"20 16 ~Año del Bicentenario de la Declaración de la Indepenlencian

Ministerio de saludSecretaria de Políticas, Regulación

e InstitutosA. N. M.A. T.

OISPOSICION N°

'" 61 2

BUENOS AIRES 2 6 ABR 2016

VISTO, el expediente nO 1-47-3110-4038/15-9 del Registro de la

Administración Nacional de Medicamentos, Alimentos V Tecnología Médica V,

CONSIDERANDO:

Que por las presentes actuaciones la firma TECNOLAB S.A Sol[¡cita. I

modificaciones para el producto para diagnóstico de uso "in Vitro" denominado

QuantiFERON@-TBGold, autorizado por Certificado NO8068.

I Que a fs. 156 consta el informe técnico producido por el Servicib de

Productos para Diagnostico que establece que el producto reúne las condicionJs de

aptitud requeridas para su autorización.

Que se ha dado cumplimiento a los términos que establece la Ley N0

16463, Resolución Ministerial NO 145/98 Y Disposición A.N.M.A.T. NO2674/99.

Que la presente se dicta en virtud de las facultades conferidas p¿r el

Decreto N° 1490/92 Y por el Decreto NO101/15 de fecha 16 de diciembre de 20115.I

Por ello;

EL ADMINISTRADOR NACIONAL DE LA ADMINISTRACION NACIONAL DE

MEDICAMENTOS, ALIMENTOS Y TECNOLOGIA MÉDICA

DISPONE:

3

"2016 - Afio del Bicentenario de la Declaración de la Indepenlncia"I

Ministerio de Salud,secretaria de Polítkas, Regulación

e InstitutosA. N. M. A. T.

D1SPOSICION N° , 6 J 2

QuantiFERON@-TB Gold Plus.

,ARTICULO 10.- Autorizase a la firma TECNOLAB S.A, la modificación que se detalla

~n el ANEXO 1 para el Producto para diagnóstico de uso "in Vitro" denomi~ado

Ii

ARTICULO 20.- Practíquese la atestación correspondiente en el Certificado nO 8068I

cuando el mismo se presente acompañado de la fotocopia autenticada de laI

presente Disposición.,

ARTICULO 30.- Acéptese los nuevos proyectos de rótulos y manuales de

instrucciones a fojas 87 a 152, desglosándose las fojas 87 a 108. ]

ARTICULO 40.'- Regístrese; gírese a Dirección de Gestión de Información Técnl,ca a

slus efectos, por el Departamento de Mesa de Entradas notifíquese al interesa~o y

hágasele entrega de la copia autenticada de la presente Disposición junto cdn la

copia de los proyectos de rótulos, manual de instrucciones. Cumplido, archíLese

PERMANENTE.-

Expediente nO: 1-47-3110-4038/15-9.

¿' ::SPOSICIÓN NO:

J4 6 1 2

3

Dr. ROS"RTe LE!)!!Sllbadmlnlslrador Nacional

A..N.M ..A.T.

I~2016- Año del Bicentenario de la Declaración de la IndependenCia"

Ministerio de Salud.secretaría de Políticas, Regulacwn

e InstüutosA.N. M. A. T.

ANEXOI

Expediente NO1-47-3110-4038/1~5-9

PRODUCTO: QuantiFERON@-TB Gold Pius / Ensayo ELISA para la determinación

cuantitativa de interferón gamma (IFN-y) secretado por células T presente~ en

sangre entera humana he~arini~adaestimuladas "in vitro" con antígenos pePtílicos

ESAT-6 Y CFP-10.

INUEVA PRESENTACIÓN: 1) Blood Collection Tubes, envases conteniendo:

QuantiFERON@TB - Single patient pack QFT-Plus TUbeS¡(10 paquetes) (200 tubos)

Blood Collection Tubes Códiqo: 622222 Códiqo: 622526

QuantiFERON@NIL (tapa gris) 1 50 IQuantiFERON@TB1(tapa verde) 1 50 IQuantiFERON@TB2 (tapa amarilla) 1 50 I,

QuantiFERON@Mitogen (tapa violeta) 1 50 IY 2) QuantiFeron@-TB Gold Plus ELISA kit, envases conteniendo: 2 microplacas k 96

pocillos, 1 vial de IFN-y humano normal liofilizado (x 8 UI/mol), 1 vial de

Diluyente x 30 mi, 1 vial de 0.3ml Concentrado conjugado 100X liofilizado, 1 vial de

100ml Concentrado de tampón 'de lavado 20X, 1 vial de 30ml Solución de sust~ato

y 1 vial de 15ml Solución de parada.

I~ ,NUEVO PERIODO DE VIDA UTIL: 1) 15 (quince) meses, conservado entre 4 y

250C; Y 2) 36 (treinta y seis) meses, conservado entre 2 y 80(,

NUEVO ORIGEN DE ELABORACIÓN: Elaborado por 1) Grelner Bio-One GmbH,

IBad Haller Stral3e 32, 4550 Kremsmünster (AUSTRIA) y 2) QIAGEN 19BOO

3

NUEVO ORIGEN DE ELABORACIÓN: Elaborado por 1) Greiner Bio-One GmbH,

Bad Haller StraBe 32, 4550 Kremsmünster (AUSTRIA) y 2) QIAGEN 19300

Germantown Rd, Germantown MD20874 (USA); para QIAGEN GmbH Qiagen

Strasse 1,40724 Hilden (ALEMANIA).

Expediente na; 1-47-3110-4038/15-9

i¡

1

II

£ 'DISPOSICIÓN N°:

av I

4 6 lj~

3

Dr. ROBERTO LI!IlE!Subadmln/strador NaCional

A.N.M.A.T.

,

PROYECTODERÓTULOEXTERlli6 1 2. 26 ABR20ti

QuantIFERON-TB Gold PlusCódigo: 622120

oo~mo••••••••••QlAGENQuantiFERONID.TB Gold Plus (QF¡@.Plusl

2 Plate Kit ElISA(Blood Collecfion Tubes pocked separately)

An in vitro diognostic test using o peplide cocktail simulattng ESAT-6 and CFP.] Oproteins lo stimulole ceUs in heparinized whole blood.Detection of inlerferon-y (IFN-Yl by Enzyme-Linked lmmunosorbenl Assay (EUSA)is used ia identífy in vilro responses lo these peplide anligens ¡hat are ossocioledwith Mycobacterium tuberculosis infeclion,

QuantiFERON@.TB Gold Plus (QF¡@.Plusl2 Plate Kit ElISA

QuantiFERON Microplate Sirips (12 x B well.) 2QuantiFERON IFN.y Standard 1QuanliFERON Greso D¡Juenl ]QuonuFERON Con¡ugote 1OOx Concenfrote 1QuantiFERONWash Buffer20x Concentrate 1QuorltlFERON Enzyme Sub~trole SoIulion 1QuantlFERON Enzyme Stopping Solution 1

( E ¡IVD I "C V'.Call J1QIAGEN GmbHQIAGEN Slrasse 140724 HildenGERtv\ANY

••www.QuanIiFERON.comTel: +49- 21 03-29-0 P~cll,l,1of Unil.o Sta!tl,

IMPORTADOR: TECNOLAB S.A. Estomba W 964. Ciudad Autónoma de Buenos Aires.Argentina.

DIRECTOR TECNICO: Bioq. Marisol Masino,

ORIGEN DE ELABORACION: QIAGEN GmbH, QIAGEN Str. 1,40724 Hilden, Alemania.

AUTORIZADO POR EL MINISTERIO DE SALUD - ANMAT CON N' DE CERTIFICADO:

Bioq. Masin arisolD.T. - leen b S.A.

00000•••••••••••Q1AGENQuantiFERON@.TB Gold plus (QF"f'ID.plus)

Bload Collection TubesSin"gle Patient Pack

Far use with ¡he QuantiFERON~.TB Gold Plus assay onlyAn cid lo detect M. tuberculosis infeclion.

QIAGENGmbHQIAGEN Strasse 140724 HildenGERMANY

••www.QuanliFERON.comTel:+49-2103-29-0

[REF1622222Single Palienl PockConhlnls:1:1 QuariliFERON TBl Tuba1x QuanliFERONTB2Tubeh QUllntiF ERON Nil Tubah QuantiFERON Mitog*, Tubalx 21G 1 1/2' reedlllh QU1ClCSHIElD Saftlly Tubio HollklrI LOT 1123<1567698 ~ 2018-1'1-31

C€ ~ tnJ & <%l1111111111111111111111111111111111111111111111+ E Q I A 6 2 2 2 2 2 O 5

Product of Auslrio

1Ir'''''4"c4

IIMPORTADOR: TECNOLAB S.A. Estomba N° 964. Ciudad Autónoma de Buenos Aires. Argentina.

IDIRECTOR TECNICO: Bioq. Marisol Masino.

IORIGEN DE ELABORACION: QIAGEN GmbH, QIAGEN Str. 1,40724 Hilden, Alemania,

AU+RIZADO POR EL MINISTERIO DE SALUD - ANMAT CON N' DE CERTIFICADO:

< III

Bioq.Masi o ar;solD.T. - Tec ab S.A.

3

QFT-Plus Tubes (50 x TB1, TB2, NiI, Mitogen)Código: 622526

tJ~CC'Q••• e••••••Q1AGEN,QuantiHERON@-TB Gold Plus (QFT"'-Plus)

Blood Collection Tubes

50 x Qu"nl,FERON lB 1 Tub••,50 x Qvc,"I:fERON TB2 Tuba,,50, Oo<,nrJERON Nil Tubas,

5(0 ':'''''''"1" M""['::"" 1'25'C~ IIVDJ /J!l 4'cJ

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l<~('(''' 1••••••••••QIAGEN

QuantiFERON$.TB Gold Plus (QFrc>'j-Plu~lBlood Collection Tubes

For u,e with theQuonliFERON.TB Gold plu.

m""y only". ald 10d.r.<I M.lllbo,wlo,,, Inlochon

. OIAGEN o..,bHQIAGfN"Stru ••• l40724 HildenGERMANY

••www.OJ"otiFtRON., ••mTel:+49-2103-29-0

I

IIMPORTADOR: TECNOLAB SA Estomba N° 964. Ciudad Autónoma de Buenos Aires. Argentina.

DIRECTOR TECNICO: Bioq, Marisol Masino.

I:1:~z:::L:::::::~~:::E:EG::LH~:::::A:trc~:::2:EH~::~:::~::I

Bioq. Masi I MarisolD.T.- Tec lab S.A.

I

PROYECTO DE ROTULOS INTERN" 6 1_2 ~4

ELlSA

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,-~~.••.~:::::--QuantiFERON° Enzyme

Substrate SolutionJO mi

~ 'x_'xxx~ ~ ~xx<.'xProd"e! 01 Uni•• d S!<l!<.

Ir'",,-1IT9.!J xxxxxxx S xxxx.xx

Product of United SIetes

QuanliFERONGlEnzyme Sloppíng Solu!ion

15 mI

QuantiFERONZ Green DiluenlJO mi

@ill xxxxxxx ~ xxxx-xxProduct of Uniled Stetes

conlain,'ufiu,i, o<id

QIAGEN GmbHQIAGEN Siro,," 140724 H;ldon,

••GERMANYTd .• 49.1) 03.29.<J

«mlain.tri.oaium S-hydroxy-l-14-,"1phoph. ny!I-4•14-,"1phoph. "YlozolpyrQzol." J-eo,boxylo te

QIAGEN GmbHQIAGEN Srro". 140724 H,lden,

••GERMANY1.1..49.2103.29-0

[iliD xxxxxxx 8 xxxx_xxProclo" 01Unít.d Stn~,

v'"2.c-1

QuontiFERON:FJ Wash Buffer20x Concentrote

100ml

-,~ - -.•..~-•••••~,QuantiFERON@ Microplote Strips

12 x 8 wells

",~,< i•••••••••••• =::::. '- ,

.Ql,IontiFERON'" Conjugote1OOx ConcentrQte 0.3 mi ~

VB'c JiITIEJl 090818 2'C';¡ cm Ó

00

~oIlOTlxxxxxxx ~XXXX~XXproduct of United States

,".,.1"",,,,J,..lo.(h1.,._"m.",I.,.".,"" ••I,,"l .••• ' ".d ¡.M".,I.'H_;,.,M~,.H-.", Il 11

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100AGEN11"~' I,on' H 1"," .

••G¡RMANY1,1,49_1103_29-0

••Q1AG;EN GmbHQtAGfNSt'llue 140724 Hilden,GERMANYTel: +49-2103-29-0;,

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QlAG,N G",b"OIAO,N\-'0'" 1~~~;:"~,~d<o,

\ ••• r.1 .<9.1103-29-0, ¡,

~confoinsboric ocid

••QlAGl'NGmbHQlAGEN S""". 140724 Hild.n,

'''M''''rol: +49.2103.2'}.0

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VI

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canta;ns Interferon-y Standard 5boric ecid '

Reconslilute wilh XXXX mi JIr'"

IR~Fll0908192"c-1 []] gllar I XXXXXXX ~ XXXX-XX g

Produd al United SltIlt!s

Bioq. MasinD.T. - Tecn

arisolbS.A.

iIl' 6 1TUBOS DE RECOLECCiÓN DE SANGRE

5

llillQuontiFERON"MITOGEN EEB <E:~Sumame" , i

Ftrs1 Narntl

PaVo/o.

008

Date

Add 1 mi 01 blDDd and shake 10x.

~~~¡g~'@~i

QuontiFERON"NILiSumaml,l

lA"" NamePal.No.

1

008

,Date

Add 1 mJ 01 blood and stlake 'Dx.

SIO.

~~~~~.l!lo~m~~

,oz.ao¡;7~.Ol

~ s;¡ .XNOX"'8'l!loxm~~Ward

TImEl 1519:,Dale

QuontiFERON" lB 1Sumamo

Fl('5t Name

'P'atNo.008

Add 1 mlafbloodandshake 1Ox. ',.- 1~R='" •.O'

~

QuontiFERON~' lB2Svmamo

Fi~t Name

Pat.No.

DOSDste

Add 1 mi ef toood al'\d sha.ke 10Je.

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Uf Bioq. Masiriq\MariSOIO.T. - Tecrlo ab S.A.

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~--------_._-------------"---------------'--

C'I

-; Prospecto de QuonliFERON@.TB Gold Plusce (QFr"'.Plus) ELlSA" ,~ '"\/ 2x96

Ensayo de IFN-y en sangre total que mide la reacción a los

antígenos peplídicos ESAT-6 y CFP-l O

IIVDI Poro uso de diagnóstico in vitro ,,CE /~ 622120

•• QIAGEN GmbH .1QIAGEN Strasse 1

40724 Hilden,ALEMANIANumero de teléfono' +49-2103-29-0

1083163ES Rev, 02

CID www.QuantiFERON.com

('(nc:r,~ ,_./ / '-.,••••••••••QIAGEN@'

www.QuanliFERON.com

MARISOL M lNOBIOQU\MICA-M .9483DT. TECNOl S.A.

--L

ContenidoUso previsto

Resumen y explicadón de la prueba

Principios del ensayo

Tiempo necesorio pora la realización del enseyo

Componentes y almacenamiento

Materiale, necesarios pero no sumini,trados

Almacenamiento y manipulación

Advertencias y precauciones

Advertencias

Precauciones

Obtención y manipuloción de mueslras

ln,lnIccione. de "'0Cólculo. e interpretación del ensayo

Generación de curva e,tónd",

Conlrol de calidad del ensayo

Interpretación de los re,uitados

limitaciof\esCar<lcleris~ca. de rendimiento

Estudios clínicos

Características del rendimiento del ens"yo

Información técnico

Re,ultodas indeterminado,

Mue,tras de plasma coagulados

Guía de •.•••alueión de problem'lsR"ienmcia.

SímbolosInformación de contodo

Resumen del procedimiento

4

4

5678

8

9

9

10

13

15

20

2021

21

23

24

24

29J4

34

34

353742

42

43

Uso previstoOuontIFERON-TB Gold Plu, {OFT-Plus) es un ensayo de diognó,tico in villO gue utiliza un cóctelde péplido. que ,imula la actividad de lo, proteinas ESAT-6 y CFp.I O poro e,timular célulm ensangre total heparinizodo, La detección de interferón-y (IFN-¡j mediante el ensayo de inmuno-ab,orción enzlmático IELlSAI sirve paro detectar reaccione, in vitm a estos antigeno, peptidieo,vinculadas a la infección por Mycoboderium luberculo5i"

QfT-Plu, es una pruebo indlIedo de,tinodo u detectar la infección por M tubelculo,i, [InclUidala enfe, medad) concebida como complemento a e,ludio' de determinación de riesgo.,radiografias y otras en'ayo' médica, y diagnósticos.

Resumen y explicación de la prueba -c~

la tuberculosis e. Una enfermedad tron,mi,ible cau,ada POf lo infección de argonl5mo, delcomplejo M. tuberculosi, {MTB) {M tuberculo,is, M. bo"'s, M. arriconum). que normalmente,e contagia a través de las núcleos en forma de gotitas que viajan par el oire procedentes depacientes que padecen tuberculosis respirotoria Un individuo puede enfermar de tuberculosis.emano, O me,e, de'pué, del momento de la infección, aunque la mayoría permanecen .anaSLa infecci6n lotente por tuberculosis (LTBI, en sus ,iglas il"lgle,o,). una dolencia asintom6t,coIntransmisible, pe"i.te en alguno. individuo,. que pueden llegar a .ufrir tubercula,i, mesesO año, mó, tarde. El principal objetivo del diognó,tico de la LTBIes bus<:ar tratamientospreventivo' para la tuberculosi" Hosta hace poco el único método para d,ognosticar la LTBIera la pruebo cutónea de lo tuberculino ITSn. Lo ,ensibilidod de la piel ante la tuberculinaaparece entre 2 y 10 ,emanm de'pué, de la infección. Sin embargo, olgunos individuosinfedodo" mduldos quienes padecen un" largo l;;ta de dolenCias que en10rpecen elmecani.mo inmune, aunque también otros pacientes que no lo, sufren, no ,eaccionon antela tuberculina, A lo inverso, exi,1en indiViduos con poca. probobilidodes de infec1arse porM. luberculosrs que mue.tran .en.ibilidad "nte la tuberculina y don un re.ultado p""llvo en laprueba cutónea tros haber ,ido vacunado, con el bacila de Colme"e-Guérin IBCG). haber "doinfectados con micobocterios di,tinto, del complejo M. luberculo,;s o debido O otro, Factores

indeterminado"

Es nece,orio di,llngulr lo lTBI de lo 1uberculo,is, una enfermedad de d"c1aroción obligatOriO,que normalmente ofecta a los pulmones y 01 trado re'piratorio Infeflor pero que también puedeafedor o otro, órganos del ,i.tema. La tuberculo,i, ,e diagnostico o partir de signos físico"radiológicos, h;stológica., micobaderiolágicos y datos extra ido, de la anamne",.

El ensayo OFT..f'lus mide la reacción inmunitaria celular {RIC) onte ontigeno, peptidico, quesimulan ser proteínas micoboclerianos. Esta, proleína;, ESAT-6 y CFP-l O, no aparecen enninguna cepo lo BCG ni en la mayoría de las m;cobacteria' no tuberculo,os, o excepciónde M lansasi;, M. szuJgoi y M, morinum (1) La, persona, infedodas por organismos delcomplejo MTB suelen tener en la sangre linfocitos copace, de reconocer a este y otrosantígeno, micobacterianos Este prace.o de reconocimiento implica la generación y ,ecreciónde la cLtoquina, IFN-y, lo detección y posterior cuantificación de IFN_y con.tiIuye lo ba,e dee.te ensayo.

-P,ospecto de QuontiFERON-TB Gold Plu, (OFT-Plu'l ELtSA 02/2015, 4

ASiNOBloaU,MlCA ht:,,",9483DT _TECNO AS S.A.

P,o'pedo de QuonliFERON-TB Gold Plu, (QFT-l'lu.1 ElISA 0212015

-------

Principios del ensayoEl ensaya OH_Plus utiliza tubo, de recogido de sangre e'pecíficos par" sangre total. La sangrese extme en lo, tubos y se incuba enlre 16 y 24 hom, Posteriormente se retira el plasma porodeterminar si se ha producida IFN-ycomo reacción O las antígenos peptídicos.

El ensaya OFT-Plus ,e llevo (l cabo en dos fases. En primer lugar se recoge sangre torol encada uno de la, tuba, de recogida de songre poro QFT-plu., que incluye un iubo de mediciónde nulo" antígena T81, antígeno TB2 y mitágeno. También existe la po,ibilidad de extraer la

ap'ax, 3 horas para una placo de ELlSA

122 individuos)

< 1 hora de trabaja

Añadir enlre 10 y 15 minutos por cadaplaco adicional

Pro'pecio de OucntiFERON-TBGold Plus10FT-PIu,) EUSA 02/2015

songre en un tubo de recogida de ,angre genérico con heparina de litio coma anticoogulontey lransferirla luego a lo, tubas para QFI-Plu'.

El tubo de mitógeno se puede utilizar cama control pOSitiVOen el emayo QH-Plus. Esto e,Impor/onte en los caso, en que exislen duda; re'pecto al e,tada inmunológica del individuo,El luba de mitógeno tomb,én ",ve como control paro a.egurm una correcta manipulacióne incuboción de lo ,angre.

Los tubo, para OH.Plus deben incubarse a 37 oC la antes pasible durante la, 16 hora,posteriare, a la extracción de lo sangre. Tra, el periodo de incubación comprendido entre16 y 24 horas, se centrifugon los tubas, ,e retiro el plosmo y se mide lo cantidad producidade interlerón IFN-y(UI/ml) mediante el método EUSA

Se considera que el resultado del emoyo OH.Plus es po,itivo si la producción de IFN."(comareacción a cualquiera de la; tuba, de antígeno TBes claramente superior al valor en UI/ml denulas pora IFN-y.Lo muestra de plosma del tubo de mitógena sirve cama control posiliva deIFN.y paro cada mue,lra anokwda. Una reacción baja al mitógeno 1<0,5 UI/ml) ind,ca unresultado indeterminado cuondo lo muestra de sangre también presenta Uno reacción negativaante la, antígena; TB. EMeresultado puede responder a un número insuFicienle de linfocitos,o una menor odividod de lo, mi.mos provocada par una manipulación incorrecta de la,muestras, a un llenada/mezclado incorredo del tubo de mitógeno o a que lo, linfociro, delpaciente lean incopoce; de producir IFN-"f.El tubo de medición de nula, aju,la el ruido defondo Ip. ej., nivele, exce,ivo, de IFN-yen circulación o lo presencia de anticuerposheterófila'), El nivel de IFN-yen el tubo de medición de nulos ,e sustrae del nivel de IFN-yen los tubos de antigena lB y en el tuba de milógeno.

Tiempo necesario para la realización del ensayoA continuoción Se indi<:oel tiempo nece,ario poro Ilevor a cabo el ensayo QFT-Plu, ELlSA,a,í como el liempo necesmio para analizo< vorias mue,lra, si vienen en lotes:

Tubos de ,ongre pora la incuboción a 37"(- de 16 a 24 horas

ELlSA:

s

Lo, antígeno, que ut;l,za el ensayo QFT-plus son una mezcla de peptídicos que simulan loacción de los proteínos ESAT-6y CFP.] o. Numerosas estudios han demo,trodo que e,losantígenos peptídicos estimulan la reocción olIFN-y en 1m células T de pe"onm ,,,¡,,clad,,, porM. fubercuJ05js. pero nO en p"r;onc" no infectados o vacunadas con BCG sin la enfermedad Q

con ,;e'90 de LTBI(1-321. Sin emba,so, los trolom;enjo, médico, O los cond,ciones que Inhibenlo función del ",temo inmunológico pueden Ilegor Q ,educir la reacción "IIFN-y. Los paciente,con otro tipo de infecciones micobaderianas también pueden presenta' reacción ante lasproteína, ESAT-6 y CfP.] O, puesto que los genes codificadores de dichos proteinQS estánp'e,entes en M. kan,os", M. 5zu/gai y M. marrnum [1, 23). El ensayo QFT.Plus se utiliza camapruebo para lo detección de LTBIy camo ayuda para el diagnóstica de la Infección par elcomplelo M. tuberculos'-s en pacientes enferma,. Un resultado po;itlvo secunda el diagnósticode tuberculosis, pero hoy que tener en cuento que las infecciones debida, o otral mica.baderia, Ip, ej. M. kon5G,j¡1pueden producir también resultadas positivos Son nece,oria,otros ensayos médiCOSy pruebas diagnósticas paro confirmar o excluir Uno tuberculo,is.

El ensayo OFT-Plus utiliza dos tubos diferente, de medición de ontigeno TB; el tubo demedición de ontigeno TB 1 (TB11y el tubo de mediCión de antígeno TB2 ITB2). Ambas tubo;contíenen antígenos peptídicos de los antígenas ""ociados al compleio MTB, ESAT-6 y CFP-l O.El tubo TB1 contiene péptido, de ESAT-6 y CFP-l O dISeñados para generar re'pue.tos RtCo partir de linfocitos T cooperadores CD4- y el tubo TB2, un conjunto adicional de péptid05cuyo lunción e, inducir respuestas RIC o partir de linfocitos T cilotóxicos CDS'. En el tron.cu,>onatural de los infecciones por el complejo MTS, el papel de las células T CD4" e.fundamentalparo el control inmunológico gracias O la secreción de clloquinas IFN-y.Las pruebas corro-boran la importancia de fas células T CD8" que intervienen en la deFensa del sujeto frenteal complejo MTBmediante la secreción de IFN-yy olros factores solubles, que adivan losmacróFagos que ,uprimen el crecimiento de MTB, matan la, células infectadas o directamenteli,an el MT8 inlracelular 133-351. Se han detectado célulos CD8" e'pecificos para MTBen,uíetos con LTBIy tuberculo,is activa en los que e, frecuente detedar célula, CD8' productorasde IFN-y (36.381. Ademos, se ha descrito un aumento en la frecuencia de deleccrón delinfocitos TCD8" espedficas paro ESAT-6 y CFp.l O en ,ujetas con tuberculoSIs activo encomparaCión con sUletos afectada, par LTBtlo que puede e,lar relacionado con unaexposición reciente 01MTB 139-411. Tombién se han detectado células T CD8' e'pedf,cas paraMTS producloro, de IFN-yen ,ujeto, con tuberculoSIS activo y coinfección par VIH (42, 43), asícomo en niño. jóvenes con tuberculo,i, 144).

Prospecto de QuantiFERON-TBGold Plu, IOFT-Plu')ELlSA 02/20\ 5

-

MARISOLalOOUIMIC"".,.- ",,,,"'~1.

ASINOM.N.94831 Al' •..•A

Componentes y almacenamientolubos de =ogida de •••ngmO "" ""'" Ema•••d. pacimte

individuo!N,.de~ 622S26 622222

NUmerode prvebc>./~ so 10

Ouof"ifERON N~ lube (tubo de medición de mdoo NtI so ""'" 10 tubo.poro OuonfifERON con 1ap6n efl. y anillo blanca)

- - -- - - -Ouon'ifERON lBl lube [tuboTBl paro Tll' 50lubo. 10 tubo.Ouon,ifERON ~ Ia~ vefde y_anilo~nc;aJ __

-- --OuonlifERON lB2 Tubo [tuboTB2pafa Tll2 50 ""'"

10 tuba.OuonlifERON con tap6n amorillo y cnilb blanca!- - --~ - ~1000nlifERON Milogcn lubc ll\lbo de m;t6geno para Mir09"n 50 ""'"

10 rubos~'ifER?N con IapOOmarada y anillo blanca¡

Pro'poda d" loo rubo. do 'ocoeido d" W1lll'0poro , ,OfT.f'kIs

(0"'90"cnl", potCIEUSA' KirfUSAparo 2 pIa<a.N.• de m..r.n.:ia 622120

liras d" microplaal1 [12 • B paclno.¡ r•••.••olido. con onl~ 2 """i""lo, de tiro.mOllo,L ,ale•• ~ cn,i-humono tfN-y de mictoploca. p,,,a

12 • 8 pocillo.____ o --. ________ -- -- --- ~IfN.,.Standafd,lyoph<loz~ [•••l6n.lor d" IfN'l,I>ofito,odo) [eon!ione tfN-y 1 • vialIwmo"" reromblnonla. co.eíno bovino, 0,01% pI.., d" r¡mof""'~ [8 Ul/mI de~., - - - - __ da ••• racon>li'<lCiónL..•

G..-. DWcn! [00, di\uyenla -del [con!~ ca"""" bovi•.••••'IJeI"Ode I.JOmll'<It6nnonnaI, 0,01% pI..,da r¡mer""'~ .- - - - --- -:Con¡~ 100. ~--;;nfra'''', ~il¡;;¡lconjugado lOO>.COflCentrodo, 1.0.Jmlliofililado) OfN..,HRPmUf''''' ",,!>humano. can.tiet>e0,01% pI'" d" [d••lpIo'6.de .u,¡¡"",,,,,,,~ . racor"liJu66r,)

Wolh 8oJ.1cr2().-Ú><Ican!f,,'"f1a"'96n do lo¥Odo20. conc_odo) 1.IOOml(pH7,2. contiene 0,05% ..,1.., de ProO",- JOOl~ --- _.~ - - -- --~ --- _. _.. -Erayme Su\>'lr<l!eSoIu,ion[.oh.oci6<l••n,im6tioo d" ••••lralo) bJOml(con!"''''' HA, J,J', 5,5'IlI""mol~bon,¡.r.nal -- --- - - -EI\lyIIIllS!opplng SoIvtion[••••"Ci6<lenzim6llca de poradol 1. 15 mi(eon!ieneO,5M H,so.¡ - .- - .Proopcclada Qf1.P1u. EUSA ,Algunmcon!,gu.-"","",-do-!~ puedoonna .,ID<ditp<wliblo• ..., ol¡¡uftoif'Ol••". PÓIl(ID'"""~ con •• con!TOcM_iIlon al dietI>odoOIAGEN/otocon!rorllloWomt<tci6<l_la póg••••~ p<J'aobIan&r•.••••~ """'~ "" conl9"oc ••••••diopotliblol.Conouhola póg•.•••OPO'" """"" •• "" w.eI~ do riM(loy ""--c ••.

Materiales necesarias pera no suministrados• Incubodor o 37.C:t- I ~. No ~ nac"silD CO,.

• PipelDs cotibrodas d~ ..,oIumenw,.,iabltl" polo mon'lje" ~ntr~ 10 vl y 1.000 ¡l1con tiro.de,ochoblos

• PipelD mu~icanol calibrado. oopaz CÚldispenloOr 50 ~l y 100'" oon punID, d(t1«hoblf!.

• Agi!ado< de microplocas o

• Agua de.ionizado O dellilodo, 2 li~os

• Lovodor d", microploc:o, (\ovadO' oulomótico re<:omendodo)

• lacto< de microploc:as' equipodo con un Miro d", 450 nm y un libro de r"ferencio enlr"620 nm y 650 nm

Almacenamiento y manipulación

Tubo, de rc<;ogiclo de SOnglll

• A1moeel'Kllo. Iubo, de rKOgido de loOngreo uno Iflmperoturo compfendido cnlre<ly25~.

R!lodivo, dd kit

• Guafd" los reactivos del kit O uno temperol\lfO comprendido "nlre 2 y 8~.

• Pre"'ia en IOdo momt!nlD la soIuc:ión enlimólico CÚl'Um-alOde la [uz difedO Jcrl sol.

Reactivo, rc<;on,tituidos ,in utI1izor

eon.uIte lo p6gino 16 POfOobtener lo. in,lr",ccion." loObrec6mo r~.tiluir lo. rPOdi.•.•••.

• El "stóndOf re<:Qnltitl,lidodel kit pvacIo OOnsetVOf~ dvran! •• 3 fnflCS oomo lTlÓ.imosi ~ oImoceno a una temperoturo d" enlre 2 y 8 ~,

AnokIlo lecho de reconstitución del ".tóndo. del kir.

• Una ycz recon.lituido, el con¡ugodo lOOKCQnc;"ntrado qUé no ~ hoyo utilizadod••bfl volver O olmocenorte O uno temperaturo comprendido entre 2 y 8 ~ y debeU'!ilizor", duron'" lo, 3 me$e$ siguientes,

Anoto lo lecho do reconstitución d,,1 conjugado.

• El conjugado li.to poro el UloOJcrbe utilizo.", en lo. 6 horo. sieuienle. O supreporación .

• EIIDmp6n Jcr Iovodo lisio po.o el UloOpued" olmoceo",.., O lempera1uro ornbienleun mó.imo de 2 Iflm(lna •.

1'r"'f'OClado Guont,fERON-TBGoId Plu.IQfT-I'Iulj fUSA 02/2015 , .MARISOL. SINC'BIOCU''''' Ior.N.9483OT•TECNd AS S.A.

'.,\

Advertencias y precaucionesPoro uso de diagnó,l,co in vítro

Advertencias

• Un resultado negativo del QFT-plus no descorla lo posibilidad de una infección porM. luberwlo,is o de que se padezw tuberculosis: los folsol negotivos pueden deberseO lo etopo de lo inlección en que se encuentre el pociente (p. ej. si lo mue,tro seha obtenido antes de que se desarrolle lo respuesto celular inmune), enfermedad"so>ociad",. 'lue afecten 01meconi;mo inmunológico, a uno incorrecto manipulaciónde los tubo, de recogido de song'" d"'pues de lo venopunción, o uno realizociónerrónea del ensayo o O otros variable, inmunológicos

• Un resultado positivo del QFT.Plus tampoco debe considerarse como prueba unicoy definitivo de lo existencio de una infeCCión por M. tuberculosis. Uno realizaciónincorrecto del ensayo puede generor lol,os positivo,.

• Después de obtener un re,ultado po,itivo para el QFT-Plu" deben realizo"e otrosensayos médico, y de diagnóstico poro comprobar lo eXIStencia de uno tuberculosisactivo Ip ej., frot" y cultivo BAR, radiografío del pecho).

• Aunque 1m proteinos ESAT-6y CFP-10 no eslón presentes en nínguno de 1m ceposde BCG ni en lo moyorio de los micobacterias no tuberculosos, es posible que unresultado positivo del ensayo QH.Plus se debo o una infección por M. konsosii,M szulgai o M. morinum. Si ,e sospecho de lo existencio de tole' Infecciones,deberán reali:>:orseensayo, alternativos.

PrecaucionesPoro uso de diagná,lico in vitro.

Siempre 'lue trabaje con productos 'luí mico,. utilice una bata de laboratorio adecuado,guante, de,echable, y gafo, protoctoras, Poro obtener mós información, consulte los hoja,de datos correspondientes sobre seguridad ISDS). Puede obtenerlas en lineo en el prácticoy compacta formato PDF en www.qiagen.com/salety.de.de donde también podrá buscar,ver e imprimir lo. hojas de doto, SDS de todos lo. kit>y componentes de lo, kils OIAGEN,

PRECAUCIÓN:monipvle la sar>gre y el plasma humano, como material polencial-mente infeccioso. Cumpla las diredrices pertinentes poro lo manipulación de""ngre y productos songuineos. Elimine las mvestras y los moteriole, que hoyanestado en conlodo con lo songre O los produ.:tos 'onguineos .egún lo normohofe.derol, nocional y local.

las siguientes indicaciones de riesgo y advertencia hacen refereneta a los componentes del kitQuantiFERON-TB Gald Plus ElISA.

Indicaciones de peligro

QuontiFERON Conjugole(Conjugado QuantifERON)

Contiene: ócida bórico. ¡Peligro! Puede perjudicar lo fertilidad o dañar al feto,Eliminar el contenido/el recipiente en un centro de eliminación de reSIduo,aprobado, En coso de exposición manifiesta o presunta: consultor a un médico.Pedir instrucciones especiales ante' del u'o. Gu"rdor b"jo llave. Llevar guontes/prend05/gafos/máscara de protección.

OuantiFERON Enzyme 5topping Solution(Solucián enzimólica de pQrodQ QuontiFERON)

Conliene: ócido sulfúrico, ¡Peligrol Provoca 'luemadufOs grave, en lo piely lesiones aculare. gro ves, Puede 'er corrosivo para los metale,. Ehminorel contenido/el recipiente en un centro de eliminocián de re,iduos aprobado.EN CASO DECONTACTO CON LOS OJOS odorar cuidadosQmente con aguodurante vari05 minulos Quitar las lente, de canto do, si llevo y resulto lócil. Seguiradarando. EN CASO DE CONTACTO CON LAPIEL(o el pelo): quitarse inmedia.tomente 105prendas contominodas, Aclarorse lo piel con oguo O ducharse Ll"marinmediotomente o un CENTRO DE INFORMI>.CIÓNTOXICOLÓGICA o a unmédICO Guardar boja Ilove. Llevarguantes/prenda'/gaf05/mó5Caro de protección

QuontiFERON Enzyme Substrate Solution(Solución enzimótico de sustrato QUQnliFERONj

¡Atenciónl Provoco Irritación cutóneo leve. En coso de irritación cutáneo: consuhoro un médico.

Pro'pecto de QuontiFERON.TBGold Plu, IQfT-f'lu,¡EUSA 02/2015 9 10 Pro'pecto de QuantiFERON.TBGold Plu'IQFT-Plu'l ELISA 02/2015-.~-JMARISOLBIOaUIMICA.rT-TECNC'-

ASINO.N,94B3B S.A

QuanliFERON Green Diluent(Diluyente verde QuantiFERON)

Contiene' 5_hidroxi_l_14.,ulfolenil)-4_I4-sullofenilozo) pirazol-J.<:arboxiloto delri,odio. iAtenciónl Puede p,ovocor una reacción alérgico en lo piel. Eliminar elcontenido/el recipiente en un cenlro de eliminación de rcsiduos aprobado.Quíte'e la vestimenta contaminado y lóvela ontes de volver o utilizarlo. En cosode irritación O erupción cutóneo: consultor o un m••dico. Llevar guantes/prendas/gofas!móscaro de protección.

QuantiFERON IFN-yStondordIE.tilndor tFN-yQuantiFERON)

Contiene: ócido bÓflca. IPeligrol Puede perjudicor lo fertil,dod o dañar 01 feto.Eliminor el contenido/el recipiente en un centro de eliminación de re,iduosaprobado. En co,o de exposición monifie,to o pre.unto: consultar o un médico.Pedir instrUCCionese'peciole, <lOtesdel uso. Guardar bajo llave. Llevar guantes/prendos/galos/móscara de protección.

QuontiFERON Wash Buffer 20x Conoonlrate(rompOn de lavada 20x concentrada QuantiFERON)

Contiene: mezclo de 5.doro-2.metil-4-isotiozolin-3-ono y 2_metil.2H.isotiozo~3-onap: 1). iAlención! Puede provocar una reacción alérgico en lo piel. llevar guante,/prendos/gafas/móscara de protección,

Indicociones de precoución

Pedir instrucciones E'pecioles antes del uso. Llevar guante'/prendos/gafos/móscoro deprotección. EN CASO DECONTACTO CON LAPIELlo el pelo): quitarse inmediatamente lo'prendas contaminados Adorarse lo piel con aguo o ducharse, EN CASO DECONTACTOCONlOS OJOS: odorar cwdadosamente con ogua duronte varios minutos. Quito¡ lo, lente; decontacto, .i llevo y resulto fóCII.Seguir adorando, En caso de expoSlc,ón manifie,to opresunto: consultar o un médico, Uomnr inmediatamente a un CENTRO DE INFORMACIÓNTOXICOLÓGICA Oo un médico En coso de irrilación o erupción cl!tónea: consultor o unmédico. Quílese lo vestimenlo contaminodo y lóvelo ante' de volver o utilizarlo. Guardar bajollave, Eliminnr el contenido/el recipiente en un centro de eliminación de re.iduos apfobodo.

Más informacián

Hoia$ de datos de seguridad: wwwqiagencomlsgleb'

• Cualquier desviación respecto al procedimiento indicado en el Prospecto deQuontiFfRON-TB Gold P!u. (QFT.P!u.) fUSA puede generor resultados errÓneOs,leo los instrUCCIonesatento menO. onte, de realiza, el ensayo.

• No utdice el kit ,i algún frasco de reactivo muestra ,igno' de e,tor dañado a perdef1i<¡Uido.

,I

l

• No mezcle ni.utilice liras de microplacos, estóndar IFN.y, dduyente verde o conjugado100x concentrodo de diferente, lote, del kit QFT.Plu;. Otra> reoctivos {tampón de lavado20x concentrodo, ,olución en:timótica de sustrato y ,nlución enzimótlca de poradolpueden intercambiarse entre kit, ,iempre y cuando los reoctivos no hayan caduo:odoy se anote la información de lo, loles. Elimine los reactivo, y lo. muest,o; biLllógicmde acuerdo can la normativo locol, regional y nacionol.corre'pondiente,

• No utilice la> tuba> de recogida de sangre poro QFT-flus o el kit EUSA de'pué, de lofecho de caducidod indicado.

• A,egúre,e de que el equipo de loborotono ,e ha calibrodo/volidodo poro el uso

1I 12

MARISOLB1oaUlMtC'" -DT_TECNOL

SIN'"N.94'B S.A,

Pro'pecto de QuantiFERON-TBGotd Ptu, (QFT.Ptu,1ELlSA 02/20 t 5

etiqueto del tubo]. Vuelva a colocar bien lo, tapones y mezcle como se describe acontinuac,ón.

Pro'pecto de QuontiFERON-TBGold Plus{QFT.Plu,)EUSA 02/2015

Tombién existe la posibilidad de extraer la sangre en un tuba de recogido de ,ongregenérico con hepLlrino de litiOcomo onticoagulante y transferirlo luego a los tubo, paraOFT-Plu•. Utilice .010 heporino de litio como onticoagulante sanguíneo porque los demásonllcoagulantes interfieren en el ensoyo. Uene un tubo de recogida de .ongre Ivolumenminimo 5 mi) y mezcle cuidodo'amente invirtiendo el tubo vanas vece, poro d"oiver loheporino. La sangre se debe mantener a temperatura ambiente lentre 22 oC 10 5 oc¡ antesde transferirla a lo, tubos poro OFT-Plu' para 'u incuboción. que debe iniciarse durantelos 16 horas ,iguiente' LIla extrocclón de la sangfe. S, lo ,angre se e~trae en un tubo conheparina de litiO,mezcle 1m muestros vniformemenle invirtiendo con cuidodo los tubo,ante. de trons!erirlas a lo' tubos paro OFT-Plus, lo tron,ferencia debe realizarse de formaa,éptico y tomando 1m precauciones oportunas para quitar lo, tapone. de las 4 tubo.paro OFT.plu. y añadir 1 mi de ,ongre o cado uno (hasta el centro de la marca negra dellateral de lo etiqueta del tubo) Vuelva a colocar los tapones y mezcle 101como ,e de.cribemás abojo,

3. InmediolClmente después de nenor loo tubo., ogítelo. diez ¡¡O) vece, opli<ondo únicamentelo Neno nece.•••río para cubrir de .ongre todo lo ouperficie intemo del tubo. Con ello seconoigue oolubilizor el onligeno en los paredes del tubo.Noto ;mparlante. los tubos se deben encontror a uno temperoturo comprendido entre17 y 25 oC en el momento de agitarlos, Si agito el tubo con demasiada fuerza, puede'romper" el gel. la que oltemrío los resultodm.

4. Tra. el eliquetado, el llenado y lo ogiloción, coloqlle los tubos en el incubodor o37 oC:!: 1 oC lo anteo po,ib\e, y ,iempre durante las 16 horas siguientes o lo obtenciónde lo .ongre. Ante, de lo incubocián, mantengo los tubos o temperatura ambiente122 oC:!: S 'c).

14

Obtención y manipulación de muestrasEl ensayo QH-Plu, utiliza los siguiente. tubos de recogida:

1. Tubos de medición de nulo. paro QuontiFERON ItapO" gris y anillo bloncol

2. Tubos TB1 p"ra QuantiFERON (tapón verde y anillo blanca)

3. Tubos T82 para QuantiFERüN Itapón amarillo y anilla blancal

4. Tubas de mitógeno para OvantiFERQN (tapón morodo y anillo blonco)

Siga 1m instrucciones que.e indican O continuación paro los tupos con heparina de litio.

Lm antigena, se ,econ y adhieren o la parad inteflar del jubo de recogida de sangre, porlo que e, imprescindible mezclar cuidado,omente el contenido de los tubos Con lo .angre.los tubos para OFT.Plus deben colocarse en el incubador a 37 oC lo antes posible y siempredurante las 16 horas siguientes o lo recogida de lo ,angre.

Pro'pecto de QuantIFERON.TBGald Plu, IQFT.flu,1ElISA 02/2015

Siga los procedimientos que se describen a continuación para obtener resultados óptimos:

1. Coloque los etiquetos correspondientes en los tubos.Asegúre,e de que cada jubo (nulos, TB1, TB2 Ymitógeno) ,e pueda identificar por 'uetiqueto o por otros medio. cuando 5e reti,e el tapón.

2. Extraiga 1 mi de .ongre de codo paciente medionte venopunción directo mente en uno delos tubos de recogido de >angre para OH-plu •. E,to operoción deberío ser toreo exclusivode un f1ebolomislo cuoliFicodo.Noto importante: los tubos se debe" encontrar a una temperatura comprendido entre17 y 25 oC en el momento de llenarlos de ,angre,

Los tubos de recogido de sangre para OFT.Plus pueden utilizarse ha,ta 810 metros parencimo del nivel del mOL

Como los tubos de 1 mi ob,mben la ,angre relativamente despaCIo, mantenga el tuboadherido a lo agvia duronte 2.3 segundos cuando parezca que esló lleno del todo.De este modo conseguirá e~traer el valumen correcto.

lo morco negra del lateral de lo, tubos indiCOel intervalo volidodo comprendido entre0,8 y 1,2 mi Si el nivel de ,angre de un tubo está fuera del intervalo de lo morcoindicativa, deberio e~troer>e uno muestro de ,ongre nueva.

Si utilizo una agujo con aleto. pora extraer la ,angre, utilice un tubo de purga paraa.egurorse de que el conducto e.tó lleno de .ongre ante. de transferirla o los tubasporo QFT-Plus

Si utilizo tubo, de recogida de sangre paro OH-plus o uno altitud de mós de 81 °metros,o ,i el volumen de ,angre extroído es in.uficiente, 'e puede extraer la ,angre con unojeringa y tronsferir inmediotamente des pué, 1 mi a coda uno de lo, 4 tubo,. Por motivosde ,eguridod, lo mejor formo de realizor e,te proce,o es quijar la agujo de lo jeringatomando poro las precoucione. oportunos, quitor.lo. tapone. de los 4. tubo, para QFT-plu,-y añadir 1 mi de sangre a cado UM Ihosta el centro de lo marca negro del lateral de la

MARI:'50LBIOOU1MICA -"' ..•.. To=r.~1

ASINO.N. 9483

AB S.A.

--------------Insttü«ionesae uso

Fase 1: incubación de la sangre y obtención de plasma

Materiale~ suministrados

• Tubm de recogida de sangre poro QFT_Plu,Iconsulie el aportado 31.

Materiales necesarios lno suminislTados)

• Consulte el aporlado 3.

Procedimiento

1. Si la sangre no ,e coloco en el incubador inmediatamente después de sU obtención, vuelvo(] mezclar los luba, invirtiéndolos 10 veces inmediatamente ante. de la incubación.

2. Incube lo. tubo. EN POSICiÓN VERTICAL(] 37 oC:!: 1 oCpor un periodo comprendido entre16 y 24 horas. Elincubodor no requiere CO, ni humidificación.

3. Uno vez finalizado la incubación II 37 .C, lo. tubo. de recogida de sangre puedenconservane enlTe 4 y 27.C duron'" 3 días onle. de centrifugarlos.

4. Despué< de lo incubación de los tubos a 37 'C, tentrihígvelos durante 15 minutos a unovelocidad comprendida entre 2.000 y 3.000 x 9 RCF(gl para obtener el plasma. Eltapónde gelatina separa la. ""lulas del plasma, Si esto no OCUlTe,vuelva a centrifugar las tubos,Es posible obtener el plasmo ,in centrifugar, pero es necesario e;d,emor lo precaución 01máximo paro retirar el plasmo sin olreror lo, células

S. Las muestras de plasma solo se deben extraer con ayuda de una pipeta.Nota impartonte: despué, del centrifugado, no pipetee arribo y abajo ni mezde el pla.made ninguno formo antes de extraer la muestro, Tengo cuidado en todo momento de nointerferir con el material de lo superficie delge!'

La. mue.tro, de plasmo pueden cargar.e directamente de.de lo. tubo. de recogido desangre centrifugados o la placo EUSAporo QH-Plus, induw ,i se utilizan equipos ELlSAautomatizadas.

Fase 2: ELlSA para IFN-y

Materiales suministrados

• Kit OH-Plu, ElISA (con'ulte el oportodo 31.

Materiale~ nece~ario~ pero no ~uministrados

l'lI Con.ulte el aportado 3.

Procedimiento

1, Tocios las muestras de plasma y los reo.ctivos, excepto el conjugado 100x concenlrado, ,,\-.--~deben estar O temperotura ambiente (22 oC :!: 5 'C) ontes de ser utilizados. Espere porla menos 60 minutos poro permitir el equilibrado.

2. Retire lo, tiras innecesoria, del boslidor, vuelva a cerrar la bolsita de oluminio y colóquelade nuevo en lo neVera donde quedará almacenada hosta que.e necesite.Deje par lo menos \ tiro poro los estándore, del OH-Plus y firm suficiente, pora el númerode sujetos que se quieron diagno,ticor (consulte lo ilustración 2). Después, guarde elbastidor y lo tapo poro u,arlos con el re,to de los tiro,.

J. Reconstituya el estándar IfN-y ailadiendo el volumen de agua desionizado o destilada que'se indico en [a etiqueta del frasco del vio!. Mezcle con suavidad para evitar la formoción dee'puma y lograr osi una ,olvbilizcción completa. Después de recon.tituir el estándar con elvolumen ind¡cado.e obtiene Una soludón con uno concentradón de 8,0 UI/ml.Nota importante: el volumen poro reconstitución del estándar del kit vario de un loteo otro.

Utilice el estándar del kit reconstitu;do paro obtener uno serie de 2 diluciones y luegouno ,erie de 4 dilucione, de IFN-yen d,luyenle verde IGDI {consulte lo Ilu,troción 1¡.El SI lestándar 1) contiene 4,0 UI/ml, el 52 {estándar 21 contiene 1,0 UI/mt el S3lestándar 3) contiene 0,25 UI/ml y el S4 (e,rándar 4) contiene O UI/ml (wlamente GD).Los e,tándores deben analizarse 01 mena' par duplicado. Prepa,e diluciones nuevos delestóndor del kit poro codo ensayo ELlSA.

/-

",Ó

Lo, mue,tra, de plasma pueden almacenarse duronte 28 días o uno temperoturo entre2 y 8 oc o, de'pué. de la extracción del plasmo, por debajo de -20 oC durante periodosmá, largo,.

Se necesito un volumen mínimo de 150 pi de plasmo poro garantizar lo idoneidad de 1mmue,tros,

___________________ ~P"'O.'R,.o~do~Q~Ot:!:;TJI.J>2'd..P.I",.IQEHJu,¡,EUSA_02/2015----------- 15_ló~ Pro'pedO'CJ€'Qcr¡;¡¡I1FEROt'l--TIl.GOIa'P1"'rQn.:rlu;¡.ELlSil.ll2720.i~.-- .••

MARISOL MASWBIOQU\MIC • M.fol. g4Lrn .TECN LAB S.I\

4. Reconsliluy'll el conjugodo 10lh, concentrado y liafitimdo COl'l0,3 mI de oguo cbionimdoo destilado. Mezcle ,,,,,,,,,,,,,,,,"Ill poro evitar lo IOh'lOdól. do eopumG y Iogror a.i unoKIIubiliroción completa cid conjugodo.El ~iugodo listo poro vliliza' le prepo'a ¿¡"'renda la c:antidod nC(I!>O'io de conjugado10lht concen!Jcrda en di1"Y"nkl YeJdo (labio 1. P'eporodOO del conjugadol. Vuelva aguarda, ;nmeáialamonl •• !aI conjugado1. 1O<h.<;anOentmdOl no utilizado. Q unlem~'atu'a de ••nlfll 2 y 8 oc. UI~;CllllJ<.du"'vamcntlld,luyen!c YeJd••.

•.,•

-'Pt-ococflmioe1lto.ecomendaclo pan! e<I6ncIan:iduprocodot

0, •••••••,o;a,4tubo1: 'P¡-,-P2", .pJ', 'Pd",

b, AñcdalSO¡ddoGDoSI,S2,S3yS-l.

<. Moda ISO pi dclosló"Clc" del li!o SI y ""lzdo bien.

d, T,onl!ie<~SOvi de SI ••52 Ym.ml •• ~n.

o. Tronol.....,SO •••&&S2oS3ymucl..bMn.

f. GDpo<~ IOIoliM:~oU6,.,d;,r =0 l54l.

F1II

¡_<l,lI. [_, t_1 £'-J l_.

- .'Ow.... '.oW'" o.,s~ OW••lOD:-"-••••

lIu.tnKión 1. Preparoción de la «JfV<Idodeolándar

Tlibia 1. PRparación .w (onjugodo

NIimerod.. tira. volu<r- d&conjugod•• lOOxconcenln>Óo Valumen de cl~ ¥ade, IO~ 1,0 mi

3 15~ 1,5 mi, 20~ 2.0 mi, ,,~ 2.5 mi

~1 • 30~ 3,0 mi

7 35~ 3.5 ml

8 ,,~ .01.0 mi, -'~':5.,l 4,5 mi

10 ,,~ S,Oml

11 ,,~ 5,5 mi

12 60~ 6,0 mi

S. Me:o:le bien ••••""""tren da plasmo ~ de m tv!m de ~.I!S~ quehayan.ido congeladas •• aImcKenado. antes de ¥ffiefIcn en el podio fUSA.Noto importonte: li!tu muesl••;•• do p1alJTlO•••oiiaden d"edar..ente desde Io.lubo, poroQFT.f'l". cenlrilugodos, evite mudo. el pkl1mf;1.Tenga euidado en tocio momento ele nointerfer;' c;on ••1_,¡al de la superficie cIelget.

6. Añada SOpi de confugodo re<~ prepcrodo &010 para tnar a lo. pocillot de fUSAIl'Mld'ICfIteuna pipetl:l multtconal

7. Añoda 50 pi de """",tras de plasma para anaIil1ll' •• len flO<'lIotcorrmponcflflfttc<lncmdo _ pipeta multKanol (con"be la distribOOón recon->dodo d•• ....-tn;nen lo ilu.troeión 2). PartI tl!rm;not. oñodo 50 pi a CodCluna de lo. estanclan:s I a 4.

f"o>p!!do d" OvcmlifEIl:ON.TB GoId Plu. IOFT.f'Iu.1 EUSA 02/2015

-~M¡;A~R;"~3~O~L~~$~IN¡¡O"BIOOUIM1CA. .9"63OT - TECNOl S.A.

P'OSf"'CIode OuanlifEIl:QN.T6 GaId Plu. [OfT.flu'¡ EUSA 02/2015

El programa de anólisi, del QFT-f'lus ,e utilizo poro onoli>;or los datos obtenidos y calcular losresultados. Puede obtenerlo desde wwwQuantifERON.com.Asegúresedeutllizarlaver"ónmó. aduoli7.ada del programa de anólisis QFT.plus.

El progroma evalúa la calidad del anóli,is, genero uno curva estóndar y proporciona unre.ultado paro cado suieto, calculado tal y como ,e deocribe en el aporlado Interpretaciónde lo. resultados.

En lugar de utilizar el programa de anólisi. del QFT-f'lu" pueden determinarse los rewltadoscon el ,iguiente método,

Cálculos e interpretación del ensayo

(CuclOdo no se utilizo el programa del QFT-Plus)

Determine los volares DO medios de la. réplicos del estóndar del kit para cada ploca.

Genere una curva estóndar en escolo log~rlogl.1 mediante el trazado dellogoritmol.1 de la DOmedio leje y) con reladón allog~t de la concentración de IFN-yen lo, e.lóndafe. en VI/mileje xl. .in inciuir el e,tándar cero en el cólculo. Calcule lo lineo que melar ,e adapte o lacurva e,tóndar mediante anóli,is regre,ivo.

Utilice la curva estóndar poro determinar la concentración de IFN.yIUl/mll en codo uno de lo.mue.tro. de plosma, utilizando para ello el valor DO de cada mue,tra

E.tos cólculos pueden realizarse con diversos paquete' de software que e~i.ten en el mercadopara lectores de microplacas, osi como con hoja. de cólculos O programas e,tadi.ticoshabituales (como por ejemplo Microsoft'" Excel~). Se recomIenda utilizar estos paquetes pararealizar el anóli,is de regresión, c",lculor el ca.,ficiente de vari",cián (%CVI de los estóndare.y el coeficiente de correl",ción I~ de la curvo e,tóndor.

Generación de curva estándar

13. Transcurrido. los 30 minutos de incubocián, añodo 50 ,,1de ,olución enzimático de paradaO codo pocillo y mezcle.La ,oIución enzimótica de porodo debería oñodirse a 1", pocillos en el mi,mo ordeny aproximadamente a la mi,ma velocidad que el ,u,trato en el paso 11

14. Mido lo densidad óptico (DO) de cada pocillo o lo. 5 minutos de detener la reacciónmediante un lector de micraploca. equipado con un Filtro de 450 nm y con un Filtra dereferencia de 620 nm o 650 nm. Los volare. de DO se utilizan pora cakulor los resultado •.

" "'" '"19 TB 1 21 TIll

19 TB2 21 T1l2

"M "MOON nN20TIlI 22 181

20 TB2 22 nl2

"M nM

'", ""N• ,

• 'N 'N 'N 'N 'N• lTBl HBI 5 lB 1 lTBI 9 TBI, 1 TB2 HB2 5 TB2 7 T82 " TIl, 'M 'M 'M 'M 'M" 'N " ,N "N "N "N21B2 <1 TBI 6lBl 8TB1 10 TBl 111BI 12 TB 1,21B2 .; lB2 6 TBl 8182 10 TB2 11 TB2 12 TB2

" 'M 'M 'M 'M "M "M "M

8. Tape coda uno de la, placas y mezcle bien el conjugado y los mueslTas de plasmale.rondares durante 1 minuto en un C1gitadorde microplocas. Evite las salpicaduras.

9. Tape coda una de 105ploCClSe incúbelas a temperatura ambiente (22.C:!: 5 oc¡ duranle120:!: 5 minutos.No expongo la. placas a la luz directa del .01 mientras estén en el incubador.

10. Durante lo incubación, diluya una p<'rte dellampón de lavado 20x concentrado con19 parte. de agua de.ionizada o de.tilodo y mezcle bien. Se incluye .uficiente Iampón delavado 20x concentrado p<'ro preparar 21itras de tampón de lavado ~.Ia poro utilizar.Lave lo. pocillo. con 400 ,,' de tampón de lavado listo para u,ar duronte al menOS6 Ciclos Se recomiendo utilizar un lavador de placas outomótico.

Es muy importante lavar bien los plocos poro que el onáll,i, dé lo. re.ultado. e'perada,.Asegúre,e de que todos lo, pocillos e.tán completamente lleno, de tampón de lavadohasto el borde ante' de iniciar cado ciclo de lavado. Se recomiendo dejar escurrir durante5 segundos como minimo entre ciclo y cicio,

Añado de'lnlectonte normal de laboratorio 01 depó,ito de evacuación y .iga losprocedimientos e,tablecidos paro descontaminar materiales potencialmente infeccioso •.

11. Cobque los placo' bO<:<labajo ,obre un paño absorbente sin pelusa y dé uno, Iaqueeito.pora escurrir lo. re.to. de tampón de lavado que puedan quedar. Añado 100 1'1desolución enzimáti<:<lde su.trato o coda pocillo, tape cocla placa y mezcle bien con Unagitador de microplacas.

12. Tope coda uno de las pIoC<l'e incúbe10s a temperatura ambiente [22"C:!: 5"C¡ durante30 minutos.No expongo la, placas o la luz directo del ,01 mientras e,tén en el ¡ncubador.

13181 15TB1~171Bl

13182 15T82 17T82

13M 15M 17M

14N IóN 18N

14TBl 16181 18lBl

14Tll2 161B2 16TB2

14M; 16M IBM

Ilustración 2. Distribución re<:omendado de muesltas (22 ensayos por placa].

• S 1 {estándar 11. 52 (estándar 2), 53 le,témdm 3), $4 lestándar Al.

• 1 N (mue,lra 1, plasma de nulosl, 1 TB1 (mue,~ra 1, plasma de TB1).1 TB2 (mue'tra 1, plasma de TB2). \ M imue,tra 1, plasma de mitógeno)

Pro'pecto de QvontIfERON-TBGold Plus(QFT-f'lus)EUSA 0212015 lO Prospecto de QuontiFERON.TBGold Plu, (OFT-PI".¡EUSA 02/20t 5

MARISOL ASir-' ...•

MARISOL ~SINOBl00UIMtCA- 1~.9.83OT. TECNOL B S.A.

-Control de cCllidad del ensayolo "l<OCIitvdde lo••••• "hado. dtIt aflÓl,,;, dapclIlde,6 dllla prnci,ión do lo CIJ1VO(I$IÓnd\l. q\ltl~ genN". Por c;onligu¡en~, deben 'eviKlf'le lo. um"tcdo, "moldo, de los "lIóndo",. alife.de ;nlc<prelo' los f"sultodo. corre.pon<!ienkllO lo. muestros onohooo •.PafO que el "">ayO EUSA se considere ...olido:• El yglot DO medio poro el eslóndof 1 debe se' O!:0,600.

• El%CV de lo. vglor"" DO de la. r~p1;cll' del eslÓndo' 1 y el ",16000' 2 debe se<:!: 15%.

• LOIvoIoros DO de JOI r~ico. del e.tónclar 3 y el e:ll6nda. 4 no deben prt!sefl!CIfunode,viQl;ión mayor que 0,040 unidades DO respecto II .u medio.

• El coefic;enlt! do co«olodón Ir! oalc:uloclo a parli, de lo, valoro. mediol dllObsorbonc;iodo Jos MIónc!OfO'dobo l.Cf2:0,98.

El programo de oool;,i, del QF1..f'lU!coku\g y m•.••••lro lo. valore. de •••Io! parómelro. d",colidod.Si no 'le cumplen lo. fequi.ito. indieado •• 'le considero que el onalisi. no e. vólido y e. pre<;i)Qr~I¡rlo.

El voIor 00 medio poro e1eslóndo. cero Idiluy=te ...".de) debe,io ser:S: 0,150. Si el voIor 00medio D' > 0,150. deberlo revisorse el procedimiento de lavado d~ ~ •.

Interpretación de los resultadosLo. r~.u1tae1o. del ~nSO)'OOFT.f!". loOinterpreto'ón segim lo• .;g.,;~nteJ criterio",

Nota importante: paro diognollico. (1de1.cortg, uno tubcro;u!o.h, o por" .,..al"." lo p<obob •.Iiclod d.. uno inb:ción Iotente por tuberculosis {lT8Q,e. nec~so.io 'ecabo, vna .~,ie do dolo.epidomiológ~., hhl6ria ••, módico. y diogn6<ti<:o< que hobni que Ionor on cllOfllo o lo horodo inle<prelo' lo. 'e,uhodo< del OFT-P!u. [Tobla 21.

P,o>pedo de o..o.,t'fER()N..TBGoId PI". (OfT-Aus]fUSA 0212015

Tabla 2. lnterpreto06n de lo, re1v1todo1MI OFT.f'Ius,.., "'~ T"~ ""'"'" 1l,..u1todo 1l.....ftodo.{Into,•••e lociónOU/rNI Nu401IU/mII Nulo ~/rNI ~N'" "'Off"'"

fIU/mIJ';¡.0,35 Y;e 25% C""Iq~iero

d. ""'" Cuolquma POIbiYo' Inko:~ po';¡.0,35 y M ~;l probable

Cue\quie<g ;¡.2510

s: B,O doN••

1nIea:~ po'«0,35 ;1;0,5 Negativo M~.O ""' ......;¡.0,35 y « 25% do Nulo « 0,5 la probobilidod dtl

Indetenninodo'in!ección porM. h,rben:l1k)J;Jno

:> 8,0' Cuolquie.o JOpuede delerminar

o •••• -.:dono. al control po>lllYo del m!l6gono Ir •.•• •••••• _~ IBI ..,.¡"" _ hIet<I do! r""ll"dollo.clor do mkroploon. e•••• "" 0I000o o •••• ,.~,, Sl no •• _-"" uno InIoo<l6o:lpo' M r.bomrIo•••, un te..boOa ~ pen~¡"" puede cor.r~morlO~o onoli •••• po' dupIo<o<lolo• ..........,. do plaomo OfI¡¡Inoie. -. el emcryo Qf1& eLISA Si elon6li,i>dupllcocIodo •••••o de <I'lIboo~""'. do pooll••••.•• """Udofar6 qt>O e11ndMduo"" dodo peno ••••en el ""10)'0.

'e-too el ~ .~."""'l6n de proYoma.0 f'O'O.....-. ••••~ •••••••••'{n"""'¡.,. cIinlw>•••••••• do! 0,251:. de b wje!I:»~ •••••••••de Iff'l1cle,. 8.0 Wml f'O'Oel •••••do ,..,

E. impo<ible e,loble<:er COf,••!oción alguno ••mr~ el volumen d~ IFN.ymedida y lo lal4l O elgrado dl'! inltlCCióo,Ó/Iraspueslo inmll1MlO lo probabilidad de que lo enfermedad entro en .ufase octi""" E, e""'año obtener uno 'elflU'lJlo pa.itivo 01onligeno lB en pe'sono. negativo.al mit6geoo, ounque so han dado cosos en pacionte, con !vbemIIosi" E,to inclico que lo,espuesto del tfN.y 01Onligeno TBe•• upmior qllll a lo d...Jmil6g0n0, lo que o, factible porquel'IIniwd de milógeoo no e,timldo 01móximo los linfocito< PO'Oque praduzC<ln IfN.T.

P,oopecl<>de OuontifERONoTBGoId Plu. jQfT-Plul]EUSA 0112015

--.- --._ .•.•...•....._ ....-

--•

-- -

•

Características de rendimiento

Estudios clínicosEn la pr.k1lcO no ••• posible evokxn lo sensibilidad ni '"pe<:ilic:ic/od del enlaYO Qfl-Plu. al nol!x;'l;, un flslóndol definilj"O po<o el diagnóstica d" lTllI, le eopeo;ili<;idoddel e"wyo QfT.pJUlloeha dele,minoc!o mediO"I" aproximación O parti, de los Iosos de fobos posilivos en pCfSonosde bajo riesgo (sin fodores de riesgo conocidas) de inle«:i6n dclubt!n:uIosis. lo sensibilldodIombién se ha determinado medionlc aproximación o pa,l;r de lo evoloodón de g'upos depacientos con tubcn:vfosis activo conli,modo medionle cllhivo.

"

' __ ~l _l'MooTt2_~ ••••-. •••) 1S"clel••••.""W•••cIol'Mo""""~doI_tubo_ <1~ ~oIo) 0.35W•••.

Ilustración 3. Oiograma para la ¡n~ión del QFT-f'kIs

Umitacioneslos resuhodos d,,1 análi.i, QFT.f'IU1debon compIclOfSOcon lo historio eplóemiol6gial delindividllO, estada lisieo cx;1vo1y alr01 pruebe•• médica •.

los sujell» q"'" p'''>I'!nton vo!oflll nlllm s.up,,¡i(lfe. a 8,0 Ul/mt Je Ckllificon como ';nde~.minodas" porqvelo. re=ione. a lo. onl;901>O. TBsupe1iofes (1 lo media en un 25% $(l

wmidCfcn fuero de 1o.lJmiles de medición del tIn>OyO.

Pullden done rewltndoo poc:o fiable. O'¡r>deJ",minodos .1:

• Na $(l siguen lo. pa>os c1eKritos en esle ptaspeclo.

• Exhten volúmenes "",,celivo. de IfN-r en circvkxión O'hay antiCUllrpos helmófilos.

• Han pCllodo rn6. de 16 hoto. de..!" lo oblenclÓl'l de lo muestro de 50"9'" y.uincuboc;i6n O'37~.

Espedficiclad

Se reclizó un elludío poro evoluclf lo espe,;.ilicidod del ensayo QfT.f'IlI. COn409 slljelo •. losdolos demográfico. y los lodofes de riesgo de exposición o lo Iub,,,odosi. se dlllerminCJfonmediante un Cv<lllionorio es/andar en"¡ mo",..,nlo do lo pruobo.

Del re,umen de dolo' oolenido. de lo. 2 grupos de podentes con bojo riesgo l<in factores deriesgo cOflOcidos) poro lo Infe<;ción por tubt!rculo.is, lo esptlcificidod glabo! d.,¡ QFT.fIus fued..I97,6% 1399/4091 lToblo. J y 4).

Tabla 3. Re.ultado. cid ~tudio de especificidad cid Qn.PIus por cemro de estudio

E<tv<fJO I'<Kitivo N.gotivo hlClelC¡¡¡,h>odo Especaicidod(IC9S'l1.lapón 4 203 O 98'10 19.5-1001I~~ol¡;' --~6 -196-' - -- - O 97"f.194~ -""':e _~___ _ _ J

Tabla 4. Resullados cIeIll1tudio de ll1peCficidod del aFT.f'Ius por tvbo de onlitleno TB

lBl TlI2 QFH"u.

PollJivo .5 10 10--~-Negativo "" ". ,,,

£' Irlde!cfminodo O O O

Especificidad ~ --W,8% 97,6% 97,6% "lte 9.5%1 197,'.99,61 (95,6-98.8) 195.6.98.81~

I'foopedOde Ouonl;FERON-TIiGoId PIu. IOFT.f'IusJEUSA 02110 15

MARISOL MASINO6100Ull,IIC - M.N. 94801. leeN LA8 S.A.

•

ScnJibilidad para Ic. tuberculosis (l(tiva

M¡lln~ClJno ,,'¡'Io uno pruebo e.!Óndo, definitivo poro el diogoo.lioo de lml, $& o<:"pIa ,,1método del cultivo microbiológico de M. "'ooculo.i. yo que lo. pacie"!ll' con la enft!1~d,,'lÓn ;nMdad01 por definición. Poro evolUOf lo sensibilidad del QFT-Plu. le Ol>QlizorQnlen•U¡olo. ¡:wocodcnto. de 4 centro. de evudio on Au,lrolig y Jopón oospcchoooo de padec."!\Ibe,culosi. y wyo ;nfec;<;iónpo< M. "'00•.•:,,10.;, se confinn6 poslef;ormente mediante cultivo[Tobla. 5 y 6). lo condición Indispenwbl" e. que lo. podenle. re<;iban "" tratamiento demenos da 14 dí<;uanit!o d", la 'l'!Cogido dt,l Klngnl poro "lllnSCJyOOFT.P1us.

Del/MUme<! de dolo1 obtenido. de ~ 4 grv¡><»de po<;ienle. po,il;"", pCIfOM. tvbetcvlo.i.medionl" whivo, la oen.ihilidad global cIeIQFT-Plu. poro la tubercvlo.i. odivo fve del 95.3'X,[164/172). De lo. <1grupos, 159 paciente •• ",ullo,on po,il<vo. mediante T81 y T82,I poden'" rn.vlt6 po.iliv(l rnt'ldionhllB 1 K>lamflnllly 4 pocitlnlt!. resultaron polifiven medianteTB2 KIIomenm. Un toltll dll 1,1% (2/17 tj de los ,"wl!OOO1 fueron indc!efminodo •. El re'uhodoporo onligeno TB2 idenlifi<;ó eorreetomenle 1 pedenlo confirmado modionte cultivo quoehubiera re •..Jtodo indeklfminodo Imil6geno boja) solomenlo con el 'es"hodo pero TB1(con...,hlllos tabla. 5 y 61.

Nr.m..o o. 'ujoto.

~~'""." o.,O ~~'':t~~~~~~~~~~~9,~:~~o~o' , .••..~.• ' .,. 1> "l. "'0.9'

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Nu-ro doouje!oI

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trN'flll/mIl

U".troción~. OiltribllCión de nulos. mDistribución de volcne. nulo. en lo pobIoción debajo riesgo (n _ 01091. liD Distribución de uoIo<",snulo. en lo pobIoción d", riesgo ",i~1o(n •• 194). tf:J Di¡lribución de voIarel nuIol on lo pobIodón con inFección por M. tubercubsi.confi,mado medionlo cultivo In _ 174).

"

OistñbudonM de fMpuesto o!w:rvodo': ostrotificodon del riesgo

en lo. (tnsoyos clini<:o. so obK!rvoron vario. tIllput"Io' dd lfN-T o lo. tubo. de TBI, TB2 y decontrol y se e.ttolific6 el ,iesgo de infección por M. tube<culo,i. plustracione. 407). Elgrupode riesgo mido ellÓ rOlmodo por .,,¡eIOI repre",nlo~¡vo. do "no pobIoción de ensoyo 9_rol,fOlmedo por s,,¡eIos con y lin fodore. do ,iesgo do lo e.pcnlcJ6n o lo tuboreulosis y en lo. quees poco Irecuenl1llo tubo<culo.is ttdivo [e. decir, l1Bq .lB Nu-oo do wjoIo,

~~,">.>""".'.,;,;.,:••.o~o'".••..~.• '.,. 1>'"1- "'0.9'

FNJ¡ [UlmIl

1S

1ClO% (B4ol 00]

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7

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'" "" an.••••Po,ifM:> "O '" ''''rN~;"'; -,

" • B,Indeterminado , 1 1r-~ ---"...,..- -~~-

--94.8iSensibilidad' 93,6% 95.3%(IC95~ [8B.8.96,71 (90,3-97,61 [90,9--97,91I _ ~_ -

C_O de Japón 1-~-LCenttode Jc~ 2

Ceonnod" Japón 3

rcen~,J;" Aus""'j;'"olía-

Toblo 6. Resultados del estudio ~ sensibiüdod del QFT-f'!us por tvbo de ontlgeno TB

Tablo S. RMIIItodos del Mludio do ~S1"bi1idoc1del QFT-f'lus por cenfn;I do mud"1O

Negat.... Inclemminodo SensNidod delm-Plus" pe 9S'¡j

B4% [69-931.. - ..98% (90-1 00]

100'4 (93-100]

Pro>pftQOde o...onl,fERON-TBGoId Plu. [orUlu.] eUSA 0212015

MARISOL MBIOOU1MICA. Mr'lT. TECNOL

INO9483f::; ./1

IOTBllII!J TB2

IOTel1lIIi TB2."'-'00

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IfN_"((UI/ml)

Ilustradón 6. Distribución de mit6geno (su.tracción de nulo). El D"tribuci6n de valores demilógeno I,u,tracción de nulo] en la población de bajo rie'go (n _ 4091.111 Oistribuciónde valore, de milógeno ¡,ustrocción de nulol en la población de rie'90 mixto (n ~ 1941.DI Di,trlbución de valore, de milógeno ¡,ustracción de nulol en la población con infecciónpor M. tuberculasi, confirmada mediante cultivo In _ 169).

11lOTBil~

Número de '"jetQ'00

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IfN-1IUl!mll

IlustracióR 5. Distribución de TBI Y T82 (,,,,tracción de nulo). a Distribución de valore; delB 1 Y T82 (su,tracción de nulo) en la pobloción de bajo rie'90 (n ~ 409). DI Distribuciónde valores de lB 1 Y 182 (sustrocción de nulo) en la población de rie'go mixto In - 194).11Di,tribución de volores de 181 Y 182 ¡,ustracción de nulol en la población con illfecóónpor M. fuberwlo.i, confirmada mediante cultivo (n ~ 1741.

Prospecto de QuontifEROJ\l.TB Gold Plu, (QFT.Plu') fUSA 02(2015 2L...2ª P,rospeclo.de.QuontiFERGN.TB.GoId fitr.-{QFHlusl HISA -02/20 I'S"

MARI SO'BloaUIMICOl-lEeN

MASINC• M.N. 9483LAB S,A.

lo impreci,ión inlra e interensoyo (%CV¡del OFT-Plus ELlSA,e estimó medionte el onólisis de20 muestras de plasma con diferente, concentrocíones de IFN-r en réplicas de 3, en 3 labora-torios distin~o" en 3 dias no consecutivos y con 3 usuorio, distintas Todo ello ,upone un total27 onólisi, por mue,tro, en 9 ,erie' analíticm distinto,. Uno de los muestro, erO un control denulo, can una concentración de IFN.rcalculodo de 0,08 UI/ml {ICdel 95%: 0.07--0,091. Poralas 19 mue,t,os de plasmo re,lontes. 1m concentraciones estaban comprendidos entre 0,33IIC del 95%: 0.31--0,341 Y7,7 Ul/mlllC del 95%: 7.48-7,92).

la estimación de la imprecisión denlra de lo mismo sene onalítico o intraen,oyo se real;zó conel promediO de los valore, % CV de coda muestra de plasma con IFN.yde cada placa paraanálisis (n ~ 9); el resultado para la impreci,ión o,ciló entre un 4,1 y un 9.1% 01. El pro--medio de la covarianza dentro de una misma sede 1:1:IC del 95%1 lue de 6,6% '" 0.6% Elpromedio del plasma con cera IFN-yfue de 14,1 % CV

lo imprecisión total O inlerensoyo se determinó medianle la wmparación de la, 27 concen.traciones wlculada, de IfN-r para codo muestlo de plosma, la imprecisión interensoyoosciló entre un 6,6 y un 12,3% CV. El promedio gloool de % CV (:1:IC del 95%) fue de8,7% '" 0,7%. El plasma can cerO IFN.y presenló un 26,1 de % CV. Cabe esperar este nivelde variación debido a la baja concentración wlculada de IFN-r, y lo vo,;ación relativo O unaestimación bajo de concenlración siempre seró mayor que la de concentlociones ,uperiores,

lo (ep'oducibilidod del QFT-Plus ,e determinó con muestra, de sangre de 102 sujeto, conlactare, de riesgo mixro para la infección por M, ruberculosjs. Se valoraron tre, usuariosy condicione, de laboratorio di,tinros.

En total se llevaron a cabo 3 determinacione, diognó,lico' por cada ,ujeto, con un total de306 para todo, la, sujetos En general, la reproducibilidad de diagnó'lico obtenida fue del99% {ICdel 95%: 97,2.99,7], con un d,agnó,tico concordante para 303 de las 306 determi.nacione,. La variacIón se debe a los resultados de 3 sujetos con valores cercanos al valorde corte.

Di(lgtló~ico de LTBI

Se han publ,wdo varios e,tvdios que ,ecundan la validez del QFT, precursor del OFT-Plus, endistintos poblaciones con riesgo de infección por MTB. En la tabla 7 se resumen los principole,resultados de algunos de e,tos e,tvdio •.

.'.d'.....~'.,:',''.

'.

,,

Ri.'go Rle>go"'¡"o lB0<;1;"0

b"io R."so d. Infecci6np",MTB

o

,

Ilustración 7. Diferencia abs ••rvada entre valores d•• lB 1 YTB2 (sustracción de nulo),estrotificada por riesgo. Población de riesgo bajo (n ~ 409). población de riesgo mixto(n ~ 189) Ypoblación con infección por M. lu6ercu/a,;s confirmada mediante cultivo(n ~ 141). Se re,taron lo, valore, de lB 1 de los valores de TB2, Se excluyeron los sujefoscon v~lores de TB1 O T82 > 10,0 UI/ml por estor fuero del intervalo lineal del emayo.

Características del rendimiento del ensayoSe ha demo,trado la lineolidod del ensoyo QfT.plu. EUSA med,onte lo colocación oleatoriade 5 réplicm de 11 pooles de plasmo de concentraciones conocidos de IFN.r en lo ploco deEUSA. Lo linea de regresión lineal presento una pendiente de 1,002 '" 0.01 ¡ Y un coe~cienlede correlación de 0,99 (1lusjración 8).

El limite de detección del QFT-Plus EUSAes de 0,05 UI/ml, y no se ha demastrada el eledagancho a dosi, alta, {prazona) con concentraciones de IFN-r de hosta 10,000 UI/ml.

.,

IfN-ylUllmll

"

.,

o 1 2 3 4 5 6 7 e 9 1011

Nivele'pe'''do d. IFN_y[UI/ml]

Ilustración 8. Perfil d<;Unealidod del QFT.f>lusEUSA,

Pro'pecto de QuonliFERON-TBGold Plu, (QFT.f'lu,]ElISA 02/2015 ~:~~'-'~~~~~~~~:----~P':O:'P:':':'O~d:.~Q;;:OO:':':'F;E;RO:;;:N~.'~"~G;o:l:d~P:lo:.:IO:;n:.p~I:,,:,;E~L1;SA::-:O~2:/;20:;";~MARISOLMINO

Bl0aUIMICA' M. 9483r-". ,.",r.NOLA S.A

Tobla 1. Selección de fltudios publicodo. 50bra QfT

¡;.•

Población! RewI!lodo1 '1 , ••••••••••••••• N""-o lokIl deCondici6n •••tudiM pubIicodoI

Inla"l~ Validez derncnttodo en niñl». ¡"""ido' niños menor ••• do "25 0"0. (¿,S..!6). l;Cfl "ne exochlud mayor a \o de lo. en>ery<»lGlA baoodoo en El1Spol181. [1 moyo< ••,!Ud'o "C••IO lo fechooobr •• lo comparaci6n enlr •• d en>O'fO on y lo prvebo TSTrealizado CO!Iniño> de V¡"lr>Om.Filipino. y M.l~~ cor,oba<oel 1110pr"f...-c:;"l cid OH en lugo' de lo TSTpo,a lo- dcle«06<l de lTBI en ni1'w» e>;.lIonje'cn (46). Un e.Ndio deconl_limitndo. delermlno 1m11'1'*" ~Ior prodidiYo que lopruebo rST en nIño. ¡<l7] y un '"''SO d. progrll>i6n houodetoNo/k" lo 1l,I1-cuIo.1. 8 ¥'lICe. mayor al cabo de dos oilcnentre •••• convert!dO«l' Off con rdoción (>lo. noa>nYIIrtidooll.[48]. lo diKo<dcmcio QfT.ftegllli..o/TST1"'.il ••••en oI!O en ni~cn ~Oi con 6CG [.lI6, ¿9). pero no.., hac1etcdodo n;"Sun impado en lo ••••pue.ta dd mll6geno enniño> men<>l'Il' de 5 ono. [49), y lo 1010 de indelermmocl6npara el cribado tvlinorio dII nir.... inmigran~ •• " boja (46J.

Mu¡.. ••• En zona. de =90 boja. ,,1Off ohecc> un buen rendimiento 6"rnbo,ozD<ia. en lodos lo. 1r,,,,,,1lf••• del embarazo con ",.uhodo.

comporoble." •••• de ku muje'''' no "mba,azoc!o., ,,,.,,10,,I'nlXho mc\. "'P""if;a" con """ .-.ib<liclod compo",ble y~ _ 1m ""'jo< ploddor .1,,10 progresión .leloenftnmaóod q...c lo ptveba 151150). En Ófeo. de CO'SO olla,el Qn rcs.itó se' m6 ••• dable a lo la,so de: tada el "",ba",~ ••Ymud>o m6. ceJa", •• a la "" ••.•••Iencia delTa! de fondo encom;>o",<:ión con la p<....oo TST, a pe"" de que la. ""Iaf •••lego ••••••• la condu.i6n de q"" ••1"",bora~a incide kmlo onel """'YO on como ••n lo p<VCl'ba1ST [51 [.

"'"1_ Tanto "" """'YO.IGRA coma la pr....oo 1S1 ••• __ aledoda. 101po< la infección po< VlH Yel canj<.mla de f"""ba. s"Si ••, •• q ••••deberlon tamo, ••• ~al,f(ione. en el _lo de ln"''f'''''ll''"" , ••whoda, con n;.de. de CD4' c 200 (S2]. Se hademcl$trodo q"'" la Incidencia .., •• fllsayo on o. _ q\IC"" "" ensayo' IGItA ba...do ••• n EUSpoI y la prueba 1St (53-55].LD comodidad do la ••• nsayo.IG~", ,ooIizocloo en u •••••••••• "'¡,IIo, pr •••.••1aeo oabto la p<ueba 1S1. que p'""",1o u•••••1Ina. * seguimiento mvy bajos "" ••>te lipa depobIoclón IS3],

P"Wa<:i••••/ Re...bod ••• y condu •••••.••• NUmera total d.Condición ...ludios pub!"oc..dos

1•••••,,1a. mmu""," LDincidencia de la. ""apio. in""'na.u¡>reooro •••• menor 112

'''1''"''''''''' on ,,1 en"'YO on que en la ",u"ba TS1 y of'e<;e u••••mejoreo<",loción con la. IacIOnts d. '''''9'' de la IIII>..,cII-Iasi, [23. 27], on ha domailroda uno alta ••••••ibil;dacl .en pacil"'l"" can ••nf••,med"" ••• '"um<!tico. 123. 56, 57]

•.

Y uno moya< e."",,;lkiclad que lo prueba 151, la que•. minjrni~a los f"l •••• paoiliYo. Y ,educct el !rolo",;"nlo no

nee<l•••,1a q\IC se odaplOr>a con la """,bo1S1 [23. 57, 58].~-- - 111Pnú.ianola. Mó •••• """,f><:o. con "n me •••••nü"""a de !"I •••• pasi' •••••.•

I ",n;ItI,Ia. " •••••Ia pr •••••bo 1ST Y mó. 'enlabio:> q"'" la pt....oo 151 159.62]. lo ••••'icbiliclod en ••••Ior ••• ce,cano' al "",I><al e.e ••••••.able en aflÓ!;,; ••• n se,;" debido 01 """lo d ••cotledicol6mico y a lo ••••riabll;dad inl.er""t •• do u •••• """,bobiológico 1631. lo •••• ludio> f'O"'ln do manil ••••1O"na, lo"'. Id •• con"",si6n/""",,,¡ón '''P'''iar". 010. de lo "' •••••bo 151en len onóli.i ••• n _10 d •• ",oT".ionoItt. ",nilOfio. de bojo

I';"'9" [64, 65J. to. (en';a. paro el Canlfol Y P'rove<>clónde Enknnedades [COCJ do ElIoda. Unido. ,.,.;anacen qu •• ..la IIexib~idod dd cr;~,ia pa'o def;niflo corwc"ión tGMpuedo genera, """YO' con"",>l6n q"" la ob"""""o con la.c,i""la. c •••••nlilat1va. md. ,altricliYo. de la ",uebe TST;odemó., la ••• motegla ••• nfacodo ••• la 'epeticlón d •• la.••nót..¡. hcm demostrada ••• elic.ocla pa,a la 9"'llión d ••lknóm"no do c•••••••.•iórl/ro .•",,;ón I65.óBJ.

Soopadlo",. Va ••••.•••VPP y VPN •••par •••••••a la. da la ¡lnJCba 151147]; ••.10_ camodiócd da uno ocia .•isita pe'a la. poeienl<:. con poca.iuborculosi. paoibaidc4 ••• de ••.••••.•••(63). ""'jaf (Clf,elociórl do la

••.><pOSición169], "opc<:ialmcn!c en wjelcs -=vnados conBCG y pabIod",.". de ""1 •••• dand.. ••• odrniniltra lovocvnc BCG [70, 71J.

,s..¡.,ta. E!;cocia equipcroble -:: la-de la prueba 151. "",a con un ".lf •••plantado. ""' •••••impaClO dala inoulic.iencia en ~ Io<minal deórgano. q"" la p,....oo 1ST (22J.-

--~-- "•.

• •

MARISOL.MA~N0Bl00UIMICA- M. 4f

- OT. TECNOLA .A.

,

Población/Candici6n

Diaba""

Muestras de plasma coaguladasSi en lo. m"".1I0' de pIa.mo almacenado. duronte mucho tiempo opoll!'(en coógulos defibri"O, centn1úguelo. poro Sl'ldirnenlo: los ooóg'*» Y facilitol osi el pipotoodo del pIo.mo.

Resultados indeterminados

Información técnica

1m re.u1tado. in<Últenninocla, son paca habitvole. y pueden ",ler ,,,Ioci~ (Ofl el ",tocioinmunológico del individuo o (Ofl vo,io1 !tKlo<", técniao. en coso de no .ag..,;, lo. in",ue-(ione. ele ",so indicado •.

Si ~xi.l<!nso~ha. do que SIlhoyon ",oollCido folios o errore.lécn;(os duronto el olmaceno-m;onto do rooclivo. o lo recogido O mClnipu!odón de lo. m"",Iro. d" sangre, repito Ioda el"nsoya QFT.t'\u. con airo. m"".lro. nllCYO•. Cuando ,,1motivo pued" deberse o que e1l1l(rloriolno se ha Iavodo bi"n o a que se han c;ornetido errare- de proa-clímit!11to,put'!de ,eolizarSf!de nllCYOel "nsayo EUSAcon pIa.ma. e.:imulado,. A no se. que 10 hoyo p,ooocido un etl"Of

"n el flnSC1)'OfUSA, no dctbMion oblllnono IO.u/lodos inc!eterminodos por un boio voI",men domitógor>o o ltn elevado ¥Oiumendo vobe. fU,l1os.Los",""'todo. inclelCfminodo. deben fdCflrsecomo tole •. Corre.ponde a lo. ~tcos optor por cxlmel ",no lft(J"'ndo m"".1I0 o 'f>QrozOfairolipa d" ",,,,,ba._

29

--,,---.,_.__--.-1

Pn.oebo.CQ<1l1oclido<""a partir de un "","",o redlKido do""blicociont., ,,,,,llzoda. C04'1\/'1 rnimetO Ilmilodode wi~.Une.ludio ,octirod" en """ órOQde (0'9" bojo O1lablecióq"'lo ..,",ibil;doc/ da! QfT <>o•••YOo!oc;Iod" por la d ••be!<!.cmPOCie1>~1tO<'lrubo,culo.i.(72). Un elludio ,,,,,tizodo enTOnzcmia,1mIuga. con _ ~ COf90do lo en!en"ed".d, yqve .ugerlo \/'1 impoclOn&gO!."tode la dicbele. can relacióna lo producción ele IfN-y, no.-olotó !Qclom d••conlu,ióf,_ el VlHYkll i,,!ocdone. hc!mlnlico.¡nl. Enelludio>viOl!'lomito•• 838 >UjcIo.qllC1T>O";!"umon,,110.m,...,..._dio~!i"" y _pechcno. ele lene<tuberculosis o porl~ d"ploco. do Ióto. onómol,"" por lo conl¡,modÓfl median'"cuhiYodo tub"••;"kni. ac!iYaIn. 128). lo po$,rMdod del0fT M equivalen", " wpe<ior a lo, PU"IO,d" Cortoldo10 Y 15 mmdo lo pruebo 1STpAJ.

'e;,i;,,"";'¡;"¡ ~-~.,,¡lod.;;i;.I,ivo. del Ofl ~ conelac~ con lo.Eenal""m~~ Iodor". d" ''''190 de la tube<cuIo<i.mejet q"" lo pruma TST_ _ y o>l6nmeno. fObcionockn con &CG (75).

Emigron"'. 1m "Mio. d~."O'II que el ""oayo QfT no •••••••af"clodoni por 8CG ni por la e<!od, "dffe ••"cio ckla prueboTST/74). P•••.1o!<mlt>,el Ilnoeyo0fT towf!o se<el metocIomó. oconómico (761. Enzono. de =9" bajo, la rncrycriadabt. (0_ do 1tlbe<<:UIoslop" •••.;.,""" da nacidos en ele.lfanic<o y da lo reodM><:iónda lIrbe<aAo.io~ Ira. lalIc¡¡odo (771. El_Y'" e.!ud;e, lIo'la lo f~"'¡"'"la(ompotoci6n entr" el ~ntoyo OfT y la prwbo TSl,ooIizooocon nli'l.>1"'miS•••••"'. "'''''"'''''' ellnO P',,1e<cncioldel OfT ••.••"'gar do lo ",uabo TSTpoftl lo dc!occión de lo lubetcula<i.Iomntoen niños nacido. en el "d'anjcfoo 11.61.

¿ PrO>¡»Clode OucmI.f(RON-T6Gold Plu.¡OfT.f'!u.1 EUSA 02/2015 Ptospeao d. OuonliFERQN.TBGold PI'''IOFT'''''',) (USA 02/2015

MARI SO6100UIMIi"'T. Tt="f"';1'

MASINOM,N. S"B3Lllf.l .e.,A

a) Errof de dilución del estóndar A,egúrese de preparar correctomente lo, dilucione, dol e,tóndordel kit, .iguiendo 1m inslruccione, de e,te pro'pecto.

1

t

1

lo, mue.tra. deben mezclarse con los e.rondore, de formaRuida, Sin interrupCtOne •. Todos lo. reactivo. deben e,torpreparados ante' de comenzar el emoyo.

De,eche el ,u,lrolo ,i presento UnOcoloración azul. Utilicedepó,ito. de reoctivos limpio •.

A,egúre.e de que el kit no e,té caducado. Compruebe 'lueel e,rándar reoomlltu,do y el conjugado 100x con~enlrado,e utihan durante lo, 3 me,eS ,iguienle, a la feCha derecon,tituci6n

Asegúre,e de que el kit no e,té cadu<;ado. Compruebe que ele,rondar reconstituido y el conjugado 1OOx caocentrodo seutilizan durante lo, 3 me,e, ,iguiente. a la fecho dereconstitu~iÓn

Solución

love la placa 01 meno, 6 vece, con 400 pI/pocillo oon tompónde lavado. Según el lavador utilizado, puede que ,eannece'ario, mó, de 6 ciclas de lovado. Dele e.currir durente5 ,egundo, como minimo entre ciclo y ciclo

la incubación poro EUSA debe reali2arse o temperoturaambiente (22 oC jo 5 oc¡.

Todos lo, reo~tivo" O excepción del <;oniugodo 100xconcentrado, deben e,tar o temperalura amb,ente ontc.de empezar el ensayo. E,le paso puede tordar una horoaproximadamente.

lave la plow al meno. 6 ve"". con 400 ~I(pocillo can tampónde Iovado. Según ellovodor ulilizado, puede que .eannece,orios mó, de 6 ciclo, de lavado Deje e,currir duranteS segundo, como minimo entre ciclo y cicla.

A'"'9úre,e de preporor correclomenle la, dilucione, delest6ndar, siguiendo lo, instrucciones de este pro'pecto.

Mezcle bien lo, reoclivos mediante tnversión o agitándolo. conCUidado ante, de dISpensario, en la placa.

di Técnico de pipeteado nofluida o interrupción durante lopreparación del ensayo

cl Mezdodo mal he~ho

b) Errar de d,lución del e,16ndar

a) Placa mallavodo

Cu"",, estándar no lif>C<lly V<lti<lbo1idodentre duplicados

Po,ible causo Solución

d) Solución enzimót,co de,u,troto contaminodo

Resolución de problema. pa •.••ELtSA

f) -Reactivo, demasiado fri~

Posible cousa

01 Plo~a mol la vade

b] Temperatura de incubaci6ndema,iada elevada

~I Kilo componente. ~aducadas

g) Kit o ~omponenre, caducoda,

Fondo elev<ldo

te incuboci6n para ElISA debe realizarse a temperaturaembiente 122 oC ~ 5'C¡

lo Incubación de lo ploco con el conjugado, los estóndore, y 1mmue,tro, debe durar 120 jo 5 minutos. La ,olución enzim6ticade ,u,troto debe incubo"e en lo ploca durente JO minuta,

Compruebe que lo, pipeta, e,tén calibrada, y utilicela, segúnlos instrU~Clone, del fobrkante.

Solución

lave la plaw 01 meno, 6 vece, wn 400 ~I/pocilla con tampónde lavado. Según el tavador utilizada, puede que ,eannecesario' mó, de 6 ciclo, de lavado. Deje e,currir durante5 ,egunda, toma mfnimo entre dcla y ciclo.

Extreme la precaución durante el pipeteado y la mezcla de lomuest,o pora minimizar el rie'ga.

A,egúre,e de que el kit no e,té <;adu~ado. Compruebe que ele.lóndor recon,tituido y el conjugado 1OOx concentrada seutilizao durante la, tres me.es Siguientes a la fecha derecomtitución

~I Temperatura de incubacióndemasiado bojo

di Tiempo de incubaci6ndemasiado coo1o

el Plo,mo mezclado en tubo.pora QH.Plu, ante, de 'urecogida

bl Error de pipeteado

di Solución enzlmót,ca de,u,tmto contominoda

De,eche el ,u.tralo" pre,ento uno coloración azul. UtiheedepóSito' de reactivo' limpios.

De'pué, del centrifugado, no pipetee amba y abajo ni mezcleel pla.ma de ninguna formo onle, de extroer lo muestro. Tengo~u,dodo en todo momento de no interferir ~on el materiol de la'uperficie del gel.

Valores bajo, de den.idad óptica para las esfó-ndares

Po.ible causa Solución

POSible cau",

al Placa mal lavada

b) Contaminación cruzada entrelo, pocillo, de EUSA

cl Kilo componente, caducodos

Guía de resolución de problemas¡;,jo guia deresolución de problemas puede r;,uitarle de utilidad para resolver cualquierproblema que pueda ,urgir. S, deseo obtener mós información, también puede consultor loinformación técnico que encontroró en: wwwQugntiFERON.com. Consulte la contracub,ertopara obtener la dirección de contacta.

Resolución de problema. para EltSA

Calaración indetenninada

e) Fillro incorrecto para lo lecturede placas

lo placa debe leerse a 450 nm ~on un filtra de referencia deentre 620 y 650 nm.

QIAGEN Y .u. distribuidores ponen a su di.posición de forma grcrtuikl toda la inf<JflTlacion delproducto y las guía' técnicas. También puede visitar www.QuantiFERON.com.

Pro'peclo de QuontiFERON.TB Gald Plu, ¡QFT-flu.1 EUSA 02/2015 Pro'peclo de QuantifERON.TB Gold Plu, IOFT.Plusl EUSA 02/20t 5

33 Tu,ne" J et 01. {19961 Stimulolion of humon peripherol blood mononucl80r eell, wilh liveMycabaeterium bovj. BCG octivote, eytolytic CD8 .•. T eell, in vitro Immunology 87, 339,

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~:~~~~~~~~;;;~:---.,;,:O:,,:.:.:'O~d:.~Q:;:OO:":";f;ER;,O;N~.T~B~G~o:l;d~.:lo:,71O;H;,.~,o:'~,;E:US:A::-~O;2;!2;0;7,,;.• MARISOL ASINO

BIOQUIMICA .N 94B3DT-TECN L 8 S.A,

P,o'pedo de QuonliFERON.TB Gold Plu, IQfT-f'lu,1 EUSA 02/2015

ReferenciasEn Gnow"", la bíblio~eca de referencias QuantiFERON di'ponlbleen Y'Y>'W~~JI.l:Í,encontrará una lista completa de referencios sobre el en,oyo QFT.Plu, y Ofi.

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~

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• lL. ,Q.. -z-.- .. , t¡----------------------------------

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Prospecto de QuontiFHON-TB Gold Plu. (QFT-f'lu'l ELlSA 02/2015

MARISOLBIOQUIMICADT - TECN

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40 Prospecto de OuontiFERON.TB Gold Plu' (OFT-Plusl EUSA 02/2015

ASINON.94B3

AS S.A.

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70.

l'ca I72

~73

"75.

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77.

Mand"lak" •• A.M , Detjen, A.K • H""ellng, A c., Benedetti, A" ond Menzi"" D, 120111Interrero""90mma r"lea", """Y' and ehildhood I"bereui",¡, 'y,temallo ,evi"w and meto-analy,i,_In!. J. T"berc. lung DlS. 15, 1018.

Grimdale, J A , Ha, CS., 8000""00g, H., Kwamuro, L.M (20111 P'<>g,ommatrc ¡mpacl oí u,ingOuantiFERON-TB Gold in roulioe ~ontadio"",llgoI100 "di";ti,,,. Inl. J Tubere Lung Di,_ 15, 1614.

Wal.h, M.e. el al. 120111 Semitivity 01intcrrcron-y ,dca," m,ay' i, MI eompromi,ed In

IlIbereulo"" palient, wilh diabetes, Int, J. Tubere. long D,,_ 1S, 179.

Fovrholl.je'pen, D. el al. 12014) Diabete, i, ""ocial"d wilh lo"'er lubereuloSlS antigen-speeilieinterFeron gommo releose in lonzonian tuberculosi, potienls ond non-lubercuio,i, control., Scond.J Inl"et, Dis, 46, 384

Pointer, lA el 01. (2013) TubercuFo,i. ",reenlng by tuberculoSIS ,kin te,t or QuontiFERON.TB GoldIn-Tube A"oy omong an immlgront populotlon wi;h o higo prevolence 01 tuberc"losi, ond BCGvoccinotion. PloS ONE S, e82727

Roge"on, T,E. et 01. 120121 Test, lor lolent tuberculosi, In people with ESRD: o 'ystemotic ,eVEeW,Ame,. l Kldney Di,. 61, 33.

Poreek, M, et 01, 120131 Community-bo,ed evoluotion 01 immigmnt tubercu!o.i, ,creenlng usinginterleron y releose o,,,,y' and luberculin ,k,n te,tong: ob,ervationol ,rudy ond eeonomic onoly,i,Tboro". 68, 230.

WHO Global Tuberculo.i. Report, ;>013, bffp I/www/",ho.int.iri,/hondle/t0665/91355Icon.ultodo el 14 dc julio de 2013).

Símbolos

W 2 x 96 Suficiente pclro lo p,eporoclán de 2 x 96 muestras

•• Fabricante legol

( E: Símbolo de mmcodo CENO

~ Poro u,o de diognó'tico in "itro

@!] Código de late

~ Número de referencio

I GT1N I Número mundial de artículo comercial

~ Fecho de caducidad

t Limitación de tempetoturo

Consultor los in>!rucciones de uso

No reutilizor

Mantene, alejado de lo luz solar

Información de contactoPoro recibir osi,tencia técnica y solicitar mó, información, llame al número grotuito00800-22-44--6000, "isite el Centro de servicio técnico en ~~eo com/contocta póngase en contocto con uno de los departamentos del servicio técnico de QIAGEN(consul1elo contraportodo o visite el sitio www ..liogen.coml.

r:--:'-'.O:'-':'.':'O:-d:':.Q:"~"~"-'.;-F.E~'-O.-.N:~-T.-B:G.-.O:Id:-':'":':I.Q:-F.:-'-':.~.E.U-.S.A::0:2:1:2:0:':S::::::::::::::::::::::::-~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~,~m~,.,-,.'-'~"~.d-.'~Q'".".".tiF'E.'.O.N.~T.B-G.O.ld.'.I".'.I.Q.F.T~.•.I".'I.E.U.S.A-0.2.1.2.0."S

•

Resumen del procedimiento

Fose 1: incubadóll de la sangre

l. Recojo 1•• sangre del paciente en 1m tubos de recogida de,angre y mezcle el contenido agitando los h,lbos diez (10) vecescon la fuerza ,uficienle para 9ue toda la superficie interna deltubo se cubro de sangre Con ello se consigue ,olub,lizor elantígeno en las poredes del tubo.

2. Incube los tuba> EN POSICIÓN VERTICALo 37 °C:r. 1 oC porun periodo comprendido entre t 6 Y24 hora..

3. Después de la incubación, centrifugue lo, tubos durante15 minuto, o 2.000-3.000 x g RCf Igl para ,eparar el plasmade lo. glóbulo. rojo;.

4. De'pués del centrifugado, no pipetee orriba y abojo ni mezcleel plo,mo de ninguna lorma antes de extraer la muestro. Tengacuidado en lodo momento de no inter/erir con el material de lasuperficie del gel,

7. !.oveJas.pocillo; ",1menos 6 vece, con_400 ~I/pocillo conlampón de lovado,

8. Añodo <1 los pocillos 100 ~I de solución enzimótic:o de sustrato.Mezcle con un agitador.

9. Deje incubar durante 30 minutos a lemperatura ambiente.

10. Añada a lo, pocillos 50 Vide solución enzimática de parada.Mezcle con un agitador.

11 Lea la, resul1ados a 450 nm con un filtro de relerenóa de entre620 y 650 nm,

12. Analice lo, re,ultados.

~L~i

"~tItftftftf~#iii~

Fase 2: fUSA para IFN¡

Equilibre lo, componentes de EUSA, excepto el conjugado 1OO~concentrado, O temperatura ambiente 122 oC '" 5 oC) durante unmínimo de 60 minutos.

[ 10M" J,'.UU

2. Reconst,tuya el ",stándar del kit hasta 8,0 VI/mi con aguadestilada o desioni:wda. Prepare cuatra 141diluciones deestándar.

3. Reconstituya el conjugado 1OOxconcentrado líoFilizado conagua desíonizada o destilado.

/g

Pro'pecto de OuantIFERON-TBGold Plu, IOFT.Ptu,)EUSA 02/2015

tftfl1'l1'

'tI'(2:00)6. Deje incubar durante 120 % 5 minutos a temperatura ambiente.

4. Prepare conjugado li,to para usar con diluyente verde yañada50 ~¡a cada uno de lo, pocillos.

5. Añada 50 ~I de las mue,tro, de plasma del en,ayo y 50 ~I delo, estóndare, O lo, pocillos correspondientes. Mezcle con unagitadar,

Pro'peda de QuontiFERON-TBGold Plus [QFT-f'lu.1EUSA 02/2015 43 44

--------------~~--------------- .•""'''''~M'''A5:?;I;,S''O'''L~AS!~'?

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Pro'pecto de QuontifERON_TB GoId Piu, IQfT-Plu.) ElISA 02/2015

A. 'OLBIOOUIM1C

Pro'p""to de ~"ontIFERON-TB Gold Plus {QFT.PluslElISA 02/2015

ASINO.N.9463'" '"' "

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" ,000.""o,'" .I,'",~ o""',_'"'~ do",.,«10 'o, ~",,,,,.oIo, ,.""""""",,, '" .1.000~Ioy "', p,.'p"", '" ,O~ ~,I,=,~ '"'~~ ..••"'" r"~po"'''' "~"'''Hlm~o~"_""GrN~"'=.",~~~,~bo~o'""~ do,",p_d,,"~ ;."',.0<.. ","' ",,""'. '"""",,~1"_"""~"" ••• ",,'''""'.'._ ''" 'O" '""",,"'"lo, "' ,~I...,. '"~, ~"m,,, ,,,«pro~ do~""" ~, ''''OCO~' p,op~'~nOO"'" ,1p<OO"'~"""m,,,,,,~""'""" d, '" ''''''''" •• ""~~". "p~"'''''''',='N ~ '=01,='" ~•• ,••o; w('1."1" M ;0'0010"~, d.~""'," •.•• '0<E,~lO, '"' " •• ,,,••,,,,,,,.~" ''''''0 po,oHO••••"'O' '" "'"!lO"~~ ~ """"" ,••"b,. "o"""'",'~"""' ~~cdo'. '0"0"" Gll-'HN .d"."'O,,"""'"

" ,omp'o""",1••••"0d. lo,H"mp'" '" .-o'.",", ,,,m,",. o"",~"','" "M""pO", •• O"'" _d.o" om,o~, p"',b~"." ~,"I""F,,,,,o~, oo"'io~,. ,,"' ,.000 r,,,I,.,"o. w.mN", ,"'''.0'' do",h. <l.~,..,od., o~'o~ ~••I" ."~ "O•••~, ""00' poro.1,"mpl,~;,"todo ~, """".'0".' .'F=,I,,",,,,, '".'" ", ••«10d. ,~~~ 'mOodo,''"'"1''''''' mO" '" OO''"'do,,.o';'" do ~ •••• ~""'", •• '"=,~,dd 1""00.,',.,,'''~, '-',m~, ,. obogo,'o'" '"'~"'" "'''"" ~p,~d,do po"'''''' .,~,I,,_ I><,••dodoI,~"o~••.•~.,OO.,"""'"~,••• d_ho a. "",,~dod ,",,",-"01roo ~~''''" •• '~", "'" ," _F"''''"'"',

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CONTENIDO4 lubos de recogidode sangre pOfO QFT-Plus(Ni/, TB'. TB2, Mitogen)laguja21Gde0,8 x 38 mm

1 soporte poro lubosde seguridadQUrCKSHIELD1 prospecto

&. ADVERTENCIA,• Deben aplicane losprecauciones estándarporo lo manipulaciónde tubos.

• los tubos debenalmacenarse y ylilizorse

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IJ7 °'-25 oC!.

,10X~"iI':~-/' •. '~'~\t -'_

." ..•_- ~, lit

~, .l' .17-25~

QuantiFERON@.TB Gold Plus(QFJ<II>-Plus)Tubos de recogida de sangreEnvase de paciente individual

(N,O de referencia 622222) Poro uso enlre el nivel del mor

ylos810m

&. Si se utilizon fuera de eslos raogos de altitud, se podríanproducir variaciones en el volumen de lo sangre recogido.Poro uso con el kit QFT-Plus EtlSA(N,o de referencia 622120).

RECOGIDA DE SANGRE

Recoja lo songre mediante punción venoso.El vacío llego hasta , mi (la marca negra indica el rangoaceptable de 0,8 o 1,2 mi).El fluio sanguíneo puede ser lento.Mantengo el tubo en la aguja durante 2 Ó 3 segundosdespués del cese de flujo.Si el tubo no se ha /lenado hasta la marco, repita elproceso.

Consejo técnicoAguias con aletos: purgue los tubos con un tubo normal(no suministrcdoJ antes de llenar los tubos poro QFT.Plus .

RECOGIDA DE SANGRE

Inmediatamente después de llenar los lubos, ogitelos diez (10)veces aplicando únicamente lo fuerzo necesario poro que todolo superficie inlerno del tubo se cubro de sangre o fin desolubilizor el ontígeno en los paredes del mismo.

,

Los tubos se deben encontrar o uno tempero/uro& comprendido en/re /7 y 25 oC en el mamen/o dellenarlos de sangre.Si agila el tubo con demasiada fuerzo, puede"romper" el gel, lo que a/terorTa los resultados.

Coloque los etiquetas correspondientes en los tubos.

r,(-.(" 'U'-" '_' '. , •••• .1••••••••••QIAGEN

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MARISOL MA NOBlOOU1MICA..M. 483DT. TECNOLA .A.

OPCiÓN 1,Incubar en el laboratorio

OPCiÓN 2Incubar en el centrode recogida

OPCiÓN 2 (conlinuoción)

[J],

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~_'612ENVíO/INCUBACiÓN @Envíe los tubos al laboratorio a una temperatura comprendidaentre 17 y 27 oc. la sangre debe incubarse 37 oc lo antesposible (y durante las 16 horas posteriores a la extracción dela sangre).El personal del/aborataria debe va/ver a mezclar los tubosinvirtiéndolos 10 veces inmediatamente antes de incubarlos o37"C.

Conseio técnicoColoque etiquetas de "No incubado" en 105 tubos.

ENVíO/INCUBACiÓN ~La sangre debe incubarse en posición vertical lo antes posibleIy durante las 16 horas posteriores a la exlracción de la sangre).Coloque los tubos en posición vertical durante 16-24 horas paraincubarlos a 37 oc.Q/AGEN dispone de incubadores.Consejo técnicoNa se necesita humedad/C02.Si los tubos no se incuban o 37 oC justo después de laobtención, vuelva a mezclar los tubos invirtiéndolos 10 vecesinmediatamente antes de la incubación.

ENvio/INCUBACiÓN lIDEnvíe los tubos incubados al laboratorio de pruebas

(en el plazo de 3 días).

Mantengo los tubos a una temperatura comprendido entre4 y 27"C.

Consejo técnicoColoque etiquetas de "Incubado" en los tubos.

CENTRIFUGADOCentrifugue los tubos antes de realizar el muestreo.Centrifúguelos a 2.000-3.000 g durante /5 minutos.

El plasma de los tubos centrifugados se mantiene estable durante28 días si se almaceno a una temperatura comprendida entre2 y 8 oC.

Paro obtener información actualizada sobre licencias yexenciones de responsabilidad específicas del produclo,consulte el prospecto de QuantiFERON-TB Gold Plus ElISA.

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ASINa,N.9483B S.A.

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INFORMACiÓN DE CONTACTOQIAGENAsia-Pocific: lechservice-ap@qiagen.comEurope: techserviceQFT-eu@qiagen,com

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QuantiFERONQ!)-lB Gold Plus (QF~-Plus)Tubos de recogida de songre

1Jr2S.C4.c-1 ~ CE

200 tubos

622526

Nil 50 tubos

TBI 50 tubos

TB2 50 tubos

Mitogen 50 tubos

QuontiFERON Ni! Tube (tapón gris y anillo blonco)

QuontiFERON TBI Tuba Itop6n verde y onillo blonco)

QuontiFERON 1B2 Tuba ltapón amarillo y anillo blanco)

Tubos de recogido de songreN.- de referencia

QuontiFERON Milogen Tuba [top6n morado y anillo blanco)

Prospecto de losluho$ de recogido de sangre paro QFT.plus

Noto importante: el volumen de recogido de sangre de un tubo se ve o/eelado por lo altilud. Los tubos de recogido de songre

poro QFT.fllus deben utilizarse entre el nivel del mor y los 810 m. Si se utilizan tubos de recogido de sangre poro QFT.fllus Nera

de cstos m6rgenes de altitud. o si se ohtiene un volumen bojo, lo sangre se puede recoger ulilizondo los métodos olternolivos quese describen o continuación. los tubos de recogido de sangre suministrados son para uso exclusivo con el ensoyo QfT-Plus, y los

siguientes instrucciones están relacionados únicamente con el uso de los tubos de recogido de sangre paro QFT-Plus.

los anligenos se secan y adhieren o lo pared interior del tubo de recogida de sangre, por lo que es imprescindible mezclarcuidadosamente el contenido de los tubos con lo sangre. los tubos deben colocarse en el incubodor o 37 oC lo antes posible y

siempre durante los 16 horas siguientes o lo recogido de la sangre. Sigo los procedimientos que se describen o continuación

paro obtener resultados óptimos.

Recogido de saoorej

1. Coloque los etiquetas correspondientes en 105 tubos.

Asegúrese de que codo tubo (Ni!. TB1, TB2 Y Mitogenl se puedo idenlilicor por su etiqueto o por otros medios cuando se

retire el tapón.

2. Extraigo 1 mi de songre de coda pociente medion!e venopunción directamente en uno de 105 tubos de recogido de songre pora

QFT.P1us. Esta operación deberlo ser tarea exclusivo de un f1ebofomista cualificado.

Nota impotignle: los tubos se deben encontrar a uno temperatura comprendido entre 17 y 25 .C en el momento de llenarlos

de sangre.

Como los tubos de l mi absorben lo sangre relativamente despacio, mantenga el tubo odherido o lo ogujo durante2 á 3 segundos cuondo parezco que está llena del lodo. Esto le permitirá asegurarse de haber extmido el volumen correcto.

lo marco negro del lateral de los tubos indico el rango validado de 0,8 a 1,2 mI. Si lo sangre de uno de los tubos se

encuentro fuera del rango de lo marco indicodoro, deberá obtenerse una muestra de sangre nuavo. Si utilizo uno ogujo conaletas poro extraer lo sangre, utilice un tubo de purgo poro asegurarse de que el conducto estó lleno de sangre antes de

transferirlo o los tubos paro QFT-Plus. Si los tubos de recogida de sangre poro QFT.f'lus se utilizan o una altura superior o los

810 metros o si se obtiene un volumen bajo, los usuarios puede recoger lo sangre con uno jeringo y transferir inmediatamente

~

mi a codo uno de los .ti tubos paro QFT-Plus. Por motivos de seguridad, lo mejor formo de realizar este proceso es quitar la

aguja de lo jeringo tomando poro les precauciones oportunos, quitar los tapones de los .ti tubos paro QFT-Plus y añadir 1 mi

e sangre o codo uno de los tubos (hasta llegar 01 CMtro de lo morco negro situado en el lateral de lo etiqueto del tubol. ••.

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Vuelva a colocar bien los tapones y mezcle como se describe a continuación. También existe la posibilidad de extsangre en un tubo de recogida de sangre genérico con heparina de litiocomo anticoagulante y transferirla luego a ffluopara QFT.plus. Utilice5010 heparina de litio como anticoagulante sanguíneo, ya que 105 demás anticoagulantes int fie enel ensayo. Llene un tubo de recogida de sangre (volumenmínimo5 mi)y mezcle cuidadosamente invirtiendo el tveces para disolver la heporina de litio. La sangre se debe mantener a temperatura ambiente (entre 22 oC :l: 5 oC)transferirla a 105 tubos poro QFT-Pluspara su incubación, que debe iniciarse durante las 16 horas siguientes a la extrde la sangre. Si la sangre se extrae en un tubo con heparina de litio, mezcle los muestras uniformemente invirtiendo concuidado 105 lubos antes de transferirlas a los tubos para QFT-Plus.Llevea cabo lo dispensación de forma aséptica ¡garanticela aplicación de 105 procedimientos de seguridad oportunas) quitando las tapones de los 4 tubos para QFT-Plusy añadiendo1 mi de sangre a cada uno (hasra llegar al centro de la marca negra situada en el lateral de lo etiqueto del tubo). Vuelvo acolocar los tapones y mezcle tal como se describe a continuación,

3. Inmediolamente después de llenar los Iubos, agítelos diez (101v~es oplicando únicamente la fuerza necesaria pora que todalo superficie interna del tubo se cubra de songre o fin de solubilizar el antígeno en los paredes del mismo.

Noto importante: los tubos se deben encontrar a una temperatura comprendido entre 17 y 25 oC en el momento deagitarlos, Si agita el tubo con demasiado fuerzo, puede "romper" el gel. lo que alteraría los resultados.

4. Tras el etiquetado, el llenado y [a agitación, coloque los tubos en el incubador a 37.C:t 1 oC lo antes posible, y siempredurante las 16 horas siguientes a la obtención de la sangre. Antes de la incubación, mantenga los tubos o temperaturaombiente (22.C :t 5 oC).

Incubación de los tubos y obtención de plasma:

II

I

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Si lo sangre no se coloca en el incubador inmedioltlmente después de su obtención, vuelva a mezclar los tubos invirtiéndolos10 veces inmedialtlmente antes de la incubación.

Incube los Iubos ENPOSICIóNVERTICALa 37'C:t 1 oC por un periodo comprendido entre 16 y 24 horas. El incubodor narequiere CQ¡ ni humidificación.

Una vez finalizada ICIincubClción,los tubos de recogida de sangre pueden conservarse entre 4 y 27'C durante 3 díClSantesde centrifugarlos.

Tras la incubación, centrifugue los tubos durante 15 minultls a una velocidad comprendida entre 2.000 y 3.000 RCF(g).Elfapón de gelatina separa los células del plasma. Si esto no OCUlTe,vuelva a centrifugar los tubCls.

Es posible recoger el plasma sin centrifugar, aunque en tal caso, habrá que poner especial cuidado paro retirar el plasmosin alterar las células.

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2.

las muestras de plasma solo se deben exlraer con ayuda de una pipeta.

Nafa importante: después del centrifugado, no pipetee arriba y abajo ni mezcle el plasma de ninguna forma antes deextraer lo mvestra. Tenga cuidado en todo momento de no interferircon el material de la superficie del gel.

Las muestros de plasma pueden cargarse directamente desde 105 tubos de recogido de sangre centrifugados o la placaELlSApara QFT-Plus, incluso si se utilizan equipos ELlSAautomatizados. Los muestras de plasmo pueden almacenarsedurante 28 dfas a una temperatura entre 2 y 8 oC o, después de la extracción del plasmo, por debajo de -20 oC duranteperiodos más largos. Se necesito un volumen mínimode 150 fll de plasma para garantizar la idoneidad de las muestras.

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