UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

FACULTAD DE RECURSOS NATURALES RENOVABLES

CONSERVACION DE SUELOS Y AGUA

ENUMERACION DE MICROORGANISMOS DEL SUELO

CURSO : MICROBIOLOGIA DEL SUELO

INTEGRANTES : ACOSTA ASTO, Daily

BAILON OBREGON, Benjamín

DIAZ PAREDES, Janeth

DAMIAN LUJAN, Admir

LOPEZ ANGULO, Richard

OLORTEGUI UTIA, Liseth

FIGUEREDO CÁRDENAS Alejandra María

DOCENTE : ING. GUERE SALAZAR, Fiorela Vanesa.

TINGO MARIA – PERU

2013

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I. INTRODUCCIÓN

Microbiología es el estudio de los organismos microscópicos, deriva

de 3 palabras griegas: micros (pequeño) bios (vida) y logos (ciencia) que

conjuntamente significan el estudio de la vida microscópica.

Para mucha gente la palabra microorganismos le trae a la mente un

grupo de pequeños criaturas que no se encuadran en ninguna de las categorías

de la pregunta clásicas ¿es animal, vegetal o mineral? Los microorganismos son

diminutos seres vivos que individualmente son demasiado pequeños como para

verlos a simple vista.

Los microorganismos del suelo destruyen los productos de desecho e

incorporan el gas nitrógeno del aire en compuestos orgánicos así como reciclan

los productos químicos en el suelo agua y aire: ciertas bacterias y algas juegan un

papel importante en la fotosíntesis ,que es un proceso que genera nutrientes y

oxígeno a partir de luz solar y CO2 siendo un proceso crítico para el

mantenimiento de la vida sobre la tierra : los hombres y algunos animales

dependen de las bacterias que habitan en sus intestinos para realizar la digestión

y síntesis de algunas vitaminas como son la K y algunos de complejo B .Los

microorganismos también tienen aplicaciones industriales ya que se utilizan en la

síntesis de productos químicos como son acetona, ácidos orgánicos, enzimas,

alcohol y muchos medicamentos.

Nosotros podemos hacernos una idea de cómo se han desarrollado

nuestros actuales conceptos de microbiología repasando los acontecimientos

históricos que han cambiado nuestras vidas.

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La microbiología es una ciencia biológica que estudia la estructura,

fisiología, genética ecología y las aplicaciones socioeconómicas de los

microorganismos. Es decir, de aquellos seres vivientes comprendidos en los

reinos Fungí (hongos), Protista y Monera (bacterias), incluyendo a los virus y a

otros organismos moleculares. La microbiología utiliza técnicas como la

esterilización, el empleo de medios de cultivo, el análisis molecular y bioquímica,

para el aislamiento y crecimiento de los microorganismos.

I.1. Objetivos General

Determinar la enumeración de microorganismo del suelo en el bosque

reservado de la universidad nacional agraria de la selva (BRUNAS).

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II. REVISION DE LITERATURA

II.1. Desarrollo histórico de la microbiología

Como otras ciencias, la microbiología actual ha seguido también un

desarrollo histórico, que por razones didácticas aquí se ha dividido en seis

periodos se mencionarán cuatro de ellos.

a. Periodo especulativo (3 millones de años a.c. – 1676)

Este periodo se inicia desde los 3 a 2.5 millones de años A.C con la

evolución del género homo. Al desarrollarse las primeras prácticas agrícolas y el

procesamiento empírico de los alimentos (1000-7000 A.C) el hombre inicia

inconscientemente su relación eterna con los microorganismos. Fueron los

sumerios, babilonios y, más exquisitamente, los egipcios los que emplearon

directamente a los microorganismos al desarrollar la fabricación del pan y la

cerveza. Otras culturas más recientes también han utilizado los microorganismos

particularmente en su alimentación, bebidas alcohólicas han estado presentes en

las culturas asiáticas, africanas, europeas y americanas; los alimentos

fermentados han sido desde sus orígenes fundamentales en la dieta de los

asiáticos. Más tarde, Fracastoro (1546) sugiere que organismos invisibles eran los

causantes de las enfermedades. Otros como Robert Hooke (1664) describieron

observaciones microscópicas de hongos .Pero fue en octubre de 1676 Anthony

Van Leeuwenhoek; (1632-1723) publica en la revista “PHILOSOPHICAL

TRANSACTIONS OF THE ROYAL SOCIETY”, su primer articuló sobre

observaciones microscópicas y la primera persona en describirlos

microorganismos en detalle, a los cuales denomino animáculos.

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b. Periodo especulativo (3 millones a.c, 1676)

Aparición Genero Homo (3 A 2.5 millones A. A. C)

Practicas Agrícolas (10,000 –7000 A. A. C), Procesamiento Empírico de los

Alimentos

Egipcios M .O. Pan y Cerveza Otras Culturas: asiáticas, Africanas,

Europeas, Americanas

Bebidas Alcohólicas Alimentos Fermentados

Fracastoro (1546) = M .O. Enfermedades

Robert Hooke (1664) = Observaciones Microscópicas Hongos

c. Periodo de la observación (1676-1867)

Después que las publicaciones de Leewenhoek demostraron la

existencia delos microorganismos fue necesario, sin embargo, esperar cerca de

200 años para que la microbiología tenga un avance rápido. Esto fue debido

principalmente al predominio en aquella época de la Teoría de la Generación

espontánea. Este fue un periodo de duro enfrentamiento filosófico entre los

diversos científicos que termino con tal Teoría. Hombres como Francesco Redi

(1626 –1698) Lázaro Spallanzani (1729-1799), Jhon Tyndall (1820-1893) y.

principalmente, Louis Pasteur (1822-1895), dieron la victoria e impulsaron

vigorosamente a la microbiología.

La idea de la generación espontánea se remonta a la cultura griega,

los cuales creían que las ranas y gusanos crecían espontáneamente a partir del

lodo, incluso existían recetas: llenando una tinaja con trapos y colocándola en un

sitio apartado durante semanas al final crecían ratones a partir de trapos. En el

siglo XVII el italiano Francesco Redi demostró en 1668 que los gusanos

encontrados en la carne podrida eran las larvas que provenían de los huevos que

previamente habían depositado en la carne las moscas y no el producto dela

generación espontánea. Sin embargo una cosa eran huevos de moscas y otra los

microorganismos que solo se podían ver, con la ayuda del microscópico. En 1745

Jhon Needham hirvió trozos de carne para destruir los organismos preexistentes y

los coloco en un recipiente abierto. Al cabo de un tiempo observo colonias de

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microorganismos sobre la superficie y concluyo que se generaban

espontáneamente a partir de la carne.

En 1769, Lázaro Spallanzani repitió el experimento pero tapando los

recipientes, no apareciendo las colonias, lo que contradecía la teoría de la

generación espontánea. Pero Needham argumento que el aire era esencial para

la vida incluida la generación espontánea de microorganismos y este aire había

sido excluido en los experimentos de Spallazani.

e. El periodo de la genética microbiana (1941-1970)

A inicios de la década de los 40 no estaba plenamente confirmada la

participación de los ácidos nucleicos como los agente fundamentales en la

transmisión hereditaria de los organismos vivientes. Si bien los trabajos de

Mendel habían dado origen a la genética, no se incluia a los microorganismos y,

en todo caso, era un misterio su comportamiento genético. Fueron G, W. Beadie y

E.L Tatum quienes en1941, probaron la relación entre los genes y las enzimas

encontrar mutantes auxotroficos (incapaces de sintetizar un metabolismo y,

entonces, dependientes del suministro extenso de este) del hongo Neurospora.

En 1943, Max Delbruck y Salvatore Luria encontraron mutaciones

espontáneas en bacterias. Un año más tarde, O.T. Avery, C.M. Macleed y M.

Mccarty probaron contundentemente que el DNA era la molécula hereditaria y que

las bacterias podían transferir genes mediante la transformación, J.Lederberg y

E.L. Tatum (1946) demostraron que algunas bacterias también podían transferir

genes mediante contacto célula (conjugación). En 1952, F.H.C.Crick, J.D. Watson

y W.Wilkins propusieron el modelo estructural del DNA.

En este periodo, también, se inicia la utilización de los nuevos

conceptos dela genética de microorganismo para lograr mejorar las

características culturales e incrementar las capacidades metabólicas de los

microorganismos utilizados en la producción industrial. Se considera que el uso

de la Muta génesis con estos propósitos es casi inmediato al hallazgo de

mutantes de Neurospora. La Muta génesis con estos propósitos es casi inmediata

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al hallazgo de mutantes Neurospora. La Mutagenesis es aun utilizada en los

programas de mejoramiento genético de microorganismo de uso industrial El

periodo anterior fue sin duda muy rico en descubrimiento genético y molecular los

cuales continúan actualmente. Sin embargo, en 1973 se publicó un artículo en el

que se demostraba la factibilidad de introducir y expresar genes foráneos en

bacterias. Particularmente el gen de las omatostaina, una hormona de mamíferos,

pudo ser expresado en Escherichia coli.

Esto dio lugar al resurgimiento y modernización de la Biotecnología,

es decir, de la aplicación de ingeniería de los procesos biológicos desarrollados

por células microbianas, vegetales o animales, por sus componentes o partes,

con la finalidad de obtener bienes y servicios. Actualmente se produce en forma

industrial varias proteínas humanas, animales y vegetales empleado

microorganismo. La formación de industrias biotecnológicas ya ha causado una

nueva Revolución industrial, cuyo máximo nivel e podría alcanzar recién en las

primeras décadas del próximo siglo.

II.2. Microbiología y tecnología

Como ciencia la microbiología contribuye no solo descubriendo de la

verdad, sino también al desarrollo socioeconómico de la humanidad. La aplicación

económica de la microbiología depende de un buen balanceentre tres

componentes. Materia prima (constante) (MP, Tecnología (T) ynivel de la

microbiología (M).

Dentro de las diferentes sociedades actualmente existentes en el

mundo se pueden encontrar cuatro variaciones.

La primera corresponde a Japón y varios países asiáticos

La segunda a la ex Unión Soviética

La tercera a Europa y EEUU

Y la cuarta a los países del Sur (Tercer Mundo).

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II.3. Microbiología del suelo

Existe una gran diversidad de microorganismos que viven en el suelo.

El número y tipos de microorganismos presentes en el suelo dependen de

diversos factores ambientales como son los nutrientes, humedad, aireación,

temperatura, pH, prácticas agrícolas, etc. Existen del orden de varios miles de

millones de bacterias por gramo de suelo. La mayor parte son heterótrofos, siendo

comunes los bacilos esporulados, los actinomicetos que son los responsables del

olor a tierra mojada, y en la rizosfera (región donde el suelo y las raíces de las

plantas entran en contacto) especies de los géneros Rhizobium y Pseudomonas.

II.3.1. Ciclos biogeoquímicos

El planeta Tierra actúa como un sistema cerrado en el que las

cantidades de materia permanecen constantes. Sin embargo, sí existen continuos

cambios en el estado químico de la materia produciéndose formas que van desde

un simple compuesto químico a compuestos complejos construidos a partir de

esos elementos. Algunas formas de vida, especialmente las plantas y muchos

microorganismos, usan compuestos inorgánicos como nutrientes. Los animales

requieren compuestos orgánicos más complejos para su nutrición. La vida sobre

la Tierra depende del ciclo de los elementos químicos que va desde su estado

elemental pasando a compuesto inorgánico y de ahí a compuesto orgánico para

volver a su estado elemental. Los microorganismos son esenciales en estas

transformaciones químicas

Ciclo del nitrógeno

La fijación biológica de nitrógeno, crucial en el ciclo biogeoquímico del

nitrógeno, es considerada, después de la fotosíntesis, como el proceso

bioquímico más importante para el mantenimiento de la vida sobre la Tierra.

FIJACIÓN DE N2

La llevan a cabo las bacterias diazofróficas para su propio

crecimiento. Sólo cuando mueren se liberan al medio los compuestos orgánicos

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nitrogenados que se transforman en nitrato y amonio, que ya pueden asimilarse

por las plantas o por otros microorganismos.

Azospirillum basilense

Bacteria fijadora de N2 que se encuentra con frecuencia en la

rizosfera del maíz y otras gramíneas. Además produce fitohormonas que

favorecen el desarrollo de las plantas

Fijación de n2 en simbiosis

Las bacterias de la familia Rhizobiaceae, conocidas con el nombre

genérico de rizobios, se caracterizan por infectar las células de las raíces de las

plantas leguminosas y formar nódulos (Figura 1), estructuras características de la

interacción bacteria-planta en el interior de las cuales unas células especializadas,

los bacteroides (Figura 2) reducen el N2 a amonio.

La fijación simbiótica de N2 es un proceso no contaminante y

respetuoso con el medio ambiente, por lo que debería emplearse para disminuir el

empleo excesivo de fertilizantes nitrogenados

II.3.2. Características físicas del suelo

Hay diferentes tipos de suelo y sus características varían

dependiendo de la localización y el clima. Los suelos difieren con profundidad,

propiedades físicas, composición química y origen. Estos pueden clasificarse

como suelo. Minerales y orgánicos. Los suelos minerales contienen materia sólida

mayormente inorgánica. Los suelos orgánicos contienen poca materia inorgánica.

II.3.3. Composición del suelo

El suelo está compuesto de diversas capas. A dichas capas se les

llama horizontes y cada una se caracteriza por su composición abiótica y/o

biótica.

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Horizonte A

Aquí encontramos los minerales y la materia orgánica en distintos

estados de descomposición. En esta capa se localiza el humus. El humus se

define como el conjunto de residuos orgánicos, vegetales y animales que se

incorporan al suelo y cuya degradación es difícil de realizar por microorganismos.

La importancia de éste, es que mejora la textura y estructura del suelo,

aumentando así su capacidad de retener agua y reduciendo los cambios en el pH.

Además sirve como reserva de materiales nutritivos en el suelo.

Horizonte B

En esta capa encontramos partículas finas y minerales.

Horizonte C

Este se compone de materia mineral solamente.

Horizonte D

Esta capa posee roca sólida bajo el suelo, es importante para la

formación de acuíferos. En Puerto Rico los acuíferos se localizan al norte de la

isla, siendo éstos muy importantes como reserva de agua.

II.3.4. Material sólido del suelo

El material sólido que forma parte del suelo es muy diverso y se divide

en dos clases: material orgánico y material inorgánico.

Material inorgánico

1. Partículas coloidales: Provienen de la erosión de las rocas subyacentes y están

constituidos por minerales arcillosos. Tienen gran capacidad de adsorción

convirtiéndose en almacenes de agua y nutrientes para las plantas.

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2. Minerales: Los principales son el cuarzo y diversos silicatos procedentes de la

disgregación de las rocas ígneas y metamórficas.

3. Óxidos: Principalmente los óxidos de hierro de ahí la típica coloración ocre. Y

en menor proporción los óxidos de magnesio, titanio, aluminio y cinc.

4. Los carbonatos: El principal es el carbonato cálcico, son una gran fuente de

carbono con abundante presencia en el suelo.

Material orgánico:

Consiste en una mezcla de biomasas, plantas parcialmente

degradadas, organismos vivos microscópicos y el humus. El humus es el residuo

originado por la acción de hongos y bacterias sobre las plantas y esta compuesto

por una fracción soluble y una fracción insoluble: la humina. Este componente

desempeña un papel importante en los procesos físicos y químicos que tienen

lugar en el suelo.

II.3.5. Propiedades características de los suelos

Cada suelo se caracteriza por sus propiedades físicas y químicas. El

conocimiento de las características físico-químicas de un suelo, nos permitirá

prever la dinámica de las sustancias contaminantes:

1. LA POROSIDAD: Condiciona la movilidad de los compuestos solubles y de los

volátiles.

2. LA TEMPERATURA: De ella dependen los procesos de alteración de los

materiales originarios o la difusión de los contaminantes

3. LOS PROCESOS ÁCIDO-BASE: Influyen en el grado de descomposición de la

materia orgánica y de los minerales, en la solubilidad de algunos contaminantes y

en conjunto, los procesos controlados por el pH del suelo.

4. LAS REACCIONES REDOX: Originados en el metabolismo de los

microorganismos del suelo, afectan a elementos naturales y contaminantes.

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5 LAS PROPIEDADES COLOIDALES: Explican los procesos de agregación e

inmovilización de partículas.

6. LAS INTERACCIONES SUPERFICIALES: Como por ejemplo la adsorción

entre componentes del suelo y otros compuestos ya sean naturales o

contaminantes.

7. LA CAPACIDAD DE INTERCAMBIO IÓNICO: Corresponde a la cantidad de

iones metálicos que una determinada cantidad de suelo es capaz de intercambiar.

Estos intercambios son vitales para que los iones metálicos puedan acceder a la

planta.

8. La modificación o transformación por contaminación, deforestación, de alguno

de los factores que conforman un suelo implica un desequilibrio que afecta al

resto de los factores y activa normalmente, procesos de regresión en ese suelo.

II.3.6. Factores que contribuyen al número y tipo de microorganismos

en el suelo

Composición del suelo (cantidad y tipo de nutrientes.), Características

físicas del suelo (grado de aeración, humedad, temperatura y pH.), Tipo de

plantas en el suelo (el sistema de raíces influye en el número y tipo de

organismos presentes.

II.3.7. Flora Microbiana en el Suelo

En un suelo fértil podemos encontrar raíces de plantas superiores,

diversos animales y una gran cantidad de microorganismos.

II.3.7.1. Bacterias

Estas exceden la población de todos los otros grupos de

microorganismos. Encontramos todo tipo de bacterias desde autotróficas,

heterotróficas, aeróbicas y anaeróbicas.

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II.3.7.2. Hongos

Cientos de especies se encuentran en el suelo, generalmente cerca

de la superficie donde prevalece una condición aeróbica. Los hongos son los

descomponedores de celulosa, lignina y pectina. La importancia del hongo en el

suelo es que mejora la estructura física mediante la acumulación de sus micelios

en él. Además los hongos forman unos agregados que ayudan a retener agua.

II.3.7.3. Algas

Mayormente encontramos algas verdes y diatomeas en la superficie o

cerca de ésta ya que necesitan luz para llevar a cabo fotosíntesis. Estas juegan

un papel importante en suelos erosionados o desérticos, ya que como son

fotosintéticos inician la acumulación de materia orgánica en esa área.

II.3.7.4. Protozoarios

Son importantes en la cadena alimentaria, ya que su modo de

nutrición es la ingestión de bacterias controlando así la población bacteriana.

II.3.7.5. Virus

Este grupo incluye fagos, virus de plantas y virus de animales.

II.3.7.6. La rizósfera

Es la capa de suelo que se encuentra adyacente a las raíces. Esta

región se caracteriza por una alta población microbiana. Las bacterias que crecen

en la rizósfera se ven afectadas positivamente por substancias que liberan las

plantas como aminoácidos, vitaminas y otros.

A la vez el crecimiento de las plantas se ve afectado por substancias

liberadas por la población microbiana.

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II.3.8. Interacción entre los microorganismos del suelo

II.3.8.1. Relaciones simbióticas

Neutralismo

Es esta relación dos especies ocupan el mismo ambiente sin que se

afecte una o la otra (neutral.)

Mutualismo

Es una asociación donde cada uno de los organismos envueltos se

benefician (relación positiva.

Comensalismo

Es esta relación un organismo se beneficia mientras que el otro no se

afecta (relación positiva). Un ejemplo lo observamos en los hongos que degradan

celulosa a glucosa y otros compuestos, las bacterias no pueden degradar

celulosa, pero sí glucosa beneficiándose de esta forma.

Antagonismo

Esto se observa cuando una especie afecta adversamente el

ambiente de otra especie, produciendo diferentes substancias inhibidoras o

antibióticas (relación negativa. Un ejemplo lo vemos en la producción de

sustancias inhibidoras como: antibióticos, cianuro (producido por hongos),

metano, sulfuros, enzimas líticas (éstas rompen la pared celular de las bacterias).

II.3.9. Los medios de cultivo en microbiología

THOMAS. Et al. (1991). Uno de los sistemas más importantes para la

identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias

alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el

que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los

microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de

cultivo diferentes.

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Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de

cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura,

grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto

de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y

factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo

contaminante.

La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos

similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la

base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y

Peptona a la que se añadirán otros ingredientes.

El agar es un elemento solidificante muy empleado para la

preparación de medios de cultivo. Se licúa completamente a la temperatura del

agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimas excepciones

no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas

que crecen en él.

II.3.10. Características De Las Colonias Bacterianas

Para conocer mejor las características de los microorganismos es

necesario estudiarlas en un medio puro.  Un cultivo puro es aquel que contiene

una clase de microorganismo, por eso se debe evitar la contaminación.  Para esto

se debe cultivar con la cantidad de nutrientes y los medios necesarios.  (Brock

1999).

La solución acuosa con los nutrientes necesarios se llaman medio de

cultivo.  Un medio de cultivo requiere de una fuente de carbono, nitrógeno y otros

nutrientes.  La célula requiere de dos tipos de nutrientes: macro y

micronutrientes.  El carbono es muy importante porque a partir de éste la célula

fabrica material celular.  El siguiente elemento más abundante es el nitrógeno ya

que forma parte de proteínas, ácidos nucléicos y otros constituyentes celulares. 

Algunos otros macronutrientes son el fósforo, el azúfre, el potasio, magnesio,

calcio, sodio y hierro.  Entre los micronutrientes son metales que forman parte de

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enzimas.  Los factores de crecimiento incluyen vitaminas, aminoácidos, purinas y

pirimidinas. (Brock 1999) .

Los dos grupos de medios de cultivos son los químicamente definidos

y los indefinidos o complejos.  Los primeros se preparan añadiendo a agua

destilada cantidades precisas de compuestos purificados, por eso se conoce la

composición exacta.  A veces no es necesario conocer exactamente la

composición química.  Los medios complejos usan lisados de sustancias

nutritivas.  (Brock 1999).

Los medios de cultivo pueden ser preparados para usarse en estado

líquido o como geles semisólidos.  Un medio de cultivo líquido puede pasar a

semisólido agregándole un agente solidificante  que normalmente es el agar.  En

las cajas de Petri, es donde se hacen los medios de cultivos con agar. (Brock

1999).

Para evitar contaminantes se debe utilizar la técnica aséptica.  Los

contaminantes aéreos son los que presentan el problema más común.  Las

transferencia aséptica de un tubo a otro se realiza con un asa o una aguja que ha

sido esterilizada por calentamiento.  Los cultivos también piden ser transferidos a

placas. (Brock 1999).

II.3.11. Métodos de aislamiento

THOMAS. Et al. (1991). El aislamiento de bacterias a partir de

muestras naturales se realiza, en la mayoría de los casos, mediante la producción

de colonias aisladas en cultivos sólidos. El crecimiento explosivo de las bacterias

permite producir un gran número de ellas a partir de una única célula inicial de

forma que, tras un periodo de incubación en las condiciones ambientales

adecuadas, se produce una colonia observable a simple vista y formada por

individuos iguales (un clon bacteriano).

Sin embargo, no todos los microorganismos presentes en las

muestras ambientales son cultivables (microorganismos no cultivables). Esto es

debido a dificultades intrínsecas en el cultivo (microorganismos parásitos de

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otros), al desconocimiento de los requerimientos específicos de cultivo, y a la

existencia de grupos de microorganismos que deben mantenerse en equilibrio

para poder sobrevivir (casos de sintrofía por ejemplo).

Se estima que en sólo en torno al 1% de las bacterias del suelo al 0,1

- 0,01 % de las bacterias marinas son cultivables. Existen procedimientos de

enriquecimiento del número de bacterias de ambientes naturales para facilitar su

aislamiento. Uno de ellos es la Columna de Winogradski que crea un

microcosmos para enriquecer el número de ciertos tipos de microorganismos

presentes en ambientes naturales con objeto de facilitar su aislamiento.

II.3.12. Medida del crecimiento y enumeración de microorganismos

THOMAS. Et al. (1991). Existen diferentes sistemas para detectar y

medir el crecimiento de microorganismos. Los principales, se enumeran a

continuación:

II.3.12.1. Recuento directo

Consiste en la observación al microscopio de volúmenes muy

pequeños de suspensiones de bacterias. Se usan unos portaobjetos especiales

denominados cámaras de Petroff-Hausser. Para que la medida sea correcta es

necesario que la densidad de células sea del orden de 105 por ml.

II.3.12.2. Medida de la masa de células

El sistema se basa en que las células en suspensión dispersan la luz

causando la turbidez del cultivo. La turbidez depende de la masa en suspensión y,

por tanto, midiendo esta se puede estimar aquella. Este es el parámetro de

medida más fácil de usar en los cultivos de laboratorio. La densidad de células

debe ser del orden de 105 por ml.

II.3.12.3. Recuento de viables

Consiste en sembrar un volumen determinado de cultivo o muestra

sobre el medio de cultivo sólido adecuado para estimar el número de viables

contando el número de colonias que se forman puesto que cada una de estas

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deriva de una célula aislada. Para que la medida sea correcta desde el punto de

vista estadístico, es necesario contar más de 300 UFC.

En ciertas ocasiones en las que la densidad de microorganismos es

demasiado baja, éstos se pueden recolectar por filtración a través de una

membrana (de 0.2 μm de tamaño de poro) y posterior colocación de la membrana

en un medio de cultivo adecuado para que se formen las colonias.

II.3.12.4. Medida del número de partículas

Usando contadores electrónicos de partículas. Estos sistemas no nos

indican si las partículas corresponden a células vivas o muertas; pero nos pueden

dar una idea del tamaño de las partículas.

II.3.12.5. Medida de parámetros bioquímicos

Tales como la cantidad de ADN, ARN, proteínas, peptidoglicano, etc.

por unidad de volumen de cultivo.

II.3.12.6. Medida de actividad metabólica

De las bacterias como que respiran producen una disminución del

potencial redox del medio en que se encuentran como consecuencia del consumo

de oxígeno (utilización de colorantes sensibles a oxidación-reducción tales como

el azul de metileno).

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III. MATERIALES Y METODOS

III.1. Materiales

Caldo peptonado 1% 90 ml

Agar Plate Count + manitol 1% (sal)

Tubos con caldo diluyente

Matraz

Papel filtro

Pipetas de 1 a 10 ml

Embudo

Estufa

Placa Petri

III.2. Metodología

III.2.1. Trabajo de campo

Se realizó la ubicación de la zona para la extracción de la muestra de suelo

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III.2.2. Trabajo de gabinete

Muestra de suelo desecado o húmedo (250 gr)

Se pesó 10 gr de muestra de suelo

Los 10 gramos de suelo se le añadieron al matraz contenido con 90 ml de caldo

peptonado al 0.1 %. Agitar bien la solución.

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Después de agitar hay q llevar a filtrar la solución

Después del filtrado hay que sacar 1 ml de la solución para agregar al primer tubo

de ensayo, y así a cada tubo respectivamente.

1 ml de Solución Filtrado

1 ml 1 ml 1 ml

10-2 10-3 10-4 10-5

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Sembrar por profundidad un inoculo de 0.25 – 1 ml (de las dos últimas

disoluciones), medio Plate Count manitol 1%.

Incubar a temperatura ambiente (28 – 30°c) por 24 a 48 horas.

Después de los 24 a 48 horas, se procede a realizar el recuento de colonias

utilizando un equipo de cuenta colonias, luego se aplicó la formula respectiva de

enumeración de M. O. por gramo. Formula: M.O./gr de suelo = # colonias X

Inoculo de siembra X Factor de dilución.

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IV. RESULTADOS

IV.1. Determinación de microorganismos en la muestra del suelo.

La práctica de enumeración de colonias tiene la finalidad de

determinar la fertilidad del suelo, debido a que los microorganismos son

extremadamente numerosos en un suelo fértil, es decir que un gramo de tierra

sana contiene aproximadamente diez mil millones de bacterias. Todos los

microorganismos descomponen la materia orgánica y reciclando así los

nutrientes, mayormente son organismos aerobios, los cuales también pueden

pertenecer al grupo de los patógenos.

Del muestreo del suelo del BRUNAS, se utilizó 10 gramos de suelo

para inocular utilizamos el método de incorporación. Utilizamos un factor de

dilución de 104 con un inoculo de 1 ml.

Se aplicara la siguiente formula, después del conteo de colonias:

Microorganismos en el suelo = número de colonias × inoculo de siembra × factor

de dilución.

Microorganismos en el suelo = 10 × 1 ml × 104 colonias/gr de suelo.

Microorganismos en el suelo = 100 000 colonias/gr de suelo.

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V. DISCUSION

Después de 24 horas de haber hecho la siembra, se observó que no

había habido crecimiento en la placa.  Se observó 50 colonias en la placa de

agar.  Si se tratara de una bacteria, la forma de crecimiento era circular, el borde

era entero y no tenía elevación por lo que era plana.  El hecho de que no hayan

crecido puede deberse a que tal vez se tomó muy poco al realizar el raspado de la

placa.  Podría deberse también a que al realizar el raspado para tomar la colonia

de la placa previamente sembrada el asa estuviera todavía muy caliente, tanto

que matara a las bacterias que se tomaron y para el momento de realizar la

siembra en la placa hubieran muy pocas o ninguna viva.   

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VI. CONCLUSION

El punto blanco observado en la placa podría ser una colonia

bacteriana o una burbuja del agar.

El conteo de los microorganismos del muestreo del suelo del BRUNAS

dio como resultado un alto índice de microorganismo en gramos de

suelo, concluimos que es un suelo altamente fértil.

El contenido de microorganismos del suelo es de 100 000 colonias/gr

de suelo.

Todos los microorganismos descomponen la materia orgánica y

reciclando así los nutrientes, mayormente son organismos aerobios.

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VII. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS

BURGES. A. 1960. Introducción a la microbiología del suelo. Edit. Acribia.

Zaragoza. 84-109 p.

THOMAS. D; BROCK; MICHAEL. T. y MADIGAN. 1991. Microbiología. 6 ta

Edición. Edit. Prentice Hallitom. Mexico.605 p.

HAYNES, WC, WICKERHAM, LJ Y HESSELTINE, 1955. El mantenimiento

de cultivos de microorganismos de importancia industrial. Apol.

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MAYEA S, NOVO SR, VALIN0 A., 1982. Introducción a la microbiología del

suelo, Pueblo y Educación, Habana, Pág. 187.

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ÍNDICE

I. INTRODUCCIÓN............................................................................................2

1.1. Objetivos General...................................................................................3

II. REVISION DE LITERATURA..........................................................................4

2.1. Desarrollo histórico de la microbiología..................................................4

2.2. Microbiología y tecnología......................................................................7

2.3. Microbiología del suelo...........................................................................8

2.3.1. Ciclos biogeoquímicos.........................................................................8

2.3.2. Características físicas del suelo...........................................................9

2.3.3. Composición del suelo.........................................................................9

2.3.4. Material sólido del suelo.....................................................................10

2.3.5. Propiedades características de los suelos.........................................11

2.3.6. Factores que contribuyen al número y tipo de microorganismos en el

suelo…………………………………………………………………………………12

2.3.7. Flora Microbiana en el Suelo.............................................................12

2.3.7.1. Bacterias.....................................................................................12

2.3.7.2. Hongos........................................................................................13

2.3.7.3. Algas...........................................................................................13

2.3.7.4. Protozoarios................................................................................13

2.3.7.5. Virus............................................................................................13

2.3.7.6. La rizósfera..................................................................................13

2.3.8. Interacción entre los microorganismos del suelo...............................14

2.3.8.1. Relaciones simbióticas................................................................14

2.3.9. Los medios de cultivo en microbiología.............................................14

2.3.10. Características De Las Colonias Bacterianas....................................15

2.3.11. Métodos de aislamiento.....................................................................16

2.3.12. Medida del crecimiento y enumeración de microorganismos............17

2.3.12.1. Recuento directo.......................................................................17

2.3.12.2. Medida de la masa de células...................................................17

2.3.12.3. Recuento de viables..................................................................17

27

Pág.

2.3.12.4. Medida del número de partículas..............................................18

2.3.12.5. Medida de parámetros bioquímicos...........................................18

2.3.12.6. Medida de actividad metabólica................................................18

III. MATERIALES Y METODOS.........................................................................19

3.1. Materiales.............................................................................................19

3.2. Metodología..........................................................................................19

3.2.1. Trabajo de campo..............................................................................19

3.2.2. Trabajo de gabinete...........................................................................20

IV. RESULTADOS..............................................................................................23

4.1. Determinación de microorganismos en la muestra del suelo...............23

V. DISCUSION..................................................................................................24

VI. CONCLUSION..............................................................................................25

VII. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS................................................................26

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