Diagnóstico de la diarrea viral bovina para la mejora de la eficiencia reproductiva en la...

7/29/2019 Diagnstico de la diarrea viral bovina para la mejora de la eficiencia reproductiva en la Ganadera de Doble Prop

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Captulo LIII

Diagnstico de la diarrea viral bovina para la mejorade la eficiencia reproductiva en la Ganadera

de Doble Propsito

Roberto A. Palomares-Naveda, MSc

INTRODUCCIN

Para lograr una alta eficiencia reproductiva y garantizar la rentabilidad y soste-nibilidad de la ganadera de doble propsito, es necesario que las vacas alcancen unintervalo entre partos menores de 13 meses, por lo cual deben prearse antes de los 90das postparto. Entre los principales problemas reproductivos que limitan el cumpli-miento de estas metas se incluyen el anestro postparto, fallas en la concepcin con ser-vicios repetidos, abortos, entre otros.

La repeticin de servicios o subfertilidad es considerada despus del anestro

postparto la causa principal de baja eficiencia reproductiva en la ganadera de doblepropsito en el trpico (Gonzlez-Stagnaro et al., 1988). Desde el punto de vista repro-ductivo, una vaca se considera subfrtil o repetidora cuando necesita tres o mas insemi-naciones para concebir y no existe un causal clnico evidente (Morrow, 1980). En explo-taciones de doble propsito de la cuenca del Lago de Maracaibo-Venezuela, la frecuen-cia de vacas repetidoras oscil entre 17,5 y 48,0% de los problemas reproductivos exis-tentes entre los aos 1968 y 1987 (Gonzlez-Stagnaro et al., 1988). La etiologa de losproblemas de subfertilidad es diversa y multifactorial siendo consecuencia de la accincombinada y aditivade factores hormonales, nutricionales, genticos, climticos, meta-blicos, inmunolgicos y sanitarios, entre otros (Palomares et al., 2002; ver Figura 2).

Entre los factores sanitarios que afectan la eficiencia reproductiva se incluyen lasinfecciones bacterianas inespecficas del tracto reproductivo, causantes de salpingitis,metritis y endometritis, as como tambin las infecciones especificas sistmicas (Bruce-

losis, Leptospirosis, Diarrea Viral Bovina, IBR, Campilobacteriosis, Tricomoniasis,etc.) que provocan mortalidad embrionaria precoz y tarda, as como abortos en diferen-tes momentos de la gestacin, retenciones de membranas fetales, metritis, etc.

La diarrea viral bovina (DVB) es un agente infeccioso que afecta la produccinbovina en casi todos los pases del mundo (Barrer,1995; Houe, 1999).La infeccin delvirus de la DVB (VDVB) puede causar manifestaciones clnicas como, diarrea (Ful -

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ton et al., 2005), enfermedad respiratoria (Stott, 1980), inmunosupresin (Makoscheyet al., 2001), abortos, nacimiento de becerros dbiles, defectos congnitos y depen-diendo de la edad del feto puede provocar el nacimiento de animales inmunotoleran-tes persistentemente infectados (Baker, 1995) produciendo prdidas econmicas deconsiderable magnitud.

Dentro de las estrategias para prevenir y controlar la DVB se incluyen medidasde bioseguridad para evitar la introduccin de animales infectados en el rebao, cua-rentena de los animales sospechosos para controlar la diseminacin del virus, diag-nstico y eliminacin de animales persistentemente infectados y la vacunacin(Brock, 2004).

En el presente capitulo se discutirn los fundamentos y estrategias de diagnsti-co de la DVB como punto crtico para el xito del programa de mejoramiento de la efi-ciencia reproductiva en los rebaos de doble propsito. Los criterios presentados en

este capitulo estn basados en las experiencias del autor en el servicio de diagnsticode DVB de Auburn University, en Alabama, USA.

EFECTOS DEL VIRUS DE LA DVB SOBRE LA REPRODUCCINBOVINA

El VDVB es un pestivirus de la familia Flaviviridae, dentro del cual se encuen-tran dos biotipos basados en sus efectos sobre los cultivos celulares: citopatognico(CP) y no citopatognico (NCP). A su vez las cepas de VDVBse dividen en dos genoti-pos, VDVB-1 y VDVB-2, existiendo a su vez subgenotipos 1a, 1b, 2a, y 2b (Fulton etal., 2005). El virus es transmitido a travs de la inhalacin e ingestin de saliva, secre-ciones nasales, orina y heces contaminadas, que constituyen las fuentes ms frecuen-tes de infeccin, as como tambin el semen, secreciones uterinas, lquido amnitico oplacenta contaminada.

Las infecciones con VDVB son subclnicas en el 70-90% de los casos (Ames,1986), evidenciando en algunos casos solo problemas de infertilidad cuyo diagnsticocomo hemos visto es confuso por su naturaleza multifactorial. Las infecciones conVDVB provocan variaciones negativas en algunos de los parmetros reproductivosrelacionados con la fertilidad, tal como el incremento en el porcentaje de vacas contres o ms servicios (>15 %), aumento en el nmero de servicios por concepcin (>2),disminucin de la fertilidad (global y al primer servicio; 120 das), en el intervalo entre partos (>400 das) y enla duracin de las lactancias, entre otros.

Las infecciones con una cepa CP de VDVB en hembras preadas susceptiblescausan infeccindel feto y usualmente provocan abortos, los cuales tienen un impactocontundente en la rentabilidad de la finca, tomando en cuenta que no solo implica la

prdida de la cra, sino tambin la lactancia, los costos de tratamientos como del se-men, y como se mencion se compromete la futura fertilidad de la vaca.

La infeccin con una cepa NCP de VDVB antes de los 125 das de gestacin envacas seronegativas susceptibles, puede provocar la infeccin transplacentaria del fetoque origina abortos y defectos congnitos (Duffel y Hakness, 1985) o el nacimiento debecerros inmunotolerantes PI, los cuales excretan grandes cantidades de virus y dise-

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minan la enfermedad durante toda su vida (Brock, 2004). El fenmeno de inmunoto-lerancia es debido a que la infeccin ocurre antes del desarrollo del sistema inmunefetal, de manera que las defensas del feto no reconocen el virus como un agente extra-o. El sistema inmune de la vaca preada, la etapa de la gestacin y el biotipo viral sonfactores importantes que determinan el resultado de la infeccin vertical.

Se ha demostrado que adems de los efectos directos del virus de la DVB sobreel embrin y feto bovino, la infeccin con una cepa NCP del virus, altera la frecuenciade pulsos de la LH, alargando la duracin del intervalo entre la ovulacin y el pico dela progesterona, a la vez que disminuyen las concentraciones de progesterona entrelos das 3 y 11 del ciclo. Esto puede afectar la fertilidad del ganado debido a una reduc-cin de la capacidad del folculo ovulatorio de formar un cuerpo lteo competente,comprometiendo el desarrollo del embrin y el reconocimiento materno de la preez(Fray et al., 2002).

La DVB frecuentemente se presenta interactuando con otros agentes infeccio-sos como IBR (BHV1), Parainfluenza 3 (PI3), BRSV, as como tambin, Leptospira yagentes hemotrpicos los cuales pueden provocar infeccin como consecuencia delefecto de inmunosupresin del virus. Un estudio de seroprevalencia realizado en 4fincas lecheras de Croacia con alto porcentaje de problemas reproductivos (60,8%), re-vel que el 85,8 % de las vacas afectadas presentaron altos ttulos de anticuerpos paraIBR y 79,2% para DVB y una tasa de repeticin de servicios variable entre 15 y 35%(Biuk-Rudan et al., 1999). Adems, se encontraron diferencias significativas en la pre-sencia de anticuerpos combinados contra IBR y DVB en grupos de vacas con y sin de-sordenes reproductivos, siendo excesivamente alto en los primeras (80,8 vs 46,8%);ello significa que infecciones simultaneas de ambos virus pueden tener una mayor in-fluencia en la aparicin de desordenes reproductivos que infecciones simples de cadauno de los virus por separado.

IMPACTO ECONMICO DE LA DVB EN LA GANADERA BOVINA

Las prdidas econmicas provocadas por la DVB son principalmente debidas ala subfertilidad con prolongados intervalos postparto, reduccin en la produccin deleche, abortos, defectos congnitos, incremento de mortalidad neonatal, fallas en elcrecimiento, muerte de animales jvenes, infecciones agudas en animales adultos, en-tre otros. En un rebao lechero de 67 vacas los daos asociados a la DVB incluyerondos abortos, nacimiento de dos becerros dbiles, tres becerros con defectos congni-tos, dos casos de enfermedad de las mucosas y seis animales virmicos que fueron sa-crificados. El clculo de las prdidas econmicas vari entre 2.655 y 6.351 dlares; di-chas prdidas econmicas estuvieron en un rango entre 40 y 95 dlares por vaca en elrebao (Houe, 1995).

Los efectos econmicos de la DVB en 14 fincas lecheras en Alemania fueronaproximadamente entre 24 y 161 dlares por vaca en el rebao. DE manera similar, unreporte en una finca lechera de 183 vacas revel la presencia de infecciones combina-das del virus de la DVB con Leptospira, registrndose prdidas econmicas queascendieron a 75.000 dlares (410 $ por vaca) debido a 15 vacas muertas, 20 vacas eli-minadas por infertilidad, 40 abortos, 18 nacimientos de becerros dbiles y tres bece-

Desarrollo Sostenible de Ganadera Doble Propsito. 2008

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rros que murieron despus del nacimiento (Pritchard et al., 1989). Un estudio de bro-tes de DVB en 7 rebaos en Canad revel una mortalidad de 9 y 53% en animalesadultos y jvenes, una tasa de abortos de 44% y una alta incidencia de enfermedadesrespiratorias. Las prdidas econmicas en rebaos severamente afectados variaronentre 40.000 y 100.000 dlares por rebao (Carman et al., 1998), habindose estimadoque el costo de la presencia de por lo menos un animal PI en rebaos de carne vara en-tre 14,8 y 24,8 dlares por vaca por ao, lo que hace imprescindible la eliminacin deestos animales de la finca.

SITUACIN DE LA DVB EN VENEZUELA

La DVB es endmica en la mayora de los pases del mundo donde se explota laganadera bovina, reporta una seroprevalencia que vara entre 20 y 89% de las pobla-ciones bovinas muestreadas (Goyal, 2005). Un estudio de seroprevalencia de VDVB

en el estado Apure en Venezuela revel 36% de seropositividad, siendo este porcentajesimilar a los reportados en estudios previos llevados a cabo en otros pases (Obando etal., 1999). En este estudio fueron muestreados solo animales adultos no vacunadoscontra VDVB, de manera que la presencia de anticuerpos indic que el virus estuvocirculando dentro de la poblacin bovina estudiada.

La prevalencia de bovinos PI en Inglaterra, Dinamarca, Suecia y Estados Uni-dos vari entre 0,4 y 1,7 % (Obando y Rodrguez, 2005). Hasta el momento en Vene-zuela no han sido realizados estudios para determinar la prevalencia de bovinos per-sistentemente infectados. Segn la experiencia del autor en el manejo reproductivo derebaos bovinos de doble propsito, las limitaciones en el diagnstico definitivo delos agentes infecciosos que afectan la fertilidad, en especial IBR y DVB han represen-tado por aos un obstculo en el xito de los programas reproductivo y sanitario demuchas fincas. Las medidas de control frecuentemente establecidas para dichos pro-

blemas se han basado errneamente en aplicacin a ciegas de tratamientos y vacuna-ciones, sin existir un conocimiento real de la prevalencia de dichas enfermedades enel rebao. Por esta razn, se hace necesario el desarrollo de amplios programas dediagnstico para tener una idea clara de la prevalencia de la DVB en las diferentes zo-nas ganaderas del pas.

PROGRAMA DE PREVENCIN Y CONTROL DE LA DVB

Para prevenir y controlar la DVB es necesario analizar los riesgos e identificarlos puntos crticos de control para corregirlos mediante la toma de decisiones prcti-cas que conlleven al cumplimiento de las metas reproductivas y productivas. Entre lasprincipales estrategias de prevencin y control de la DVBse encuentran la cuarentenade los animales que ingresen a la finca, establecimiento de medidas de bioseguridad

para evitar la introduccin y diseminacin del virus en el rebao, vacunaciones siste-mticas y un plan integral de diagnstico que incluya la identificacin y eliminacinde los animales PI (Brock, 2004).

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DIAGNSTICO DE LA DVB COMO HERRAMIENTA CLAVE EN LAMEJORA REPRODUCTIVA

El objetivo de diagnosticar la DVB es evidenciar la presencia del virus en el re-bao, lo cual puede conllevar a la adopcin de alguna medida de prevencin o intensi-ficar las medidas de bioseguridad dentro del programa sanitario. Por otra parte, laidentificacin de animales PI conlleva a su inmediata eliminacin con el objetivo dedisminuir la presin de infeccin en el rebao (Moenning y Greiser-wilke, 2003). Se-ria muy ambicioso hablar de un plan nacional masivo de erradicacin de la DVB enuna industria ganadera en la cual no ha sido posible la erradicacin de enfermedadeszoonticas como la Brucelosis que tiene un fuerte impacto en la salud pblica. De ma-nera que, el objetivo inicial de minimizar la presin de infeccin es una meta acorde alas condiciones de la ganadera DP Venezolana.

Con la disminucin de la presin de infeccin de DVB en la finca, se estaran fa-

voreciendo condiciones ptimas para una mejor respuesta inmunolgica frente a lasvacunas, promoviendo una mayor eficiencia de las mismas. Aunque diversas vacunascomerciales contra VDVB disminuyen significativamente el riesgo de infecciones fe-tales en hembras preadas expuestas a animales PI, la proteccin no es 100% efectiva.Todo ello enfatiza la necesidad de combinar la vacunacin con la identificacin y eli-minacin de animales PI, as como tambin la adopcin de medidas de bioseguridadcomo una parte de un programa integral de control (Grooms et al., 2007).

Es importante enfatizar que el programa de diagnstico debe ser precedido porla identificacin de los factores de riesgo de infeccin de cada finca en particular, loscuales podran estar favoreciendo el ingreso del agente infeccioso. Posteriormente, serecomienda el establecimiento o correccin de las medidas de bioseguridad en la uni-dad de produccin; ya que sera ilgico instaurar un programa de diagnstico en fin-cas en las cuales el virus tiene un acceso libre; escenario que se traducira en una pr-dida de tiempo y dinero.

Debido a la gran variabilidad en la sintomatologa presentada en animales in-fectados con VDVB, el diagnstico definitivo debe estar necesariamente fundamenta-do en pruebas de laboratorio. Hay que tomar en cuenta que la inversin para iniciarun protocolo de diagnstico en una finca es significativa; sin embargo, si la historia dela finca hace sospechar a presencia de animales PI en el rebao, este protocolo estaraampliamente justificado por el incremento en el retorno econmico. Un requerimien-to esencial para el xito de este programa es la disponibilidad de mtodos de diagns-tico rpido, econmico y simple Cada mtodo tiene su ventaja, desventaja y aplicabili-dad de acuerdo a las condiciones de cada sistema. Los factores que puede afectar la efi-ciencia de los protocolos y mtodos de diagnstico incluyen: diversidad antignicay/o gentica del virus, variacin de la carga antignica, interferencia de los anticuer-

pos maternales obtenidos a travs del calostro, alta prevalencia del virus, alta densi-dad de ganado y presencia de reservorios, entre otros factores.

Estrategias para el Diagnstico de DVB

Por aos ha existido la costumbre de los Mdicos Veterinarios de tratar de reali-zar el diagnstico de la DVB despus de una crisis abortiva o despus de un reporte de


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una baja fertilidad del rebao, lo cual definitivamente es una medida atrasada cuandoya se han presentado grandes prdidas econmicas. Lo ideal seria establecer el diag-nstico antes de comenzar un programa de vacunaciones, de manera que el resultadoayude en la toma de decisiones, en cuanto al tipo de vacuna a utilizar (virus inactivadoo vivo modificado), as como tambin en cuanto a los ajustes en las medidas de biose-guridad en la finca.

En algunos pases de Europa se ha utilizado como primer paso la aplicacin depruebas diagnsticas a una muestra del tanque de la leche a manera de detectar el vi-rus o anticuerpos contra VDVB (screening). Sin embargo, independientemente delprotocolo que se utilice la identificacin y la eliminacin de animales PI es de crucialimportancia en el control de la DVB (Schelp y Greiser-wilke, 2003).

A continuacin se presenta un resumen de los diferentes mtodos para el diag-nstico de la DVB, haciendo nfasis en su aplicabilidad as como tambin en las ven-

tajas y limitaciones de su establecimiento en la ganadera de doble propsito.

1. Pruebas para la deteccin de antigeno del VDVB

Estas tcnicas son rpidas y tan sensibles como los otros mtodos. Las pruebasms utilizadas para la deteccin directa de antgenos de VDVB incluyen ELISA e In-munohistoqumica (IHQ). La prueba de ELISA de captura de antgeno es la tcnicams comn y prctica para el diagnstico de animales positivos a VDVB. Esta pruebapuede ser utilizada para detectar virus en sangre, secreciones nasales y biopsias de piel(previamente colocadas en una solucin buffer por 1 hora). La tcnica usa anticuerposmonoclonales primarios dirigidos contra una protena estructural (E ) o no estructu-ral presente en el virus (antigeno). Luego es aplicado un anticuerpo secundario (espe-cfico contra el anticuerpo primario), el cual est ligado a una enzima capaz de degra-dar un substrato generador de un color cuando el antigeno de VDVB est presente.

El resultado de esta prueba se interpreta basado en la aparicin de un color enlas muestras positivas. Sin embargo, para lograr una mayor especificidad, minimizan-do la posibilidad de falsos positivos, es necesario utilizar un lector de ELISA median-te espectrofotometra. La desventaja de realizar esta prueba utilizando muestras desuero en becerros de menores de 6 meses es la posibilidad de que los anticuerpos ma-ternales puedan inhibir o neutralizar el virus, de manera que la prueba resulte en fal-sos negativos, siendo posiblemente animales PI. El suero es una muestra ptima parala deteccin de animales PI por ELISA de captura de antigeno en animales adultos (sise toman muestras pareadas).En animales jvenes, es indispensable la toma de unabiopsia de piel de la oreja, la cual debe ser colocada en una solucin buffer por 1 hora ysometer el fluido a la tcnica de ELISA.

Esta prueba no es muy recomendada para el diagnstico de infecciones agudas

utilizando muestras de suero ya que el virus est presente en la sangre de los animalescon infeccin aguda solo por un corto tiempo. Sin embargo, para descartar una infec-cin aguda se recomienda tomar muestras pareadas de suero con 21 a 30 das de dife-rencia y someterlas a la prueba de ELISA de captura de antgeno. Si la primera mues-tra resulta positiva y la segunda negativa se podra concluir que se trata de una infec-cin aguda. La ausencia de antgenos en la segunda muestra indicara la eliminacin

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del virus por parte del sistema inmunolgico tpico de la resolucin de una infeccinaguda. Si la segunda muestra resulta tambin positiva el animal es considerado PI.

La prueba de Inmunohistoqumica (IHQ) es otra tcnica para la deteccin deantgenos de VDVB la cual tiene una alta sensibilidad y especificidad. Esta pruebapuede ser realizada en tejidos congelados o fijados en formalina como en los tejidos fe-tales (bazo, hgado, riones, pulmones, etc.) despus de un aborto, permitiendo laidentificacin del virus en conjunto con los hallazgos histopatolgicos (Grooms,2005).

En animales vivos se recomienda la toma de una biopsia de piel de la oreja paradetectar el VDVB y diagnosticar la presencia de animales PI. Las muestras son fijadasen formalina, cortadas y sometidas a una tincin con un sistema de anticuerpos pri-marios (monoclonales) y secundarios (ligados a una enzima) similar a la prueba deELISA. Finalmente, los cortes histolgicos son observados bajo el microscopio, evi-

denciando la presencia del antigeno de VDVB a travs de un color rojizo en reas ex-tensas del tejido cutneo (Figura 1).

Esta tcnica puede ser llevada a cabo cuando se sospecha de infeccin aguda encasos de enfermedad respiratoria o puede aplicarse en animales muertos y en tejidosfetales en casos de abortos cuando se sospeche de DVB. Otros autores sugieren queesta prueba no es muy adecuada para la deteccin de infecciones agudas, siendo pti-ma solo para el diagnstico de animales PI (Ridpath et al., 2002). La cantidad y distri-bucin de antgenos en muestras de piel de animales PI es mucho mayor y ms exten-sa que en animales con infeccin aguda, siendo la IHQ la prueba de eleccin paraidentificar los animales PI.

La prueba tiene la ventaja de permitir cierto tiempo de preservacin cuando lasmuestras de campo no pueden ser sometidas inmediatamente al laboratorio de diag-nstico. Adems la IHQ de biopsias de piel tiene la ventaja de que puede ser llevada acabo en animales recin nacidos y becerros menores de 6 meses sin riesgo de una inhi-bicin por parte de los anticuerpos maternales derivados del calostro. En caso de re-sultar positivo un animal recin nacido deber ser eliminado del rebao antes de in-


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corporarlo al sistema de produccin con el resto de los animales, ubicndolo tempo-ralmente en un lugar aislado hasta el momento de su eliminacin.

Esta tcnica no es costosa y no tiene mayores complicaciones cuando se cuentacon los equipos bsicos de un laboratorio de histopatologa. La adquisicin de los an-ticuerpos monoclonales contra VDVB es un punto crtico, el cual puede ser superadodebido a la disponibilidad comercial de los mismos. El costo de esta prueba en los Es-tados Unidos es alrededor de 4 dlares por muestra; sin embargo, una vez establecidoel programa de diagnstico las ganancias por la mejora de la eficiencia reproductivadespus de identificar y eliminar los animales portadores y diseminadores del virussuperaran los costos de inversin.

2. Pruebas Serolgicas

Estas tcnicas se basan en la deteccin de anticuerpos en el suero contra VDVB

como medida indirecta de la infeccin viral. Para la determinacin de anticuerpos sepueden utilizar bsicamente dos mtodos, ELISA y neutralizacin viral. Los anti-cuerpos neutralizantes del virus usualmente aparecen 3-4 semanas despus de la in-feccin y persisten por aos. De igual manera, los ttulos inducidos por las vacunastambin pueden persistir por un largo tiempo (Oguzoglu et al., 2003).

Laspruebas serolgicas pueden ser utilizadas cuando se sospeche de infeccionesagudas, siendo recomendable tomar muestras pareadas de sueros con 21-30 das de di-ferencia, para detectar las fases aguda y de convalecencia de la infeccin. La serocon-versin de animales centinelas introducidos en el ganado, puede ser utilizada comouna evidencia de la posible presencia de animales PI en el rebao (Goyal, 2005).

Las pruebas serolgicas tambin pueden utilizarse como chequeo preliminar oscreening de rebaos no vacunados para determinar la prevalencia de exposicin alVDVB. Para el caso de animales jvenes es recomendable muestrear entre 6 y 12 me-ses de edad para determinar si el VDVB ha estado recien o actualmente circulando enel rebao. El muestreo de animales menores de 6 meses tiene la desventaja de que encaso de existir aun anticuerpos maternales contra VDVB, existe una alta posibilidadde obtener un resultado falso positivo. De manera que una desventaja de estas pruebases no poder diferenciar anticuerpos vacunales, anticuerpos por infeccin y anticuer-pos maternales, por lo que en un rebao vacunado no tienen una gran significancia.

Dentro de las pruebas serolgicas, la neutralizacin viral es el mtodo principalpara determinar ttulos de anticuerpos a nivel mundial (Rossi y Kiesel, 1971). En estaprueba se evala la habilidad de los anticuerpos en el suero problema para neutralizaruna cepa conocida de DVB. Diluciones seriadas de muestras de suero se incuban conuna cantidad constante del virus por una hora, seguido de la incorporacin de clulasy se someten a incubacin por 3-5 das a 37 C. La dilucin ms alta de suero que inhi-

be la infeccin viral en el 50% de las clulas inoculadas es considerada el ttulo de anti-cuerpo del suero.

Una desventaja de esta prueba es la falta de estandarizacin entre laboratorios,lo que hace imposible las comparaciones entre los resultados de los ttulos de anti-cuerpos de diferentes laboratorios. Esto es principalmente debido a diferencias enlas diluciones, cepas de virus utilizadas, lneas celulares en los cultivos y condicio-

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nes de cultivo, entre otros. La prueba de ELISA de anticuerpos ha sido la prueba msutilizada por los Mdicos Veterinarios para tratar de detectar indirectamente infec-ciones virales en las fincas de Venezuela. Sin embargo, la exposicin de los rebaosvenezolanos a VDVB (naturalmente o a travs de las vacunas) ha hecho muy difcil suinterpretacin.

3. Pruebas de Aislamiento Viral

Histricamente este ha sido el mtodo ms comn y vlido para identificar demanera directa el ganado infectado con VDVB en especial cuando se sospecha de in-fecciones agudas. Para esta prueba pueden utilizarse muestras de suero, capa blanca(leucocitos), hisopados nasales y muestras de tejidos (timo, hgado, bazo, riones,etc.) de animales muertos o fetos abortados, semen y heces (Goyal, 2005). La pruebaconsiste en someter las muestras de suero o tejido a un cultivo celular para lograr la re-

plicacin viral, seguido de su identificacin a travs de la visualizacin de los efectoscitopticos (en caso de cepas CP) o a travs de una tincin inmunoenzimtica similaral utilizado para las pruebas de ELISA (para cepas NCP) (Figura 2). Por otra parte, enanimales persistentemente infectados con DVB el virus tambin puede ser aislado delsuero, capa blanca y la mayora de los tejidos. El aislamiento viral tiene como desven-tajas el tiempo necesario para obtener los resultados (aproximadamente 5 das), uso demateriales costosos y la necesidad de tcnicos capacitados en biologa celular, las cua-les limitan su aplicacin como prueba rutinaria de diagnstico.

4. Pruebas de Deteccin decidos Nucleicos

Consisten en la identifica-cin del genoma viral (RNA). La

reaccin en cadena de la polimera-sa (PCR) es una prueba que tieneuna alta sensibilidad y especifici-dad para el diagnstico de anima-les con infecciones agudas y per-sistentemente infectados conVDVB. Para esta tcnica se requie-ren materiales y equipos costosos,alto nivel de tecnificacin, tenien-do una limitada aplicacin para eldiagnstico de rutina. Adems sedebe tener un cuidado extremo de-bido a que el RNA puede ser de-

gradado fcilmente por enzimaspresentes en la mayora de los ambientes. La tcnica de PCR ha sido recientementeutilizada en protocolos de screening usando muestras mezcladas de mltiples anima-les (ej. muestra de leche del tanque de enfriamiento) para detectar la presencia deVDVB en el rebao, pudiendo reducir el costo por animal (Goyal, 2005).


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PROTOCOLOS DE DIAGNSTICO DE DVBA continuacin se presentan una serie de recomendaciones sobre como proce-

der en los diferentes escenarios para diagnosticar la DVB. Como se mencion, antesde comenzar con un plan sistemtico de diagnostico es necesario evaluar y ajustar lasmedidas de bioseguridad en el rebao para que el diagnstico pueda surtir los efectosdeseados.

1. Evidencia de VDVB en el rebao (Screening)

Cuando se quiere evidenciar si el VDVB esta circulando en el rebao se reco-mienda tomar muestras de sangre de un nmero representativo de terneros entre 7 y12 meses de edad no vacunados contra BVDV (aproximadamente 10-15 % de la pobla-cin), y realizar la determinacin de anticuerpos contra VDVB a travs de una pruebaprctica y rpida como ELISA. Desde un punto de vista global, los resultados de sero-positividad indican que el VDVB produjo infecciones naturales en estos animales, su-giriendo que el virus ha circulado o esta circulando en el rebao. Desde un punto devista especfico se puede decir que estos animales seropositivos sufrieron la infeccinpero debido a la respuesta inmunolgica desarrollada son libres de VDVB con un 99%de seguridad. Por otra parte, estos resultados de seropositividad podran hacer sospe-char sobre la presencia de una fuente de infeccin de VDVB en el rebao, la cual po-dra estar representada por animales PI.

Los animales que resultan seronegativos podran crear falsas expectativas en losVeterinarios de campo, al catalogarlos errneamente como libres de DVB. Es posibleque algunos de estos animales seronegativos sean PI inmunotolerantes, pudiendo serla fuente de diseminacin del virus en la finca. Sin embargo, aunque los animales PIson usualmente seronegativos a VDVB, se ha reportado que algunas cepas heterlogas

naturales o de vacunas podran estimular cierta respuesta inmune en estos animales(Brock et al., 1998).

Si en la finca no se ha aplicado ningn tipo de vacuna contra VDVB, el muestreopodra estar basado en el 10%del total de los animales dentro del rebao, cuyo resulta-do dara una idea mucho ms general de la seroprevalencia en la finca y una mejor in-ferencia sobre la difusin del virus en la unidad de produccin. Adems, las muestrasde leche de un pool comn (tanque de enfriamiento) pueden ser sometidas a las prue-bas para deteccin de antgenos y/o anticuerpos contra BVDV y conocer si el virusesta circulando en la finca.

2. Diagnstico de infecciones agudas de BVDV

En caso de observarse un alto porcentaje de animales con enfermedad respirato-ria o abortos en el rebao, es necesario descartar la presencia de una infecciona aguda

de DVB como causa del problema. Durante las infecciones agudas, el virus es solo de-tectado por un periodo de 1 a 4 das entre los das 3 y 12 post-infeccin, debido a quedespus de producirse la respuesta inmune el virus es eliminado lo cual hace difcil sudeteccin. Sin embargo, el aislamiento viral de la capa blanca puede realizarse por untiempo ms prolongado, siendo esta la muestra de eleccin (sangre completa) en casosde infecciones agudas. Las pruebas de deteccin de antigeno (ELISA de captura) son

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de utilidad cuando se realizan en muestras pareadas en cuyo caso la primera muestraresulta positiva mientras que la segunda es negativa, debido a la eliminacin del viruspor parte del sistema inmune.

Las pruebas serolgicas pueden ser utilizadas para detectar la concentracin deanticuerpos contra DVB. Debido al incremento relativamente lento en los ttulos deanticuerpos despus de una infeccin aguda con DVB, tambin se recomienda colec-tar muestras pareadas de suero, una durante los primeros tres das de haberse presen-tado la enfermedad (respiratoria o abortos) y otra tres o cuatro semanas despus.Como se mencion, la presencia de anticuerpos en la segunda muestra de un animalque result negativo en la primera o un incremento de 4 veces en la concentracin deanticuerpos en la segunda muestra es indicativo de una infeccin aguda. En caso debrotes de DVB se recomienda tambin tomar muestras del rebao no afectado comocontroles (becerros sin enfermedad respiratoria y vacas con fertilidad y parto normal).

Otras pruebas como la PCR podran ser utilizadas cuando se sospecha de infeccionesagudas de VDVB en el rebao.

3. Diagnstico de animales PI

Los animales PI son considerados fbricas de virus para sus compaeros derebao. Ellos eliminan grandes cantidades de virus durante su vida por lo cual debenser identificados y eliminados del rebao tan pronto como sea posible (Goya, 2005).La prueba de IHQ en muestras de piel de la oreja de los becerros es considerada laprueba ms efectiva para detectar los animales PI. Cuando la prueba de IHQ es utili-zada para evaluar los becerros, el resultado positivo sugiere la eliminacin del animaldel rebao y el inmediato muestreo de su madre para determinar si es un animal PI. Siel resultado es negativo, indica que su madre no es un animal PI; de manera que laaplicacin de esta prueba en los becerros indirectamente indica el estatus de sus ma-

dres, por lo quese recomienda la aplicacin inmediata en los animales recin nacidos.Otras pruebas como el aislamiento viral de muestras de sangre (capa blanca) o

suero pueden utilizarse para la deteccin de animales PI (Goya, 2005). Adicionalmen-te, las hembras sin cra y los toros tambin deben ser sometidos a las pruebas de IHQ oELISA de captura para determinar si son animales PI. Cuando se compran animales(novillas y toretes para reproduccin), se recomienda que estos sean aislados del restodel rebao durante 30-60 das y probados mediante la tcnica de IHQ para saber siellos estn persistentemente infectados con VDVB.

CONCLUSIONES

El diagnstico de la DVBy otros agentes infecciosos que afectan la eficiencia re-productiva del rebao, as como tambin el establecimiento de un plan de vacunacin

y medidas de bioseguridad adaptadas a cada zona, representan un punto crtico en elxito del programa de control reproductivo de la finca. El diagnstico presuntivo de laDVB puede basarse en los signos clnicos, la historia de la finca y el examen postmor-ten. Sin embargo, para un diagnstico definitivo se deben llevar a cabo pruebas de la-boratorio rpidas y vlidas. Las pruebas de IHQ y ELISA para la determinacin deantgeno y anticuerpos son las tcnicas de eleccin para el diagnstico de la DVB bajo


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las condiciones actuales de la ganadera de doble propsito. Independientemente delprograma de control que se utilice, la identificacin y eliminacin de animales PI esde crucial importancia para mantener una baja prevalencia de la DVBen la finca. Paramantener los resultados logrados, es necesario dar continuidad al programa de pre-vencin y control establecido. Si el proceso se interrumpe es posible que se observenuevamente in incremento de los problemas de fertilidad afectando la productividady rentabilidad de la finca.

LITERATURA CITADA

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Diagnóstico de la diarrea viral bovina para la mejora de la eficiencia reproductiva en la...

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