Evaluación de la actividad genotóxica del extracto metanólico de Gynosis verrucosa

mediante el ensayo Micronúcleos con bloqueo de Citocinesis en la línea celular

Astrocitoma cerebral (D-384)

Diana J. Herrera Torres

Director:Dr. Natalia Bailón M.

Universidad Técnica Particular

de Loja

La muerte por cáncer en 2007 fueron 7.6 millones personas En el 2008, los diagnósticos de cáncer fueron de 1.4 millones de personas.

El cáncer se caracteriza por un crecimiento incontrolado y la propagación de células anormales

DEFINICIÓN

Macdonald F. et al ,2004

INCIDENCIAPulmón (25%)Próstata (15%)Colon y recto (10%)

En 1997 al 2002Mujeres: cérvix invasor, mama, piel, estomagoHombres: Estómago, próstata, leucemia

Pulmón (26%) Mama (14%)Colon y recto (10%)

Mujeres: mama y cérvix Hombres: próstata y estómago.

Veniecuador, 2005

Aracno, 2006

Brown, 2008 Iriarte, 2008

TRATAMIENTO Procesos quirúrgicos

Quimioterapia sistémica

Radiación

Novo J., 2005García J., 2003

Navarra, 2007

AGENTES ANTICANCERIGENOS

2.Epipodofilotoxinas

4.Camptotecinas

1. Alcaloides de la Vinca

3. Taxanos

Desde décadas atrás se han utilizado especies vegetales y microorganismos para obtener principios activos para la fabricación de nuevos medicamentos.

Taxus brevifolia

Catharanthus roseus

Camptotecina cuminata

Podophyllum peltatum

Carrión, 2007

Gynoxis verrucosa

Familia: Asteraceae

Nombres Comunes Guángalo, Congona

Parte usada Hojas

Usada alergias, espanto, dermatitis y nervios.

3,4-dihidroxi-bisabola-1,10-dieno

2-(2-(acetoximetil) oxiran-2-il)-5-metilfenil isobutirato

ácido 3,5-dicafeoilquínico flavonoide glicosidado eupalitina

Dehidroleucodina Acetilhanfilina Kauniolida 1 α,10α-epoxy-2α-hidroxikauniolidaCH3

O

OCH3

CH2

O

O

CH3

CH2

O

CH3

O

O

CH3

(S)(Z)

(S) (S)

(Z)

O

O

H

Malangón O. 2007

O

O

OH

O

H

(S)(R)

(S)

OH

OH(S)

O

O

O

O

O

HOOC OH

O

OH

HO

O

OH

O

OH

OH

OH3CO

H3CO

OH O

OR

OH

R =Glucoside

Gynoxis verrucosa

El extracto metanólico mostró IC50 = 22,06 ± 10,7ug/ml

El extracto metanólico mostró en CHO-K1

Citotóxico a <100ug/ml Citostático a <10ug/ml

     

Extracto D384 A549 MCF-7 CAKI

Gynoxis verrucosa

22,06±10,7

57,06±2

,61 62,14±1,

6942,73±8,

14

LÍNEA CELULAR TUMORAL HUMANA

DL50 (ug/ml) ENSAYO MTS

(Astudillo A., 2006)

Micronúcleos con bloqueo de citocinesis (CBMN)

Micronúcleos evalúa la inestabilidad genética, indica rotura cromosómica, en biomonitoreo de exposición a genotóxico y sus efectos en humanos.

Los MN se forman por ruptura directa del ADN

Posibles destinos a la exposición citotóxicos o agentes genotóxicos

OBJETIVO GENERAL Evaluar la actividad

genotóxica del extracto metanólico de Gynoxis verrucosa mediante el ensayo CBMN en la línea celular Astrocitoma cerebral (D384).

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

• Establecer el efecto citostático mediante Índice de División Nuclear en la línea celular Astrocitoma cerebral (D384).

• Establecer el efecto genotóxico mediante la evaluación de Micronúcleos en la línea celular Astrocitoma cerebral (D384).

MATERIALES Y METODOS

24 Horas

24 Horas

24 Horas

Siembra TratamientoCultivar células D-384

Evaluación

CosechaTinción

24 Horas

GRUPOTRATAMIENTO

VehículoConcentraciones

de prueba MMC Citocalasina B

Cont. Positivo MMC ------ ---- 1 uM (5ul) 4.5ug/ml (33 ul)

Concentración 25ug/ml DMSO 25ug/ml (62,5ul) ---- 4.5ug/ml (33 ul)

Concentración 20ug/ml DMSO 20ug/ml (50ul) --- 4.5ug/ml (33 ul)

Concentración 10ug/ml DMSO 10ug/ml (25ul ) ---- 4.5ug/ml (33 ul)

Cont. Negativo DMSO < 0.5% ---- ---- 4.5ug/ml (33 ul)

MATERIALES Y METODOS

MATERIALES Y METODOS

24 Horas

24 Horas

24 Horas

Siembra TratamientoCultivar células D-384

Evaluación

CosechaTinción

24 Horas

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

DMSO 10 20 25 MMC 1uM0

25

50

75

100Mo Bi Po

Concentración G.v (ug/ml)

% d

e ce

lula

s M

o, B

i, Po

li

Provoca daño puntual que interactúan directamente al ADN, indicando toxicidad.

Figura.3.1. Efecto del extracto G. verrucosa en la proliferación celular T. de DUNETT. *P<0.00001, **P<0.008.

DMSO 10 20 25 MMC 1uM1.0

1.2

1.4

1.6

1.8

2.0

Concentración G. v (ug/ml)

IDN

El IDN hace referencia a la velocidad de la división celular siendo un indicativo del grado de toxicidad.

Se sabe que extracto en células CHO-K1, 10ug/ml es citostático medido por curva crecimiento clonal (Astudillo, 2006)

INDICE DE DIVISION NUCLEAR

Figura 2. Índice de división nuclear T. de DUNETT. *** P<0.00001; **P< 0.00002; *P<0.00003

RESULTADOS Y DISCUSIÓN Estableciendo que el efecto puede variar dependiendo de la

naturaleza del estudio .

La diferencia del modelo, la diversa sensibilidad de cada técnica

Antineoplásico Citotóxico No citotóxico

Carboplastino CHO-K1 Linfocitos

Tamoxifeno MCF-7 MDA-MB468

Frecuencia de Micronucleos

control 10 20 25 MMC 1uM0

10

20

30

40

50

60

70

Concentraciones G. v (ug/ml)

CB

N m

icro

nu

cle

os

/10

00

CB

N

Figura 3. Efecto genotóxico, en las células D384, T. de DUNETT. *P> 0,00001.

FRECUENCIA DE MICRONUCLEOS

Hay un incremento en la frecuencia de MN conforme incrementa la concentración del extracto , por lo que creemos que los datos obtenidos se debe a la presencia de lactonas sesquiterpénicas.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Las lactonas sesquiterpénicas afectan la formación del huso mitótico lo que podría indicar el incremento de micronúcleos.

Se observa una actividad genotóxica por el incremento de la frecuencia de MN a partir de 1ug/ml en linfocitos humanos CBN (Toledo Z., 2007)

Medido por el ensayo cometa se puede evidenciar un incremento en el daño al ADN a partir de 0.01ug/ml. (Vintimilla A., 2007)

El extracto metanólico de Gynoxis verrucosa a las concentraciones de 10, 20 y 25ug/ml no tiene un efecto citostático en la línea celular de Astrocitoma cerebral D-384 evaluadas mediante el índice de división nuclear.

CONCLUSIONES

El extracto metanólico de Gynoxis verrucosa tiene un efecto genotóxico produciendo un daño significativo en la línea celular de Astrocitoma cerebral D-384 evaluadas mediante la frecuencia de MN a las concentraciones probadas de 10, 20, 25ug/ml en células binucleadas.

GRACIAS

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