INFORME DE PRÁCTICAS

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PRACTICA DE LABORATORIO NRO. 2

- DETERMINACIÓN DE GLUCOSA

1. INTRODUCCIÓN

La glucosa es la principal fuente de energía para el metabolismo celular. Se obtiene

fundamentalmente a través de la alimentación, y se almacena principalmente en el

hígado, el cual tiene un papel primordial en el mantenimiento de los niveles de

glucosa en sangre (glucemia). Para que esos niveles se mantengan y el

almacenamiento en el hígado sea adecuado, se precisa la ayuda de la insulina,

sustancia producida por el páncreas.

La glucosa es un azúcar que es utilizado por los tejidos como forma de energía al

combinarlo con el oxígeno de la respiración. Cuando comemos el azúcar en la sangre

se eleva, lo que se consume desaparece de la sangre, para ello hay una hormona

reguladora que es la insulina producida por el páncreas (islotes pancreáticos). Esta

hormona hace que la glucosa de la sangre entre en los tejidos y sea utilizada en forma

de glucógeno, aminoácidos, y ácidos grasos. Cuando la glucosa en sangre está muy

baja, en condiciones normales por el ayuno, se secreta otra hormona llamada

glucagón que hace lo contrario y mantiene los niveles de glucosa en sangre. Cuando

la insulina es insuficiente, la glucosa se acumula en sangre, y si esta situación se

mantiene, da lugarar una serie de complicaciones en distintos órganos. Esta es la

razón principal por la que se produce aumento de glucosa en sangre, pero hay otras

enfermedades y alteraciones que también la provocan.

El tejido más sensible a los cambios de la glucemia es el cerebro, en concentraciones

muy bajas o muy altas aparecen síntomas de confusión mental e inconsciencia.

El mantenimiento de la glucemia, o concentración plasmática de glucosa, en los

organismos superiores el fundamental para el funcionamiento de todos los órganos,

al ser la glucosa un metabolito energético principal.

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La coordinación de los procesos metabólicos implicados en este cometido se lleva a

cabo por la relación insulina/glucagón. La ingestión de glucosa o sustancias que la

produzcan (almidón, fructosa, galactosa, proteínas, pero no grasas) va seguida, en

las personas sanas, por un aumento de la glucosa en sangre. Este aumento origina la

puesta en marcha del mecanismo regulador: aumento de la utilización de glucosa

(por glucólisis, entre otras), aceleración de la glucogenogénesis y disminución de la

glucogenólisis; todo ello ocurre principalmente mediante la secreción de insulina, una

hormona pancreática de tipo polipeptídico. En el caso de que la producción de

insulina esté disminuida, la glucosa no puede ser utilizada por las células, lo cual

ocasiona niveles elevados de glucosa en sangre (hiperglucemia); así ocurre en las

personas que sufren diabetes del tipo denominado "dependiente de insulina" o "tipo

1".

El diagnóstico de la diabetes dependiente de insulina es sencillo y se basa en

antecedentes, síntomas clínicos y comprobación de una hiperglucemia significativa.

Las determinaciones de glucemia basal permiten el diagnóstico de la diabetes, pero

constituyen valores puntuales y aislados en el tiempo que no reflejan los niveles

medios de glucemia ni la duración de la misma. Por lo tanto, es necesario disponer

de pruebas que indiquen el grado del control metabólico de la enfermedad a corto y

medio plazo. Estas pruebas están basadas en el fenómeno de unión de la glucosa a

diversas proteínas. Esta glucosilación tiene lugar por una reacción no enzimática y

afecta tanto a proteínas de vida media corta (albúmina, hemoglobina, etc.) como de

vida media larga (colágeno, mielina, etc.). La intensidad de la glucosilación depende

de varios factores, siendo los más importantes los niveles medios de glucemia, la

duración de la hiperglucemia, la vida media de las proteínas y la concentración de

éstas. Como consecuencia, la medida de la glucosilación proteica constituye un buen

marcador bioquímico del grado de compensación del enfermo diabético.

2. OBJETIVO:

Capacitar al alumno para que conozca, maneje y determine el valor de la glucosa en

sangre, utilizando el análisis objetivo para la deducción de un resultado real.

3. PARTE TEÓRICA:

3.1. La glucosa

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Es un glúcido o carbohidrato, más precisamente un monosacárido, la estructura

más sencilla dentro de los azúcares simples, presente en forma libre en las frutas y

la miel. Entre los carbohidratos de absorción rápida, la glucosa es la que se absorbe

más rápidamente.

La glucosa es una fuente importante de energía para la mayoría de las células del

cuerpo, incluidas las del cerebro. Los carbohidratos que se encuentran en las frutas,

los cereales, el pan, la pasta y el arroz se transforman rápidamente en glucosa en el

cuerpo, lo que eleva el nivel de dicho azúcar en la sangre.

Las hormonas producidas en el cuerpo llamadas insulina y glucagón ayudan a

controlar los niveles de azúcar en la sangre.

Es un examen que mide la cantidad de un azúcar llamado glucosa en una muestra de

sangre.

3.2. Características

La glucosa, libre o combinada, es el compuesto orgánico más abundante de la

naturaleza. Es la fuente primaria de síntesis de energía de las células, mediante su

oxidación catabólica, y es el componente principal de polímeros de importancia

estructural como la celulosa y de polímeros de almacenamiento energético como el

almidón y el glucógeno.

A partir de su estructura lineal, la D-glucosa sufre una ciclación hacia su forma

hemiacetálica para dar sus formas furano y pirano (D-glucofuranosa y F-

glucopiranosa) que a su vez presentan anómeros alfa y beta. Estos anómeros no

presentan diferencias de composición estructural, pero si diferentes características

físicas y químicas.

La glucosa es uno de los tres monosacáridos dietéticos, junto con fructosa y

galactosa, que se absorben directamente al torrente sanguíneo durante la digestión.

Las células lo utilizan como fuente primaria de energía y es un intermediario

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metabólico. La glucosa es uno de los principales productos de la fotosíntesis y

combustible para la respiración celular.

Todas las frutas naturales tienen cierta cantidad de glucosa (a menudo con

fructosa), que puede extraerse y concentrarse para preparar un azúcar alternativo.

Sin embargo, a escala industrial tanto el jarabe de glucosa (disolución de glucosa)

como la dextrosa (glucosa en polvo) se obtienen a partir de la hidrólisis enzimática

de almidón de cereales (generalmente trigo o maíz).

3.3. Biosíntesis

Los organismos fotoautótrofos, como las plantas, sintetizan la glucosa en la

fotosíntesis a partir de compuestos inorgánicos como agua y dióxido de carbono,

según la reacción:

Los seres heterótrofos, como los animales, son incapaces de realizar este proceso

y toman la glucosa de otros seres vivos o la sintetizan a partir de otros compuestos

orgánicos. Puede obtenerse glucosa a partir de otros azúcares, como fructosa o

galactosa. Otra posibilidad es la síntesis de glucosa a partir de moléculas no

glucídicas, proceso conocido como gluconeogénesis. Hay diversas moléculas

precursoras, como el lactato, el oxalacetato y el glicerol.

También existen ciertas bacterias anaerobias que utilizan la glucosa para generar

dióxido de carbono y metano según esta reacción:

3.4. Forma en que se realiza el examen:

Se necesita una muestra de sangre. Esto se realizará antes del procedimiento de

la glucosa a través de la venopunción o flebotomía.

3.5. Preparación para el examen:

Después de no haber comida nada (en ayunas) durante 7-8 horas.

3.6. Lo que se siente durante el examen:

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Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un

dolor moderado, mientras que otras sólo sienten un pinchazo o sensación de

picadura. Posteriormente, puede haber algo de sensación pulsátil.

3.7. Razones por las que se realiza el examen:

El médico puede solicitar este examen si uno tiene signos de diabetes. Sin embargo,

otros exámenes (prueba de tolerancia a la glucosa y examen de glucemia en ayunas)

son mejores para diagnosticar la diabetes.

El examen de glucemia también se utiliza para monitorear a pacientes que padezcan

diabetes. También se puede hacer si usted presenta:

Un cambio en el comportamiento

Episodios de desmayo

Convulsiones por primera vez

¿Por qué se hace esta prueba?

Por lo general, la prueba de glucosa en la sangre se hace para detectar la diabetes

mellitus.

¿Recomendaciones para el análisis de glucosa?

La forma más fácil de detectar la diabetes es medir la cantidad de azúcar en la sangre

(glucosa) antes de que el paciente coma o beba algo por la mañana. En la mayoría de

los casos, el paciente deberá ayunar durante la noche anterior, no comer ni beber

nada más que agua después de la cena y por la mañana antes de la extracción de

sangre.

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4. PARTE PRÁCTICA

4.2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

¿Cuál es el método, técnica más adecuado para

determinar la glucosa en sangre y por qué no se

puede trabajar con sangre total; (método

trinder)– punto final?

4.3. PLANTEAMIENTO DE LA HIPÓTESIS

Todos los métodos y técnicas son válidos por lo tanto

cada prueba se realiza con su respectivo método. se determina sea con suero,

plasma y sangre total.

4.3.1. Métodos:

Enzimático: 10 ul + 1 ml de reactivo (glucosa-biosistem), se deja en baño maría

5 minutos a 37°C y se lee en espectrofotómetro a 500 nm contra blanco de

reactivo.

Glucometria: se toma una muestra de sangre capilar y se lee con un glucómetro

Glicemia preprandia: prueba donde se toma una muestra de sangre periférica

con un ayuno mínimo de 8 horas

Glicemia Postprandial: prueba donde se toma muestra de sangre periférica en

cualquier momento del día

Curva de tolerancia oral a la glucosa: se da una carga de glucosa al paciente y se

toma a la hora, dos horas, 3 horas para ver la respuesta del organismo a esa

carga.

Test O`sullivan: a una mujer entre la semana 24 y 28 de embarazo se le dan 50

gr de glucosa y se toma la prueba 2 horas después.

Hemoglobina Glicosilada: sirve para ver el nivel de glicemia que manejo un

paciente en los últimos 3 meses

4.4. PROCEDIMIENTOS DE EXPLORACIÓN

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Organizados en grupos de trabajo dispongan en la mesa de trabajo los siguientes

materiales y reactivos

MÉTODO TRINDER – PUNTO FINAL

4.4.1. PRINCIPIO:

La glucosa oxidasa (GOD) oxida a la glucosa en ácido glucónico y forma el

peróxido hidrógeno. En presencia de peroxidasa (POD) el peroxido hidrógeno

reacciona con el fenol y 4-aminofenazona y produce un complejo coloreado, cuya

intensidad de color es directamente proporcional a la concentración de glucosa

en la muestra.

4.4.2. MUESTRA: (Suero/Plasma)

Evitar muestras hemolizadas.

MATERIALES Y EQUIPOS REACTIVOS

Micropipetas de 10ul y 1.0ml

6 tips descartables para

micropipetas

Cronometro

2 tubos vacutainer

2 agujas vacutainer

Capuchón

Gradillas para tubo de ensayo

Ligadura

Algodón

Esparadrapo

Centrifuga

3 tubos de ensayo de 6 ml

Cubetas para

espectrofotómetro

Baño maría a 37°C

Espectrofotómetro

Reactivo glucosa enzimática

Alcohol.

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Separar tan pronto sea posible las células de la sangre puesto que la glicólisis

consume la glucosa (aproximadamente 5% por hora) y proporciona falsamente

valores disminuidos.

La glucosa en suero es estable hasta 3 días de 2-8° C.

4.4.3. ESTABILIDAD:

Los reactivos están listos para su uso.

Almacenar de 2- 8°C y protegerlo de la luz los reactivos son estables hasta la

fecha de expiración indicada en el rótulo.

No congelar.

Una vez abiertos los reactivos son estables por 2 meses de 2º- 8ºC si se evita la

contaminación.

Mantener los frascos cerrados cuando no están en uso. No usar los reactivos en

caso de turbidez.

4.4.4. PROCEDIMIENTO:

calibración y absorbancia del espectrómetro

Método:……………………………. punto final en Incremento

Longitud de onda:…………….510 nm (500-520 )

Cubeta:…………………………….1 cm de vía óptica

Temperatura:……………………37°C

Tiempo de reacción:…………5 - 10 minutos

Lectura:…………………………...Contra reactivo blanco

Reactivo/Muestra:…………....1/100

Toma de muestra través de la venopunción o flebotomía se utilizan las venas

situadas en la flexura del codo. La estudiante encargada de tomar la muestra

utilizará guantes, una aguja (con una jeringa o tubo de extracción).

le pondrá un tortor (cinta de goma-látex) en el brazo para que las venas

retengan más sangre ya parezcan más visibles y accesibles.

limpiará la zona del pinchazo con un antiséptico y mediante una palpación

localizará la vena apropiada y accederá a ella con la aguja. Le soltarán el tortor.

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Cuando la sangre fluya por la aguja el sanitario realizará una aspiración

(mediante la jeringa o mediante la aplicación de un tubo con vacío).

al terminar la toma, se extrae la aguja y se presiona la zona con una torunda de

algodón o similar para favorecer la coagulación y se le indicará que flexione el

brazo y mantenga la zona presionada con un esparadrapo durante unas horas

Colocar en baño maría de 5-10 min para que se coagule la muestra

Centrifugación de la muestra 3000 rpm 3-5 min

Rotular los 3 tubos de ensayo R. Blanco, Estándar y muestra.

4.4.5. PREPARACION DE SOLUCIONES:

Mezclar e incubar de 5-10 minutos a 37°C en baño maría.

luego leer la absorbancia del estándar (abstd) y la muestra (absm) contra el

blanco de reactivo en el espectrofotómetro.

Los volúmenes de reacción pueden ser variados proporcionalmente sin ninguna

modificación en el cálculo.

4.4.6. RESULTADOS DE CÁLCULOS:

CALCULAR LA CONCENTRACIÓN DE GLUCOSA EN LA MUESTRA USANDO LA

SIGUIENTE FÓRMULA:

Abs muestra

Abs estándarx100

4.4.7. VALORES:

VALORES DE REFERENCIALES:

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PREMATUROS: 30mg/dl(1.6 mmol/L)

RECIÉN NACIDOS: 40-60mg/dl(2.2 ÷ 3.3 mmol/L)

NIÑOS: 60 - 100 mg/dl (3.8 ÷ 6.10 mmol/L)

ADULTOS: 70 - 110 mg/dl (3.8 ÷ 6.10 mmol/L)

VALORES NORMALES:

Si le hicieron un examen de glucemia en ayunas, un nivel entre 70 y 100 miligramos

se considera normal.

Si le hicieron un examen de glucemia aleatorio, los resultados normales dependen

de cuándo fue la última vez que comió. La mayoría de las veces, los niveles de

glucemia estarán por debajo de 125 mg/dL.

Los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre laboratorios.

Hable con el médico acerca del significado de los resultados específicos de su

examen.

Los ejemplos anteriores muestran las mediciones comunes para los resultados de

estas pruebas. Algunos laboratorios usan diferentes medidas o pueden evaluar

distintas muestras.

4.4.8. SIGNIFICADO DE LOS RESULTADOS ANORMALES

SI LE HICIERON UN EXAMEN DE GLUCEMIA EN AYUNAS:

Un nivel de 100 a 125 mg/dL significa que usted tiene una alteración de la

glucosa en ayunas, un tipo de prediabetes. Esto incrementa el riesgo para la

diabetes tipo 2.

Un nivel de 126 mg/dL o mayor casi siempre significa que usted tiene diabetes.

Los niveles aleatorios de glucosa en la sangre superiores a los normales pueden

ser un signo de diabetes. En alguien que tenga diabetes, puede significar que la

enfermedad no está bien controlada. El médico probablemente ordenará una

glucemia en ayunas o un examen de tolerancia a la glucosa, dependiendo del

resultado del examen aleatorio.

OTROS PROBLEMAS MÉDICOS TAMBIÉN PUEDEN PROVOCAR NIVELES DE GLUCOSA EN

LA SANGRE SUPERIORES A LO NORMAL, COMO:

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Hipertiroidismo

Cáncer pancreático

Pancreatitis

Tumores raros, entre ellos feocromocitoma, acromegalia, síndrome de Cushing

o glucagonoma

LOS NIVELES DE GLUCOSA EN LA SANGRE INFERIORES A LO NORMAL

(HIPOGLUCEMIA) PUEDEN DEBERSE A:

Hipopituitarismo (un trastorno de la hipófisis)

Hipotiroidismo

Insulinoma (muy poco común)

Muy poco alimento

Demasiada insulina u otros medicamentos para la diabetes

4.4.9. RIESGOS:

Las venas y las arterias varían de tamaño de un paciente otro y de un lado del cuerpo

a otro, razón por la cual obtener una muestra de sangre de algunas personas puede

resultar más difícil que de otras.

OTROS RIESGOS ASOCIADOS CON LA EXTRACCIÓN DE SANGRE SON LEVES,

PERO PUEDEN SER:

Sangrado excesivo

Desmayo o sensación de mareo

Hematoma (acumulación de sangre debajo de la piel)

Infección (un riesgo leve cada vez que se presenta ruptura de la piel)

4.5.0. CONSIDERACIONES:

Muchas formas de estrés intenso (por ejemplo, traumatismo, accidente

cerebrovascular, ataque cardíaco y cirugía) pueden aumentar temporalmente los

niveles de glucosa en la sangre.

ENTRE LOS FÁRMACOS QUE PUEDEN AUMENTAR LAS MEDICIONES DE LA GLUCOSA

ESTÁN LOS SIGUIENTES:

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Ciertos medicamentos para tratar la esquizofrenia y la psicosis

Betabloqueadores (como propanolol)

Corticosteroides (como prednisona)

Estrógenos

Glucagón

Isoniazida

Litio

Anticonceptivos orales (píldoras anticonceptivas)

Fenotiazinas

Fenitoína

Salicilatos (ver sobredosis de ácido acetilsalicílico (aspirin))

Diuréticos tiazídicos (como hidroclorotiazida)

Triamtereno

Antidepresivos tricíclicos

ENTRE LOS FÁRMACOS QUE PUEDEN DISMINUIR LAS MEDICIONES DE GLUCOSA

ESTÁN LOS SIGUIENTES:

Paracetamol

Alcohol

Esteroides anabólicos

Clofibrato

Disopiramida

Gemfibrozilo

Inhibidores de la monoaminoxidasa (IMAO)

Pentamidina

5. REFLEXIÓN:

¿Qué es la prueba de glucosa en la sangre?

Esta prueba mide la cantidad de glucosa (azúcar) que hay en la sangre. El azúcar es una

fuente importante de energía, especialmente para el cerebro. El sistema endócrino

(glandular) controla con exactitud la cantidad de glucosa en la sangre. Este sistema hace

que el azúcar se almacene o se utilice para energía, según las necesidades de su cuerpo.

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Usted puede obtener la glucosa directamente de algunos alimentos, como el azúcar de

mesa. El cuerpo también puede producir glucosa cuando se digieren otros alimentos, como

el pan y los cereales.

¿Por qué se hace esta prueba?

Por lo general, la prueba de glucosa en la sangre se hace para detectar la diabetes mellitus.

¿Cómo preparar a los niños para esta prueba?

La forma más fácil de detectar la diabetes es medir la cantidad de azúcar en la sangre

(glucosa) antes de que el niño coma o beba algo por la mañana. En la mayoría de los casos,

su niño deberá ayunar durante la noche anterior, no comer ni beber nada más que agua

después de la cena y por la mañana antes de la extracción de sangre.

Es posible que el niño deba evitar tomar ciertos medicamentos antes de la prueba, ya que

podrían afectar los resultados. Asegúrese de que su profesional médico esté al tanto de

cualquier medicamento, hierbas medicinales o suplemento que tome su hijo. Su hijo no

debe dejar de tomar ninguno de sus medicamentos habituales sin consultar antes con su

profesional médico.

Si tiene preguntas, hable con el profesional médico de su hijo.

¿Cómo se hace esta prueba?

El profesional médico de su hijo le pinchará el dedo con una lanceta y llenará un pequeño

tubo con la sangre. A veces, se extrae sangre del brazo de su hijo con una aguja. Esta

prueba solamente tardará unos pocos minutos.

¿Cómo conoceré el resultado de la prueba?

Pregunte a su profesional médico cómo le entregarán los resultados de la prueba de su

hijo.

¿Qué significa el resultado de la prueba?

El intervalo normal de glucosa en la sangre en ayunas para niños en la mayoría de los

laboratorios es de 70 a 99 miligramos por decilitro (3.9 a 5.5 milimoles por litro). El

intervalo de valores normales puede variar ligeramente de laboratorio a laboratorio. Los

intervalos de valores normales generalmente se muestran junto a los resultados en el

informe del laboratorio.

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Un nivel de azúcar en la sangre en ayunas de 100 a 125 mg/dl (5.5 a 6.9 mmol/l) se

denomina alteración de la glucosa en ayunas o prediabetes. Un nivel de 126 mg/dl (7.0

mmol/l) o más puede indicar que su hijo tiene diabetes.

El nivel de glucosa en la sangre puede ser superior a lo normal (se llama hiperglucemia)

si:

o Su hijo tiene prediabetes, una afección que puede convertirse en diabetes.

o Su hijo tiene diabetes.

o A su hijo se le diagnosticó anteriormente diabetes y:

No ha estado tomando insulina o medicamentos para controlar la diabetes, o los

medicamentos para la diabetes no están controlando la afección correctamente

Su hijo no ha estado siguiendo una dieta para diabéticos.

o Su hijo tiene enfermedad del hígado o de los riñones.

o El páncreas de su hijo está inflamado.

o El cuerpo de su hijo se ve gravemente afectado por una lesión o infección

importante.

El nivel de glucosa en la sangre de su hijo puede ser inferior a lo normal (se llama

hipoglucemia) si:

o Su hijo es diabético y:

La dosis de insulina u otro medicamento utilizado para controlar la diabetes es muy

alta

Su hijo tomó medicamentos para la diabetes y luego no comió.

o La glándula tiroides, pituitaria o adrenal no está funcionando correctamente.

o Su hijo tiene enfermedad del hígado.

o Su hijo tiene problemas para absorber los alimentos.

o Su hijo no recibe los nutrientes necesarios de su dieta.

6. APLICACIÓN:

1. Averiguar cuantos técnicas y métodos existe para determinar la glucosa

2. ¿Qué otras pruebas complementarias serán necesarias para complementar la

prueba de tolerancia a la glucosa?

3. ¿Cómo es la glucosa a falta de insulina?

7. BIBLIOGRAFÍA:

-http://colombiamedica.univalle.edu.co/Vol38No1/html/v38n1a10.pdf

-http://www.netdoctor.es/XML/verArticuloMenu.jsp?XML=000437

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-http://www.ferato.com/wiki/index.php/Glucosa

-http://www.medicinapreventiva.com.ve/laboratorio/glicemia.htm

-http://external.doyma.es/pdf/277/277v27n106a13105169pdf001.pdf

-http://www.uned.es/pea-nutricion-y-dietetica-

I/guia/diabetes/prodinsu.htm

-http://jama.ama-assn.org/cgi/data/297/2/230/DC1/1