Fiebre AmarillaFiebre AmarillaFiebre AmarillaFiebre AmarillaImportancia y Uso Racional del Laboratorio en laImportancia y Uso Racional del Laboratorio en la

Vigilancia y Atención de los pacientes con cuadro clínico Vigilancia y Atención de los pacientes con cuadro clínico Vigilancia y Atención de los pacientes con cuadro clínico Vigilancia y Atención de los pacientes con cuadro clínico icterohemorrágicosicterohemorrágicos agudosagudos

Dra. MERCEDES CARRILLODirectora GeneralDirectora General

Laboratorio Central de Salud PúblicaLaboratorio Central de Salud Pública

20082008

Virus de la Fiebre AmarillaVirus de la Fiebre Amarilla

�� El agente etiológico de la Fiebre Amarilla es El agente etiológico de la Fiebre Amarilla es

un arbovirus del género un arbovirus del género Flavivirus Flavivirus un arbovirus del género un arbovirus del género Flavivirus Flavivirus

(familia Flaviviridae)(familia Flaviviridae)

Rol del Laboratorio en la Vigilancia y Rol del Laboratorio en la Vigilancia y Seguimiento de los Pacientes con cuadro Seguimiento de los Pacientes con cuadro clínico icterohemorrágicos agudosclínico icterohemorrágicos agudos

�� Vigilancia Laboratorial de febrilesVigilancia Laboratorial de febriles

�� Investigación de Brotes como componente del Investigación de Brotes como componente del Equipo de SaludEquipo de Salud

Estudios Serológicos (IgM)Estudios Serológicos (IgM)�� Estudios Serológicos (IgM)Estudios Serológicos (IgM)

�� Confirmación de circulación del virus en focos Confirmación de circulación del virus en focos sospechosossospechosos

�� Diagnóstico diferencialDiagnóstico diferencial

�� Apoyo para el diagnóstico presuntivo y Apoyo para el diagnóstico presuntivo y seguimiento clínicoseguimiento clínico

Investigación AplicadaInvestigación Aplicada�� Ante la aparición de casos sospechosos, el Ante la aparición de casos sospechosos, el LCSPLCSP

conjuntamente con funcionarios del conjuntamente con funcionarios del SENEPASENEPA y y

los del los del Hospital DistritalHospital Distrital de San Estanislao, se de San Estanislao, se

realizó una Investigación del Broterealizó una Investigación del Brote

–– Búsqueda activa de febrilesBúsqueda activa de febriles

–– Vectores Vectores

–– Datos conducentes a dilucidar los casosDatos conducentes a dilucidar los casos

DepartamentoDepartamentodede

Virología Virología

Virología Virología

Diagnóstico Diferencial Diagnóstico Diferencial -- LCSPLCSP

� Las distintas formas clínicas de la fiebre amarilla también pueden identificarse en otras enfermedades febriles que evolucionan con ictericia, manifestaciones evolucionan con ictericia, manifestaciones hemorrágicas o ambas.

� Por lo que se deben descartar las siguientes patologías:– Leptospirosis, Malaria grave; Hepatitis A, B y C y Fiebre hemorrágica por virus dengue.

Pruebas Realizadas por el LCSP Pruebas Realizadas por el LCSP en la Vigilanciaen la Vigilancia

�� Detección de AnticuerposDetección de Anticuerpos–– MACMAC--ELISA IgMELISA IgM

– Aumento de por lo menos cuatro veces en los niveles de anticuerpos de IgG contra el virus de la fiebre amarilla (seroconversión), por pruebas de neutralización (seroconversión), por pruebas de neutralización

�� Detección de virus o ARN viralDetección de virus o ARN viral

-- Aislamiento viral en cultivo celularAislamiento viral en cultivo celular

-- RTRT--PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa)PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa)

Cuando y como tomar las Cuando y como tomar las muestras de sangre ?muestras de sangre ?Cuando y como tomar las Cuando y como tomar las muestras de sangre ?muestras de sangre ?

En la etapa Virémica En la etapa Virémica (1, 2 y 3 Días)(1, 2 y 3 Días)

En la etapa Aguda En la etapa Aguda (después del 5º Día)(después del 5º Día)En la etapa Aguda En la etapa Aguda (después del 5º Día)(después del 5º Día)

En la etapa Convaleciente En la etapa Convaleciente (15 a 20 Días)(15 a 20 Días)

Tipo de muestra

Nº y volumen de

muestra

Momento de recolección Recipiente Conservación Transporte

Sangre:Serología

2 muestras de suero de 5 ml. cada una

1ª muestra (Fase aguda) después del 5º día del inicio de síntomas.2ª muestra (Fase convaleciente) a partir de decimocuarto día del inicio de los síntomas

Tubo estéril, seco, herméticamente cerrado y rotulado.No usar anticoagulantes

En heladera y remitir antes de 24 hs al LCSP.

Caja térmica c/ hielo

Sangre:AislamientoViral

Una muestra de 5 ml. de suero

En la fase aguda, hasta el 3º día del inicio de los síntomas

Tubo estéril, seco, herméticamente cerrado y rotulado.

Remitirinmediatamente alLCSP en forma

Caja térmica c/ hielo seco o Termo para suero síntomas cerrado y rotulado.

No usar anticoagulantes

LCSP en formarefrigerada. Congelara menos 70o C o enNitrógeno líquido.

Termo para Nitrógeno líquido

Órganos otejidos:AislamientoViral

Fragmentos Hasta 8 horas post-mortem Frasco con medio de transporte viral, herméticamente cerrado y rotulado

Llevarinmediatamente alLCSP o congelar amenos 70o C o enNitrógeno líquido.

Caja térmica c/ hielo seco o Termo para Nitrógeno líquido

Órganos otejidos:Inmuno-histoquímica

Fragmentos Hasta 8 horas post-mortem Frasco estéril c/ solución de formol al 10%

Temperaturaambiente

Temperatura ambiente

�� Hemograma (leucocitos, plaquetas, hematócrito)Hemograma (leucocitos, plaquetas, hematócrito)

�� AlbúminaAlbúmina

Pruebas de laboratorio Pruebas de laboratorio Clínico para Fiebre AmarillaClínico para Fiebre Amarilla

AlbúminaAlbúmina

�� Pruebas de la función hepáticaPruebas de la función hepática

�� Urea, creatinina, TP, gasometría, electrolitosUrea, creatinina, TP, gasometría, electrolitos

�� Bilirrubina, Glicemia Crasis Sanguínea y Tipificación Bilirrubina, Glicemia Crasis Sanguínea y Tipificación

�� OrinaOrina--verificar si hay hematuria microscópicaverificar si hay hematuria microscópica

Muestra para el aislamiento Muestra para el aislamiento viral y PCRviral y PCR

�� Deben ser colectadas en los Deben ser colectadas en los 3 primeros días3 primeros días de iniciado el de iniciado el estado febril (fase virémica).estado febril (fase virémica).

�� Para asegurar las optimas condiciones durante el Para asegurar las optimas condiciones durante el aislamiento, la separación del suero del coagulo se aislamiento, la separación del suero del coagulo se aislamiento, la separación del suero del coagulo se aislamiento, la separación del suero del coagulo se realizará el mismo día de la toma de muestra y realizará el mismo día de la toma de muestra y asépticamente.asépticamente.

�� Los tubos con suero se congelaran y se almacenaran en el Los tubos con suero se congelaran y se almacenaran en el freezer, en caso de no enviar inmediatamente. (Lo ideal es freezer, en caso de no enviar inmediatamente. (Lo ideal es congelar a congelar a --20º C)20º C)

�� El suero debe enviarse lo antes posible al laboratorio El suero debe enviarse lo antes posible al laboratorio realizando el transporte en congelación.realizando el transporte en congelación.

TECNICAS DE EXTARCCION Y PREPARACION DE LAS SANGREAISLAMIENTO VIRAL Y PCR DEL DENGUE

1- Usar Yodo-Alcohol con algodón para limpiar la zon a de extracción. Luego desinfectar en forma de espiral c on una gasa con alcohol

2- Esperar hasta que se seque el área desinfectada(sin soplar)(sin soplar)

3- Extraer 10 ml. de sangre con jeringa desechable

TECNICAS DE EXTARCCION Y PREPARACION DE LAS SANGREAISLAMIENTO VIRAL Y PCR DEL DENGUE

4- Cargar la sangre en los tubos estériles correctamente, identificarlos con nombre, flamear la boca de los mismos y taparlos rápidamente

Nombre y Apellido

5- Colocar los tubos que contiene la sangre entre hielo o en el refrigerador (No congelar)

6- La separación del suero debe hacerse en campana d e flujo laminar o frente a una llama (Lamparita) y con tapa boca en el mismo día d e la extracción

TECNICAS DE EXTARCCION Y PREPARACION DE LAS SANGREAISLAMIENTO VIRAL Y PCR DEL DENGUE

7- Remitir el suero al Laboratorio Central de Salud Pública en condiciones refrigeradas con la ficha epidemiológica junto con el pedido méd ico

Hoja de Pedido

Fecha Epidemiológica

No olvidar los datos Contenedor

Observación: Las muestras para aislamiento viral deben sercolectadas entre los 3 primeros días del inicio de la fiebre

datos laboratoriales como ser: Hepatograma, Creatinina y otros indicados en la ficha !!!!

D.G.V.S.DIVET

SENEPA LCSP

Otros Laboratorios

Públicos y privados

Flujograma de Envíos de Muestras y Resultados Flujograma de Envíos de Muestras y Resultados Laboratoriales de Fiebre AmarillaLaboratoriales de Fiebre Amarilla

REGION SANITARIA

HospitalCentro de

SaludPuesto de

Salud

Otros Servicios de Salud

Públicos y Privados

Ficha Epidemiológica de Ficha Epidemiológica de Fiebre Amarilla y Fiebre Amarilla y Criterios de rechazo de Criterios de rechazo de muestrasmuestras

• Muestra de paciente sin cuadro febril

ictérico agudo

• Muestra extraída y remitida en• Muestra extraída y remitida en

condiciones inapropiadas (en jeringa,

frasco inadecuado, muestra inadecuada,

transporte inadecuado)

• Muestra sin ficha epidemiológica o no

completada correctamente (importante

indicar fecha de inicio de síntomas y

antecedentes de vacunación)