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RESUMENLos oligosacáridos son carbohidratos formados por 2 a 10 unidades de monosacáridos los que se encuentran ligados con enlaces glucosidicos, α, β. En el siguiente laboratorio tenemos el objetivo de identificar una muestra problema otorgada por el laboratorio de Farmacognosia. Para ello realiza un análisis organoléptico, un análisis cualitativo y por último un análisis cuantitativo.Para la identificación de oligosacáridos (análisis cualitativo) es necesario primero someter a la muestra problema a reacciones generales de identificación de carbohidratos para ello usaremos los reactivos de Molisch y Antrona; si estas reacciones resultan positivas seguidamente se debe recurrir a las reacciones particulares para conocer o no su poder reductor con los reactivos de Fehling, Benedict, Tollens; también es necesario realizar la reacción de Barfoed para la diferenciación de monosacáridos y disacáridos. Entre otras reacciones usaremos la reacción de Wohlk(coloración roja para lactosa). Finalmente realizaremos reacción de la Fenilhidrazina donde obtenemos los cristales de erizo de mar con ello concluimos que nuestra muestra problema resultó ser la lactosa.El análisis cuantitativo lo realizamos según el Método de Fehling, donde determinamos el porcentaje de azúcar de un monosacárido y un disacárido (sacarosa) Palabras clave:

Oligosacáridos Disacáridos Cristalización Hidratos de carbono Azúcar reduct

ABSTRACTOligosaccharides are carbohydrates made up of 2 to 10 units of monosaccharides that are linked with glycosidic bonds, α, β. In the next lab we aim to identify a sample given by the laboratory of Pharmacognosy. It performs an organoleptic analysis, a qualitative and quantitative analysis finally.The identification of oligosaccharides (qualitative analysis) is necessary to first put to the test overall reactions of carbohydrate identification we will use reagents and Antrona Molisch, if these reactions are positive then one must resort to individual reactions to know or not its reducing power with Fehling reagent, Benedict, Tollens, it is also necessary Barfoed reaction for the differentiation of monosaccharides and disaccharides. Among other reactions will use Wohlk reaction (red coloration to lactose). Finally we will Phenylhydrazine reaction which we get the crystal sea urchin; we conclude that our sample was found to be lactose.We carry out quantitative analysis according to the Fehling method where we determine the percentage of sugar from a monosaccharide and a disaccharide (sucrose).Keywords:

Oligosaccharides Disaccharides Crystallization Carbohydrates, Reducingsugar

OBJETIVOS

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1.-Identificar los diferentes tipos de oligosacáridos mediante reacciones generales y específicas.2.-Cuantificar azucares reductores y totales en nuestra muestra problema mediante el método de Feeling.

MARCO TEORICO

DROGAS CON CARBOHIDRATOS: OLIGOSACARIDOS

Los carbohidratos son moléculas con una extraordinaria diversidad estructural y se encuentran presentes en todas las células. Antiguamente solo se les veía como moléculas proveedoras de energía (glucosa y glicógeno) y como elementos estructurales, sin embargo, ahora se conoce que contienen información. Los oligosacaridos se caracterizan por ser solubles y exhibir dulzor, el cual decrece con el largo de la cadena. La solubilidad en agua y las propiedades gelificantes, permiten utilizar a estos carbohidratos como sustitutos de la grasa. Estas propiedades, junto con los efectos fisiológicos: bajo valor energético, anticancerígeno, efecto prebiótico, mejorador de la absorción de minerales, anticariogénico, actividad antioxidante, potencian su incorporación en alimentos que normalmente contienen cantidades despreciables de tales nutrientes. Los oligosacáridos de grado alimenticio son

manufacturados por procesos químicos y enzimáticos que envuelven diversas transformaciones sobre el enlace glicosídico, tales como alargamiento o acortamiento de la cadena carbonada o por cambio de la estructura de algún monosacárido en la molécula. Se obtienen generalmente desde la hemicelulosa de materias vegetales, la cual varía en cantidad y calidad según la composición de la pared celular.

La lactosa es un azúcar que está presente en todas las leches de los mamíferos: vaca, cabra, oveja y en la humana, y que también puede encontrarse en muchos alimentos preparados. Es el llamado azúcar de la leche, (C12, H22, O11) disacárido natural compuesto de glucosa y galactosa. Es así que el presente informe permite tener un mayor conocimiento sobre la importancia de la identificación de oligosacáridos, dándole mayor cabida al encontrado en nuestra muestra problema: la lactosa.

En lo que respecta a la determinación cuantitativa de azucares reductores es frecuente la utilización del método de Fehling el cual se fundamenta en que los disacáridos no reductores se hidrolizan fácilmente en medio acido (inversión) por poseer una unión furanósica.

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METODOLOGÍASe realiza los análisis correspondientes a la muestra problema Nº13:ANÁLISIS ORGANOLÉPTICO:

Mediante el cual determinamos:El color (blanco), olor (inodoro), sabor (ligeramente dulce) y la textura del carbohidrato como sólido pulverulento de.

ANÁLISIS CUALITATIVO:Se emplearon las reacciones siguientes:

Entre las Reacciones generales de identificación de carbohidratos utilizamos:

REACCIÓN DE MOLISH:Consiste en:Colocar en un tubo de ensayo 1ml de M.P. 0,5ml de reactivo de Molisch (solución alcohólica de alfa-naftol al 2% y acido sulfúrico concentrado de densidad 1.84) más V gotas de H2SO4 [] en zona.

Se observa un cambio de coloración, con la formación de un anillo violeta, lo que no indica que es positiva para carbohidratos.REACCIÓN DE ANTRONA:Consiste en:Colocar en un tubo de ensayo 1ml de M.P. más unas gotas de reactivo de Antrona

(solución de Antrona 2% en H2SO4 de densidad 1.84).Se observa la forman de burbujas y se torna de una coloración amarilla con un precipitado verde, lo cual nos indica que la reacción es positiva.

Entre las reacciones de identificación de azucares reductores utilizamos:

REACCIÓN DE FEHLING:Consiste en:Colocar en un tubo de ensayo 1ml de R. Fehling A (sulfato cúprico pentahidratado) más 1ml de R. Fehling B (tartrato sódico potásico e hidróxido de sodio en agua) y la adición de 1 ml de M.P. en medio alcalino calentando a fuego directo.

Permite determinar la presencia de aldehídos. Mezcla de color azul (complejo cúprico tartárico) que al añadírsele la M.P. oxida a los grupos aldehídos y como resultado positivo se observa un p.p. de color rojo ladrillo (óxido cuproso).

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Entre las reacciones de diferenciación de monosacáridos de disacáridos empleamos:

REACCIÓN DE BARFOED:Consiste en:Colocar en 1 tubo de ensayo 1ml del reactivo (acetato de Cu (II)) mas 1ml de M.P. y calentar a BM.

Se observa un color constante del reactivo, no hay formación de p.p. rojo.Los disacáridos reaccionan, en forma más lenta que los monosacaridos. El grupo aldehído del monosacárido que se encuentra en forma de hemiacetal se oxida a su ácido carboxílico correspondiente. El cobre (II) (En forma de acetato) se reduce a cobre (I) (En forma de óxido), el cual forma un precipitado color rojo ladrilloMuchas sustancias, entre ellas el cloruro de sodio, pueden interferir en la prueba.Entre las reacciones de identificación particulares utilizamos:

REACCIÓN DE HERAIL:Consiste en:Colocar en tubo de ensayo 1ml M.P. más 1ml del reactivo con gotas de NaOH al 50 %Se observa un color constante del reactivo, no hay cambio de color a un azul violeta.

REACCIÓN DE POZZI-SCOTT:Consiste en:Colocar en 1 tubo de ensayo 1 ml de M.P. más 1ml de reactivo y agitar, pasado esto incorporar V gotas de H2SO4 [] en zona.

REACTIVO DE WOHLK:Consiste en:Colocar en 1 tubo de ensayo 1 ml de M.P. con 1 ml de NH4OH [], llevándolo a MB por 30min a 60ºC

Pasado el tiempo, no hubo cambios; lo que indica una “posible resultado negativo”

Entre las reacciones de cristalización empleamos:

REACCIÓN DE FENILHIDRAZINA:Consiste en: Colocar en un tubo de ensayo 1ml de solución problema más 1ml de reactivo de Fenilhidrazina, calentar a BM por 20 minutos.Luego se observa que se torna una coloración amarilla con la formación de cristales, los cuales llevamos al microscopio para observar que forma tiene.

Observamos cristales con forma de erizo, iguales a la fila inferior al extremo izquierdo.Los –OH hemiacetales libres entrar en reacción con la fenilhidrazina y formar fenilhidrazonas y osazonas. La reacción de formación de osazonas transcurre en tres etapas. Al reaccionar los azúcares reductores con la fenilhidrazina, en la primera etapa se forman fenilhidrazonas solubles en agua (reacción de sustitución). En la segunda etapa, con la fenilhidrazona formada, reacciona otra molécula de fenilhidrazina y, oxidándola, transforma el grupo hidroxilo en grupo carbonilo. La tercera molécula de fenilhidrazina entra en reacción de sustitución con el grupo carbonilo recién formado, lo que conduce a la formación de compuestos poco solubles en agua.

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ANÁLISIS CUANTITATIVOSe emplearon las siguientes reacciones, para complementar el estudio analítico de carbohidratos:

1. Determinación del TITULO de FELINHNG :

En el cual utilizamos una muestra estándar de sacarosa al 5O/OO; para determinar la concentración del reactivo.Consiste en:Colocar en un beacker 10ml del Fehling A (CuSO4), 10ml Fehling B (tartrato sódico potásico) y 5ml Fehling C (el indicador: K3Fe(CN)4); más 25ml de agua destilada. Llevándolo a valorar con la M. estándar de sacarosa, en contacto con fuego directo.

La reacción consiste en un cambio de color desde el azul-celeste, verde, hasta un amarillo pálido (indicando el punto final de la valoración)

2. Determinación del % de monosacáridos :

En el cual utilizamos un M.P. para encontrar el % de [monosacáridos].Consiste en:Colocar en un beacker 10ml del Fehling A (CuSO4), 10ml Fehling B (tartrato sódico potásico) y 5ml Fehling C (el indicador: K3Fe(CN)4); más 25ml de agua destilada. Llevándolo luego a fuego directo para valorar la M.P.

3. Determinación del % de sacarosa:

Para lo cual tratamos la M.P. de sacarosa, en los siguientes pasos:

a. HIDRÓLISIS DE LA M.P:En el cual agregamos 1 ml de HCl conc. a 10ml de M.P. para luego calentarla a BM por 20 minutos.

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Los disacáridos no reductores se hidrolizan fácilmente en medio ácido por inversión.De esta forma reaccionaran al FEHLING, al utilizar los –OH hemiacetales libres de sus componentes ante los complejos cuprotartarico.

b. NEUTRALIZACIÓN:Una vez enfriamos, agregamos NaOH 10% hasta obtener un sol. Alcalina. Si no se consigue a la primera se regula con HCl al 10% hasta obtener el pH deseado.

c. VOLUMEN FINAL:Luego, el resultado lo llevamos a un volumen final de 100ml (en fiola).

d. TITULACIÓN DE LA M.P:Llevamos la M.P. a 1 bureta para pasar a valorarla con el reactivo de FEHLING.En un beacker Colocamos 10ml del Fehling A (CuSO4), 10ml Fehling B (tartrato sódico potásico) y 5ml Fehling C (el indicador: K3Fe(CN)4); más 25ml de agua destilada.

Para luego pasar a valorar la solución a fuego directo

Punto final de la valoración: color amarillo tenue:

e. Determinamos el % de sacarosa:En el cual guiándonos de los gastos y resultados del TITULO de FEHLING, analizamos:La cantidad ml de M.P. en la disolución; (con el gasto obtenido).El % de Azucares reductores en la M.P.Y finalmente la determinar del % de sacarosa en la M.P.

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RESULTADOS ANALISIS CUALITATIVO

ANÁLISIS CUANTITATIVO:Por el método de TÍTULO DE FELIHNG A,B,C

ANÁLISIS GASTO

RESULTADOS

Determinación del TITULO de FEHLING

8ml5g—1000mlx—8mlx=0,04g

Determinación del % de azucares monosacáridos

0.5ml0,5ml—0,04g100ml—xx=8%

Determinación del % de sacarosa

8ml

a.- t. FEHLING: 0.04b.- 10—100ml x— 8ml x=0.8ml M.P.c.- 0.8ml—0.04g 100ml—x x= 5% de A.R.d.-% de sacarosa: 5x 0.95= 4.75% sacarosa

DISCUSIONES En el análisis de WOHLK, observamos un resultado negativo para la muestra problema, lo que es una contradicción con los otros resultados que evidencian la presencia de un disacárido reductor, la lactosa. Es posible que se deba a un problema de concentración del reactivo; ya

REACCIONES OBSERVACIONES

RESULTADOS

REACCIONES GENERALES

MOLISHFormación de un anillo violeta

Positivo

ANTRONAFormación de un anillo verde brillante

Positivo

REACCIONES PARA AZUCARES REDUCTORES

FEHLING

Cambio de color, de un azul intenso a un rojo ladrillo

Positivo

REACCIONES DE DIFERENCIACIÓN:

BARFOED

No hubo formación de anillo violeta, sin cambios

Negativo, para monosacáridos

REACCIONES PARTICULARES:

HERAIL

No hubo formación de coloración azul-violeta

Negativo, para sacarosa

POZZI- SCOTT

No hubo formación de anillo morado

Negativo , para sacarosa

WOLKNo hubo cambios de coloración

Negativo, observado

REACCIONES DE CRISTALIZACIÓN:

FENILHIDRAZINA

Formación de numerosos de cristales amarillos.

Cristales en forma de erizo

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sometimos a la M.P. a diferentes concentraciones y el resultado seguía siendo el mismo. Además en comparación con los resultados de los grupos que tenían muestras liquidas, para la misma reacción; sus decoloraciones o eran muy débiles o no reaccionaron como se esperaba en la teoría. Lo que demuestra una deficiencia en el reactivo utilizado. Que lleva a la confusión.

CONCLUSIONEl Método de Fehling nos ayuda a determinar el porcentaje de azúcar de una muestra problema que previamente se ha identificado la presencia de carbohidratos. Se concluyo que nuestra muestra problema es un disacárido debido a que en comparación con una muestra de un monosacárido éste reacciono relativamente más rápido en la Reacción de Barfoed. Se concluye según los análisis realizados que la muestra problema resulta ser la LACTOSA

SUGERENCIASEs importante mantener la proporción 2:2:1 del Fehling A, Fehling B, Fehling C respectivamente, según la Farmacopea puesto que alguna modificación podría variar el gasto para la obtención del Título de Fehling.Se sugiere realizar por lo menos tres veces el Título de Fehling para así obtener tres gastos y realizar un promedio; con ello ser más precisos con este dato obtenido; e inclusive esta sugerencia la podemos generalizar para diferentes métodos titulación. Cuando se realice la reacción de de Herail a nuestra muestra problema lo conveniente sería que también se le haga en simultaneo a una muestra de sacarosa

y así poder comparar el punto final de ambas reacciones.

CUESTIONARIO1.- ¿Mencione 4 drogas de interés que contienen oligosacaridos?-Caña de azúcar -Soya-Remolacha azucarera -Alcachofa

2.- ¿Si al laboratorio llega una muestra que contiene monosacáridos y oligosacaridos, cuál sería el esquema de trabajo para su respectivo análisis?

3.- ¿Cuál sería la posible interferencia en la diferenciación de monosacáridos y disacáridos con el reactivo de Barfoed?

PRUEBA DE BARFOEDLa prueba de Barfoed sirve para distinguir monosacáridos reductores de disacáridos reductores, basándose en la velocidad de reacción; en los monosacáridos reductores

MUESTRA PROBLEMA(OLIGOSACARIDO Y MONOSACARIDO)

REACCIONES GENERALESREACCION DE MOLISH:Anillo color violeta (positivo)

REACCION DE ANTRONA: Anillo color verde (positivo)

REACCION DE DIFERENCIACION DE PENTOSASREACCION DE BIAL:Color verde brillante (positivo)

REACCION DE B-NAFTOL:Anillo color azul (positivo)

REACCION DE DIFERENCIACION DE HEXOSASREACCION DE PELOUSE:Color pardo oscuro a negro (positivo)

REACCION DE DIFERENCIACION DE ALDOSAS Y CETOSASREACCION DE SELIVANOF:Color rosado (positivopara

cetosas)

REACCION DE DIFERENCIACION DE CRISTALIZACIONREACCION DE FENILHIDRACINA:Identificar los cristales de azucares segun el microscopio

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a los 7 minutos da un precipitado color rojo (oxido cuproso) mientras que para los disacáridos reductores es a los 10 minutos aproximadamenteLa interferencia que se puede producir en esta prueba sucede cuando un disacárido no reductor, como la sacarosa, puede hidrolizarse por el medio ácido del reactivo de Barfoed, dando un resultado falso positivo.

4.- ¿Indique razones por las que la lactosa es un disacárido reductor mientras que la sacarosa es no reductora.

LACTOSA Es un disacárido llamado ß-D-galactopioranosil-(1-4)-ß-D-glucopiranosido formado por, posee un enlace glucosídico ß-(1-4), este aspecto es muy importante por sus propiedades químicas pues al poseer un carbono anomérico libre (el C-1 de la glucosa), en disolución, puede abrirse y poner de manifiesto la naturaleza reductora de este disacárido.SACAROSAEs un disacárido formado por glucosa y fructosa, llamado también α-D-glucopiranosil-(1-2)-ß-D-fructofuranosido, pues posee un enlace glucosídico α- (1-2)-ß este aspecto es muy importante por sus propiedades químicas pues no posee un carbono anomérico libre, los dos carbonos anoméricos están formando parte del enlace glucosídico por lo que ninguno de los anillos puede abrirse y pierde su capacidad reductora.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

-Hidratos de carbono, disponible: en http://www.uhu.es/08007/documentos %20de%20texto/apuntes/2005/pdf/Tema_02_carbohidratos.pdf 9:34 pm 17/4/11

-Metodos cualitativos para la identificacion de carbohidratos (monosacaridos, disacáridos y polisacaridos), disponible en: http://webdelprofesor.ula.ve/farmacia/gmendez/manuales%20PDF/EXPERIMENTO%204%20IDENT%20CARB%2006-05.pdf 10:45 pm 17/4 /11