HEMOGRAMA MANUAL -...
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HEMOGRAMA MANUALBqco. Gonzalo A OjedaCátedra Hematología ClínicaFa.C.E.N.A-U.N.N.E2011
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Definición
ES EL ESTUDIO CUALI Y CUANTITATIVO DE LOS ELEMENTOS
CORPUSCULARES DE LA SANGRECUANTITATIVO : Recuento de GR, GB
Dosaje de HbÍndices Hematimétricos ( VCM, HCM, CHCM )Fórmula Leucocitaria
CUALITATIVO : Fórmula LeucocitariaEstudio Morfológico de la Serie Roja, Serie Blanca y Pq
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Determinaciones Adicionales
RECUENTO DE Pq
Reticulocitos
VSG
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ETAPA Pre-ANALÍTICA
Condiciones del Paciente
Tipo y Toma de Muestra
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Condiciones del Paciente
NO NECESITA ESTAR ESTRICTAMENTE EN AYUNAS (se sugiere al menos 2 h).
NO HABER REALIZADO ACTIVIDAD FÍSICA INTENSA
PERMANECER PREFERENTEMENTE SENTADO DURANTE LA EXTRACCION
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DATOS A TENER EN CUENTA
EDAD DX. PRESUNTIVO SEXO
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REFERENTE A LA MUESTRA
TIPO DE MUESTRA-VENOSA
-CAPILAR
-ARTERIAL??
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PUNCION VENOSA
VENTAJAS-Técnica rápida y segura-Permite obtener volúmenes adecuados para las demás determinaciones.-Permite repetir el análisis en caso de dudas.-Reduce los posibles errores de la punción capilar.
DESVENTAJAS-Resultados erróneos por hemo-concentración (torniquete pro-longado)-Hematomas y dolor (extraccióndificultosa)-No se recomienda en neonatoso pacientes quemados.-Paciente Oncológicos
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PUNCION CAPILAR
VENTAJAS-Resulta sencillo para neonatos yniños-Se puede realizar más de una vez en pacientes especiales (que-mados, oncológicos, etc)-Útil en pacientes con patologíasHemorrágicas.
DESVENTAJAS-Recuentos erróneos por hemo-concentración o hemodilución-Dificultad para obtener flujo continuo.-Recuentos de Pq disminuidos, coagulación.-Errores por contaminación-Paciente Oncológicos
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ANTICOAGULANTES SALES DE EDTA :Forman complejos con el Ca++, efectivo en
pequeñas cc, no necesita ser evaporado (Posible error por dilución a tener en cuenta) 0.01mL (10 µL) sirven para anticoagular hasta 2,5 mL de sangre LA RELACION NORMALMENTE USADA ES 10 µL más 1 mL de sangre (1:100)PERMITE CONSERVAR EN HELADERA LAS MUESTRAS HASTA 48 SIN ALTERAR LOS VALORES
MEZCLAS DE OXALATOS DE AMONIO Y POTASIO ( MEZCLA DE WINTROBE) Actúa precipitando el Ca²+Proporción 1/10 (0.5 mL ACG EVAPORADO a 37 + 5 mL sangre)
HEPARINA: Actúa neutralizando la trombina. Proporción 10-50 UI/mL sangre.
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Obtenida la muestra
HOMOGENEIZAR !!!!! LENTA Y REPETIDAS VECES
ANTES DE PROCESAR : HOMOGENEIZAR LENTA Y REPETIDAS VECES!!!
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ETAPA ANALÍTICA
RECUENTOS DE GB , GR y Plq Hematocrito Dosaje de Hb Fórmula Leucocitaria
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RECUENTO DE GB
DILUYENTE: LIQUIDO DE TURK-Acido acético glacial (20 mL)-Cristal Violeta 1% (10 mL)-Levar a 1000 mL con agua destilada Dilución : 1/20
380 µL + 20 µL muestra
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Muestra
HomogeneizarPor agitación
Secar con papelel dispositivo de
cargado
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RECUENTO DE GBCAMARA DENEUBAUER
PIPETAS
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CAMARA DE NEUBAUERSe trata de un portaobjetos con una depresión en el centro, en el fondo de la cual se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula. Es un cuadrado de 3 x 3 mm, con una separación entre dos líneas consecutivas de 0.25 mm. Así pues el área sombreada y marcada L corresponde a 1 mm². La depresión central del cubreobjetos estáhundida 0.1 mm respecto a la superficie, de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos éste dista de la superficie marcada 0.1 mm, y el volumen comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es de 0.1 mm³.
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Aumento 10X
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Aumento 10x
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Consideraciones prácticas PARA CARGAR LA CAMARA : SE COLOCA EL CUBRE
OBJETO Y ACERCANDO LA PUNTA DE LA PIPETA O EL CAPILAR SE LLENA POR CAPILARIDAD
EL LLENADO DEBE HACERCE DE UNA SOLA VEZ SIN QUE QUEDEN BURBUJAS, NI LÍQUIDOS EXEDENTES ALREDEDOR DEL CAMPO
NO BALANCEARLA AL ACERCAR AL MO PARA DISTINGUIR DE BASURAS MOVER EL
TORNILLO MICROMETRICO. NO DEMORARSE
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Elementos contados 4 mm²X 1mm²X N / 4
Dado que el espesor de la cámara es 0.1 mm, para expresar el número de elementos por mm³ deberemos multiplicar el valor X por 10.
X= (N/4) X 10 Como se ha efectuado una dilución de 1/20, debemos multiplicar por
la dilución, es decir:X= Nx10x20= N x 50= Nº de GB/mm³
4
Según el ICSH, debe expresarse este resultado en Nº de GB. 10x9/l
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Cálculos
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Valores de Referencia
ADULTOS : 5000 a 10.000 GB / mm³ NIÑOS- RN : 12.000 a 25.000 GB / mm³- Hasta 1 año : 6000 a 18.000 GB / mm³- 3 a 6 años : 5000 a 15.000 GB / mm³- 6 a 12 años: 4500 a 13.500 GB / mm³
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CAUSAS DE ERROR DEL MATERIAL CUBREOBJETOS MAL COLOCADO SUCIEDAD ,LEVADURAS EN EL LIQUDO DE DILUCION RESTOS DE G.R. APELOTAMIENTO DE LEUCOCITOS DESGASTE
DE TECNICA EXTRACCION DE SANGRE DILUCION (PIPETA MAL ENRASADA) LLENADO DE CAMARA EN FORMA DESIGUAL AUTOAGLUTINACION
DEL OPERADOR DIFERENCIAS DE UN INDIVIDUO A OTRO FATIGA OCULAR
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LEUCOCITOSIS
FISIOLÓGICAS- Embarazo, Lactancia, Puerperio, Período
menstrual- Ejercicio violento, Stress.
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LEUCOCITOSIS PATOLOGICASCAUSAS INFECCIOSAS
-Bacterias piógenas : Strepto, Staphylo , Meningo y gonococo.-Tos convulsa (Bordetella)Leucocitosis con Linfocitosis
-Sarampión (Inc)-Cuadros septicos : Peritonitis, Neumonía
CAUSAS NO INFECCIOSAS-Cuadros inflamatorios-Post hemorragias-Vómitos, convulsiones, crisis eclámp-sicas, epilepsia, taquicardias-Hipertemias no infecciosas-Quemaduras extensas-Sock traumático-IMC, necrosis de tejido tumoral, pan-creatitis.-Leucemias-Enfermedades metabólicas : DBT, Coma diabético, Acidosis-IRC-Endócrinopatias : Cushing- Corticoterapia
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Leucopenias-Constitucional (Rara) tener presente resultados previos-Digestiva (post prandial)-Infecciosa: fiebre tifoidea y paratifoidea-Sepsis de mala evolución-Casi todas las virosis (Sarampión, Varicela, Gripe, Neumonía )-Intoxicación por benzoles o sulfas-Hemopatías: Leucemias leucopénicas, aplasia medular, etc-Afecciones hepatoesplénicas-Cirrosis hepática, trombosis de la vena porta o esplénica-Leucopenias alérgicas, shock anafiláctico-Afecciones reumáticas-Quimioterapia-Leucopenias carenciales-Colagenopatías: LES, Esclerodermia-AINES
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DOSAJE DE Hb
Método de la Cianmetahemoglobina Fue recomendado por el Comité
Internacional para la Estandarización de Hematología (ICSH) en 1966, modificado en 1977 y sigue siendo hasta hoy el más recomendado.
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REACTIVO DE DRABKIN
Fe(CN)6K3---------------200 mg KCN---------------------------- 50 mg K3HPO3--------------------140 mg Sterox Se o Triton X-100-------1 mL Llevar a 1L con agua destilada y ajustar el pH
a 7,2 con H3PO4 0.1 N o con KOH 0.1N. Guardar en frasco color caramelo, a T amb,
estable 6 meses.
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Fundamento del MétodoHb ( Fe II )
Meta Hb ( Fe III)
Fe(CN)6K3
CIANMETAHEMOGLOBINA
KCN
MAXIMO DE ABSA 540 nm
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Técnica5 mL Rvo Drabkin + 20 µL sangre entera anticoagulada
5 minutos
Leer a 540 nm en espectrofotómetro o en fotocolorímetro confiltro verde
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Curva de calibración
Se realiza cada vez que se prepara o adquiere reactivo.
Kits comerciales : 3 niveles ( bajo, normal, alto )
Muestra testigo de cc conocida (trabajo con dilución al ½ y con el doble )
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Curva de Calibración
A=Ɛ.b.C
g/dL
Abs
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VENTAJAS DE LOS METODOS
KIT COMERCIAL-Controla la
linealidad del equipo-Estado del rvo
MUESTRA TESTIGO-Controla la linealidad del equipo-Controla la manipulación del material de medición volumétrico(en forma indirecta) pues elpatrón se procesacomo si fuese una muestra-Posible deterioro del reactivo-Variaciones de tensión, Int de la -Lampara,etc.
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Para tener en cuenta
La determinación de un patrón diario nos permite:
-Controlar que el reactivo no ha sufrido deterioro
-Controlar el factor humano-Cambios en la tensión eléctrica o
funcionamiento del equipo de lectura.
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VALORES DE REFERENCIA
13 – 17 g%13,5 – 17 g%Varones
12 – 15 g%11,5 - 14 g%Mujeres
LaboratorioBibliografía
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HEMATOCRITO O VOLUMEN GLOBULAR
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Definición
ES EL VOLUMEN DE MASA GLOBULAR EXPRESADO COMO UN % EN EL VOLUMEN DE SANGRE TOTAL
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Técnica
1-SE CARGAN TUBOS CAPILARES: Sangre venosa : Sin heparina Punción digital: Con heparina2-LLENAR HASTA 2/3 EL CAPILAR Y CERRAR
EN UN EXTREMO CON PLASTILINA3-CENTRIFUGAR EN CENTRIFUGA ESPECIAL:
15000 rpm 5 a 6 min4-LEER EN ABACO ESPECIAL
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VENTAJAS
RÁPIDO < VOLÚMEN DE SANGRE TUBOS CAPILARES DESCARTABLES MAS EXACTO YA QUE AL CENTRIFUGAR
LA SANGRE A MAYOR VELOCIDAD EL VOLUMEN DE PLASMA ATRAPADO POR LOS G.R. EN DICHA CAPA ES <
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Valores de referencia
Recién Nacido 52 – 65 % Varones 40 – 48 % Mujeres 37 – 47 %
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VALORES BAJOS -ANEMIAS-FASE DE
RECUPERACIÓN DE PERDIDA DE
SANGRE-EMBARAZADAS
VALORES ALTOS
POLIGLOBULIA REAL
HEMOCONCENTRACION : QUEMADURAS , ECLAMPSIAS,
SHOCK QUIRURGICO O TRAUMATICO
ESTADOS DE DESHHIDRATACION (VOM. DIARREAS, DIABETICOS)
HIPOXIA DE LAS ALTURAS
FUMADORES
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RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS EL CONTAJE HA ADQUIRIDO MUCHA
PRESICION CON LOS METODOS AUTOMATIZADOS
EL RECUENTO EN CAMARA ES OBSOLETO Y SUJETO AGRAVES ERRORES TANTO QUE CUANDO NO SE DISPONE DE VALORES POR AUTOMATIZACION ES MEJOR PRESCINDIR DE ESTE DATO Y GUIARSE POR LOS VALORES DE HTO Y HB.
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VALORES DE REFERENCIA
Mujeres 4 – 4.8 millones/mm³ Varones : 4.5 -5.5 millones / mm³ RN : 5.6 millones / mm³ 4 semanas: 4 millones/ mm³ 6 semanas: 3.6 millones/ mm³ 12 semanas : 3.8 millones/mm³ 6 a 12 años : 4.5 millones / mm³
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INDICES HEMATIMÉTRICOS
32 – 35 %29 ± 3 pg90 ± 5 fL
% de Hbcontenida en la masa globular total
Cantidad de Hbcontenida en un hematie
Expresa el volumen medio del GR
CHCMHCMVCM
Hto x 10GR
Hb x 10GR
Hb x 100Hto
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ANÁLISIS DE FROTIS SANGUÍNEOS
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Coloración May Grüwald - Giemsa
May Grüwald-Eosinato – Azul de Metileno-Metanol Giemsa-Eosinato de Azur II-Azur II-Glicerina y Metanol
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TÉCNICA1-Realizar el extendido – Dejar secar- Rotular2- Cubrir 3 minutos con MG (FIJACIÓN)3-Agregar en igual proporción al colorante
buffer o agua común : agua destilada (1:1) con movimientos sin eliminar todo el colorante anterior (ACTIVACION)
4-Volcar la mezcla anterior y (enjuagar) cubrir con Giemsa al 10% durante 15 minutos. PREPARAR EN EL MOMENTO
5-Dejar secar – Observar con Aceite de Inmersión
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MG
Metanol : Agente Fijador Eosinato : colorea partes básicas del
citoplasma (rosado) : hematíes, gránulos de Eos, citoplasma de granulocitos.
Azul de Metileno: granulaciones específicas de granulocitos, nucleolos, citoplasmas basófilos, hematíes policromatófilos, colorea levemente el núcleo.
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Giemsa
Colorea fuertemente las granulaciones inespecíficas (azurófilas), colorea además fuertemente los núcleos diferenciando la cromatina.
Tiñe también cuerpos de Howell Jolly, anillos de Cabot y Bastones de Auer
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RESUMIENDO… NÚCLEOS: En violeta rojizo CITOPLASMA DE LAS CELULAS
LINFOIDEAS :en azul -celeste luminoso. Los gránulos linfoideos en rojo purpúreo
LOS GRANULOS NEUTRÓFILOS .en rosado pardusco
LOS GRANULOS EOSINÓFILOS: en naranja pardo o rojo ladrillo
LOS GRANULOS BASÓFILOS: En azul marino con tonalidad violácea
ERITROCITOS en rosado rojizo
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NEUTROFILO
BASOFILO
LINFOCITO
EOSINOFILO MONOCITO
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Fórmula Leucocitaria
Cayados…………0 - 2% Neutrófilos……….50 - 70% Eosinófilos……….0 – 8 % Basófilos…………0 – 1% Linfocitos…………20- 40 % Monocitos……….. 4 – 6 %
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OCULARES
OBJETIVOS
PLATINAMACRO
CONDENSADOR
MICRO
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FIN