INFORME AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE

MICROORGANISMOS

Cancela, María Belén

INTRODUCCIÓN

Se buscó aislar coliformes, principalmente Escherichia coli, a partir de

una muestra de agua.

La búsqueda incluía también a otros coliformes que pudieran estar

presentes. Este grupo contempla bacterias entéricas.

Las características generales de este grupo son:

- Gram negativos.

- No formadores de esporas.

- Aerobios o anaerobios facultativos.

- La mayoría fermentadores de lactosa con producción de

ácido y gas.

¿Por qué se utiliza el agua como muestra?

Las bacterias coliformes se encuentra comúnmente en el agua. La

presencia de coliformes se debe a que el agua estuvo en contacto con

heces.

Se esperaba que la muestra de agua contenga baja carga microbiana y

cierta diversidad.

Las muestras utilizadas provienen de agua de pozo y agua de zanja.

Primer día

Con ambas muestras de agua, se realizaron dos procesos:

● Se filtraron 100 ml→ El filtro fue colocado en un agar EMB.

● Se tomaron 100 ul → Se rastrillaron en EMB agar y MacConkey agar con la utilización de la espátula de Drigalsky.

Resultados del primer día:

● Agar EMB con filtro (agua de pozo)

● Agar EMB con filtro (agua de zanja)

● Agar MacConkey + 100 ul directos de la muestra. (agua de pozo)

● Agar MacConkey + 100 ul directos de la muestra.

(agua de zanja)

● Agar EMB + 100 ul directos de la muestra. (agua de pozo)

● Agar EMB + 100 ul directos de la muestra. (agua de zanja)

Sólo en este medio se observaron colonias correspondientes a fermentadores de lactosa.

Segundo día:

● Se observó detenidamente la morfología que presentan las colonias

en los medios.

Sobre las pequeñas colonias negras correspondientes a fermentadores

de lactosa se realizó:

● Una serie de pruebas básicas para verificar su género y presunta

especie bacteriana: Se efectuaron las pruebas bioquímicas de

catalasa y oxidasa.

● Tinción de gram: reacción de Gram y morfología de las bacterias.

● Siembra por agotamiento por estrías para obtener colonias

aisladas y poder realizar las pruebas bioquímicas pertinentes para

la identificación del microorganismo

Resultados del segundo día:

-MORFOLOGÍA POR TINCIÓN DE GRAM: Se observó al microscopio obteniéndose como resultado colonias gram negativas (ya que se tiñeron de rosa), con una morfología presuntamente correspondiente a enterobacterias como se buscaba ya que eran colonias bacilos sin una agrupación específica.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS INICIALES:

-CATALASA: POSITIVO

-OXIDASA: NEGATIVO

- No se logró obtener colonias aisladas en el agar EMB.

DESVIACIÓN DEL PROTOCOLO INICIAL

Tercer día:

Resultados tercer día:

PRUEBAS BIOQUÍMICAS: CATALASA: NEGATIVOOXIDASA : NEGATIVOTinción de gram: Las bacterias tenían una morfología que no se correspondía con la familia que buscábamos, eran bacilos gram positivos agrupados en cadenas y con una posible formación de esporas.

Se trabajó con la muestra del otro grupo de carne que también buscaban Coliformes y que habían obtenido resultados acordes a lo esperado:

CATALASA: NEGATIVAOXIDASA: NEGATIVATinción de Gram: Bacterias Gram negativas, sin agrupación específica con forma de bacilos.

Cuarto día:Se realizaron las pruebas bioquímicas en caldo de:-Glucosa -Arabinosa -Maltosa-Sacarosa -Xilosa -Gelatina -Ribosa -Lactosa -Ureasa -TSI -Citrato -Nitrato-RM/VP

Y el test multiprueba: API 20ENota: las pruebas en color rojo necesitan un revelado posterior a la incubación

Resultados pruebas bioquímicas: Tubos:● Sacarosa, Glucosa, Arabinosa, Ribosa, Xilosa → Positiva (medio amarillo)

● Lactosa → Negativa (medio rojo)

● Maltosa → No presentó crecimiento.

● TSI → Ácido-ácido con producción de gas (amarillo-amarillo)

● Citrato → Positiva (pico de flauta azul).

● Gelatina y Ureasa → No presentó crecimiento.

● RM → Positiva

● VP→ Positiva

● Nitrato → Positiva

Tubo de ensayo de Nitrato

Tubo de ensayo de TSI

API 20 E (RESULTADOS) ONPG: + H2S: - GEL: + RHA: + ADH: - URE: - GLU: + SAC: + LDC: + TDA: - MAN:+ MEL: + ODC: + IND: - INO: + AMY: + CIT: + VP: + SOR: + ARA: +

Conclusión:

● No arribamos al objetivo ya que el microorganismo

identificado pertenece a la carne y no al agua.

● Según los resultados obtenidos con el test multiprueba API 20

E, se obtuvo el número 5 307 773 que corresponde a un

microorganismo perteneciente al género Serratia.

● Dentro de dicho género contamos con dos especies posibles:

Serratia odorifera o Serratia liquefaciens.

● Pruebas claves para la elección de especie:

■ Ser. odorifera → Indol 99%

■ Ser. liquefaciens → RHA 2%

● Al dar negativa la prueba de indol y positiva la prueba de

ramnosa se trata de la especie Ser. liquefaciens con un 2%

de certeza.

Género Serratia:

● En dicho género hay 9 especies, dentro de ellas Ser.

odorifera y Ser. liquefaciens.

● Son bacilos móviles gram negativos.

● Son aerobios o anaerobios facultativos.

● Se encuentran en alimentos, suelos, aguas

estancadas, en animales y en vegetales.

● En el caso de encontrarse en animales, habitan en el

intestino pero no producen patología. Sin embargo,

pueden afectar a otros tejidos en los que producen

inflamación purulenta.

MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCIÓN

mbcancela@unq.com.arCancela, María Belén