsivantes en el hipocampo de estos ani-males.

Estudio farmacocinético deformulaciones de antivirales

Se está realizando un trabajo en colaboración con losDres. Alejandro Sosnik y Diego Chiappeta del Departa-mento de Tecnología Farmacéutica, FFyB-UBA, paraevaluar la farmacocinética del antiviral efavirenz en dis-tintas formulaciones y vehículos.

Estudio de las actividadesantioxidantes, antiinhamatorias,analgésicas y cardiovasculares deChiliotrichum diffusum (Asteraceae)

Con la Prof. María Luján Flores de la Facultad deCiencias Naturales de la Universidad Nacional de la Pa-tagonia "San Juan Bosco" se están continuando con untrabajo multidisciplinario (farmacognóstico y farmaco-lógico) con el fin de estudiar las plantas patagónicas. Enese marco, se están estudiado las actividades antioxi-dantes, antiinflamatorias, analgésicas y cardiovascularesde Chiliotrichum diffusum (Asteraceae).

Resumen bibliográgco

Choi MR, Lee B, Medici C, Correa AH, Fernández BE.Effects of Angiotensin II on Renal Dopamine Meta-

bolism: Synthesis, Release, Catabolism and Turnover.Nephron Physiol 2010;115 (1): 1-7.

Rosón MI, Della Penna SL, Cao G, Gorzalczany S, Pan-dolfo M, Toblli JE, et al . Different protective actionsof losartan and tempol on the renal inflammatoryresponse to acute sodium overload. J Cell Physiol2010; 224: 41-8.

Cavallero S, Gonzalez GE, Seropian IM, Cerrudo CS,Matorra F, Morales C, et al. Ventricular function andnatriuretic peptides in sequentially combined modelsof hypertension. Am J Physiol Heart Circ Physiol2010; 298 (4): H 1290-9.

Alcalde SM, Taira CA, Höcht C, Córdoba OL, FloresML. Fitoquímica y bioactividad de Chiliotrichumdiffsum (Astereaceae), una especie nativa de la Pa-tagonia Andina. Latin American Journal of Phar-macy 2010; 29 (2): 284-8,.

Giani JF, Muñoz MC, Mayer MA, Veiras LC, Arranz C,Taira CA, et al. Angiotensin-(1-7) improves cardiac re-modeling and inhibits growth-promoting pathways inheart of fructose-fed rats. Am J Physiol Heart Circu-latory Physiol 298 (3): H1003-13.

Chiappetta DA, Höcht C, Taira C, Sosnik A. Efavi-renz-loaded polymeric micelles for pediatric anti-HIVpharmacotherapy with significantly higher oral bioa-vailaibility. Nanomedicine 2010; 5 (1): 11-23.

Mayer MA, Giani JF, Höcht Ch, Dominicci FP, SilbermanEA, Taira CA, et al. Centrally administered insulin po-tentiates the pressor response to angiotensin II. RegPeptides CA (en prensa).

Rosón MI, Cao G, Della Penna SL, Gorzalczany S, Pan-dolfo M, Cerrudo C, et al. High Sodium Diet Pro-motes Profibrogenic Reaction in the Kidney fromNormal Rats. Effects of Tempol Administration. JNephrology CA (en prensa).

La disfunciónmitocondrial en la sepsisAnalía González1ab, Silvia Holod1ab, María Eugenia Elguero2c

María Cecilia Carreras3a,b,c,d

1. Bioquímica, Tesista de Doctorado de la UBA2. Lic. en Genética, Tesista de Doctorado de la UBA3. Dra. de la UBA

a Grupo de Estudios Mitocondriales y Marcadores Tisulares en En-fermedades Inflamatorias y Tumorales. INFIBIOC. UBA

b Departamento de Bioquímica Clínica, Facultad de Farmacia yBioquímica, UBA

c Laboratorio de Metabolismo del Oxígeno, Hospital de ClínicasJosé de San Martín, UBA

d CONICETE-mail: [email protected]

INFIBIOQ 419


La sepsis es una respuesta inflamatoria sistémica aso-ciada con un insulto infeccioso que se desarrolla cuandola respuesta inicial apropiada del huésped a una infec-ción se amplifica y desregula. La mortalidad de estaidentidad es de 30-40% en los pacientes añosos y es ma-yor del 50% en pacientes con shock séptico. El trata-miento antibiótico adecuado durante las primeras horases determinante en su evolución. Los principales sitios deinfección son los pulmones, la cavidad abdominal, eltracto urinario y las infecciones primarias del torrentecirculatorio. El cuadro clínico resultante ha sido deno-minado Síndrome de Respuesta Inflamatoria Sistémica(SIRS) y que se define por la presencia de fiebre o hi-potermia, taquipnea, taquicardia, y leucocitosis o leuco-penia, en el contexto de un paciente con una agresióncapaz de generar los mecanismos inflamatorios. Un diag-nóstico microbiano se realiza en el 50% de los casos y el60% de los mismos se deben a bacilos gramnegativos pro-ductores de endotoxinas (lipopolisacáridos de la paredbacteriana) y el resto a grampositivos. Los agentes in-fecciosos gatillan los mecanismos de respuesta inflama-toria, la mayoría de las veces siguiendo un orden jerár-quico de compromiso creciente de diversos parénquimasy funciones dependiendo de las interacciones entre pa-tógeno y huésped. La respuesta cobra autonomía delagente etiológico a medida que se extiende y despliegamecanismos de defensa frente a los microorganismos yperturbaciones fisiológicas que comprometen las fun-ciones vitales del propio huésped.

El proceso fisiopatológico subyacente involucra la ac-tivación endotelial generalizada y la producción de ci-toquinas, muchas de las cuales estimulan la expresión dela enzima óxido-nítrico-sintasa-inducible en células en-doteliales y del músculo liso vascular, resultando en laproducción de óxido nítrico (NO). En el caso del hígadoy el músculo esquelético, su expresión deriva en formapredominante de las células parenquimatosas, mientrasque en el pulmón por lo menos un 50% proviene defuentes leucocitarias, principalmente neutrófilos. La de-mostración de residuos de nitrotirosina en endotelio eintersticio pulmonar de niños con injuria pulmonar in-ducida por sepsis ha sido interpretada como evidencia afavor de un mecanismo de daño celular mediado por pe-roxinitrito, el cual oxida los lípidos de membrana, pro-teínas y ácidos nucleicos.

En los últimos años, se ha estudiado la participacióndel deterioro de la función mitocondrial en la patogé-nesis de la sepsis. Este grupo ha demostrado el compro-miso de la función mitocondrial diafragmática durantela endotoxemia y la participación de la iNOS en la gé-nesis de este fenómeno a través del aumento en las con-centraciones en el estado estacionario de NO y anión su-peróxido, y su producto de reacción, peroxinitrito (1).El daño mitocondrial por nitración y oxidación de pro-teínas por el peroxinitrito formado sigue una cinética pa-

ralela a la falla contráctil diafragmática. Las mitocondrias generan ATP predominantemente

a través de la fosforilación oxidativa. La cadena de trans-porte de electrones de los complejos enzimáticos y lasmoléculas transportadoras están asociadas a la mem-brana interna mitocondrial. La nicotinamina reducida(NADH) y los dinucleótidos de flavin adenina, produci-dos por la oxidación de nutrientes en el ciclo de Krebs,donan electrones a los complejos I y II, respectivamente.Luego, los electrones son transferidos a los complejos IIIy IV, transportados vía la coenzima Q y el citocromo c, yfinalmente el oxígeno es reducido a H2O. Bajo condi-ciones de alto potencial de membrana, se pueden esca-par electrones desde los complejos I y III, resultando enla formación de anión superóxido.

La presencia de altos niveles de NO en la mitocondriaya sea por internalización de la NOS inducible o por ladifusión del NO sintetizado en el citosol durante losprocesos inflamatorios, produce la inhibición de la ca-dena de transporte de electrones en el segmento b-c delcomplejo III aumentando, a su vez, la formación deanión superóxido (2). La síntesis simultánea de anión su-peróxido y NO en la mitocondria favorece la formaciónde peroxinitrito y el daño de los centros Fe-S, la nitrosi-lación de tioles y la nitración de tirosinas, particular-mente afectando el complejo I en forma progresiva,conduciendo a la inhibición prolongada de la respira-ción mitocondrial (3). Por otro lado, la síntesis de cier-tas subunidades del complejo I disminuye en la sepsis.Este grupo ha observado una reducida actividad delcomplejo I en hígado y músculo esquelético en anima-les sépticos (12 h-post tratamiento con LPS) y en mús-culo esquelético de pacientes sépticos. La limitada velo-cidad de transferencia de electrones a través delcomplejo I restringe críticamente la síntesis de ATP ycontribuye a sostener la producción de anión superóxidoa este nivel traduciéndose en mayor daño. La disminu-ción en la generación de ATP puede comprometer la ac-tividad metabólica celular normal, llevando a la disfun-ción orgánica bioquímica y fisiológica.

Dada la ubicuidad de la producción de NO en la sep-sis, la mayor parte de los órganos y sistemas están some-tidos, de esta manera, a una provisión de energía limi-tada y a una señalización intracelular patológica queconduce a un aumento de la degradación de proteínasmodificadas, una pobre renovación celular y apoptosis,bases celulares de la falla multiorgánica (4).

La nitración de las proteínas circulantes en los pa-cientes sépticos refleja la magnitud del proceso y se co-rrelaciona con la condición clínica y el deterioro orgánico.

De alguna manera, la falla mitocondrial en la sepsis seasemeja a desórdenes genéticos mitocondriales. En am-bos grupos, se afectan varios órganos y tejidos, indi-cando un mecanismo patogénico básico común cuyoselementos constitutivos no están aún completamentedilucidados.




1. Boczkowski J, Lisdero C, Lanone S, Carreras MC, Bove-ris A, Aubier M, et al. JJ. Endogenous peroxynitrite me-diates mitochondrial dysfunction in rat diaphram duringendotoxemia. FASEB J 1999; 13: 1637-46.

2. Poderoso JJ, Carreras MC, Lisdero CL, Riobó NA, Schöp-fer F, Boveris A. Nitric oxide inhibits electron transfer andincreases superoxide radical production in rat heart mi-tochondria and submitochondrial particles. Arch Bio-chem Biophys. 1996; 328: 85-92.

3. Carreras MC, Franco MC, Peralta JG, Poderoso JJ. Nitricoxide, complex I, and the modulation of mitochondrial re-active species in biology and disease. Mol Asp Med 2004;25 (1-2): 125-39.

4. Boveris A, Carreras MC, Poderoso JJ. The regulation ofcell energetics and mitochondrial signaling by nitric oxide.En "Nitric Oxide Biology and Pathobiology". LJ. Ignarro ed,2nd ed. San Diego: Academic Press; 2010. p. 441-82.

Actividad del grupo de Salud Sexual yReproductivaDirector: Ramón A. de Torres1

1. Dr. en Farmacia y Bioquímica, Profesor Emérito UBA. Investiga-dor Principal de CONICET

Lugar de Trabajo: INFIBIOC-UBA y Departamento de Microbiologíae Inmunologíaa de la Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universi-dad de Buenos Aires.E-mail: [email protected]

Este grupo de trabajo se vio potenciado científica yoperativamente con su incorporación al INFIBIOC, enel momento de su fundación. Se trabaja en el área deOptimización de la atención primaria de la mujer enedad fértil, con especial foco en gestantes, integrandouna relación con proyectos de investigación y actividadesvinculadas con la Atención Primaria de la Salud.

a. Proyecto de investigación en factoresasociados al parto pretérmino. Subsidiado porUBACYT (2008-2010 B049: Evaluación defactores de la respuesta inhamatoria comopredictores de problemas gestacionales y parto)

Es importante el impacto que el desarrollo de esteproyecto ha generado en un hospital de la importanciadel Hospital Paroissien en la optimización vinculada alseguimiento y prevención de problemas gestacionales,

sobre todo el problema del parto pretérmino. Integra elgrupo de trabajo la División de Tracto Genital Inferiordel Hospital de Clínicas José de San Martín, UBA y la mo-dalidad de estudio es transferida gradualmente a loshospitales Posadas y Eva Perón.

El objetivo es seleccionar metodologías que realmentetengan valor costo/ beneficio en la predicción y ma-nejo del parto prematuro y transferirlas a la atención pri-maria. Se ha avanzado en el establecimiento de la im-portancia del estudio morfológico del ContenidoVaginal, detección del estado inflamatorio del conte-nido vaginal y problemas gestacionales.

b. Proyecto de Investigación sobre aspectosbiodinámicos en la ecología vaginal en ladisfunción vaginal primaria (VaginosisBacteriana).

Con participación de becarios de la Universidad deBuenos Aires, se desarrolla un proyecto de estudio de larelación de adhesión, formación de biopelículas y re-ceptores en células epiteliales vaginales, con respecto aespecies bacterianas asociadas a vaginosis bacteriana.

c. Proyecto de normatización del diagnóstico deDisfunción Vaginal

Asociado al programa de Salud Sexual y Reproductiva(PROSAR) de la Fundación Bioquímica Argentina(www.fba.org.ar [prosar]) se desarrolla un proyecto con-junto con la Federación Argentina de Sociedades de Gine-cología y Obstetricia (FASGO) y otras Instituciones a los efec-tos de normatizar la atención primaria de la mujer en edadfértil. Se han publicado guías en los años 2008 y 2009 (1)(2)

Copia de la Guía Practica (Vaginosis/Vaginitis) Sepuede obtener sin cargo de www.fba..org.ar (BACOVA yProsar consensos), www.fasgo.org.ar consensos.

d. Proyecto de transferencia de metodología alsistema de atención primaria de la mujer enedad fértil

También asociado a la Fundación Bioquímica Argen-tina (PROSAR), se desarrolla un programa de transferen-cia de metodologías a los profesionales biomédicos. Esprioridad la promoción de las recomendaciones de laGuía Práctica antes mencionada. Se desarrolla en base alsistema de aprendizaje entre pares y se crean agencias re-gionales, que multiplican la realización de talleres partici-pativos, en los que se garantiza el trabajo personal del par-ticipante, vinculado directamente a la atención primaria dela mujer en edad fértil. El resultado de este trabajo se tra-duce en la actualización anual del Manual de Procedi-mientos de Balance del Contenido Vaginal (BACOVA)

El Manual de Procedimientos Balance del Conte-nido Vaginal. BACOVA.2010. www.fba.org.ar PROSAR

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consensos se publica en este número de Acta BioquímicaClínica Latinoamericana.

Como resultado del trabajo de un número significa-tivo de bioquímicos de todas las regiones sanitarias delpaís, se ha construido un mapa epidemiológico de la dis-función vaginal, aplicando todos una misma metodolo-gía, con el más alto valor predictivo (3). Estos resultadoshan sido presentados en Congresos de la Especialidad,tanto en el ámbito bioquímico como de las institucionesmédicas. Copias de estos resultados se encuentran en lapágina de internet de PROSAR o pueden ser solicitados:[email protected]


1. Guía Práctica Integral (Clínica-Laboratorio) de diagnósticode vaginosis-vaginitis en la atención primaria de la (MEF).Actualización 2010. Opciones en Ginecología y Obstetri-cia 2009; 10 (3): 109-27 (Número editado en junio de2010).

2. Guía Práctica Integral (Clínica-Laboratorio) de Diagnósticode vaginosis-vaginitis en la atención primaria de la (MEF).FASGO CIENCIA INFORMA 2008; 71 (1); 43-51.

3. Perazzi BE, Menghi CI, Coppolillo EF, Gatta C, ElisethMC, de Torres RA, et al. Prevalence and comparison ofdiagnostic methods for Trichomonas vaginalis infection inpregnant women in Argentina. Korean J Parasitol 2010;48 (1): 61-5.

Mieloma múltiple. Aporte del laboratorio aldiagnóstico y evoluciónpost-trasplante demédula ósea

Marco A Pizzolato1*

1. Dr. en BioquímicaE-mail: [email protected]

* INFIBIOC- UBA y Departamento de Bioquímica Clínica. Facultadde Farmacia y Bioquímica. Hospital de Clínicas. “José de SanMartín”. UBA.

El Mieloma Múltiple (MM) es una neoplasia de célu-las plasmáticas que infiltra fundamentalmente médulaósea y que ejerce su efecto deletéreo sobre el sistemaóseo, provocando lesiones de tipo lítico que resultancaracterísticas de esta enfermedad.

El principal aporte que brinda el Laboratorio Bio-químico para su diagnóstico radica en la detección deuna Inmunoglobulina Monoclonal, denominada gené-ricamente como componente “M” (CM), que se en-cuentra prácticamente en el 100% de estos pacientes ensangre y/o en orina. Suelen presentar además anemia,hipercalcemia, insuficiencia renal y proteinuria.

El MM constituye el 1% del total de los cánceres y alre-dedor del 10% de las hemopatías malignas, siendo el se-gundo en frecuencia después del Linfoma no-Hodgkin.

El CM fue el primer marcador tumoral específico conel que se demostró una relación directa entre la concen-tración del mismo, producido por el tumor, y la masa ce-lular mielomatosa. Este CM es estructuralmente una in-munoglobulina de origen monoclonal, generalmentetetrapeptídica, con dos cadenas pesadas y dos livianas, aun-que puede estar constituído por fragmentos de las mismas.

La importancia de los estudios de Laboratorio no selimita solamente al aspecto diagnóstico, ya que resultanademás de fundamental importancia en la evaluación dela respuesta al tratamiento, para estimar remisión y re-caída de la enfermedad.

Dentro de las distintas estrategias terapéuticas em-pleadas a lo largo del tiempo, una de las que ha demos-trado mayor tiempo de sobrevida, y de calidad de vidapara el paciente, es el Trasplante Autólogo de célulasprogenitoras de médula ósea (TAMO) (1).

Comparando terapia convencional y TAMO en pa-cientes con MM de reciente diagnóstico en primera lí-nea, pudo demostrarse en todos los trabajos un signifi-cativo incremento en términos de remisiones completas,remisiones parciales, sobrevida libre de enfermedad ytiempo de sobrevida global en aquellos que habían re-cibido TAMO .

Se han establecido distintos criterios para la estadifi-cación clínica de estos pacientes tales como la concen-tración del CM, el isotipo inmunológico, el grado de ane-mia el valor de la proteinuria y la presencia de BenceJones. Últimamente un estudio multicéntrico basó el cua-dro para establecer estadios en la concentración sérica dela Albúmina y de la Beta 2 microglobulina. Los niveles deIL-6 serían una expresión indirecta del grado de apopto-sis de las células del mieloma y de la resistencia a la qui-mioterapia. Mediante técnicas de hibridación in situ(FISH), se ha sugerido que la deleción del cromosoma 13y las traslocaciones más comunes t(4;14), t(11;14), yt(14;16) impactan negativamente en el tiempo de sobre-vida El cambio en la concentración del CM es el criteriode respuesta más importante en el MM y constituye la basedel seguimiento de la enfermedad. La remisión completa(RC) post-TAMO requiere la desaparición del CM por in-munofijación (IF) y una proporción normal de célulasplasmáticas (CP) en médula ósea .

En los últimos tiempos se describió una nueva meto-dología para la cuantificación de Cadenas Livianas Libres( FLC) séricas con una especial indicación como factor



pronóstico en MM “no secretor” y en la Amiloidosis AL.El aporte del Laboratorio resulta de fundamental im-

portancia, no sólo para el adecuado diagnóstico, sinoademás para establecer grado de respuesta y evolución,y en la permanente búsqueda de nuevos parámetros deutilidad en el control de los pacientes con MM, en es-pecial post TAMO.

Referencias bibliográgcas1. Alejandre ME, Madalena LB, Pavlovsky MA, Facio ML, Co-

rrado C, Milone G, et al. Oligoclonal bands and immuno-globulin isotype switch during monitoring of patients withmultiple myeloma and autologous hematopoietic celltransplantation: a 16-year experience. Clin Chem LabMed 2010;4 8 (5): 727-31.

Grupo de HematologíaAplicada

Alberto Lazarowski1, Mabel Lardo2, Amalia Merelli2, Claudia Carbia3, GuillermoRabossi4, Natalia Borda5, EduardoLazarowski6

1. Dr. en Bioquímica UBA.2. Especialista en Bioquímica Clínica Area -Hematología-FFyB-UBA

(Tesista de Doctorado).3. Bioquímico. UBA.4. Bioquímico. UBA Becario Maestría ”IBMS”.5. Estudiante.6. Dr. en Bioquímica UBA (EE.UU.).Autor responsable. E-mail: [email protected] Se presentan las líneas de trabajo de investigación delgrupo y en cada línea figuran los integrantes de INFI-BIOC antes mencionados y sus colaboradoresLugar de Trabajo: INFIBIOC-UBA y Departamento de Bioquímica Clí-nica, Facultad de Farmacia y Bioquímica, UBA

1 - Rol de nucleótidos de purina,particularmente UDP-Glucosa, en laactivación funcional de los PMNneutróglos, y eventualmente si juegaalgún rol en el proceso dediferenciación de las célulasprogenitoras hematopoyéticas Grupo de Investigación: Guillermo Rabossi, Natalia Borda, ClaudioCarbia, Amalia Merelli, Alberto Lazarowski. Hematología, INFIBIOC-FFyB-UBA.

El objetivo del presente proyecto es investigar el pa-pel de distintos nucleótidos purinérgicos sobre la acti-vación y función de polimorfonucleares neutrófilos, par-ticularmente sobre el recientemente descubiertoreceptor P2Y14 que es activado selectivamente por UDP-Glucosa (UDP-G) pero no por otros nucleótidos puri-nérgicos. Uno de los colaboradores de este grupo, el Dr.Eduardo Lazarowski, de la Universidad de Carolina delNorte at Chapel Hill (EE.UU.), ha detectado la persis-tente liberación de UDP-G por las células globet pulmo-nares productoras de muscina y niveles de hasta 500 nMde UDP-G en muestras de esputo de pacientes con en-fermedad fibroquística pulmonar , sugiriendo que dichascélulas pulmonares serían la fuente de secreción activade UDPG en las vías respiratorias. A su vez, tambiénpudo confirmar la alta carga de ARNm del P2Y14R enPMN. Consecuentemente, la UDPG podría desempe-ñar un rol en el reclutamiento de PMN a nivel pulmonarasociado a la inflamación de la enfermedad fibroquística.En base a estas consideraciones, este grupo ha sido el pri-mero en mostrar activación quimiotáctica de PMN porestimulación con UDPG añadida en el medio extrace-lular in vitro. Sin embargo, las vías de señalización intra-celular en PMN, consecutivas a su activación por UDPGsiguen siendo inciertas con muy escaso aporte para su es-clarecimiento en la literatura internacional. Se debe re-marcar también que la progresiva diferenciación celularde la progenie mieloide desde célula progenitora hastaPMN muestra cambios citomorfológicos y funcionalesmuy importantes. Si bien se ha descripto la presencia dereceptores GPR105 (P2Y14) en células stem hematopo-yéticas se desconoce aún cuál sería el rol de estos nu-cleótidos, particularmente la UDPG en dicho procesomadurativo.

Este grupo realizó las primeras pruebas de quimiota-xis de PMNs con cámara de Boyden modificadas en pre-sencia de UDPG, con los primeros resultados positivos(EC50 ≅ 90 nM). El valor EC50 de la quimiotaxis enPMNs promovida por UDPG es consistente con la acti-vación del P2Y14-R, medida como clivaje de inositolfos-fatos inducida por UDPG en células COS-7 que expresanel P2Y14-R recombinante.

También se pudo observar que concentraciones deUDPG (300-400 nM) similares a las detectadas en mucusde pacientes con fibrosis quìstica, promueven una im-portante activación del P2Y14-R y quimiotaxis de PMNs.(Los estudios se realizan con un Subsidio UBACyT 2009-2010 y el apoyo del Dr. Eduardo Lazarowski de UNC-Chapel Hill, NC; EE.UU.)


- Harden TK, Sesma JI, Fricks IP, Lazarowski ER. Signallingand pharmacological properties of the P2Y receptor. ActaPhysiol (Oxf). 2010; 199 (2): 149-60.

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- Carbia C, Caldirola S, Rabossi G, Pitchel M, Merelli A, La-zarowski A, Lazarowski E. Actividad de la UDP-Glucosa enlos neutrófilos humanos.. LIIº Reunión Anual de SAIC. Me-dicina 2008; 68 (Supl. II):210-1.

- Byeong-Chel L, Cheng T, Adams GB, Attar EC, NobuyukiM. P2Y-like receptor, GPR105 (P2Y14), identifies and me-diates chemotaxis of bone-marrowhematopoietic stemcells. Genes Dev 2003; 17: 1592–604.

2- Importancia del EstudioFarmacogenómico del Gen MDR-1 enla resistencia múltiple a drogas en eltratamiento de la Leucemia MieloideCrónica

Grupo de Investigación: Mabel M. Lardo, María T. Cuello, PatriciaM. Gargallo, Michele Bianchini, Sandra Camarero, Graciela Lucero,Benjamín Koziner, Irene B. Larripa, Alberto J. Lazarowski.* Premio: Mejor Trabajo en Hematología Básica. XVII Cong. Arg de

Hematología. Sociedad Argentina de Hematología (SAH) Cór-doba, 2005.

La resistencia celular a drogas anti-neoplásicas repre-senta el mayor problema en oncología clínica y está aso-ciado, entre otros factores, a la expresión y actividad deuna familia de proteínas de membrana conocidos comoABC-transportadores (ATP- Binding - Cassette), debido aque su actividad es dependiente de la hidrólisis de ATP. Elmás importante de los transportadores estudiados rela-cionados a un fenotipo de resistencia en varios tumores só-lidos y en leucemias, es la glicoproteína-P(P-gp) codifi-cada por el gen MDR-1. La Leucemia Mieloide Crónica(LMC) es una enfermedad mieloproliferativa originadaen la Stem Cell Hematopoyética (SCH) caracterizada porun marcador molecular originado por la fusión de dos ge-nes, denominado BCR-ABL. Dentro de los tratamientosde elección se encuentra un inhibidor de Tirosin Kinasa(TK), el Imatinib. Un porcentaje significativo de pacien-tes con LMC presentan recaída de la enfermedad asociadaa resistencia a drogas. La importancia de estudiar en unmodelo biológico de LMC en progresión (K562) los ni-veles de expresión de genes relacionados con el transportede drogas hacia el exterior celular, tales como el MDR1 yel BCRP, fue el principal objetivo de este grupo para en-tender así los mecanismos de resistencia al tratamiento.Dentro de los resultados obtenidos hasta el momento sehan podido establecer al igual que otros grupos de tra-bajo, una correlación entre el nivel de expresión del genMDR-1 y el grado de sensibilidad/resistencia al trata-miento con Imatinib en el modelo wild tipe de la Línea ce-lular K562. Se logró demostrar una alta expresión de lasproteínas P-gp y BCRP por métodos inmunocitoquímicosy comprobar el grado de funcionalidad de las mismas conun sustrato de la bomba como la Rho-123. Se verificó que

el tratamiento con inhibidores específicos de la Pg-p,talescomo ciclosporina, o inhibidores de mTOR (rapamicina),mejoraban el grado de sensibilización de las células resis-tentes permitiendo esto plantear nuevas estrategias detratamiento. Con este futuro prometedor nos propone-mos dirigir la investigación hacia los cambios polimórficosen el gen MDR-1, dado que podrían tener un impacto fár-maco-genómico sobre los factores de pronóstico y la so-brevida de los pacientes con Leucemia Mieloide Crónicaque son tratados con Imatinib.

Referencias bibliográgcas- Lardo M, Lazarowski A, Cuello MT; Gallardo P, Bianchini

M, Larripa I. Gen MDR-1 y resistencia al imatinib en cé-lulas K562. Hematología 2007; 11, 1: 14-9.

- Dulucq S, Bouchet S, Turcq B, Lippert E, l EtienneG, Reiffers J et al. Multidrug resistance gene (MDR1)polymorphisms are associated with major molecularresponses to standard-dose imatinib in chronic mye-loid leukemia. Blood 2008; 112: 2024-7.

3- Efectos de la Epo recombinantehumana sobre la actividad motoraespontánea en ratas sometidas ahipoxia cerebral focal por inyeccióncortical de Cl2Co

Grupo de Investigación Amalia Merelli1, Laura Caltana2, Javier Ra-

mos2, Alicia Brusco2 y Alberto Lazarowski1 (1. Hematología-INFI-

BIOC-FFyB-UBA; 2. IBCN-Fac. de Medicina-UBA-CONICET)

* Premio: “Dr. Alfredo Macchi”, XVIII Congreso Argentino de He-matología. Sociedad Argentina de Hematología: Salta, 26 de Oc-tubre, 2007.

* Selected Presentation. Neuroscience (SfN) Washington DC -No-viembre 2008.

El presente estudio tiene por objetivo la caracterizacióndel daño provocado por la inyección directa a nivel cor-tical (cerebral) del hipoxiante químico Cl2Co, y el po-tencial uso terapéutico (neuroprotector) de eritropoye-tina recombinante humana (rHu-Epo) en dicho modelo.La característica más sobresaliente de este modelo es queel Cl2Co permite un uso controlado de la dosis y la admi-nistración del mismo en una región cerebral definida y deinterés específico que en nuestro caso es un área de com-promiso motor. El Cl2Co a bajas dosis (50mM), ha mos-trado producir lesiones compatibles con las observadas enotros modelos de hipoxia cerebral focal, y documentadaspor diferentes metodologías (TTC; Hoesch, Tunnel) y mi-croscopía electrónica. La respuesta de los diferentes tiposcelulares cerebrales, mostró una importante activación delfactor de trasncripción HIF1-�, que perduró en el tiempo



(5 días post insulto hipóxico), y se asoció a la produccióny coexpresión del receptor de eitropoyetina (Epo-R) y dela glicoproteína P-gp, producto del gen de resistenciamúltiple a drogas MDR-1.

La administración intraperitoneal de rHu-Epo a ratascontroles no hipóxicas, produjo un incremento en los re-ticulocitos circulantes, indicando una acción interespeciepositiva. En este contexto, la actividad motora espontánea(AME) medida por las pruebas de Open Field y Rotarod,mostró un decaimiento progresivo en las ratas sometidasa la hipoxia focal, en tanto, las ratas sometidas a la mismahipoxia pero tratadas con rHu-Epo administradas por víaintranasal, mostraron una AME con valores persistente-mente idénticos a los basales preinjuria, sin incrementode los reticulocitos circulantes. Este hecho valida la utili-zación de la rHu-Epo por vía intranasal sin riesgo deefectos eritropoyéticos periféricos, pero funcionalmenteactiva ante la presencia de alta expresión del Epo-R y a pe-sar de la concomitante alta expresión de la glicoproteínaP-gp en los mismos tipos celulares cerebrales.


– Lazarowski A, Caltana L, Merelli A, Rubio MD, Ramos AJ,Brusco A. Neuronal mdr-1 gene expression after experi-mental focal hypoxia: a new obstacle for neuroprotection?J Neurol Sci 2007; 258 (1-2): 84-92.

– Caltana L, Merelli A, Lazarowski A, Brusco A. Neuronaland glial alterations due to focal cortical hypoxia inducedby direct cobalt chloride (CoCl2) brain injection. NeurotoxRes 2009; 15 (4): 348-58.

Transferencia de laevolución delconocimiento de lavirología a la atenciónprimaria en la Argentina

Celia E. Coto1, Ramón A. de Torres2

1. Dra. en Ciencias Químicas. Profesora titular consulta. Facultad deCiencias Exactas y Naturales. UBA.

2. Dr. en Farmacia y Bioquímica. Profesor titular emérito. Facultadde Farmacia y Bioquímica. UBA.

E-mail: [email protected]

“Los progresos de la medicina podrán considerarse verdaderoslogros para la humanidad cuando todas las personas tenganacceso a sus beneficios y dejen de ser un privilegio para las mi-norías”. René FAVALORO

IntroducciónVamos a presentar un brevísimo ensayo crítico sobre

cómo el avance logarítmico del conocimiento científicouniversal de la Virología fue utilizado en la Argentinapara mejorar la prevención y atención primaria de la sa-lud humana.

La información pública disponible nos exime de haceruna enumeración enciclopedista de los adelantos cientí-ficos de la Virología, concretados en los últimos cin-cuenta años. En cambio, hemos preferido contribuir a ladiscusión de cómo adecuar y asegurar la transferencia deladelanto científico universal a la optimización de los in-dicadores de salud de nuestro país, con costo beneficiopositivo y no presionados por el marketing farmacéutico.

Inspirados en Favaloro, creemos en la necesidad deun programa orgánico, basado en una sólida decisiónpolítica estatal, para encarar la producción nacional devacunas y reactivos diagnósticos, estrictamente necesa-rios y en cantidad suficiente para resolver problemasprioritarios de las patologías virales humanas.

Los registros del CONICET y del sistema de Acredi-tación del Ministerio de Educación, para el personalUniversitario y personal hoy actuante en la Industriaprivada agropecuaria, demuestran que la masa crítica devirólogos soporta con exceso el requerimiento de los re-cursos humanos que el programa requiere.

1900 a 1950: “Fuimos capaces”En la primera mitad del siglo XX, se producían en la

Argentina vacunas contra la viruela y la rabia. El resul-tado de un plan exitoso de su utilización, hace que nues-tro país complete al mismo tiempo que los primeros pa-íses del mundo, la etapa de erradicación de viruela

Ante un brote epidémico de viruela, la vacuna pro-ducida por el Instituto Nacional de Microbiología, fueutilizada en Inglaterra.

Desde hace varios años no hay casos de rabia humanay está ausente la rabia canina en el país. Ante el desin-terés industrial (vacuna para humanos) el Estado liderócon éxito, con los altibajos lógicos, la solución integral(atención primaria y prevención) del problema de vi-ruela y mantiene el control de rabia.

Situación actualEn la segunda mitad del siglo XX, desde 1950 en

adelante, el vertiginoso adelanto en la virología no fueabsorbido por la dirigencia político/empresarial en elámbito de la salud humana en la Argentina.

Por el contrario, el desarrollo del recurso humano enVirología en el marco académico integral, creció, aportóy sigue aportando a la ciencia. No intentamos ahora dis-

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cutir causalidad, pero sí dejar establecido que el estadogravísimo de dependencia en la producción de vacunasy reactivos diagnósticos de enfermedades virales, se debea la falta de decisiones y desorden político, pero de nin-guna manera a un déficit de recursos humanos y de po-sibilidad de financiamiento.

Factor concluyente en la toma dedecisiones

Toda patología debe analizarse para tomar decisiones,en función de su dimensión, repercusión social y vulne-rabilidad a los conocimientos científicos que disponemospara su diagnóstico, tratamiento y prevención. Es muy di-fícil lograr un equilibrio global de la inversión en saludpara todas las enfermedades virales. La repercusión so-cial tiene una importancia sustancial, en cuanto es la quemueve las decisiones políticas.

El diagnóstico de infecciones viraleshasta 1975

En salud humana hasta 1975, con excepción de la ra-bia (con cobertura regional pero siempre en institucio-nes especializadas), el diagnóstico de infecciones viraleshumanas estuvo confinado a proyectos de investigaciónpuntuales y vigilancia epidemiológica, en el InstitutoNacional de Microbiología, el Instituto de Virología deCórdoba (creado en1958) y la Cátedra de Microbiologíade la Facultad de Medicina de la UBA.

El trabajo de esta última unidad con colaboraciónde otros grupos definió científicamente la Fiebre He-morrágica Argentina, llegando al desarrollo de una va-cuna preventiva. El intento de la producción nacionalde la vacuna ha tomado un largo tiempo, que nuncadependió de problemas de recurso humano, ni de in-versiones, sino de la inestabilidad de las decisiones po-líticas.

“Somos capaces”

A partir de marzo de 2007, la candid 1, producida enel Instituto Nacional de Enfermedades Virales Humanas(ANLIS .INEVH), ciudad de Pergamino, Buenos Aires,ha sido aprobada por el ANMAT, para proteger contra laFiebre Hemorrágica Argentina e incorporada al Pro-grama Nacional de Inmunizaciones.

El Instituto Biológico de La Plata desarrolla una acti-vidad contínua y eficiente en el ámbito del diagnósticoy producción de vacuna antirrábica.

Una empresa privada en la Argentina, produce unavacuna contra Hepatitis B, con modernas tecnologíasaprobada por ANMAT.

La inmunología, la repercusión socialy la economía, permiten la primeratransferencia del diagnósticovirológico a la Atención Primaria

La metodología fundacional de la Virología, aisla-miento de virus en animales de laboratorio y cultivos ce-lulares y la microscopía electrónica, limitaron y limitansu aplicación a la atención primaria.

El primer gran impacto de transferencia de la inves-tigación virológica al diagnóstico asistencial con cober-tura social posible, fue el diagnóstico de Hepatitis B. Lametodología, por primera vez, era practicable en hospi-tales y laboratorios periféricos. En 1978 el INOS incor-poró al nomenclador Bioquímico, las metodologías dediagnóstico de Hepatitis B.

En los comienzos, inmunodifusión, contra inmunoe-lectroforesis y radioinmunoenzayo, con sus diferenciasde valor predictivo y costos, mostraron ser efectivas endiagnosticar humanos infectados. La Hepatitis B nuncatuvo repercusión social per se, pero la posibilidad de re-ducir la transmisión de la enfermedad al transfundirsangre generó una necesidad ética, rápidamente absor-bida por la sociedad, y el control en el banco de sangrefue y es una decisión política ineludible.

El patentamiento de procesos y la producción indus-trial se vio asegurada. En nuestro país se deben contro-lar no menos de 750.000 donantes anualmente.

No hay ningún diagnóstico imposibleen la virología actual

La inmunología genera la eficiencia y miniaturizaciónnecesaria para ayudar a la humanidad frente a un pro-blema como el que plantean aún hoy las hepatitis vira-les.

A partir de 1981 se genera un problema epidemioló-gicamente similar al de Hepatitis B, con la generaliza-ción de la infección por HIV, con la mayor repercusiónsocial en toda la historia de la Medicina.

El conocimiento virológico actual es suficiente paraofrecer diagnóstico de laboratorio eficiente para todaslas enfermedades virales conocidas y en especial para lainfección con HIV .

Lo que define su transferencia a la atención primariaes cuando en realidad el diagnóstico define la toma dedecisiones inmediatas de tratamiento (si lo hay, real con-



cepto de atención primaria de la salud) o por riesgosepidemiológicos.

Los casos de influenza y dengue han quedado sufi-cientemente claros en virtud de los episodios del año2009: lo que se requiere es la identificación epidemio-lógica del agente circulante, pero no necesariamente eldiagnóstico individual.

Se encuentra en plena discusión el verdadero costobeneficio del diagnóstico preventivo de la infección porHPV y/o la inmunización por vacunas, presionado porel marketing industrial. En este caso puntual lo que debeasegurarse en forma prioritaria, que es lo expresado porel Ministerio de Salud de la Nación, es la cobertura de losestudios citológicos a todas las mujeres.

La base de la detección de antígenos y/o anticuerposutilizando infinitas variables operativas, asegura la dispo-nibilidad de diagnóstico de todas las enfermedades virales.

En la actualidad, antígenos altamente específicos sepueden producir por biosíntesis mediante clonado. Laproducción de anticuerpos monoclonales permite la de-tección de antígenos virales con un alto grado de sen-sibilidad y especificidad.

El perfeccionamiento y la miniaturización de la de-tección de la reacción específica antígeno/anticuerpotransferible a la atención primaria, han variado desde lainmunodiufusión, fijación de complemento, inmuno-fluorescencia, enzimoinmunoensayo, radioinmunoen-sayo, quimioluminiscencia entre las metodologías demayor aplicación, en distintos soportes, culminando conprocesos totalmente automatizados.

La detección de anticuerpos es de gran valor predic-tivo para demostrar infección, pero en general requieredel transcurso de un tiempo de evolución, que se cum-ple luego de superado el período agudo. Por eso no estan útil para el diagnóstico de primoinfecciones y es mu-chas veces complicado en la interpretación de recu-rrencias en patologías crónicas.

La detección de antígenos por via inmunológica estávigente, pero se ve en muchos casos superada en sensi-bilidad y especificidad, por la amplificación génica, encuanto a detectar la presencia de virus y/o fraccionesmoleculares del mismo.

La ampligcación génica conmueve elfuturo del diagnóstico virológico en laAtención Primaria

En los últimos años las ciencias biológicas han sidoconmovidas por el desarrollo de estudios de secuencia-ción, identificación y amplificación biológica de genes.

Polymerase Chain Reaction (PCR) es la denominaciónpopular de un proceso complejísimo sobre el que hoy yaexisten numerosas variables. Permite identificar genes vi-rales, presentes en formas biológicas muy distintas.

Como ser: integrando una partícula viral entera, pre-sencia del ácido nucleico viral “entero” sin existencia departículas, pedazos del genoma, “sueltos” o integradosa cromosomas celulares.

La amplificación génica es una metodología que norefiere al perfeccionamiento de otra ya existente (comoocurre con la inmunología), ni que el agente sea capazde infectar un nuevo huésped, es un nuevo principio fi-losófico de la identificación de virus. Como hemos plan-teado antes “dice que hay nada más que de un pedazo deun gen de un virus”.

No es parte de una especialidad clásica y pone en unasola bolsa la detección de “genes”, cualquiera sea su origen.

Hoy la vigencia de las patentes, que protegen la ren-tabilidad sobre los costos de desarrollo, de los reactivosdisponibles en el mercado, hacen que estas determina-ciones tengan altos costos.

La realidad futura es otra

PCR ha venido para quedarse por la tremenda capa-cidad de información que genera, con la más alta efi-ciencia en la detección de genes virales.

Es la apología de la miniaturización. Un gran nú-mero de muestras, en el que se pueden estudiar simul-táneamente un número importante de distintos virus, seresuelve en horas. Esto en un espacio adaptable a cual-quier institución asistencial, atendido por un personal re-ducido y en condiciones de bioseguridad fácilmentecontrolables, en relación al laboratorio donde se efec-tuan aislamientos de virus. Evita el uso de cientos de tu-bos, placas, litros de medios de cultivos, estufas, anima-les de laboratorio, reciclamientos de descontaminacióny personal especializado en diferentes áreas. En granparte, los sistemas actuales tienen un grado de automa-tización avanzado.

Entre muchos avances realmente significativos de laAmplificación Génica, de aplicación directa en la aten-ción primaria, es la posiblidad de medir la llamada cargaviral, que informa al clínico la evolución de la cantidadde virus que se produce en el paciente en enfermedadescrónicas como VIH, pero es extensible a otras patologías.

Hay un solo problema que empalidece este pano-rama de optimismo…vamos a pasar mucho tiempo hastaque podamos interpretar todos los resultados y aplicar-los a un mejor manejo clínico de nuestros pacientes enatención primaria de la salud.

Los equipos requeridos, sobre todo los de avanzada(PCR en tiempo real) aún tienen precios importantes, enlos que se cargan los costos de desarrollo y que van a es-tabilizarse a corto plazo, pero aun así, con las ventajasoperativas que ofece su utilización, son rápidamenteamortizables.

En cuanto a la producción de reactivos para el des-arrollo de PCR en nuestro país ya se producen todos los

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reactivos básicos para el desarrollo de pruebas de la lla-mada PCR casera.

Conocimiento cientígco y producción

Queda claro entonces que el desarrollo del conoci-miento científico (hoy abrumador), permite disponer,de un medio diagnóstico útil (aplicable en atención pri-maria) para prácticamente todas las enfermedades vira-les humanas conocidas.

La posibilidad de su aplicación con equidad social de-pende de la producción del sistema diagnóstico en ca-lidad, cantidad, continuidad y racionalidad económica,para lograr la cobertura a todo habitante del país que clí-nicamente lo requiera.

Lo que hay que establecer es: en qué casos el diag-nóstico de la etiología viral específica, modifica positi-vamente la evolución del paciente de forma de hacerloéticamente necesario.

Establecer que en los casos de real necesidad, éstadebe estar asegurada a todo habitante del país.

Si no hay cobertura… es como dijo el Profesor Dr.René Favaloro, no es un logro útil.

Producción de vacunas y reactivosbiológicos en la Argentina

No es nuestra especialidad la economía. Pero es ele-mental que hay dos sistemas polares en salud, segúncomo esté basado y se inicie el algoritmo de ejecución:Solidadridad y Rentabilidad.

El nuestro es fragmentado en tres: Solidario. SectorPúblico, los Argentinos pagan impuestos y el Estado pro-vee salud a 22 millones de habitantes, los trabajadores dela salud cobran un sueldo digno.

Hay otro grupo solidario, el de las Obras Sociales, Es-tatales y Sindicales, (17 millones de habitantes) en lasque además de los impuestos, los individuos pagan unamensualidad, que la organización utiliza en su totalidadpara brindar salud. El otro sector es el Privado y Prepa-gas. Este último no es solidario, los beneficiarios paganimpuestos y una cuota mensual a la institución. Estapresta salud de acuerdo con contratos preestablecidos,pero no menos del 35% de total va a cuentas persona-les de un grupo reducido de “dueños”.

En este grupo se establece el concepto de que prestarsalud es una empresa rentable.

Los indicadores de la Organización Mundial de la Sa-lud muestran que los países líderes desarrollan programassolidarios en los que el Estado asegura a la población laasistencia y prevención de la salud. Los estados en los quela actividad de los centros de Salud ofrecen acciones quese cotizan en la bolsa, tienen un porcentaje de no menosdel 20% de la población sin ninguna atención médica.

La producción de vacunas y reactivos biológicos paraenfermedades virales, para satisfacer racionalmente unpaís como la Argentina, no depende solamente de unamasa critica científica y técnica, que sí se dispone, sinode una decisión política de ponerla en el sistema soli-dario de producción nacional o mantenerla dependientedel sistema rentable.

De qué depende entonces la atenciónprimaria en Virología

Alrededor del año 1970 se creó la Sociedad Argentinade Virología. Los resultados de los Congresos de la So-ciedad Argentina de Virología y las publicaciones Ar-gentinas (Nacionales e Internacionales) muestran unnivel de excelencia humana en calidad y cantidad. Estogarantiza la base de la organización de un sistema de pro-ducción nacional de vacunas, productos biológicos ymedicamentos.

La cobertura de las infecciones virales debe comenzarcon una inmediata actualización de las Guías de Procedi-mientos, estableciendo el uso racional del diagnóstico vi-rológico en los problemas de atención primaria de enfer-medades agudas. Garantizando su utilización sólo enaquellos casos en que ese diagnóstico genera una mejora(costo beneficio positivo) de la calidad de vida del paciente.

Diferenciar claramente de los procedimientos asocia-dos a detección y calificación de brotes epidémicos, res-ponsabildad absoluta en manos de las redes estatales.

De la atención de problemas de salud de gran com-plejidad como transplantes y diagnóstico y seguimientode enfermedades crónicas, como hepatitis virales y VIH.De hecho, el control de bancos de sangre.

Este tema viene siendo discutido en el Grupo de Ges-tión de Políticas de Estado en Ciencia y Tecnología(www.saic.org.ar , www.grupogestionpoliticas.blogspot.comy para comunicarse [email protected] ).También existen organizaciones que seriamente estántrabajando con estas ideas y esto requiere de una ampliadifusión y del apoyo crítico participativo de toda la co-munidad biomédica Argentina.

El pasado ejemplo de la pandemia de H1N1 del 2009muestra que la presión de la industria sobre las autori-dades políticas y las organizaciones nacionales e inter-nacionales de salud, opaca seriamente la validez de lasdecisiones que se toman.

La falta de una sólida organización nacional sin con-flictos de intereses, que garantice concretar una actuali-zación epidemiológica, que asegure la programación dela producción de insumos realmente necesarios y efi-cientes, lleva a costos de cifras cuantiosas, irracionales e in-útiles.



Bioquímica y biología degalectinasNilda Ester Fink1, Mariana Marta González2

1. Dra. de la UNLP2. Magister en Ciencias del Laboratorio Clínico

Lugar de trabajo: INFIBIOC-UBA. Área Bioquímica Clínica, De-parta-mento de Ciencias Biológicas y Maestría en Ciencias del la-boratorio Clínico, Facultad de Ciencias Exactas- UNLPE.mail: [email protected]

Las lectinas son proteínas que tienen la capacidad deunir hidratos de carbono, monosacáridos u oligosacáridossimples. Pueden ser de origen vegetal y animal, habiéndoseclasificado a estas últimas en cinco familias, de acuerdocon su estructura primaria (1), a saber: lectinas tipo C, lec-tinas tipo I, lectinas tipo P, pentraxinas: y galectinas.

Las galectinas constituyen una familia de proteínasque ligan hidratos de carbono que previamente fueron co-nocidas como lectinas de tipo S o S-Lac. Constituyen una fa-milia filogenéticamente conservada que contiene se-cuencias de aminoácidos características compartidas ydominios de reconocimiento a hidratos de carbono(CRD) (2). Todas las galectinas unen lactosa y otros oli-gosacáridos β-galactosídicos (3). Se han identificado 15 ga-lectinas de mamíferos, siendo designadas como Gal-1 aGal-15 (4)(5). Los CRD de todas las galectinas compartenafinidad por el ligando N-acetillactosamina- un disacá-rido común que se encuentra en muchas glicoproteínascelulares- aunque las galectinas individuales, tambiénson capaces de reconocer modificaciones de este ligando,desarrollando múltiples especificidades (6). Se clasificande acuerdo a su estructura bioquímica en (7): 1- Galecti-nas protipo: contienen un CRD, reconocen estructurassimples de hidratos de carbono disacáridos. Están incluí-das dentro de este grupo, las galectinas 1, 2, 5, 7, 10, 11,13, 14 y 15. Se encuentran como monómeros (galectinas1, 5, 7, 10) o como homodímeros (galectinas 1, 2, 11, 13,14, 15), 2- Galectinas tipo quimera: la galectina 3 es elúnico miembro de esta familia, contiene un CRD y un do-minio no lectínico. 3- Galectinas en tandem: contienen dosCRD estructuralmente distintos conectados, permitiendoque interaccionen con hidratos de carbono diferentes.Pertenecen a este grupo, las Galectinas 4, 6, 8, 9 y 12. Lasgalectinas se expresan en diferentes tipos celulares tantoen animales, en vertebrados mamíferos y no mamíferos einvertebrados y también se encuentran en plantas. Care-cen de la secuencia señal secretoria, por lo tanto no siguenla ruta clásica de secreción R.E./aparato de Golgi, pero sinembargo, algunas galectinas se encuentran en el espacioextracelular o en la superficie celular. Esta externalizacióninusual, podría prevenir la asociación de la galectina conglicoconjugados que son procesados en las vesículas se-

cretorias normales (8). A través de estudios de localizaciónde las galectinas se sabe que estas proteínas pueden se-cretarse en múltiples compartimentos celulares depen-diendo del estatus celular (9)(10). La Gal-1 es un homo-dímero de subunidades de 14 kDa. Dado que lasgalectinas son una familia de proteínas filogenéticamenteconservadas, la identidad entre dominios que ligan hi-dratos de carbono de distintas galectinas de una especiede mamífero es de 20-40 por ciento y la homología de laGal-1 entre distintas especies es de 80-90 por ciento (2)(3).

En el marco de una línea de trabajo sobre bioquímicay biología de lectinas animales, nuestro proyecto de tra-bajo refiere particularmente a Galectina-1 de diferen-tes orígenes. Así, en trabajos previos se estudió Gal-1 endistintas especies, órganos y células (ovario de Rhinellaarenarum, bazos de origen porcino, bovino y humano yen células de la sangre). Anteriormente se expusieronneutrófilos y porcinos a Gal-1 esplénica porcina, con-firmando la presencia de receptores en superficie a tra-vés de la medida de activación y degranulación de losmismos (11). Durante estudios de IFI , hechos en pa-ralelo, con PMN humanos (12), se observó que las pla-quetas (PltH) contaminantes daban reacción positivapara la detección de Gal-1 endógena, hecho éste que mo-tivó para iniciar estudios en PltH.

Recientemente se demostró que la Gal-1 esplénicaporcina interacciona con plaquetas humanas en reposoy luego de la activación con trombina (Tr), comparablecon resultados hallados con Gal-1 obtenidas de otras es-pecies. En relación a nuestros estudios sobre la interac-ción de plaquetas humanas con Gal-1 exógena, se ob-servó que la Gal-1 esplénica porcina interacciona con lasPltH induciendo a agregación dependiente de la con-centración de lectina. En particular en plaquetas, variosautores han demostrado que la Gal-1 de diferentes es-pecies produce agregación en relación dosis-depen-diente. Así, se evidenció dicho comportamiento utili-zando Gal-1 bovina (13) y con Gal-1 recombinantehumana (14). Se sabe que el receptor GPIIb/IIIa es unmiembro de la familia de las integrinas, se encuentra enla superficie de plaquetas en reposo y, también en el in-terior de la plaqueta, principalmente en los gránulos α,en los cuerpos densos y en las membranas que delimitanel sistema canalicular abierto; estos receptores son ca-paces de unirse a la membrana plasmática cuando lasplaquetas son activadas y sufren la reacción de secreción(15, 16). Pacienza, et al. (14), demostraron que la inter-acción de la Gal-1 recombinante humana en plaquetashomólogas provoca cambios conformacionales en losreceptores GPIIb/IIIa; dichos cambios favorecerían el fe-nómeno de activación. Además, se observó que, en pla-quetas activadas con Tr, previo al agregado de Gal-1 es-plénica porcina, el número de receptores detectadosaumenta con respecto a las plaquetas incubadas única-mente con la misma concentración de lectina. Estos re-sultados coinciden con los datos informados previa-

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mente, y sugieren que la activación plaquetaria previacon Tr, favorece sinérgicamente la interacción Gal-1/re-ceptor de membrana plaquetaria.

No sólo se observa que Gal-1 per se activa PltH lavadas,en reposo, al igual que Tr, sino que hay un sinergismoentre ambas. Este efecto agonista podría deberse a lainteracción de la Gal-1 con el complejo GPIIb/IIIa, yaque ambas moléculas interaccionan con receptores de lafamilia de las integrinas. Dada la enorme variedad de li-gandos con los que se une Gal-1 (17) no se puede des-cartar que otros receptores en común presentes en laPltH, puedan ser activados.

También fue de interés profundizar en las condicionesde interacción con Gal-1, por lo tanto, se aumentó el nú-mero de variables, tanto la concentración de la Gal-1 conla cual se incubaron las plaquetas en reposo y activadas,como el grado de activación plaquetaria. Los resultados deCF en plaquetas en reposo adicionadas con concentra-ciones crecientes de Gal-1, demuestran que la interacciónlectina/receptor es concentración dependiente.

Se ha descripto una diversidad de comportamientosque suele caracterizar a la Gal-1, provocando bajo ciertascircunstancias, efectos estimulatorios o inhibitorios comola adhesividad o la anti-adhesividad, la proliferación o lainhibición de la proliferación. Dependiendo dicho com-portamiento, del tipo de células, su estado de activación,expresión y estado de glicosilación de receptores en su su-perficie, de la proporción monómero-dímero de Gal-1presente y de la distribución intra vs. extracelular. Tam-bién se llevaron a cabo estudios para confirmar los ha-llazgos iniciales sobre la presencia de Gal-1 endógena enPthl. Para evidenciar la expresión de Gal-1 endógena ensuperficie y detectar los receptores totales de Gal-1 enplaquetas humanas se realizaron ensayos mediante IFI yCF. Los resultados preliminares (18)(19), demostraronque existe expresión de Gal-1 endógena en plaquetas enreposo, tanto por IFI como por CF. En estudios de la pro-teómica plaquetaria, Martens L et al. (20), encontraronque Gal-1 es parte del proteoma plaquetario, conside-rándola como una proteína menor. Coincidente con es-tos datos, se estudiaron los perfiles de expresión génicade células megacariocíticas derivadas de CD34 normalesy malignas de pacientes con TE (Trombocitemia Esen-cial), y encontraron que existe una desregularización delos genes proapoptóticos en los megacariocitos malignos,tales como BAX, BNIP3, BNIP3L y miembros del com-plejo PT mitocondrial (21). En el mismo estudio obser-varon una reducción en la expresión del gen LGALS1(Gal-1), siendo este último un factor proapoptótico.

Con el objeto de profundizar en el conocimiento deGal- 1 y plaquetas, en nuestro laboratorio se realizaronexperiencias focalizadas en diferentes objetivos quecomplementan trabajos previos. Así, datos prelimina-res fueron comunicados recientemente (22) sobre loscambios en la ultraestructura plaquetaria que provoca lainteracción de Gal-1 esplénica porcina en PltH. Asi-

mismo, se observaron cambios característicos de activa-ción plaquetaria drástica en las plaquetas activadas conTr y adicionadas con una concentración fija de Gal-1 0.5μM. En base a estos resultados, coincidente con los re-sultados obtenidos, mencionados anteriormente, me-diante inmunohistoquímica (18) y citometría de flujo(19), se concluyó que la interacción de Gal-1 con li-gando/receptores, tipo integrinas u otros, sería la res-ponsable de cambios morfológicos ultraestructurales re-lacionados con funciones como adhesión/agregaciónplaquetaria, aunque de las observaciones no fue posibleestablecer una relación dosis dependiente. La Gal-1 en-dógena de plaquetas cuya presencia se demostró (23) po-dría ejercer roles fisiológicos similares a la Gal-1 exógenaporcina, mediante mecanismos autócrinos.

Otro objetivo propuesto fue el de purificar y caracte-rizar la Gal-1 endógena de plaquetas humanas, para locual se implementó un protocolo de purificación y pos-terior caracterización de la lectina, comunicado recien-temente (24). Se demostró, procesando Gal-1 purifi-cada a partir de plaquetas humanas, por HPLC-Masa,que se presenta como una proteína de 14kDa y tambiénque forma un complejo con actina. Además se procedióa realizar una digestión enzimática con tripsina y el aná-lisis de los péptidos obtenidos por HPLC, seguido de es-pectrometría de masa. Esto permitió detectar la presen-cia de Gal-1 (3 péptidos secuenciados; % de cobertura:30,3) y actina (15 péptidos secuenciados; % de cober-tura: 36,5), en coincidencia con los resultados del westenblot. Esto es similar a hallazgos descriptos para otras cé-lulas, como LT, células de músculo y de cerebro hu-mano (25-27), donde Gal-1 se une a la actina, probable-mente formando parte de sistemas complejos queregulan la actividad de actina. Se amplían de esta maneralos datos previos obtenidos en este laboratorio (23) y sedemuestra que la Gal-1 es una proteína que está en me-nor proporción en plaquetas, en coincidencia con los es-tudios de proteómica, hechos por otros autores, que nola incluyen dentro de las 50 proteínas más abundantes deplaquetas (20). En este sentido, se ha descripto que laGal-1 induce por interacción con polilactosaminas aun aumento de la motilidad celular inducida por un in-cremento de la expresión de la proteína RhoA, la cualestá implicada en la polimerización de actina del cito-esqueleto (28). Por lo tanto, para explicar nuestros re-sultados se podría postular la hipótesis de que la Gal-1endógena formaría un complejo intracelular con la ac-tina monomérica, fundamentado en los datos de PAGEe immunoblotting, en reposo, y que, quizás tras la activa-ción, dicha lectina intervendría en la polimerización-depolimerización de actina, participando de esta formaen la activación y posterior agregación plaquetaria.

Por otro lado, existe un número importante de pro-teínas del citoesqueleto plaquetario, entre otras, talina,gelsolina, α-actinina, cofilina, vinculina que participan fa-cilitando o inhibiendo la polimerización de actina. En re-



lación con estas observaciones, surgió la propuesta de es-tudiar si la interacción de Gal-1 esplénica porcina conplaquetas humanas, desencadena la redistribución de latalina plaquetaria (29).

El hallazgo de Gal-1 endógena y de posibles receptores,permite suponer que un mecanismo autócrino actúe enla PltH para ejercer diferentes roles funcionales. La in-formación disponible es muy escasa lo que demuestra lanecesidad de profundizar otros aspectos, algunos de loscuales ya han sido abordados (localización y cambios ul-traestructurales, asociaciones proteicas y receptores pla-quetarios) y otros están pendientes de encarar, como surelevancia en la fisiopatología plaquetaria, en particular suvinculación a procesos tromboticos y a la inflamación.


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Líneas de trabajo delGrupo de Hemostasia yTrombosis

Directora: Alejandra Scazziota. Bioquímica yProf. Adjunta de HemostasiaColaboradores: Bioquímicas Silvina Pons,Lourdes Herrera, Alicia Grinspon, RosanaRaimondi, Cristina Fernandez

Lugar de trabajo: Instituto de Fisiopatología y Bioquímica Clínica -INFIBIOC- UBA y Departamento de Bioquímica Clínica de la Facul-tad de Farmacia y Bioquímica. Universidad de Buenos AiresE-mail: [email protected]

Nuestra línea de investigación enfoca el estudio de losfactores de riesgo trombóticos tanto venosos como arte-riales asociados a distintas patologías (1)(2). En los últi-mos años nos hemos dedicado al estudio de las mujerescon pérdidas fetales reiteradas que no poseen factores deriesgo tradicionales (inmunológicos, endocrinológicos,anatómicos) que justifiquen el aborto. Varias complica-ciones obstétricas están asociadas a una deficiente circu-lación útero-placentaria en donde los desórdenes trom-bogénicos en la madre pueden ser causa de una pérdidafetal. Si bien la asociación entre los abortos reiterados y lapresencia de inhibidor lúpico ha sido ampliamente de-mostrada, no ha ocurrido lo mismo con las trombofiliascongénitas. Con el objetivo de investigar este último as-pecto, como parte de nuestro proyecto UBACyT, estudia-mos distintos factores de riesgo congénitos en un grupo

de 103 mujeres que tuvieron 2 ó más abortos antes de lasemana 17 de gestación, y que no presentaban síndromeantifosfolipídico. Por un lado evaluamos alteraciones enlos inhibidores fisiológicos: Proteína C, Proteína S, Anti-trombina, Resistencia a la Proteína C activada, alteracio-nes del sistema fibrinolítico a través de la Prueba de oclu-sión venosa (3), y otros factores de riesgo como lahiperhomocisteinemia. Estos factores son los que co-múnmente se evalúan por ser los más prevalentes y de losque se tiene más evidencia clínica, pero a medida que sur-gen resultados de los estudios epidemiológicos, nuevosfactores de riesgo se van sumando a este perfil. No obs-tante, queda una franja de la población estudiada que nopresenta ninguna alteración en los estudios habituales detrombofilia. En nuestra población de estudio encontra-mos un defecto hemostático en 34% de las mujeres estu-diadas, 2 defectos en 12,6% y 3 defectos en 3,9%. Sin em-bargo en el 49,5% no obtuvimos ninguna alteración en losparámetros estudiados. Cuando investigamos otro inhi-bidor que ya habíamos considerado en las mujeres pos-tmenopáusicas: el TFPI (inhibidor del sistema extrínsecode la coagulación), encontramos TFPI libre disminuídocomo factor de riesgo adicional de las pérdidas fetales re-currentes. De esta manera el porcentaje de mujeres abor-tadoras sin causas trombóticas disminuyó de 49,5% a33%. Para estudiar su estado pro-inflamatorio medimoslos marcadores de inflamación como la Proteína C Reac-tiva (PCR ultrasensible) y lo correlacionamos con laprueba de oclusión venosa, observando que la inflamacióncrónica de bajo grado de la pared vascular se asocia condisminución de la actividad del sistema fibrinolítico.

Algunos estudios no randomizados han demostrado laeficacia de las Heparinas de Bajo Peso Molecular (HBPM)en el tratamiento de mujeres trombofílicas que han tenidoabortos recurrentes en embarazos anteriores. Pese a lascontroversias, estas pacientes son tratadas durante todo elembarazo con HBPM para favorecer la circulación feto-placentaria. Uno de los tantos efectos de la heparina con-siste en liberar TFPI desde el endotelio a la circulación, loque aumenta su concentración plasmática favoreciendo elequilibrio hemostático del microambiente placentario.En este sentido estudiamos la acción de la HBPM sobre laspropiedades hemostáticas de las mujeres con abortos re-currentes obteniéndose resultados positivos de la pruebade respuesta a la heparina: comprobamos que las mujerescon TFPI libre más bajo, aumentan sus niveles pero pre-sentan un patrón distinto de liberación comparado con lasabortadoras con TFPI libre normal. Estos hallazgos po-drían tener importantes implicancias terapéuticas ten-dientes a seleccionar posibles respondedoras y no res-pondedoras a la terapéutica.

Para evaluar el estado protrombótico de estas pacien-tes hemos aprovechado la puesta a punto de una pruebaque ofrece un panorama más amplio del balance hemos-tático, como es la prueba de generación de trombina(GT) que comparada con las pruebas tradicionales de he-



mostasia, correlaciona mejor con los fenotipos hipo e hi-percoagulables. Ya hemos empleado la prueba de GTpara la evaluar el efecto de distintas drogas antitrombóti-cas o estados protrombóticos generados por algunas te-rapéuticas (4-8). En las mujeres abortadoras a través deesta prueba, no detectamos un estado de trombofilia,contrariamente a lo esperado existiría en ellas un factortrombogénico que estimularía permanente a la plaqueta,haciéndola hiporrespondedora a los estímulos externosaplicados “in vitro”. Actualmente estamos evaluando las ac-ciones antiinflamatorias de la HBPM en el endotelio de es-tas pacientes, luego de una prueba piloto con una únicainyección de HBPM y también durante el embarazo de lasmujeres sometidas a esta profilaxis anticoagulante, con elobjetivo de hallar parámetros que permitan explicar eléxito o la falla terapéutica.

Como ya hemos mencionado, las HBPM se empleancon gran éxito en el tratamiento y profilaxis de enferme-dades trombóticas. Estas HBPM se obtienen por diferen-tes métodos químicos a partir de la heparina regular. Úl-timamente se han desarrollado diferentes HBPM de lascuales la enoxaparina es una de las más empleadas ennuestro país. Debido a que la materia prima es de origenbiológico (se extrae de mucosa porcina o bovina) y a quelos procesos de fabricación son variados, la actividad dedistintas HBPM pueden ser muy diferentes. Estas HBPMejercen su efecto anticoagulante aumentando la capaci-dad inhibitoria de la antitrombina sobre las serino prote-asas de la coagulación y liberando TFPI del endoteliovascular (9). En su proceso de fabricación se reduce la ac-tividad anti-IIa con respecto a la actividad anti-Xa. Paraevaluar su biosimilitud se deben comparar por lo menos,las actividades antiFXa y anti-FIIa, el perfil de liberaciónde TFPI endotelial y la actividad profibrinolítica. La de-terminación de la actividad anti-FXa es el gold standardpara el monitoreo del efecto anticoagulante de las HBPM,sin embargo esta prueba tiene varias limitaciones debidasa las interacciones de la droga in vivo, que no son consi-deradas cuando la determinación se realiza in vitro. Encambio la prueba de GT permite estudiar el efecto anti-coagulante de las heparinas, considerando no sólo la ac-ción inhibitoria sobre el FXa and FIIa, sino también la ac-ción sobre otras proteasas de la coagulación y sobre laliberación del TFPI endotelial. De esta manera correla-cionamos la actividad anti-FXa con la GT y evaluamos lasimilitud biológica de dos enoxaparinas que se comer-cializan en nuestro país (10).

En este contexto nuestro grupo ofrece asesorías tecno-lógicas a empresas farmacéuticas dedicadas a la producciónde HBPM biosimilares que para ser comercializadas requie-ren dosajes confiables de su actividad anti FXa y anti FIIa.

Una línea de trabajo que comenzamos a desarrollarde creciente interés y de gran controversia es el empleodel PRP autólogo como modulador y facilitador de la ci-catrización, que se está utilizando tanto en cirugías bu-cales como traumatológicas. La cicatrización ósea tarda

aproximadamente el doble en los diabéticos respecto delos controles y los implantes están muchas veces con-traindicados en estos pacientes. Cuando evaluamos elefecto del PRP sobre la cicatrización ósea en un modelomurino de diabetes inducida, hallamos un aumento sig-nificativo de la cantidad de hueso neoformado en elgrupo de ratas tratadas con PRP respecto del grupo con-trol.(11) Proyectamos evaluar los factores plaquetarios li-berados en el sitio de la injuria que serían determinan-tes del proceso de reparación tisular.

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