incluyen un conjunto de conocimientos científicos y...

http://www.vigolusogalaico2015.com/

Encontro Luso Galaico – Las Adicciones en el Siglo XXI. Vigo 26 – 27 Febrero 2015

Aspectos técnicos y metodológicos del análisis toxicológico forense

Análisis Forenses

Legislación

Ordenación Investigación

Ministerio Público

Epidemiología Salud Pública

Las Ciencias Forenses incluyen un conjunto de conocimientos científicos y técnicos con

aplicación en los ambitos legales y de investigación criminal



3

1. En cada Delegación existe un Departamento de Clínica y Patologia Forense que incluye las Unidades Funcionales de Clínica y de Patología Forense las cuales coordinan los Gabinetes Médico-Legais (GMLs).

2. El Departamento de Genética e Biología Forense (SGBF) dispone de Unidades Operativas en las delegaciones del Norte (Oporto) y del Sur (Lisboa)

3. El Departamento de Química e Toxicología Forense (SQTF) dispone de Unidades Operativas en las delegaciones del Norte (Oporto) y del Sur (Lisboa)

(Decreto Lei 166/2012 de 31 de Julho)

El INMLCF, I.P. tiene por objetivos principales garantizar la realización de exámenes médico-legales y forenses, la coordinación científica de las actividades en el ámbito de la medicina legal y de otras ciencias forenses, lo que incluye la promoción, formación e investigación en esta área, así como la supervisión y orientación de las actividades de los departamentos médico-legais y de los profesionales contratados para el ejercicio de tales funciones.




S1

S6

S5

S4 S3

S2

C 8 C 7

C

C5

C4

C3 C2

C1

S8

S7

S

N6

N5 N4

N2 N

N1

N3 N7 N8

S -

S1 - GML do Sotavento Algarvio

S2 - GML do Barlavento Algarvio

S3 - GML do Alentejo Litoral S4 - GML do Baixo Alentejo

S5 - GML do Alentejo Central

S6 - GML da Península de Setúbal

S7 - GML do Oeste

S8 - GML do Alto Alentejo

C -

C 1 – GML do Médio Tejo

C 2 - GML do Pinhal Litoral

C 3 - GML da Beira Interior Sul C 4 - GML da Beira Interior Norte

C 5 - GML Guarda (integrado no GML da Beira Interior Norte

C 7 - GML de Dão-Lafões

C8 - GML do Baixo Vouga C9 - GML dos Açores Ocidental

C10 - GML dos Açores Oriental C11 - GML da Madeira

N - Delegação Norte (Porto)

N1 – GML de Entre Douro e Vouga

N2 - GML do Tâmega

N3 - GML do Ave N4 - GML do Douro

N5 - GML Bragança

N6 - GML de Chaves (Integrado no GML do Douro)

N7 - GML do Cávado N 8 - GML Viana do Minho-Lima

Lisboa

Coimbra

Porto

C11

C9

C10

Delegação Centro (Coimbra)

Delegação Sul (Lisboa)

(Portaria 19/2013 de 21 de Janeiro)




Dosis sola facit venenum

Mattieu Joseph

Bonaventura Orfila

(1787-1853)

Philippus Aureolus

Theophrastus Bombastus

von Hohenheim

Paracelsus

(1493-1541) Georg Moritz Ebers

(1837 - 1898)



ANÁLISIS TOXICOLÓGICA

OBJETIVO MUESTREO METODOLOGIA INTERPRETACIÓN




Workplace drug test

Toxicología Clínica/Hospitalar

Toxicología Laboral

Toxicología Comportamental

Drugs and Driving Drug Facilitated Sexual Assault

OBJETIVO



http://www.google.pt/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=0CAcQjRw&url=http://www.bbc.co.uk/news/uk-politics-23374228&ei=gDnWVJ7uOeap7AasqoG4Aw&psig=AFQjCNHNeZ_6gp2SBp8i_EoKHXwB4TJt4w&ust=1423411647060523


Workplace drug test

TOXICOLOGÍA FORENSE

Drugs and Driving Drug Facilitated Sexual Assault


OBJETIVO





Aspetos técnicos e metodológicos da análise toxicológica forense

Ventana de detección

Adaptado de E.J. Cone, Addiction Research Center, NIDA

Sangre

Saliva

Orina

Sudor

Pelo

Minutos Horas Dias Semanas Meses Anos

OBJETIVO MUESTREO


Ventajas

Permite una correlación directa entre los efectos farmacológicos y el estado clínico.

Indica un consumo reciente por lo que la ausencia de una substancia (tóxico) no excluye la posibilidad de una exposición anterior

Bajo potencial de adulteración / manipulación

Abundante bibliografía con valores de referencia

Desventajas

Las substancias habitualmente están presentes en bajas concentraciones

Matrices complejas que pueden dificultar el análisis

Exámenes invasivos efectuados por personal especializado

Ventana de detección reducida (horas, dias)


SANGRE

OBJETIVO MUESTREO



Ventajas

Útil para orientar la búsqueda de substancias en la sangre

Matriz ideal para la aplicación de métodos de rastreo inmuno-enzimáticos

Las substancias están presentes en concentraciones mas elevadas

Ventana de detección (dias, semanas)

Recogida de muestra fácil y no invasiva

Posibilidad de recoger grandes volúmenes de muestra

Desventajas

No permite una correlación entre los efectos farmacológicos y el estado clínico

Presencia de metabolitos libres y conjugados

Elevado potencial de adulteración / manipulación en la recogida

Poco indicada para análisis cuantitativos

Volumen, pH e densidad pueden condicionar la interpretación del resultado


ORINA

OBJETIVO MUESTREO



Ventajas

Fácil recogida de muestra

Presencia de la substancia original (sin metabolizar)

Concentración relacionable con la concentración en el plasma

Fácil preparación para el análisis

Determina un consumo reciente

Desventajas

Ventana de detección pequeña

Poco volumen de muestra (1 – 5 ml)

Potencial contaminación oral

Método de recogida susceptible de alterar el pH de la muestra y la concentración de las substancias.


SALIVA

OBJECTIVO MUESTREO



Ventajas

Muestra de fácil recogida

Bajo potencial de manipulación

Útil para la búsqueda de drogas, fármacos y metales pesados

Ventana de detección grande (meses, años)

Desventajas

Bajas concentraciones

No detecta consumos recientes (solo > 30 dias)

Posible contaminación ambiental

Variaciones etnicas

Factores que afectan la incorporación en el pelo (contenido de

melanina; carácter lipofílico y ácido / base de las substancias)

Valores de referencia limitados


PELO

OBJETIVO MUESTREO




OBJETIVO MUESTREO



Análisis de confirmación


Análisis de rastreo

OBJETIVO MUESTREO METODOLOGIA

IPAC (Instituto Português de Acreditação)

EA (European Accreditation)

ILAC (International Laboratory Accreditation Cooperation)



http://www.google.pt/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=0CAcQjRw&url=http://www.betalabservices.com/beta-analytic-iso-17025.html&ei=dZ5nVJmyOMLlaqiHgZgC&psig=AFQjCNFzACgCJ8E8gel4WhwAdLYsStRwTA&ust=1416163096657136


• Fáciles de ejecutar

[Análisis de un elevado número de muestras en poco tiempo]

• Economía

[Coste reducido por análisis]

• Sensibilidad

[Menor número posible de falsos resultados negativos]

Exámenes de rastreo OBJETIVO MUESTREO METODOLOGIA



• Opiáceos

• Cocaína

• Cannabis

• Anfetamina e derivados

• Metadona

• Buprenorfina

• Fenciclidina (PCP)

• LSD

• Benzodiacepinas

• Barbitúricos

• Antidepresivos tricíclicos

Testes de rastreo (Inmuno-enzimáticos)




Aspetos técnicos y metodológicos del análisis toxicológico forense

La especificidad analítica o reactividad cruzada de un imunoensayo indica como el ensayo (anticuerpo) se comporta en contacto con otras substancias químicamente relacionadas con el compuesto (antígeno) utilizado como calibrador o patrón.

La reactividad cruzada de los imunoensayos es importante para evaluar si éste es adecuado al propósito del análisis. (ejemplo: análisis de cocaína en muestras de saliva y pelo y de metabolitos de cocaína - benzoilecgonina – en el caso de muestras de urina)

Reactividad Cruzada (%) = Concentración estimada de substancia analizada

Concentración real de substancia patrón

Testes de rastreo (Inmuno-enzimáticos)






Exámenes de rastreo (Inmuno-enzimáticos)

----

----

----



El resultado de un imunoensayo puede ser negativo o positivo dependiendo si el valor de concentración es inferior o superior a un valor crítico designado como cut-off, el cual es establecido de acuerdo con el tipo de muestra y el propósito del análisis.

Cut-Off





http://www.google.pt/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&frm=1&source=images&cd=&cad=rja&docid=Z7bKLg76vJce9M&tbnid=MjGcPiQVmDsTIM:&ved=0CAUQjRw&url=http://www.sportspartner.pt/?c=42&sgg=00024&ei=dG48UeaXHuuY0QXspYCwBA&bvm=bv.43287494,d.ZG4&psig=AFQjCNFTkiP11Pyr9-GxxI0jkaVWnDqyVw&ust=1363001168315539

http://www.google.pt/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&frm=1&source=images&cd=&cad=rja&docid=Dz0jX1dJwlu4cM&tbnid=rezE1nEXHQMELM:&ved=0CAUQjRw&url=http://downloads.open4group.com/wallpapers/1024x768/salto-em-altura-7718.html&ei=Im88UbedA6mL0AXg34CoDw&bvm=bv.43287494,d.ZG4&psig=AFQjCNGURHfrSblPbIsJLiMbvrjja49bMg&ust=1363001498150269


Cut-Off

100

FNVP

VPadeSensibilid

100

FPVN

VNdadeEspecifici

Grupo VP VN FP FN Sensibilidad Especificidad

Opiáceos 21 20 5 0 100% 80%

Cocaína 20 20 4 1 95% 83%

Canabinóides 17 22 1 0 100% 96%

Anfetaminas 2 18 7 2 50% 72%

Metanfetaminas 7 18 5 1 88% 78%

Benzodiazepinas 34 38 1 2 94% 97%

Grupo Cut-Off

Sangre Orina

Opiáceos 50 50

Canabinóides 50 50

Cocaína 50 50

Anfetaminas 50 100

Metanfetamina 50 100

Metadona 50 50

Benzodiazepinas 1 1





http://www.google.pt/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&frm=1&source=images&cd=&cad=rja&docid=Z7bKLg76vJce9M&tbnid=MjGcPiQVmDsTIM:&ved=0CAUQjRw&url=http://www.sportspartner.pt/?c=42&sgg=00024&ei=dG48UeaXHuuY0QXspYCwBA&bvm=bv.43287494,d.ZG4&psig=AFQjCNFTkiP11Pyr9-GxxI0jkaVWnDqyVw&ust=1363001168315539

http://www.google.pt/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&frm=1&source=images&cd=&cad=rja&docid=Dz0jX1dJwlu4cM&tbnid=rezE1nEXHQMELM:&ved=0CAUQjRw&url=http://downloads.open4group.com/wallpapers/1024x768/salto-em-altura-7718.html&ei=Im88UbedA6mL0AXg34CoDw&bvm=bv.43287494,d.ZG4&psig=AFQjCNGURHfrSblPbIsJLiMbvrjja49bMg&ust=1363001498150269


El análisis de confirmación tiene por objetivo garantizar una identificación inequívoca de la(s) substancia(s) detectadas en los exámenes de rastreo.

Exámenes de confirmación (GC-MS; GC-MS/MS; LC-MS/MS)





• Especificidad/Selectividad

• Capacidade de Identificação

• LD/LQ

• Recuperación

• Robustez

• Carry Over (contaminaciones)

• Precisión

• Exactitud

• Linearidad y modelo de calibración

• Rango

• Estimativa de la incertidumbre

Eurachem Guide: The fitness for purpose of analytical methods ILAC Guidelines for Forensic Science Laboratories Standar practices for method validation in forensic laboratories (SWGTOX) WADA Technical document (TD2010IDCR). Identification criteria for qualitative assays incorporating chromatography and mass spectrometry






Interpretación de Resultados (Resultado cualitativo/cuantitativo)


• La substancia analizada no fue detectada porque no está presente en la amostra.

Concepto de resultado negativo

• La substancia analizada no fue detetada porque está presente en concentración inferior al límite de detección (LOD) del método analítico.




• Cuando la substancia analizada es detectada en la muestra y son cumplidos los critérios de confirmación del laboratório

Concepto de resultado positivo






Metodologia Analítica(LOD; LOQ; Cut-Off)

Interpretación Analítica:

Especificidad / Sensibilidad

Interacciones

Interpretación Toxicológica (coherencia de los resultados)

Historia (clínica, social e información policial)

Peso, edad, sexo

Farmacocinética (Absorción, Distribución, Metabolismo e Excreción)

Farmacogenética

Concentraciones / valores de referencia Tolerancia

De acuerdo con el objetivo/contexto del análisis

Tipo de muestra






Tipo de muestra

SANGRE ORINA

SALIVA PELO






Especificidad / Sensibilidad

100

FNVP

VPadeSensibilid

100

FPVN

VNdadeEspecifici






ESTRUTURA QUÍMICA

DURAÇÃO DE ACÇÃO*

LONGA semivida ≥ 24 h

INTERMÉDIA semivida 12 a 24 h

CURTA semivida 6 a 12 h

MUITO CURTA semivida 2 a 4 h

5-aril-1,4-benzodiazepinas

Clonazepam Clorazepato Clorodesmetildiazepam Clordiazepóxido Desmetildiazepam Diazepam Flurazepam Medazepam Prazepam Quazepam

Bromazepam Flunitrazepam Lorazepam Lormetazepam Nitrazepam

Oxazepam Temazepam

5-aril-1,5-benzodiazepinas

Clobazam

Imidazol-5-aril-benzodiazepinas

Midazolam

Triazol-5-aril-benzodiazepinas

Estazolam Alprazolam Triazolam

5-aril-1,4-tienobenzodiazepinas

Brotizolam

*Segundo Osswald e Moura (1997)

Farmacocinética (Absorción, Distribución, Metabolismo e Excrecçión)






OCH

3

CH3

CH3

OH

C5H

11OCH

3

CH3

CH2OH

OH

C5H

11OCH

3

CH3

OH

C5H

11

COOH

OCH3

CH3

CH3

OH

C5H

11

OH

OCH3

CH3

CH2OH

OH

C5H

11

OH

11

9

8

5

1

9-THC

10

11-Hidroxi-THC THC-COOH

8-Hidroxi-THCe

8-Hidroxi-THC

8,11-Dihidroxi-THC

Conjugados

NCH

3 COOCH3

H

O

C

O

N

CH3

H

OH

COOCH3

N

H

O

CH3

COOH

O

N

CH3

H

OH

COOH

O

N

HO

CH3

COOCH2CH

3

N

HOH

CH3

COOCH2CH

3

N

H

O

HCOOH

O

N COOCH3

CH3

N

H

O

CH3

COOH

O

OH

O

N

H

O

HCOOCH

3

Cocaína

Metilecgonina(ecgoninametiléster,

EME)

Norcocaína

Cit. P450

Benzoílecgonina

Ecgonina

Hidrólise química,

metilesterase hepática

Cocaetileno

Metilesterase hepática

+ EtOH

Etilecgonina(ecgonina etiléster)

Benzoílnorecgonina

fumada

Anidrometilecgonina(AEME)

m-hidroxi e p-hidroxibenzoílecgonina

Butirilcolinesterase

plasmática,

benzoilesterase hepática

Farmacocinética (Absorción, Distribución, Metabolismo e Excrecçión)






El citocromo CYP2D6 es responsable por la metabolización de muchas substancias psicoactivas tales como antidepresivos (ADTs; ISRSs, mianserina, venlafaxina), antipsicóticos (haloperidol, perfenazina, risperidona, tioridazina), opiaceos (codeína, dextromtorfano, etilmorfina, metadona, oxicodona, tramadol), -bloqueantes (metoprolol, propranolol, timolol) y MDMA (ecstasy).

Farmacogenética






Farmacogenética






Concentración / valores de referencia






CASO 1

Información:

Sexo femenino 33 años Enfermera Víctima de secuestro (desde hace 4 dias)/agresión/abuso sexual

Muestras: Suero

Exámenes solicitados: Drogas de abuso; Medicamentos

Metodología: Ensayos inmuno-enzimáticos Cromatografia gaseosa (GC-MS) Cromatografia líquida (LC-MS/MS)

Resultados:

Clordiazepóxido 86 ng/mL (suero) Cocaína Negativo (suero) Demoxepam 168 ng/mL (suero) Opiáceos Negativo (suero) Diazepam 67 ng/mL (suero) Anfetamina Negativo (suero) Nordiazepam 238 ng/mL (suero) Metanfetam. Negativo (suero) Oxazepam 3 ng/mL (suero) Cannabis Negativo (suero) Temazepam 2 ng/mL (suero)




CASO 2

Información:

Sexo femenino 37 años Consumidora de cocaína víctima de violación después de haber consumido Hora da agresión: 15:30 Hora de recogida de muestras: 20:30

Muestras: Sangre; Orina

Exámeness solicitados: Drogas de abuso

Metodología: Ensayos inmuno-enzimáticos Cromatografia gaseosa (GC/MS)

Resultados:

Anfetamina Negativo (sangre) Opiáceos Negativo (sangre) Canabis Negativo (sangre) Metanfetamina Negativo (sangre) Benzoilecgnonina 413 ng/mL (sangre) Ecgonina Metil Éster 63 ng/mL (sangre)




CASO 3

Información:

Sexo masculino 2 años Intoxicación Medicamentosa; Síndromes extrapiramidales Rastreo inmuno-enzimático positivo para barbitúricos y anfetaminas

Muestras: Orina 1; Orina 2

Exámenes solicitados: Cuantificación de barbitúricos y anfetaminas en suero y orina

Metodología: Cromatografia gaseosa (GC/MS)

Resultados:

Barbitúricos Negativo (orina 1 e 2) Anfetaminas Negativo (orina 1 e 2) Haloperidol 1095 ng/mL (orina 1) * Haloperidol 728 ng/mL (orina 2) *

(*) Confirmada la presença de ibuprofeno en concentraciones vestigiales




CASO 4

Información:

Sexo Masculino 15 años Alteraciones de comportamiento, episodios psicóticos, alteración del estado de consciencia Resultado negativo para drogas de abuso en rastreo hospitalar

Muestras: Orina

Examenes solicitados: Drogas de abuso

Metodología: Ensayos inmuno-enzimáticos Cromatografia gaseosa (GC-MS) Cromatografia líquida (LC-MS)

Resultados:

JWH-018 N-hidroxipentil Positivo Opiaceos Negativo Cocaína Negativo Canabis Negativo Anfetaminas e derivados Negativo





CASO 5

Información:

Sexo femenino 28 años Estudiante Enferma con historial médico complejo, con antecedentes de esquizofrenia. Medicación habitual con Leponex (clozapina) y Haldol (haloperidol) Refiere haber ingerido alcohol antes de un alegado abuso sexual

Muestras: Sangre; Orina

Examenes solicitados: Drogas de abuso; Medicamentos; Alcohol

Metodología: Ensayos inmuno-enzimáticos Cromatografía gaseosa (GC-MS) Cromatografía líquida (LC-MS)

Resultados:

Clozapina 95 ng/mL (sangre) Haloperidol 24 ng/mL (sangre) THC-COOH 5,7 ng/mL (sangre) THC-COOH 54 ng/mL (orina) JWH-018 N-hidroxipentil Positivo (orina) Alcohol (etanol) Negativo (sangre)





CASO 6

Información:

Sexo Masculino 30 años Sospecha de intoxicación con producto desconocido (polvo blanco) encontrado junto al cadáver Muerte en la vía pública con sintomas prévios de alucinaciones, agresividad y sed Autópsia: sin información específica

Muestras: Sangre; orina; polvo branco

Exameness solicitados: Drogas de abuso; Medicamentos; Alcohol

Metodología: Ensayos inmuno-enzimáticos Cromatografia gaseosa (GC-MS) Cromatografia líquida (LC-MS)

Resultados: Alcohol (etanol) 0,45 g/L (sangre) Etilfenidato Positivo (sangre) Etilfenidato Positivo (polvo branco) Medicamentos Negativo (sangre)





CASO 7

Información:

Sexo Masculino 38 años Consumo de drogas entre los 14 y los 20 años, actualmente consumo ocasional de cocaína y mas regularmente de hachís Atribución de las responsabilidades parentales

Muestras: Orina; Pelo

Examenes solicitados: Estupefacientes

Metodología: Ensayos inmuno-enzimáticos Cromatografia gaseosa (GC/MS) Cromatografia líquida (LC/MS)

Resultados:

Opiáceos negativo (Orina; pelo) Anfetaminas e derivados negativo (Orina; pelo) Cocaína Positivo (Pelo) Benzoilecgonina Positivo (Orina; pelo) THC- COOH Positivo (Orina)





CASO 8

Información:

Sexo Masculino 47 años Consumo de heroína 1988 – 1998, consumo de metadona hasta 2004, consumo ocasional de cocaína hasta 2000, actualmente consumo ocasional de alcohol Atribución de las responsabilidades parentales

Muestras: Orina; pelo

Exameness solicitados: Estupefacientes

Metodología: Ensayos inmuno-enzimáticos Cromatografia gaseosa (GC/MS) Cromatografia Líquida (LC/MS)

Resultados:

Opiáceos negativo (Orina; pelo) Anfetaminas e derivados negativo (Orina; pelo) Cocaína negativo (Orina; pelo*) Cannabis negativo (Orina; pelo)

* En la muestra de pelo fue confirmada la presencia de cocaína pero no fue detectada la presencia del principal metabolito (benzoilecgonina) por lo que el resultado final para cocaína fue negativo





CASO 9

Confirmação (GC/MS ; LC/MS) (n= 75)

87%

87%

Negativos Positivos

47% 53%

Resultados Muestra Inmunoensayo EI-GC-MS / LC-MS-MS

AMT5 Positivo Canabinoides THC-COOH; JWH-018

AMT7 Positivo Canabinoides Morfina; THC-COOH

AMT18 Positivo Canabinoides THC-COOH


AMT27 Positivo Canabinoides Morfina; THC-COOH

AMT34 Positivo Canabinoides THC; 11-OH-THC; THC-COOH



AMT46 Positivo Cocaina THC-COOH


Resultados Muestra Inmunoensayo EI-GC-MS / LC-MS-MS

AMT2 Negativo Metadona AMT3 Negativo Metadona

AMT10 Negativo THC-COOH

AMT11 Negativo JWH-018

AMT13 Negativo Metadona; THC-COOH

AMT20 Negativo Metadona




AMT35 Negativo Morfina; Benzoilecgonina AMT36 Negativo THC-COOH






AMT55 Negativo Metadona ; THC-COOH

AMT56 Negativo Metadona; Morfina; THC-COOH


AMT60 Negativo Cocaína; Benzoilecgonina; THC-COOH AMT61 Negativo Tramadol


AMT65 Negativo Metadona; MDA; THC-COOH



AMT68 Negativo Tramadol


AMT70 Negativo THC; THC-COOH

AMT71 Negativo THC; 11-OH-THC; THC-COOH




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