Nicolás AguileraVictoria CoronadoRebeca Quintana

Carla Ulloa

Fraccionamiento CelularFraccionamiento Celular

Purificación de Proteínas Purificación de Proteínas Una célula contiene millones de

proteínas distintas, separarlas y determinar su estructura es extremadamente difícil.

La purificación depende de lo que se va a determinar en una proteína:

Peso Molecular Punto isoeléctrico numero de subunidades numero de aminoácidos tipo de aminoácidos secuencia de aminoácidos

Purificación de ProteínasPurificación de ProteínasPara estudiar detalladamente las

propiedades de cualquier proteína es preciso contar con una muestra homogénea que sólo contenga moléculas de un tipo.

Las técnicas de separación se concentran en el tamaño, la carga y la polaridad, que es donde residen las diferencias de las moléculas.

Se aplican muchas técnicas para eliminar contaminantes y lograr una muestra pura de la proteína de interés.

Aislamiento de proteínasAislamiento de proteínasPara estudiar detalladamente las proteínas se

necesita extraer las proteínas de la células y orgánulos subcelulares.

Homogeneización: Ruptura de la célula.

Moler el tejido en una licuadora homogeneizador Potter-elvejhem

Centrifugación diferencialCentrifugación diferencialDespués de la homogeneización, las células

se someten a centrifugación diferencial, la muestra se hace girar a unas 500 veces la fuerza de la gravedad (500 x g).

Si la proteína deseada no se consigue, entonces la velocidad aumenta, por ejemplo a 10 000 x g, para separar las mitocondrias y así hasta obtener las proteínas deseadas para su investigación.

Una vez solubilizadas, se someten a una purificación bruda, comúnmente hecha con el sulfato de amonio y a esto se le conoce como precipitación por sales.

Resumen: “aislamiento de Resumen: “aislamiento de proteínas”proteínas”

1. Las proteínas se mantienen disueltas gracias a sus interacciones con el agua.

2. Cuando se añade sulfato de amonio a una solución de proteína, una parte del agua forma enlaces ion-dipolo con la sal.

3. Al haber menos agua disponible para hidratar las proteínas, éstas comienzan a interactuar hidrofóbicamente entre ellas.

4. A una concentración definida de sulfato de amonio, se forma un precipitado que contiene las proteínas contaminantes

5. Se separa por centrifugación y se desechan.

6. Luego se añade más sal hasta que se precipita un grupo distinto de proteínas, donde se consigue la proteína de interés.