Universidad de La Salle Universidad de La Salle

Ciencia Unisalle Ciencia Unisalle

Medicina Veterinaria Facultad de Ciencias Agropecuarias

2013

Determinación de anticuerpos anti-diarrea viral bovina DVB Determinación de anticuerpos anti-diarrea viral bovina DVB

mediante Elisa competitivo en una población cautiva de venados mediante Elisa competitivo en una población cautiva de venados

cola blanca Odocoileus virginianus en Cundinamarca, Colombia cola blanca Odocoileus virginianus en Cundinamarca, Colombia

Pedro Enrique Navas Suárez Universidad de La Salle, Bogotá

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Citación recomendada Citación recomendada Navas Suárez, P. E. (2013). Determinación de anticuerpos anti-diarrea viral bovina DVB mediante Elisa competitivo en una población cautiva de venados cola blanca Odocoileus virginianus en Cundinamarca, Colombia. Retrieved from https://ciencia.lasalle.edu.co/medicina_veterinaria/18

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UNIVERSIDAD DE LA SALLE

Facultad de Ciencias Agropecuarias

Programa de Medicina Veterinaria

DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS ANTI-DIARREA VIRAL BOVINA (DVB)

MEDIANTE ELISA COMPETITIVO EN UNA POBLACIÓN CAUTIVA DE

VENADOS COLA BLANCA (Odocoileus virginianus) EN CUNDINAMARCA,

COLOMBIA

Trabajo de Grado

Pedro Enrique Navas Suárez

Bogotá, Colombia

2013

UNIVERSIDAD DE LA SALLE

Facultad de Ciencias Agropecuarias

Programa de Medicina Veterinaria

DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS ANTI-DIARREA VIRAL BOVINA VDVB

MEDIANTE ELISA COMPETITIVO EN UNA POBLACIÓN CAUTIVA DE

VENADOS COLA BLANCA (Odocoileus virginianus) EN CUNDINAMARCA,

COLOMBIA

Trabajo de Grado

Pedro Enrique Navas Suárez

Código: 14071103

Director

Diego Soler-Tovar

Co-director

Leonardo Arias Bernal

Bogotá, Colombia

2013

APROBACIÓN

DIRECTOR

_____________________________

Diego Soler-Tovar

CODIRECTOR

_____________________________

Leonardo Arias Bernal

JURADO

_____________________________

Victoria Pereira Bengoa

JURADO

_____________________________

Javier Andrés Jaimes Olaya

DIRECTIVOS

RECTOR Hno. Carlos Gabriel Gómez Restrepo

VICERRECTOR ACADÉMICO Hno. Carlos Carvajal

VICERRECTOR DE PROMOCIÓN Hno. Frank Leonardo Ramos Baquero

Y DESARROLLO HUMANO

VICERRECTOR ADMINISTRATIVO Dr. Eduardo Ángel Reyes

VICERRECTOR DE INVESTIGACIÓN Dr. Luis Fernando Ramírez Hernández

Y TRANSFERENCIA

DECANO DE LA FACULTAD DE Dra. Claudia Aixa Mutis

CIENCIAS AGROPECUARIAS

DIRECTOR PROGRAMA Dr. Juan Fernando Vela

MEDICINA VETERINARIA

COMPROMISO

Los trabajos de grado no deben contener ideas que sean contrarias a la doctrina

católica en asuntos de dogma y moral.

Ni la Universidad, ni el director y codirector, ni los jurados calificadores son

responsables de las ideas expuestas por los graduandos.

AGRADECIMIENTOS

De antemano quiero agradecer a mi padre porque sé que desde el lugar donde se

encuentra me da su apoyo y es una fuente interminable de fortaleza, a mi mamá

Alicia Suárez Contreras por cumplir el sueño que tuve de niño de ser médico

veterinario y trabajar con animales silvestres, a mi hermano por acompañarme y ser

un apoyo incondicional en mi vida. Le agradezco a Catalina Ospina por tantas cosas

buenas que ha traído a mi vida este tiempo que llevamos juntos.

Expreso mi gratificación a la Fundación Nuevos Horizontes por proporcionar las

instalaciones y medios económicos para la realización de este trabajo.

A los doctores Diego Soler-Tovar y Leonardo Arias-Bernal por ser dar su apoyo

profesional y estar disponibles en cada momento de esta investigación, así como

por la paciencia que tuvieron.

A los cuidadores, estudiantes y demás personas que hicieron posible esta

investigación y me ayudaron todo este tiempo.

Al personal del Laboratorio Zoolab Ltda., por apoyar este estudio desde el área de

diagnóstico.

Finalmente, a todos mis amigos y amigas durante estos 6 años de formación, ya

que sin el apoyo de cada uno de ello no sería el profesional que soy.

TABLA DE CONTENIDO

Pág.

RESUMEN 1

ABSTRACT 2

INTRODUCCIÓN 3

1. OBJETIVOS 6

Objetivo general 6

Objetivos específicos 6

2. MARCO TEÓRICO 7

3. MATERIALES Y MÉTODOS 21

3.1 LOCALIZACIÓN 21

3.2 POBLACIÓN Y MUESTRA 22

3.3 VARIABLES 22

3.4 ANÁLISIS ESTADÍSTICO 22

3.5 MÉTODOS Y PROCEDIMIENTOS 23

4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 34

5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES 67

6. BIBLIOGRAFÍA 69

ANEXOS 83

LISTA DE TABLAS

Pág.

Tabla 1. Variables del estudio 22

Tabla 2. Media de signos de inmovilización y recuperación de la población 35

Tabla 3. Anticuerpos anti-DVB en O. virginianus, Cundinamarca, Colombia 38

Tabla 4. Hallazgos reportados en sistema respiratorio 47

Tabla 5. Hallazgos reportados a la inspección externa 48

Tabla 6. Hallazgos en el sistema digestivo 49

Tabla 7. Hallazgos en el sistema cardiovascular 50

Tabla 8. Hallazgos del sistema endocrino 51

Tabla 9. Hallazgos de sistema urogenital 52

Tabla 10. Hallazgos a nivel músculo esquelético 53

Tabla 11. Hallazgos reportados en el sistema linfático 54

Tabla 12. Relación dosificación de ketamina y xilacina para la inmovilización de

cérvidos 56

LISTA DE FIGURAS

Pág.

Figura 1. Genoma de los pestivirus 8

Figura 2. Transmisión de DVB 10

Figura 3. Inmunidad innata vs adaptativa 14

Figura 4. ELISA directo vs indirecto 17

Figura 5. Localización Zoológico Jaime Duque, acercamiento de encierro de

venados 21

Figura 6. Acercamientos iniciales 24

Figura 7. Acercamientos con contacto directo del entrenador 25

Figura 8. Métodos de aplicación farmacológica a distancia 27

Figura 9. Venopunción mediante jeringa vs Venoject ® 29

Figura 10. Kit SERELISA® 30

Figura 11. Muestras en pocillos y posterior incubación 30

Figura 12. Lavado de pocillos 31

Figura 13. Segundo lavado y conjugado 31

Figura 14. Último lavado y lectura del ensayo 32

Figura 15. Protocolo de manejo clínico de venado coliblanco en cautiverio 34

Figura 16. Promedio del monitoreo de frecuencia cardiaca 36

Figura 17. Promedio del monitoreo de frecuencia respiratoria 36

Figura 18. Promedio del monitoreo de temperatura 36

LISTA DE FIGURAS (Cont.)

Pág.

Figura 19. Mortalidad anual de O. virginianus entre 1991-2013 40

Figura 20. Mortalidad por mes de O. virginianus entre 1991-2013 40

Figura 21. Descripción de los diagnósticos clínicos 41

Figura 22. Representación de los diagnósticos de necropsia 42

Figura 23. Caracterización de los diagnósticos de histopatología 43

Figura 24. Correlación entre los tres diagnósticos 45

Figura 25. Evaluación por sistemas a la necropsia 46

Figura 26. Alteraciones más importantes del sistema respiratorio 47

Figura 27. Dilatación abdominal severa en un macho infante 50

Figura 28. Hepatomegalia, O. virginianus, macho, infante 51

Figura 29. Edema cerebral discreto 53

Figura 30. Identificación de las causas de muerte para la población 55

Figura 31. Posicionamientos post-aplicación IM de XK 58

Figura 32. Principales causas de mortalidad en neonato 64

LISTA DE ANEXOS

Pág.

Anexo 1. Protocolo de manejo de venado coliblanco (O. virginianus) en colecciones

zoológicas 83

Anexo 2. Descripción de los animales capturados 93

Anexo 3. Formato examen clínico 94

Anexo 4. Casos indeterminados al diagnóstico clínico y de necropsia 95

Anexo 5. Casos con muerte súbita a la clínica, diagnosticados con la necropsia

96

Anexo 6. Valores hematológicos para O. virginianus en cautiverio en la sabana

bogotana 97

Anexo 7. Valores de química sanguínea para O. virginianus en cautiverio en la

sabana bogotana 98

Anexo 8. Resultados análisis hematológico para O. virginianus en cautiverio en la

sabana bogotana 99

Anexo 9. Relación parámetros hematológicos hemograma 100

Anexo 10. Relación parámetros hematológicos química sanguínea 101

Anexo 11. Examen clínico individuos 102

1

RESUMEN

Colombia posee tres géneros de cérvidos: Mazama sp., Odocoileus sp. y Pudu sp.;

el venado coliblanco (Odocoileus virginianus) se encuentra distribuido en las

regiones Andina y Orinoquia; la lista roja de la Unión Internacional para la

Conservación Natural (UICN) lo categoriza como una especie de preocupación

menor (LC); dentro de su área de distribución, se encuentran regiones de

explotaciones bovinas extensivas, las cuales pueden favorecer el contacto directo

entre venados y bovinos, generando un riesgo para la interfaz animal doméstico-

animal silvestre, y de esta manera iniciar ciclos de transmisión de patógenos,

dentro de los cuales el virus de la Diarrea Viral Bovina (VDVB) puede encontrarse.

Este estudio determinó niveles de anticuerpos para VDVB en una población cautiva

de Odocoileus virginianus en Cundinamarca, Colombia. Para ello, se caracterizaron

los niveles de anticuerpos anti-VDVB de 20 individuos entre enero y octubre de

2013 mediante el ensayo inmunoenzimático competitivo (ELISA). Fue diseñado un

protocolo de manejo clínico para facilitar la captura de los individuos; la

inmovilización química se realizó mediante Ketamina (7.2 ± 3.4 mg/kg) + Xilacina

(0.81 ± 0.2 mg/kg) usando Yohimbina (0.3 mg/kg) como antagonista. Se empleó un

programa de condicionamiento operante buscando disminuir el estrés de la

población. Durante el periodo se capturaron 17 animales (7♀/10♂), los restantes 3

individuos correspondieron a neonatos muertos encontrados en el encierro (con un

discreto estado de autolisis). Se determinó una seroprevalencia de 5% (1/20).

Posteriormente se capturó por segunda vez el individuo positivo dando resultado

negativo. Para determinar la mortalidad histórica relacionada se tomó la casuística

entre 1991 y 2013 (136 casos), donde el sistema respiratorio (27.21%) ocupó el

primer lugar, seguido de alteraciones músculo esqueléticas (16.91%) y digestivas

(11.76%) principalmente. Los hallazgos encontrados en estos sistemas fueron

similares a los reportados por este agente en la literatura.

Palabras clave: interfaz domésticos-silvestres, Odocoileus virginianus, VDVB,

ELISA, anticuerpos.

2

ABSTRACT

Colombia has three genera of cervids: Mazama sp., Odocoileus sp. and Pudu sp.;

the white-tailed deer (Odocoileus virginianus) is distributed in the Andean and

Orinoco regions; the red list of the International Union for Conservation of Nature

(IUCN) categorizes it as a specie of Least Concern (LC); inside its range are regions

of extensive cattle farms in which direct contact is promoted between these

populations, therefore, the interface domestic-wild animals is possible and generate

the development of transmission cycles for several infectious agents, among which

the Bovine Viral Diarrhea Virus can be found. This study determined antibody levels

to BVD in a captive population of O. virginianus in Cundinamarca, Colombia. For this

purpose, the BVD-antibody levels were characterized of 20 animals from January to

October 2013 using competitive enzyme-linked immunosorbent assay (C-ELISA).

Was designed a clinical management protocol to facilitate the capture of the animals,

regarding chemical immobilization was performed by Ketamine (7.2 ± 3.4 mg/kg) +

Xylazine (0.81 ± 0.2 mg/kg) using Yohimbine (0.3 mg / kg) as antagonist. Operant

conditioning program was used to reduce the population stress. During the period 17

animals were captured, the remaining 3 animals corresponded to dead fawns found

in the exhibition (with a discrete state of autolysis). Seroprevalence of 5% (1/20) was

determined, and subsequently it was captured for second time the positive deer

giving a negative result. To determine the historical mortality related, were taken

cases since 1991 to 2013 (136 cases), where the respiratory system (27.21%)

ranked first, followed by musculoskeletal abnormalities (16.91%) and digestive

disorders (11.76%). The findings in these systems (respiratory and digestive) were

similar to those reported by this agent in the literature.

Key words: Interface livestock-wild animals, Odocoileus virginianus, BVDV, ELISA,

antibodies.

3

INTRODUCCIÓN

Los incrementos de la demanda de alimento han generado un crecimiento

sustancial en las producciones agropecuarias, las cuales se ven reflejadas con

efectos como el incremento de la frontera agrícola predisponiendo interacciones

entre poblaciones de animales de domésticos con poblaciones silvestres; estos

sucesos han incrementado los desarrollos tecnológicos, con respecto a las ciencias

veterinarias las áreas de mayor desarrollo son: diagnóstico, clínica, patología,

farmacología, terapéutica y biología molecular entre otras. El enfoque patógeno

específico brinda herramientas para su manejo en poblaciones, es así como,

estudios que involucren la interfaz humano-animal y animales silvestres-domésticos

son de importancia para descifrar el impacto del patógeno en los seres vivos

independiente de su categoría; factores como: prácticas de manejo, eventos

fisiológicos, características propias del agente y sucesos ambientales predisponen

eventos de morbilidad y mortalidad en poblaciones animales, enfocando estas

problemáticas a una visión metapoblacional se pueden establecer los roles que

cumplen las especies silvestres en los ciclos de transmisión de patógenos, área que

actualmente no se encuentra desarrollada en su totalidad.

Una de las enfermedades más conocidas por la ciencia es la brucelosis, en la cual,

el rol cumplido por el ciervo común (Cervus elaphus nelsoni) en la transmisión está

reconocido; estudios similares se han realizado con tuberculosis y la importancia del

venado coliblanco (Odocoileus virginianus) como portador y diseminador del agente

(Van Campen y Ryan, 2010). Dentro de los agentes infecciosos de importancia en

las ciencias veterinarias, se encuentran los Pestivirus, un género viral que abarca

agentes de gran impacto para poblaciones productivas, como: Virus de Peste

Porcina Clásica (PPC) y el virus de la diarrea viral bovina (VDVB) afectado porcinos

y bovinos a nivel mundial (Nettleton y Entrican, 1995). El VDVB por sus

características genéticas puede encontrarse en diferentes especies de rumiantes

silvestres; Van Campen y Ryan (2010) determinaron anticuerpos específicos en

poblaciones salvajes de bisontes (Bison bison), venados coliblancos (Odocoileus

virginianus), ciervos mulo (Odocoileus hemionus) y cabras salvajes mediante

Inmunohistoquimica (IHQ) y aislamiento viral (AV). En venado coliblanco hay

información adecuada al respecto: en 1995, Aguirre y colaboradores mediante un

4

estudio serológico determinaron un grupo de posibles agentes infecciosos de

importancia para la especie, para ello, tomaron 133 muestras en 8 parques

nacionales de Estados Unidos, determinando seroprevalencia de Parainfluenza 3

(PI-3) 58%, Virus Respiratorio Sincitial Bovino (RSV) 55%, Herpesvirus Bovino tipo 1

(BHV-1) 32%, Enfermedad Hemorrágica Epizoótica (EHD) 14% y Diarrea Viral

Bovina 59%, siendo este el agente de mayor seroprevalencia; posteriormente,

Passler y su grupo de estudio (2007, 2008) realizaron infecciones experimentales

para conocer el comportamiento del agente en la especie, con el fin de reconocer

animales persistentemente infectados (PI); un año después Duncan y su grupo

(2008) reportaron un individuo persistentemente infectado en Colorado, EEUU. En

Latinoamérica, se han realizado estudios serológicos en México donde se reporta

una prevalencia de 63.5% en 521 animales muestreados (Cantú et al. 2008).

En Colombia, la diarrea viral bovina (VDVB) es una enfermedad no sujeta a control

oficial, los estudios publicados han sido en bovinos por medio de la Federación

Colombiana de Ganaderos - FEDEGAN (2010), la información disponible presenta

la importancia de este agente en ganaderías de leche y carne, obteniéndose una

prevalencia de 41% entre 2005 y 2009, para un total de 5219 muestras analizadas,

también se presenta que DVB ocupa el cuarto puesto en solicitud diagnostica

después de leptospirosis, rinotraqueitis infecciosa bovina y leucosis. Antioquia,

Caquetá y Cundinamarca son los departamentos que lideran la lista de remisión de

muestras para diagnóstico. Teniendo en cuenta que las explotaciones extensivas

son empleadas en gran parte del territorio nacional, la importancia estudiar el

interfaz silvestre-doméstico de los patógenos de mayor diagnóstico en el país

incrementa. La importancia de VDVB radica en su 4 posición en solicitud diagnóstica

y sus grandes impactos productivos, dentro de los cuales el principal es

reconocimiento mundial como el principal patógeno reproductivo para poblaciones

bovinas (Fray, et al., 2000). Los géneros Pudu sp., Mazama sp., y Odocoileus sp.,

se encuentran distribuidos en Colombia, siendo este último el género de mayor

distribución, incluyendo Cundinamarca, departamento con prevalencia de 31% y

prevalencia histórica de 47% para VDVB (FEDEGAN 2010).

Si se considera la importancia de las alteraciones reproductivas en las ganaderías

colombianas, donde se afectan sensiblemente indicadores reproductivos como: el

5

porcentaje de preñez, incremento de abortos y momias y disminución tasa de

natalidad, es necesaria la implementación de programas para el control de estas

enfermedades (FEDEGAN, 2010). Los postulados anteriores deben motivar la

investigación de este agente grupo de agentes infecciosos y la importancia de las

poblaciones silvestres. Debido a las dificultades diagnósticas y logísticas para

investigar poblaciones silvestres en vida libre (in situ), las poblaciones cautivas (Ex

situ) toman importancia con el fin de estandarizar procedimientos metodológicos y

pruebas diagnósticas.

Dentro de la colección del Parque Zoológico Jaime Duque (ZDJ) se encuentran 3

especies de cérvidos colombianos venado soche (Mazama gouazoubira), venado

conejo (Mazama bricenii) y venado coliblanco (Odocoileus virginianus), este último

posee una población promedio de 30 animales con eventos reproductivos y de

mortalidad anuales, considerando la información epidemiológica para VDVB en

Cundinamarca y las características propias del agente, la población de la institución

puede estar en contacto con el agente; mediante fómites (ingreso de un animal

seropositivo para alimentación de carnívoros o contacto de personal con animales

domésticos fuera de la institución) o incluso aerosoles (ver pág. 10); por lo cual,

toma importancia la determinación del estatus epidemiológico; para ello, se decide

efectuar un ensayo inmunoenzimático ELISA para determinar los niveles de

anticuerpos específicos anti-VDVB, dando así un aporte para futuros estudios en

poblaciones de vida libre.

6

1. OBJETIVOS

General

Determinar los niveles de anticuerpos para el virus de diarrea viral bovina VDVB

mediante ELISA competitivo y la mortalidad histórica acumulada en una población

cautiva de venados cola blanca (Odocoileus virginianus) en Cundinamarca,

Colombia.

Específicos

• Desarrollar un protocolo de manejo clínico, conformado por

inmovilización química, examen clínico y muestreo.

• Caracterizar los niveles de anticuerpos específicos para DVB en la

población.

• Determinar el estatus epidemiológico de la población hacia DVB.

• Establecer las causas de mortalidad con cuadro reproductivo en la

población de venados cola blanca en el Zoológico Jaime Duque

compatibles con DVB.

7

2. MARCO TEÓRICO

Pestivirus

Pertenecen a la familia Flaviviridae, de los cuales se encuentran 3 virus de

importancia veterinaria: peste porcina clásica (VPPC), enfermedad de la frontera

(VEF) y diarrea viral bovina (VDVB), los cuales afectan ungulados en general

(domésticos y silvestres), su distribución es mundial. Debido a sus características

epidemiológicas generan grandes pérdidas económicas importancia en animales

domésticos, las pérdidas en animales silvestres no son conocidas (Maclachlan y

Dubovi, 2011). Vilcek y Nettleton (2006) resaltan la importancia de los Pestivirus por

no ser hospedero-especifico estrictos; los estudios existentes identifican infección en

estas especies: jabalí (Sus scrofa), búfalo cafre (Syncerus caffer), bisonte

americano (Bison bison), alpaca (Lama pacos), pudú (Pudu puda), venados de los

géneros Odocoileus y Cervus, jirafa (Girafa camelopardalis), reno (Rangifer

tarandus), sarrio (Rupicapra pyrenaica pirenaica), bisonte europeo (Bison bonasus)

y antílope americano (Antilocapra americana) entre otros, estas especies se

encuentran en el súperorden Ungulata. Paton et al., (1995), reporta que se pueden

presentar falsos positivos a nivel de serología por las semejanzas de los tres virus y

la posibilidad de infecciones cruzadas (PPC, EF y DVB).

Los viriones constan de una envoltura y una nucleocápside, su cápside se

encuentra envuelta; son de morfología esférica con un tamaño de 40-50 nm de

diámetro, en la superficie posee proyecciones de 6-8 nm de longitud, el núcleo es

isométrico con un diámetro de 27-29 nm. El genoma no está segmentado y contiene

una sola molécula en sentido positivo lineal, es decir son ARN de cadena simple y

polaridad positiva; el genoma completo consta entre 12.000 a 12.500 nucleótidos

(ICTVdB Management, 2006). el genoma del virion contiene un marco de lectura

abierto que codifica más de 10 proteínas, las cuales son creadas por procesamiento

co y post-traduccional; en total se componen de 4 proteínas estructurales que son

codificadas en el extremo 5´ del genoma, dichas proteínas son: C: proteína de

nucleocápside y Erns, E1, E2: glicoproteínas de envoltura; en cuanto a las proteínas

no estructurales estas se codifican en el extremo 3’, la familia Flaviviridae contiene

8

entre 7 y 8 proteínas no estructurales: NS5: ARN-polimerasa ARN-dependiente;

NS3: actúa como helicasa y proteasa, contribuye en el complejo ARN-polimerasa;

NS2B, NS3: ayudan a la escisión de la poliproteína y las proteasas de la célula

hospedera las cuales son responsables para su subsiguiente procesamiento; en los

Pestivirus solo es codificada una proteína Npro la cual mediante autocatálisis se

libera de la poliproteína, se conoce que esta proteína no es esencial para la

replicación viral en cultivos celulares, pero tiene una actividad moduladora de

interferón (INF) en células infectadas (Maclachlan y Dubovi, 2011) (Figura 1).

Figura 1. Genoma de los pestivirus

Npro, proteasa; C, la proteína de la cápside; Ernas

, proteína de la envoltura menor con la actividad

ARNsa; E, proteína de la envoltura; p7, proteína no estructural; NS, proteínas no estructurales; P, NS2-

3 (NS3) proteasa; H, helicasa; R, ARN-polimerasa.

Adaptado de. Maclachlan y Dubovi (2011)

Virus de la Diarrea Viral Bovina (VDVB)

Generalidades

Posee dos genotipos VDVB tipo 1 y VDVB tipo 2, el primero consta de 12

subgenotipos y el segundo de 2, los cuales se han determinado mediante análisis

filogenético, su diversidad se atribuye a las altas modificaciones genómicas que

pueden presentar los virus ARN (Bolin y Grooms, 2004), esta diversidad aumenta

las diferencias antigénicas las cuales son limitantes diagnósticas, también se

considera que pueden tener importancia clínica. Este virus fue caracterizado

9

inicialmente en Estados Unidos en 1946 (Arauco, 2012), según Ridpath (2010a)

posee entre 9 y 12.3 kilobases.

Es un virus que a pH bajos tiene menos riesgo de ser inactivado, pero a

temperaturas superiores a 40°C es sensible; como se mencionó anteriormente

posee una alta diversidad genética la cual es atribuida a la ausencia de una

exonucleasa que corrige bases mal incorporadas, característica que genera una alta

plasticidad traducida en una mayor capacidad de generar cepas mutantes; la cual es

considerada como estrategia de defensa ya que puede ocultarse de la respuesta

inmunológica del hospedero (Arauco, 2012). La plasticidad es mayor cuando el virus

infecta especies no comunes o animales persistentemente infectados (PI), ya que al

sintetizarse posee una tasa de 1 error por cada 10.000 nucleótidos polimerizados

(Lértora, 2003; Brock, 2003).

Puede clasificarse según el efecto del virion dentro de la célula en: biotipos

citopáticos (CP) y nos citopáticos (NCP). Según Ridpath (2010b) el biotipo NCP es

conocido se localiza principalmente en el ambiente, mientras que los biotipos CP se

encuentran únicamente en animales sintomáticos y es originado por mutación de

una cepa NCP; se caracteriza por ocasionar vacuolización y muerte celular, este

biótico es el encargado de las diversas presentaciones patológicas del agente; por

otro lado los NCP poseen propiedades que facilitan la infección transparentaría,

razón por la cual se asocian a animales PI (Nettleton y Entrican, 1995). Otra

estrategia para proliferar en poblaciones es su capacidad de generar infecciones

persistentes junto a la transmisión horizontal y vertical (Ridpath, 2010a). El genotipo

DVB-1 ha sido ampliamente identificado en Estados Unidos de América (Santos et

al., 2011); en 2000 fue identificado DVB-2 en Brasil por Flores y colaboradores

(2000b) para ello emplearon aislamiento e identificación viral, mediante cultivo.

Transmisión e infección

Su éxito en la transmisión a una población está asociado a la inmunotolerancia que

poseen algunos individuos “PI”, los cuales tienen la capacidad de eliminar viriones

durante toda su vida en secreciones nasal, salivar, orina, heces, semen y leche;

10

aunque los animales con infección aguda también pueden transmitirla en menor

escala (Vera et al. 2006). Para Brock (2003) la presencia de hospederos

secundarios como rumiantes silvestres; las infecciones con biológicos y la

variabilidad antigénica, son factores que facilitan su transmisión y persistencia.

Las vías de infección pueden ser: transmisión horizontal, por contacto directo

nariz-nariz o semen de animales PI, o indirecta por guantes, agujas e incluso

insectos; transmisión vertical, donde la infección trans-placentaria en hembras

susceptibles durante la gestación o en transferencia de embriones es la principal

fuente, y transmisión entre rebaños, como es de esperarse es dada por la

presencia de animales PI en la población, en animales en vida libre se cree que la

transmisión se da por el contacto con especies con potencial infeccioso (Smith y

Grotelueschen, 2004) (Figura 2).

Figura 2. Transmisión de DVB

Adaptado de: Vera et al. 2006.

Un estudio realizado por el grupo de Arenhart (2009) determinó el potencial de

seroconversión y desarrollo de animales bovinos PI, para ello, realizaron infección a

una población y monitorearon por 150 días, teniendo en cuenta que el día 0 fue la

fecha de destete de los animales, el monitoreo fue realizado mediante sangre,

secreción nasal, ocular, oral y genital tomadas con un intervalo semanal, donde se

observó la eliminación del virus en todas las secreciones y los altos niveles de

anticuerpos en sangre durante el periodo evaluado, finalmente se introdujeron estos

11

individuos PI a dos poblaciones una con características de manejo semi-intensivo y

extensivo, el primer grupo presentó seroconversión total en 30 días, el segundo un

77% al día 100; este estudio presenta de forma detallada y clara la ecología del

agente en una población expuesta a él.

Las infecciones en estadios reproductivos se pueden clasificar según Grooms

(2004) en: Infecciones tempranas, justo después de la concepción, entre los días

0 y 45 de gestación, en este periodo la principal consecuencia es la disminución de

la tasa de concepción, por absorción embrionaria o por mala fijación; Infecciones

en tercio medio, entre los días 45 y 175, donde pueden presentarse abortos,

animales inmunotolerantes PI y defectos congénitos principalmente en sistema

nervioso (hipoplasia cerebelar, microencefalopatía, hidrocéfalo, hidranencefalia e

hipomielinización) seguido de ocular (cataratas, microftalmia, degeneración retiniana

y neuritis óptica), en menor frecuencia pueden evidenciarse individuos con

hipoplasia de timo, hipotricosis, braquignatismo y retardos en crecimiento; las

infecciones en tercio final, se presentan entre 125 y 285 días, como en esta fase

la organogénesis esta completada y el sistema inmune ya es competente el

individuo nace siendo seropositivo. En bovinos se cree que entre los días 125 y 150

el individuo será PI siempre y cuando la infección sea dada por un biotipo NCP

(Brock, 2004).

Presentación Clínica

A nivel mundial la prevalencia es entre 60 y 80%; factores del agente como el

genotipo o el biotipo y de hospedero como el estado inmune, especie y estado

reproductivo pueden variar la presentación clínica; en infecciones en bovinos con

DVB-1 se inicia con un cuadro febril, acompañado de leucopenia entre los 3 y 7 días

post-infección, esta es dada por el carácter inmunosupresor que posee el virus al

inducir muerte linfocitaria consecuente con una leucopenia inducida (Patel et al.,

2012). Estudios realizados en bovinos indican que la presentación aguda cursa con

un cuadro febril elevado, signos respiratorios, diarrea, problemas reproductivos

como aborto, hipó o agalactia y muerte súbita; las cepas de alta virulencia,

desarrollan el cuadro clínico conocido como enfermedad de las mucosas.

12

Por otro lado la infección subclínica en bovinos se caracteriza por descargas óculo-

nasales y leucopenia transitoria, en esta infección la morbilidad es elevada pero la

mortalidad baja, la producción de anticuerpos es dada entre 14 y 28 días post-

infección. Según Ridpath (2010a) estas infecciones contribuyen con el desarrollo de

neumopatías. Spilki et al. (2006) describieron el cuadro clínico respiratorio

expresado, en el cual se evidencia secreción nasal mucohemorrágica, disnea,

asociadas a un cuadro sistémico donde se puede presentar pirexia y anorexia. Las

infecciones cruzadas se pueden presentar junto a parainfluenza tipo 3 (PI3), virus

respiratorio sincitial bovino (VRSB) y herpesvirus tipo 1 (HV-1), debido al mismo

efecto inmunosupresor mencionado anteriormente, pero esta vez involucrando

macrófagos alveolares (Welsh et al., 1995).

A nivel reproductivo, los principales problemas son los abortos y problemas de

concepción, en menor frecuencia malformaciones congénitas (Ridpath, 2010a),

dichas problemáticas van a depender de la fase de infección, como se mencionó

anteriormente. Según Rondón (2006) VDVB se encuentra involucrado en el

complejo de diarrea neonatal bovino, presentando signos cuando la transferencia

pasiva de anticuerpo no fue exitosa, predisponiendo la colonización de diversos

agentes infecciosos a nivel de TGI, por su efecto inmunosupresor. El genotipo DVB-

2, se asocia a un síndrome hemorrágico, en bovinos es caracterizado por la

presencia de mucosas anémicas con hemorragias petequiales y equimóticas,

pirexia, cuadro hemorrágico sistémico, diarrea sanguinolenta, epistaxis, sangrado en

locales de inyección, al hemograma se pueden evidenciar leucopenia y

trombocitopenia, usualmente el individuo termina muriendo (Lértora, 2003). El

efecto inmunosupresor del virus puede ser visualizado al hemograma como una

leucopenia y alteraciones de las funciones leucocitarias, esto puede ser provocado

por su gran afinidad con el tejido linforeticular en el cual produce atrofia y necrosis

(Rondón, 2006).

Impacto económico

Es ampliamente asociado a pérdidas económicas en la industria ganadera; Valle y

colaboradores (2005) evaluaron la relación costo-beneficio de la erradicación de

13

este agente en granjas bovinas, demostrando que en 10 años de seguimiento las

granjas que decidieron erradicar tuvieron ganancias de un 60% con relación a

aquellas que no implementaron herramientas de control. En Nueva Zelanda se

determinó que las pérdida anuales por este agente están en 44.5 millones de

dólares neozelandeses, basados en un porcentaje de afectación de 14.6% rebaños

afectados (Heuer, et al. 2007).

Inmunología de las enfermedades virales

Los agentes virales son microorganismos intracelulares obligados, es decir, se

replican dentro de la célula, para ello usan ácidos nucleicos y mecanismos de

síntesis proteica del huésped. Tienen la capacidad de infectar un gran número de

poblaciones celulares ya que pueden emplear moléculas de superficie de la célula

como receptores. Cuando el agente ingresa provoca lesión o enfermedad mediante

un gran número de mecanismos. Como medida de protección el organismo tiene

dos respuestas inmunitarias innata o adaptativa, con el fin de bloquear la infección y

eliminar células infectadas (Abbas et al., 2008).

Inmunidad innata

Los principales mecanismos son: inhibición de la infección por IFN I, ya en

muchas infecciones de este tipo se asocia la producción de este por parte de células

infectadas, principalmente células dendríticas de tipo plasmocitoide, su síntesis se

da cuando hay reconocimiento de DNA o RNA vírico por parte de receptores de tipo

toll (RTT) endosómicos por un lado y la activación de cinasas citoplásmicas por el

RNA vírico, una vez sintetizado el IFN I este contribuye con la inhibición de la

replicación viral en células infectadas y no infectadas, induciendo un estatus

antivírico; junto a la eliminación de células infectadas por linfocitos NK, este es

un mecanismo que actúa en la primeras etapas de la infección, es decir, actúa antes

que se desencadenen repuestas inmunes adaptativas (Figura 3) (Abbas et al.,

2008).

14

Inmunidad adaptativa

En este tipo de inmunidad actúan los anticuerpos que bloqueen la unión del virus a

la célula diana y su posterior entrada, estos son eficaces durante la fase extracelular

del ciclo biológico del virus y actúan como neutralizantes, debido a que evitan la

fijación y penetración a la célula huésped, uniéndose a los antígenos de envoltura

de la cápside del virus. Los linfocitos T citotóxicos - LCT ayudan al organismo

destruyendo células infectadas, los linfocitos CD8+ son específicos para virus, estos

pueden reconocer antígenos virales citosólicos o de síntesis endógena, asociadas a

molecular CPH de fase I de células nucleadas (Figura 3) (Abbas et al., 2008).

Según Chase (2013) el virus de diarrea viral bovina genera supresión de esta

inmunidad, dicha supresión es dependiente de la cepa.

Figura 3. Inmunidad innata vs adaptativa

Fuente: Abbas et al., 2008.

Diagnóstico

Detección antigénica

Se basa en el aislamiento viral, para ello, se pueden tomar muestras como: suero,

sangre completa, tejidos fetales, secreción nasal, vaginal y semen, la técnica a

15

emplear es la inmunohistoquímica (IHQ) en la cual se emplean anticuerpos

monoclonales o policlonales marcados, con el fin de que sean visualizados

mediante fluorescencia o peroxidasa, esta es una técnica histopatológica; el ensayo

inmunoenzimático (ELISA) también puede ser empleado, en él se usan anticuerpos

monoclonales para inmovilizar el antígeno en particular y posteriormente visualizarlo

mediante espectrofotometría (Vargas et al., 2009).

Inmunohistoquimica IHQ

La detección de antígenos en tejidos fijados en formol al 10% durante 24 horas, es

una herramienta diagnostica para animales muertos, principalmente abortos o

mortinatos; aunque, actualmente se desarrolló en biopsias auriculares, y es una

prueba tamiz para determinar animales PI. Los tejidos de elección son fragmentos

de oreja, piel, cerebro, cerebelo, medula espinal, ganglio trigémino, hipófisis,

linfonodo sub-mandibular, linfonodo mesentérico, tonsila, linfonodo hepático,

linfonodo mediastínico, bazo, timo, pulmón, tráquea, esófago, rumen, omaso,

retículo, abomaso, intestino delgado (duodeno, yeyuno e íleon), intestino grueso

(ciego, colon, recto), tiroides, riñón, medula ósea, adrenal, corazón e hígado (Santos

et al., 2011). Los tejidos de mayor cuantificación de marcaje son: piel de oreja,

corteza frontal cerebral, tálamo, hipocampo, tiroides, linfonodos mesentéricos; en

menor escala: bazo, yeyuno e íleon.

Para la colecta de biopsia auricular, se realiza limpieza y desinfección con solución

a base de yodo; los fragmentos colectados deben medir 1cm de profundidad por 0,5

cm de longitud, el lugar de elección es la punta del pabellón auricular. Una vez se

obtiene la biopsia, debe colocarse en tubos de ensayo con solución de formol al

10% durante 24 horas, posteriormente es deshidratado con soluciones crecientes de

alcohol etílico, diafinizado en xilol e incluido en parafina. Para así realizar cortes de

5 micrómetros, colocados en láminas de poli-l-lisina para desarrollar el IHQ (Santos

et al., 2011).

16

Detección de anticuerpos

Para la detección de anticuerpos específicos, se emplean pruebas serológicas como

la seroneutralización y ELISA indirecto o competitivo, los cuales cuantifican la

titulación de anticuerpos (Vargas et al., 2009). Días y colaboradores (2010)

mencionan la seroneutralización como técnica a escoger, mientras que Tobias y su

grupo de estudio (2000) reportan mayor reactividad de anticuerpos monoclonales

para P125-P80, con relación a E2/gp53 y EO/gp48, proteínas a evaluar en ensayos

inmunoenzimáticos.

Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas – ELISA

El uso de técnicas inmunoenzimáticas en las ciencias veterinarias se ha

incrementado notablemente, siendo entre 1980-1984 los años en los que inicio esta

técnica con un total de 71 artículos publicados, mientras que en 2004 se han

publicado 853 estudios, las principales aplicaciones de esta técnica son:

confirmación de enfermedad con cuadro clínico, análisis de la respuesta inmune de

un individuo a un agente infeccioso determinado, comparación antigénica (Crowther,

2009). El ensayo inmunoenzimático es una técnica que involucra pruebas donde se

usan anticuerpos como reactivos, así como enzimas las cuales están ligadas a uno

de los reactivos en un inmunoensayo para permitir la cuantificación mediante el

desarrollo de color después de la adición de un sustrato cromógeno (Crowther,

2009).

Es una técnica inmunológica para diagnóstico tanto de antígenos como de

anticuerpos, se basa en la reacción antígeno-anticuerpo. Su fundamento se basa en

la cuantificación de un antígeno inmovilizado sobre una superficie sólida mediante el

empleo de un anticuerpo específico ligado a una enzima de forma covalente, con el

fin de detectar la respuesta inmunológica de la muestra a evaluar. La cuantificación

del anticuerpo unido al antígeno es proporcional a la cantidad de antígeno presente,

su determinación se realiza por espectrofotometría al medir la transformación de un

sustrato transparente en un producto de color a través de la enzima enlazada

(Abbas et al., 2008; Crowther 2009). Los test de ELISA pueden ser competitivos o

17

no competitivos; en el ELISA competitivo el anticuerpo de la muestra compite con

el conjugado por los sitios de unión al antígeno, una muestra es positiva cuando no

hay color, ya que el sustrato no encontrará la enzima porque el conjugado ha sido

desplazado por el anticuerpo presente en la muestra, es decir, cuantifica el antígeno

presente en la muestra; mientras tanto, en el ELISA no competitivo se enfrenta la

muestra con el antígeno o anticuerpo que está en la fase sólida, la positividad de

este test es dado cuando al formarse el complejo antígeno-anticuerpo y al agregar el

conjugado estos reaccionan con el sustrato y generan color, dentro de estos se

encuentran dos tipos: los directos detectan antígeno y los indirectos detectan

anticuerpos (Figura 4) (Abbas et al., 2008).

Figura 4. ELISA directo vs indirecto

Adaptado de: Murphy et al., 1999.

Reinhardt y Col. (2003) mencionan la importancia del ELISA para detección de

antígeno viral, debido a que, combina la acción de un anticuerpo de captura unido a

una fase solida con un anticuerpo detector el cual es marcado con un sistema

señalizador (peroxidasa) para su cuantificación, la sensibilidad de esta prueba es

equivalente a el aislamiento viral. Se usa tanto para detección de anticuerpos como

18

de antígenos. Sandvik y Krogsrud (1995) recomiendan colectar la muestra

sanguínea en tubo heparinizado para la realización de ELISA de captura, con el fin

de determinar antígenos contra proteínas p125/p80.

Al momento de analizar los resultados por espectrofotometría Felmer y Col. (2009)

recomiendan realizarlo a 450 nm, empleando el kit comercial (Svanovir®,

SVANOVA, Suecia), ELISA indirecto. Se han realizado pruebas de diagnóstico por

ELISA y neutralización viral en leche presentando resultados similares a los dados

en muestras sanguíneas (Sturza et al., 2011).

Detección de genoma viral

Para ello se emplea el RT-PCR, técnica de biología molecular, se puede aislar en

sangre con EDTA de animales positivos a IHQ, o pulmón, bazo y timo de animales

muertos son las adecuadas para esta técnica (Vargas et al., 2009; Santos et al.,

2011). Esta técnica fue usada por Pilz et al., (2007) para detección de la región

terminal no traducida (UTR) 5’UTR en suero, el autor recomienda que posterior a la

retracción del coagulo, el suero debe ser colectado y conservado a -20°C, para

evitar su degradación. Carvalho Días y colaboradores (2010) emplearon

neutralización viral para determinación mediante biología molecular de genotipos

DVB-1 y DVB-2.

Otras herramientas diagnósticas

La necropsia no es una herramienta diagnostica sensible y especifica aunque un

estudio realizado por Santos y colaboradores (2011), presenta algunas alteraciones

frecuentes a la necropsia como: linfomegalia moderada de linfonodos mesentéricos,

moderada observación de placas de Peyer y discreta linfagiectasia mesentérica; a

nivel microscópico se evidenció: infiltrado inflamatorio mononuclear leve o moderado

en intestino delgado, dilatación de vasos sanguíneos mamarios, depleción linfoide

con infiltrado histiocitario leve a moderado en linfonodos, tonsilas y placas de Peyer.

19

Reportes en Latinoamérica

En América Latina, Brasil es el país que más ha estudiado este agente, siendo en

1970 su primer reporte (Flores et al. 2005); un estudio realizado en Minas Gerais y

Sao Paulo, Brasil donde se muestrearon 376 bovinos evidenció una prevalencia de

57.56 y 56.46% respectivamente, mediante ELISA indirecta (Samara et al., 2004).

En Colombia la enfermedad data de 1975, mediante la entrada al país de bovinos

con signología clínica compatible, dando como resultado final enfermedad de las

mucosas (Vargas et al., 2009), en 2011 en Pasto se tomaron 238 muestras de

bovinos para realizar serología mediante ELISA presentando una prevalencia de

32.7% (Cadeño Quevedo et al., 2011). Estudios también en bovinos en Perú revelan

titulación de anticuerpos mediante ELISA de captura y neutralización viral (Zúñiga et

al. 2006), en México se realizaron titulaciones de anticuerpos para Neospora

caninum (54.2%), Brucella abortus (21.2%), Rinotraqueitis infecciosa bovina (30.6%)

y DVB (33.6%) en una población de 500 bovinos, denotando así, la existencia y

coexistencia de dichos agentes en la población, para ello se utilizó serología

mediante ELISA (Sánchez-Castilleja et al., 2012). Estudios de filogenética de cepas

aisladas denotan 23 estirpes aisladas en Perú y Chile, dando como resultado su

categorización dentro del genotipo 1, subtipo 1b (Ståhl et al. 2009); en 2007

Betancur y colaboradores realizan un estudio para determinar la prevalencia en

bovinos de diversas fincas ganaderas en Montería, dándose una prevalencia de

29.4%; 5 años más tarde se realizó un estudio donde se determinó la prevalencia de

este agente en los bovinos de Caquetá, Colombia, observando una prevalencia de

35.5% entre 1999 y 2009 (Motta Giraldo et al., 2012); El biotipo 2 se desconoce en

Colombia, siendo reportado en Brasil y Argentina (Vargas et al., 2009).

Estudios en especies silvestres

En 2008, Craig y colaboradores demostraron la infección en búfalos de agua

(Bubalus bubalis), en el mismo año se demostró la posibilidad de infección

persistente en ciervo ratón de java (Tragulus javanicus) mediante infección

experimental (Semrau et al., 2008). Marcoppido et al. (2010) establecieron

prevalencia de 0.8% para una población de 17 vicuñas (Vicugna vicugna) en vida

20

libre. Las infecciones experimentales en venados coliblancos han demostrado su

susceptibilidad y desarrollo de signos clínicos post-inoculación; estas mismas han

sido replicadas en Taurotragus oryx observando animales PI con replicación y

eliminación viral; entre 2005 y 2006 se tomaron biopsias de pabellón auricular de

5597 animales producto de la temporada de caza, de los cuales 141 pertenecen a

venado cola blanca, donde fue positivo un O. hemionus mediante IHQ (Duncan et

al., 2008); Nettelton (1990) identificó la presencia del agente en poblaciones de

rumiantes silvestres mediante estudios serológicos y aislamiento viral en Cervus

elaphus scoticus, Capreolus capreolus y Bison bonasus especies también

estudiadas por Romvary, (1965); McMartin et al., (1977); Doyle y Heuschele, (1983);

Frolich (1995) y Nielsen et al., (2000).

21

3. MATERIALES Y METODOS

3.1 LOCALIZACIÓN

Este estudio se realizó en el Zoológico Jaime Duque (ZJD), en el municipio de

Tocancipá, Cundinamarca. Localizado en el kilómetro 34 vía Tocancipá (Figura 5).

Tocancipá se ubica geográficamente sobre los 4° 58´ latitud norte y los 73° 55´

longitud oeste, se encuentra a 2.606 metros sobre el nivel del mar; su temperatura

promedio es 13° C. Según su sitio web “El Municipio posee y conserva áreas

ambientalmente estratégicas llamadas "Predios de interés hídrico", que influyen

sobre nacederos de agua, donde se realizan actividades ecológicas como

caminatas y reforestaciones. También se debe resaltar que la Administración

Municipal creó la Secretaría del Medio Ambiente, para que desde lo local, se

propenda por el desarrollo sustentable basado en la protección de los componentes

agua, suelo y aire. (Municipio Tocancipá, 2013).

Figura 5. Localización Zoológico Jaime Duque, acercamiento de encierro de

venados

Tomado de. Google Maps, 2013.

22

3.2 POBLACIÓN Y MUESTRA

Población: grupo de venados coliblancos de la colección del ZJD, para la

investigación se tomaron 20 animales de los 32 ubicados en el encierro. La

descripción de los animales capturados se presenta en el Anexo 1.

Muestra: se realizó venopunción para toma de muestra sanguínea, para la prueba

de ELISA se tomó en tubo sin anticoagulante, para hemograma en tubo con EDTA

(como posible correlación paraclínica de DVB), con la sangre restante se realizó

frotis sanguíneo para evaluar morfología de línea roja.

3.3 VARIABLES (Tabla 1)

Tabla 1. Variables del estudio.

Nombre Variable Tipo Variable Unidad de Medida o

Categorías

Títulos de anticuerpos

anti-DVB en sangre Cuantitativa continua Densidad óptica

Sexo Cualitativa dicotómica Macho / Hembra

Edad Cualitativa policotomica

ordinal

Neonato / Infante / Juvenil

/ Adulto / Geriatra

3.4 ANÁLISIS ESTADÍSTICO

Muestreo: Probabilístico, aleatorio simple (Samuels et al., 2012)

Estadística descriptiva: Frecuencias, proporción y/o porcentaje (Samuels et al.,

2012).

23

3.5 METODOS Y PROCEDIMIENTOS

Diseño metodológico:

Tipo de estudio:

- Descriptivo: ya que se buscó describir el estatus epidemiológico de la

población hacia el virus de la diarrea viral bovina y su posible impacto

poblacional.

Método de estudio:

- Cuantitativo: ya que se evaluaron datos numéricos.

- Analítico: debido al carácter analítico y de correlación tanto clínica

como paraclínica de la población.

Procedimientos metodológicos:

Condicionamiento del grupo

Para ello se empleó el condicionamiento operante, definido como “…un proceso de

ejercer control sobre la conducta de un organismo en un cierto ambiente, por medio

de la aplicación del refuerzo. Incluye máxima flexibilidad y adaptabilidad…”

concepto postulado por Skinner (Ardila, 1981) un psicólogo estadounidense que

estudió a fondo el comportamiento humano, sus postulados han sido empleados en

animales principalmente en adiestramiento canino. Para efectos de este estudio se

empleó como control de la conducta la adaptación de los animales a personas

dentro del encierro, como refuerzo fue empleado el alimento. El condicionamiento

tuvo un tiempo inicial de 2 meses en los cuales se logró el objetivo planteado, para

ello, se ingresaba al hábitat de los animales en compañía del alimentador y se

procedía a dispersar el alimento en un círculo de aproximadamente 4 metros de

diámetro, al interior del círculo se posiciona una persona y queda a espera que los

animales se acerquen a comer (Figura 6), durante las primeras dos semanas no se

obtuvieron resultados significativos, pero posterior a ellas los animales respondieron

de forma adecuada.

24

Figura 6. Acercamientos iniciales, a) acercamientos iniciales a la población; b)

acercamientos mediante alimentación

a)

b)

Fuente. Autor.

El siguiente paso del condicionamiento se basó en el acercamiento de los animales

hacia las personas, para ello, se empleó como recompensa el alimento que más

consumen los animales, para este caso zanahorias, la metodología fue la siguiente:

como primer paso se buscó disminuir la distancia entre los animales y el entrenador,

para ello la distancia se fue disminuyendo gradualmente 0,5 m cada 4 días hasta

llegar a una distancia de 1 m, en este momento se buscó ofrecer al animal el

alimento de la mano sin tener contacto visual, hasta llegar al punto de tener contacto

visual y poder palpar rostro, región cervical y miembros anteriores (Figura 7). Los

resultados de este paso fueron positivos después de 2 meses, cabe resaltar que las

conductas jerárquicas de la especie limitaron este paso, ya que los individuos de

menor jerarquía no se acercaron debido a que los individuos de mayor jerarquía no

lo permitían.

25

Figura 7. Acercamientos con contacto directo del entrenador, a) contacto directo

con una hembra; b) contacto directo con un macho.

a) b)

Fuente. Correa, 2013.

Una vez el condicionamiento en su primera fase tuvo éxito se procedió a inicial la

captura de individuos mediante una técnica de distancia como lo es el dardeo de

anestésicos mediante cerbatana y pistola de aire comprimido.

Antecedentes de manejo anestésico

Los fármacos se seleccionaron con base en la experiencia del ZJD, la disponibilidad

de los principios comerciales en el país y una revisión de literatura, en cérvidos los

fármacos empleados incluyen xilacina, medetomidina, zolazepam, azaperona,

ketamina y tiletamina, entre otros (Caulkett y Haigh, 2007). Para el presente estudio

se empleó xilacina y ketamina para formular el protocolo, esta asociación ha sido

descrita por un gran número de investigadores tanto para animales en cautiverio

como en vida libre (Al-Sobayil et al., 2010; Muller et al., 2007; Wallingford et al.,

1996; Kreeger et al., 1986). La seguridad del protocolo se incrementará al emplear

yohimbina un fármaco antagonista de la xilacina (Wallingford et al. 1996).

26

Fármacos empleados

Xilacina

Pertenece al grupo de los α2-agonistas, fármacos con capacidad de estimular

receptores α2 adrenérgicos; su mecanismo de acción está directamente relacionado

a estos receptores, específicamente a los de membrana asociados a la proteína G,

los cuales, al ser estimulados inhiben la adenilil ciclasa y generan cambio en las

conductancias de calcio y potasio, lo cual se traduce en cambios en el voltaje de la

membrana y excitabilidad neuronal. La xilacina posee un efecto analgésico el cual

puede ser comparable con algunos compuestos opioides (Botana López et al.,

2002).

Ketamina

Es un principio activo que genera anestesia disociativa, en la cual el individuo se

encuentra cataléptico, es decir, el paciente presenta disociación de la actividad del

SNC, razón por la cual, no hay respuesta a estímulos físicos como dolor, presión y

calor, entre otros. La ketamina actúa como antagonista del glutamato,

neurotransmisor excitador, en los receptores NMDA (M-metil-D-aspartato) del

glutamato que regula el calcio en el SNC, se cree que junto a los efectos en

receptores opiáceos son las dos vías de analgesia que proporciona este principio.

También tiene acción en receptores GABA (ácido gaba-amino-butírico) y en el

bloqueo del transporte neuronal de dopamina, serotonina y noradrenalina (Botana

López et al., 2002).

Yohimbina

Es un antagonista de receptores α2 adrenérgicos, tiene mayor afinidad por estos

receptores que por los α1, sus efectos farmacológicos ayudan a disminuir los efectos

de los agonistas y de esta manera disminuir el tiempo de recuperación anestésica

por disminuir el efecto del agonista (Botana López et al., 2002).

27

Protocolo anestésico

La dosificación empleada fue establecida con base a la revisión de literatura y la

experiencia de la institución: Xilacina 0.5-1 mg/kg; Ketamina 5-8 mg/kg y Yohimbina

0.3 mg/kg.

Captura

Para la captura se emplearon dardos de 3 mL marca Telinject ®, así como dardos

fabricados por la institución, se emplearon dos técnicas de disparo: Cerbatana y

pistola de aire comprimido marca Telinject ®. Con la primera técnica se pudo

realizar con una distancia máxima de 10 metros, con la segunda técnica se pudo

ampliar la distancia a 30 metros máxima (Figura 8).

Figura 8. Métodos de aplicación farmacológica a distancia, a) aplicación con

cerbatana, b) aplicación con pistola de aire comprimido

a) b)

Fuente. Autor.

28

Examen clínico

El examen clínico de los animales se realizó bajo anestesia, empleando el formato

establecido por la institución (Anexo 2), donde se examina: Inspección externa:

Tegumentario, mucosas, órganos de los sentidos (ojo, oído); digestivo: cavidad oral

(lengua (saliva), rumen, intestino, recto, materia fecal); respiratorio: mucosa nasal

(moco), tráquea, pulmones; cardiaco: pulso, corazón (válvulas); urinario: orina;

Locomotor: ligamentos, articulaciones, huesos.

Toma de muestra sanguínea

Para la obtención de la muestra en animal se debe encontrar en un plano

anestésico entre 0-1 de la escala clínica para evaluar la profundidad de sedación

(OAAS) (Chernik et al., 1990). Una vez en animal se encuentra en el plano

anestésico adecuado es posicionado en decúbito lateral derecho, para la toma de

sangre se empleó la vena yugular izquierda, para ello, los miembros anteriores se

dejan pegados al cuerpo pero estirados y la mandíbula se deja en ventro-extensión

con el fin de dejar expuesto el cuello, justo antes de la entrada al tórax se realiza

una ligera presión en el canal yugular para visualizarla a lo largo del cuello,

posteriormente se aplica alcohol como método de desinfección y al mismo tiempo

para visualizar mejor el vaso, para la venopunción se empleó aguja hipodérmica de

calibres 21½ o 16G y jeringa de 10 mL o venoject® con camisa, para ingresar al

vaso se posiciona la jeringa a 45° aproximadamente y se ingresa aproximadamente

1,5 cm de la aguja de forma paralela al surco yugular. Al obtener la muestra

sanguínea se coloca en tubos de 4 mL sin anticoagulante y con EDTA (Figura 9).

29

Figura 9. Venopunción mediante jeringa vs Venoject®, a) posicionamiento del

cuello; b) desinfección de la zona de venopunción; c-d) punción con jeringa de vena

yugular; e-f) punción con venoject® de vena yugular;

a) b)

c) d)

e) f)

Fuente. Autor y Correa Blain, 2013

Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas – ELISA

Se empleó el kit SERELISA® del laboratorio Synbiotics (Figura 10), el cual es un

ELISA indirecto para la detección de un antígeno en este caso una proteína no

estructural llamada p80/125, la cual posee un epitope común para las cepas CP y

NCP del virus de la diarrea viral bovina, esta técnica fue realizada por el personal

del laboratorio Zoolab Ltda.

30

Figura 10. Kit SERELISA®, a) kit Serelisa, b) caja del kit con especificaciones

técnicas

a) b)

Fuente. Autor

Para esta prueba la muestra a usar es suero, plasma o sangre entera, su

importancia radica en la identificación de animales infectados permanentemente

inmunotolerantes, es decir PI. También puede usarse para el análisis de muestras

de leucocitos, muesca de oreja y extracto de tejido. La consiste en 4 pasos:

1. Los controles y muestras son colocados directamente en los pocillos

sensibilizados con anticuerpos monoclonales anti-BVD/MD/BD [p80/125]. La

proteína viral presente se fijará a los sitios específicos (Figura 11).

Figura 11. Muestras en pocillos y posterior incubación, a) preparación de

conjugado, b) depósito en los pocillos de las muestras

a) b)

Fuente. Autor.

31

2. Se realiza lavado para eliminar las fracciones no ligadas, se agrega un

antisuero de conejo anti-BVD/MD/BD [p80/125]. Este se fija al antígeno

previamente adherido a la fase sólida (Figura 12).

Figura 12. Lavado de pocillos, a) pocillos post-incubación, b) lavado de

pocillos

a) b)

Fuente. Autor

3. Se realiza un segundo lavado y posteriormente se agrega un conjugado de

peroxidasa anti-Ig de conejo el cual se obtiene en cabra, con ello se permite

la revelación del antisuero de conejo anti-BVD/MD/BD [p80/125], formando el

complejo: (Mac) - (Ag BVD/MD/BD [p80/125]) - (anti-BVD/MD/BD [p80/125]

Ig de Conejo) - (Ac cabra anti-conejo Ig / peroxidasa) (Figura 13).

Figura 13. Segundo lavado y conjugado, a) incubación en cámara oscura;

b) muestras pre-incubación

a) b)

Fuente. Autor.

4. Se realiza un tercer lavado y posteriormente la enzima unida al complejo es

revelada tras la adición de un substrato el cual se transforma en un producto

coloreado. Las densidades ópticas se leen e interpretan para determinar la

32

presencia o ausencia del antígeno en función a los valores del umbral

obtenidos del control positivo (Figura 14).

Figura 14. Último lavado y lectura del ensayo a) muestras post-incubación, b)

aplicación de reactivo (coloración), c) muestras post-lavado; d) espectrofotómetro, e)

muestras en espectrofotómetro, f) visualización de resultados.

a) b) c)

d) e) f)

Fuente. Autor.

Estudio retrospectivo de mortalidad para la población

Inicialmente se tomó la información encontrada en los registros de necropsia del

ZJD entre el periodo 1991-2013, como primer paso se toman los siguientes datos

de cada caso: N° de RN, año, fecha de muerte, fecha de necropsia, origen, sexo,

edad, diagnóstico clínico, diagnostico de necropsia y diagnóstico de histopatología.

El segundo paso es tomar el informe de necropsia y registrar en una tabla de

acumulación la información existente clasificada por sistema: Inspección externa,

33

respiratorio, cardiovascular, digestivo, endocrino, urogenital, linfático, musculo

esquelético y nervioso, de esta forma de va a obtener de forma sistematizada la

información de las lesiones presentadas en casa caso. Con la información existente

se realizan tablas de frecuencia para determinar los grupos demográficos de

importancia y los sistemas y hallazgos de mayor presentación, como paso final se

realizará un análisis de los casos para verificar el diagnostico necroscópico y en el

caso pertinente postular un diagnóstico.

34

4. RESULTADOS

Protocolo de manejo clínico, el protocolo de manejo clínico se presenta en la Figura 15, y se describe en el Anexo 1.

Figura 15. Protocolo de manejo clínico de venado coliblanco en cautiverio

Fuente. Autor

35

Captura de individuos

Se capturaron 17(7♀/10♂) animales entre enero y octubre de 2013, las dosis del

protocolo fueron para xilacina (X) 0.81± 0.2 mg/kg, ketamina (K) 7.2± 3.4 mg/kg y

yohimbina 0.3± 0.0 mg/kg. Muller y colaboradores (2007) emplearon X 1.6± 0.2

mg/kg + K 7.8± 0.3 mg/kg, en cuanto a la ketamina la dosis promedio no varían pero

al detallar la SD están varían en 3 mg/kg, lo cual presenta significa un rango mayor

en nuestra dosis, la dosis de xilacina fue 2 veces mayor que la empleada en este

estudio. Para el protocolo empleado el tiempo transcurrido entre la aplicación del

anestésico y el primer efecto observado fue 5.64± 3.9 minutos, el tiempo

transcurrido en presentar recumbencia esternal fue 9.9± 8.8 min y el tiempo en

reincorporarse 76.1± 42.4 min (Tabla 2).

A nivel cardiovascular la frecuencia cardiaca en promedio se mantuvo en 56± 1.8

latidos por minuto (Figura 16), la frecuencia respiratoria en promedio fue 54± 2

respiraciones por minuto (Figura 17); la temperatura promedio al inicio fue 38.46°C,

20 minutos después 37.86°C y al finalizar el procedimiento 37.63°C (Figura 18),

durante el estudio se recapturo un individuo.

Tabla 2. Media de signos de inmovilización y recuperación de la población

Dosis ketamina

mg/kg ±

SD

Dosis xilacina

mg/kg ±

SD

Dosis yohimbina

mg/kg ± SD

Efecto inicial (n)

min ± SD

Tiempo a recumbencia esternal (n)

min ± SD

Tiempo de reincorporación

(n) min ± SD

7.2± 3.4 0.81± 0.2 0.3± 0.0 5.6± 3.8 (18)

9.9± 8.8 (18) 61,8± 12.7 (16)

36

Figura 16. Promedio del monitoreo de frecuencia cardiaca

Fuente. Autor

Figura 17. Promedio del monitoreo de frecuencia respiratoria

Fuente. Autor

Figura 18. Promedio del monitoreo de temperatura

Fuente. Autor

0

20

40

60

80

100

120

5 10 15 20 25 30 35 40

Lati

ds/

Min

Min

Promedio SD (Mín) SD (Máx)

0

20

40

60

80

100

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Re

sp/m

in

Min

Promedio SD (Mín) SD (Máx)

35,5

36

36,5

37

37,5

38

38,5

39

39,5

Ini Med Fin

°C

Prom SD (Mín) SD (Máx)

37

Examen clínico

Se examinaron 20 individuos, 17 (capturados con restricción química) y 3 neonatos,

A la evaluación no fueron observadas alteraciones de importancia (Anexo 11):

El estado general fue bueno en el 70% de los individuos mientras en el 30%

restante fue regular. El estado de hidratación se evaluó según Radostits (2002)

tomando como parámetros: el tiempo de llenado capilar de más de 2 segundos

como anormal, la persistencia del pliegue cutáneo más de 4 segundos anormal y el

grado de depresión ocular, siendo esta una prueba relativa por no tener una

clasificación determinada; ningún animal presentó trastornos de hidratación al

examen; en cuanto a la piel y el pelaje el 40% de los animales presentó pelaje

hirsuto, mientras que el restante 60% no presentaron alteraciones. Inspección de

cavidad oral, el rasamiento dentario de los individuos fue óptimo, teniendo en

cuenta su fórmula dentaria I 0/3, C 0/1, P 3/3, M 3/3 = 32 (Knight, 2001), en este

estudio solo fueron observados los incisivos, 15% presentaron dientes de leche tres

de tres, 5% presentaron pinzas mudadas y los demás de leche, 30% presentaron

rasamiento total de dientes definitivos con observación de raíz, mientras que 25%

también se encontraban con rasamiento total pero sin observación de raíz, 15%

presentaron un rasamiento total solo en pinzas, 5% rasamiento parcial de pinzas y

medios, y un 5% presentaron ausencia del medio izquierdo. El examen de sistema

digestivo solo evidenció un individuo (5%) con dilatación sugestiva de timpanismo.

A nivel de sistema musculo esquelético un individuo presentó fractura de tarso de

MPI y un individuo recapturado (10%) presentó una masa a nivel de rama horizontal

de mandibular izquierda. A nivel genitourinario dos hembras presentaron hallazgos

clínicos, una presentó congestión en mucosa vulvar y la otra una secreción

blanquecina también a nivel vulvar, dicha secreción se cree que pudo ser semen

pero no se confirmó; los sistemas respiratorio, circulatorio y linfático no presentaron

hallazgos al examen clínico.

38

Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas – ELISA

Una de las 20 muestras fue positiva, mientras que otra fue sospechosa, las

restantes 18 muestras fueron negativas, dando así una prevalencia del 5% para

DVB. La muestra positiva perteneció a una hembra adulta en puerperio, la muestra

sospechosa fue de un neonato de dos crías que nacieron en fechas similares, la

hembra positiva es una de las dos hembras que dieron a luz, por lo cual es posible

que fuera la madre de la cría sospechosa, en la Tabla 3 se describen los resultados

de cada una de las muestras, denotando el sexo, la edad, el resultado por

colorimetría y la interpretación de dicho resultado. Posteriormente el individuo que

dio positivo se recaptura y el resultado es negativo.

Tabla 3. Anticuerpos anti-DVB en O. virginianus, Cundinamarca, Colombia

Caso Sexo Edad Resultado Interpretación

V01 M G -75,65 Negativo

V02 H G -4,52 Negativo

V03 H A 5,45 Negativo

V04 H A 3,66 Negativo

V05 M J -12,48 Negativo

V06 M A -24,73 Negativo

V07 H A -2,68 Negativo

V08 M A -23,99 Negativo

V09 H J -21,68 Negativo

V10 M A 15,604 Negativo

V11 M A -79,65 Negativo

V12 M A -4,47 Negativo

V13 M A -14,51 Negativo

V14 H N -69,31 Negativo

V15 H N 30,14 Sospechoso

V16 M N -54,56 Negativo

V17 H A 75,855 Positivo

V18 M A -16,1 Negativo

V19 M A 8,078 Negativo

V20 H J 6,487 Negativo

V17 H A 4,526 Negativo

39

Hematología

Mediante el protocolo empleado se tomaron muestras de 20 individuos a los cuales

se les realizó hemograma y bioquímica sanguínea, para analizar los parámetros

fueron considerados los rangos obtenidos en este estudio (Anexos 6-7).

Hemograma

Los glóbulos rojos se encontraron dentro de los intervalos en 13 individuos, 3

estuvieron por encima, al igual que por debajo de los rangos. La hemoglobina

estuvo disminuida en 4 individuos, 4 individuos presentaron valores de leucocitos

elevados, 3 individuos valores de neutrófilos, 1 de linfocitos, 2 tanto de monocitos

como de eosinófilos; mientras que solo 3 animales presentaron neutrófilos

disminuidos, los demás analitos del hemograma no presentaron hallazgos de

importancia clínica (Anexo 8).

Química sanguínea

La glucosa se observó en 4 individuos elevada y en igual número disminuida, 7

animales presentaron este parámetro dentro del intervalo, el nitrógeno ureico en

sangre se encontró elevado en 3 casos y disminuido en 1, la CK se encontró

elevada en un caso, la creatinina elevada en 3 casos y disminuida en 1 (Anexo 8).

Mortalidad entre 1991-2013

Casuística y mensual

Durante el periodo evaluado se presentaron 136 casos, donde el año 2006 presentó

la mayor mortalidad 10.29% (16), el 2013 ocupo el segundo lugar con 8.82% (14),

seguido de 2003 con 7.35%, los demás años presentaron mortalidades entre 0.82 y

6.61%, siendo el 0.82% la mortalidad para el año 1991 (Figura 19). Al evaluar dicho

fenómeno por mes se observó un ligero aumento de la mortalidad en agosto

40

presentándose 22 casos (16.17%), seguido de junio con 16 casos (11,76%),

septiembre y octubre (10.29%), diciembre fue el mes que menos casos presentó

con 3 (2,2%), en 4 casos no se reporta este dato (Figura 20).

Figura 19. Mortalidad anual de O. virginianus entre 1991-2013

Figura 20. Mortalidad por mes de O. virginianus entre 1991-2013

Descripción demográfica

En cuanto al sexo el 49.26% fueron hembras, mientras que el 45.59% machos, un

5.15% fue indeterminado; el estado de desarrollo biológico evidenció que los

estadios iniciales fueron los más destacados siendo juveniles (25.74%), infantes

(22.79%) y neonatos (35%) con un 73.53%, el restante 22.96% fueron adultos,

0,74% geriatras y el 3.68% indeterminado. El origen de los animales fue en un

0

2

4

6

8

10

12

14

16

N°

Cas

os

0

5

10

15

20

25

Ene Feb Mar Abr May Jun Jul Ago Sep Oct Nov Dic NR

N°

caso

s

41

89.71% exhibición, mientras que, hospitalización 3.68%, cuarentena 1.46% y un

5.15% no reportado.

Diagnóstico clínico

La muerte súbita fue el diagnóstico más frecuente (23.53%), aunque en un 20.59%

de los casos no se reportó este diagnóstico, los traumatismos (12.5%) ocupan el

tercer lugar, seguido de los problemas respiratorios, de regulación de temperatura y

casos sin información con 6.62%, el quinto lugar lo comparten las enfermedades

digestivas y problemas pediátricos en un 5.15%, los choques y problemas

nutricionales 3.68%, un 2.94% de los animales fueron eutanasiados, 2.21% fueron

casos a esclarecer y finalmente un caso (0.71%) fue toxicológico (Figura 21).

Figura 21. Descripción de los diagnósticos clínicos

1

3

4

5

5

7

7

9

9

9

17

28

32

0 5 10 15 20 25 30 35

Tóxicológico

A esclarecer

Sacrificio In extremis

Choque

Nutricional

Digestivo

Pedriatria

Respiratorio

Sin información

Temperatura

Traumatismos

No presenta

Muerte súbita

N° Casos

42

Diagnóstico de necropsia

Los hallazgos a nivel de sistema respiratorio ocuparon el primer lugar con un

27.21%, dentro de los cuales la neumonía fue el diagnóstico de mayor importancia

con 17 casos (48.65%), la segunda alteración en este sistema fue el edema

pulmonar (37.84%) y finalmente la congestión (13.51%); los trastornos musculo-

esqueléticos ocuparon el segundo lugar con un 16.91% dentro de los cuales se

destacan lesiones traumáticas e infecciosas a nivel óseo; las alteraciones

nutricionales como las infestaciones ectoparasitarias y la caquexia se observaron en

el 13.24%, así como en un 11.76% fueron caracterizadas alteraciones digestivas,

dentro de las cuales las inflamatorias fueron importantes, en 12 casos (8.82%) no se

consiguió información al respecto, los trastornos urinarios, endocrinos, linfáticos y

nerviosos así como los cadáveres con autolisis no fueron de importancia en la

población (Figura 22).

Figura 22. Representación de los diagnósticos de necropsia

1

2

2

3

5

6

11

12

16

18

23

37

0 5 10 15 20 25 30 35 40

Nervioso

Autolisis

Linfatico

Endocrino

Urinario

No se observan Hallazgos

Cardiovascular

Sin información

Digestivo

Nutricional

Músculo esquelético

Respiratorio

N° Casos

43

Diagnostico histopatología

Los casos donde no se ha concluido un diagnóstico ocupan un 57.36% dentro de los

cuales en el 19.12% esta técnica no fue realizada, el 9.56% no presentó

alteraciones histológicas en los tejidos evaluados, un caso (0.74%) presentó

autolisis, así como otro caso (0.74%) presentó errores en la muestra, el 22.79% de

los casos no poseen información al respecto y finalmente un 4.41% de los casos

pertenecientes al año 2013 no poseen resultado histológico en este momento. Del

restante 42.64%, así como a la necropsia las patologías respiratorias ocupan el

primer lugar con un 13.97%, en segundo lugar las alteraciones digestivas con

10.29%, los problemas endocrinos y los choques comparten el tercer lugar (5.15%),

los cardiovasculares (3.68), las demás categorías no son de importancia por el

número de casos entre 1 y 2 (Figura 23).

Figura 23. Caracterización de los diagnósticos de histopatología

0 5 10 15 20 25 30 35

Dht., severa

Error en la muestra

Indt., autolisis

Infeccioso, micótico

Linfatico

Nutricional

Renal

Cardiovascular

Sin resultado

Choque

Endocrina

Sin alteraciones

Digestivo

Respiratorio

No realizado

Sin información

N° Casos

44

Correlación clínica – necropsia – histopatología (Figura 24).

A nivel respiratorio los casos con sospecha clínica fueron 9, a la necropsia se

diagnosticaron 37 y finalmente a la histopatología fueron 19, este valor debe

analizarse teniendo en cuenta el porcentaje de ausencia diagnóstica observado; 28

casos no presentaron diagnóstico clínico (Anexo 4), de ellos 12 resultaron con

alteraciones respiratorias, 9 cardiovasculares, digestivas y musculo esqueléticas con

3 cada uno, 4 casos fueron renales y nutricionales dos cada uno, y un caso fue de

sistema endocrino, finalmente 2 casos continuaron indeterminados, pero por

ausencia de información.

De los 32 casos con diagnóstico clínico de muerte súbita, 27 casos pudieron

esclarecerse a la necropsia ya que uno presentó un grado de autolisis severo y los 4

restantes no presentaron alteraciones patológicas a la necropsia, de estos a la

histopatología solo uno presentó lesiones (respiratorias), en los demás casos los

trastornos respiratorios fueron los de mayor presentación (8 casos), esta vez

seguidos de los nutricionales (6), los digestivos (4), cardiacos (3), músculo

esquelético y renal (2 c/u) y finalmente linfático al igual que nervioso un caso (Anexo

5). Los casos diagnosticados como traumatismos (17) a la clínica en la gráfica se

observan con nulidad a la necropsia e histopatología, se debe considerar que estos

diagnósticos a la necropsia exhiben lesiones a nivel músculo esquelético, de las

cuales hay 23 casos a la necropsia, 8 de los cuales corresponden a los 17

reportados en clínica, 3 no poseen información, 2 involucran lesiones respiratorias y

cardiovasculares, y los dos restantes uno es linfático y el otro digestivo.

Los casos categorizados dentro de pediatría a la necropsia describieron alteraciones

respiratorias, renales, cardiovasculares, endocrinas y un caso presento autolisis. La

eutanasia se presentó en 4 diagnósticos de clínica los cuales a la necropsia

evidenciaron problemas a nivel músculo esquelético. A la clínica no se observaron

casos que involucrarán al sistema cardiovascular, pero a la necropsia fueron

diagnosticados 11 y confirmados 5 a la histopatología, esto mismo fue observado en

el sistema linfático donde no hubo casos a la clínica pero si a la necropsia e

histopatología; al igual que con el sistema urinario con 5 casos reportados a la

necropsia y 2 a la histopatología. La categoría de trastornos en el balance de la

45

temperatura presentó 9 casos a la clínica, los cuales a la necropsia se distribuyeron

así, alteraciones nutricionales, digestivas y cardiovasculares presentaron 2 casos

cada uno, al igual que necropsias sin lesiones evidentes y caso restante involucró

sistema respiratorio.

Figura 24. Correlación entre los tres diagnósticos

Clasificación por sistemas de los hallazgos a la necropsia

Del total observado 14 casos no presentaron información de necropsia por lo cual se

muestran en la Figura 25 como casos sin información y poseen la línea de color

negro. El sistema respiratorio se encuentra en primer lugar de mayor presentación

de casuística con 90 de 136, el segundo lugar lo posee la inspección externa con 85

0 5 10 15 20 25 30 35 40

A esclarecer

Autolisis

Cardiovascular

Choque

Deshidratación

Digestivo

Endocrino

Error en la muestra

Infeccioso, micótico

Linfatico

Muerte súbita

Músculo esquelético

Nervioso

No presenta

No realizado

Nutricional

Pedriatria

Respiratorio

Sacrificio In extremis

Sin alteraciones

Sin información

Sin resultado

Temperatura

Tóxicológico

Traumatismos

Urinario

N° Casos Histopatología Necropsia Clínica

46

casos, los sistemas digestivo, cardiovascular, endocrino y urogenital ocupan los

lugares 3, 4 y 5 respectivamente, y al final se encuentran músculo esquelético,

nervioso y linfático este último con 21 casos.

Figura 25. Evaluación por sistemas a la necropsia.

Respiratorio

En este sistema la alteración más reportada fue la congestión tanto en pulmón como

en tráquea (40%), los trastornos infecciosos a nivel pulmonar también presentaron

gran frecuencia (21%) donde la neumonía es la principal. El edema pulmonar se

presentó en 14%, 2% de los casos presentaron autolisis (Tabla 4), en la Figura 26

se detallan las principales alteraciones observadas.

0 20 40 60 80 100 120

Urogenital

Respiratorio

Nervioso

Músculo-esquelético

Linfático

Inspección externa

Endocrino

Digestivo

Cardiovascular

N° Casos Sin información Con hallazgos Sin hallazgos

47

Tabla 4. Hallazgos reportados en sistema respiratorio

Figura 26. Alteraciones más importantes del sistema respiratorio, a) Superior

izquierda, neumonía necrótica moderada; b) Superior derecha, edema pulmonar

moderado; c) Inferior, vasos sanguíneos inter-anelares con moderada ingurgitación.

a) b)

c)

Fuente: Autor.

Hallazgo N° Casos

Autolisis 2 Múltiples órganos, congestión 63 Múltiples órganos, hemorragia 9

Pulmón, adherencia 15 Pulmón, antracosis 2

Pulmón, colapso 1 Pulmón, edema 22

Pulmón, enfisema 6 Pulmón, infarto 2

Pulmón, inflamatorio 34 Tráquea, contenido extraño 3

48

Inspección externa

La principal lesión fue la presencia de ectoparásitos (18%), donde el principal

reportado fueron las pulgas, la palidez de las mucosas (mucosas anémicas) obtuvo

un 15%, seguida de, efusión torácico-peritoneal y laceraciones con un 10% cada

una, el 2% dilatación abdominal, lesiones oculares, estado nutricional regular y

autolisis cada uno, 5% deshidratación y pelo hirsuto, 6% caquexia en diferentes

estadios, siendo moderada en 2 casos, 1% presentó prolapso de recto y pérdida de

un tercio de la mucosa anal por posible predación, la congestión de mucosas se

observó en el 4% de la población (Tabla 5).

Tabla 5. Hallazgos reportados a la inspección externa

Hallazgo N° Casos

Cadáver, abdomen, dilatado 3

Cadáver, alopecia 5

Cadáver, autolisis 3

Cadáver, caquexia 11

Cadáver, deshidratación 4

Cadáver, ectoparásitos 32

Cadáver, edema 2

Cadáver, efusión 17

Cadáver, estado nutricional, regular 3

Cadáver, hematoma 8

Cadáver, hemorragia 5

Cadáver, inflamatorio 4

Cadáver, laceración 17

Cadáver, lesión, ocular 3

Cadáver, pelo, hirsuto 4

Cadáver, traumatismo, herida, perforante 12

Cadáver. mucosa, anal, pérdida de 1/3 1

Mucosa, anal, prolapso 1

Mucosa, cianosis 3

Mucosa, congestión 7

Mucosa, hemorragia 3

Mucosa, pálida 26

49

Digestivo

En la Tabla 6 se detallan los hallazgos reportados, en primer lugar se encuentran

trastornos de origen inflamatorio, donde fueron observados glositis necrótica,

enteritis y necrosis lingual, dentro de las enteritis las acuosas, parasitarias y

hemorrágicas fueron las más comunes; en segundo lugar están los trastornos

vasculares congestión vascular y hemorragias; seguidos de las pérdidas de epitelio

(úlceras), donde los órganos de mayor frecuencia fueron lengua y abomaso; la

presencia de cuerpos extraños se reportó en 8 casos. En 6 oportunidades se

evidenció dilatación (Figura 27), la cual se asocia a timpanismo. Los demás

hallazgos presentaron menos de 4 reportes.

Tabla 6. Hallazgos en el sistema digestivo

Hallazgo N° Casos

Autolisis 2

Órganos TGI, congestión 32

Órganos TGI, dilatación 6

Órganos TGI, impactación 4

Órganos TGI, cuerpo extraño 8

Órganos TGI, hemorragia 9

Órganos TGI, úlcera 15

Órganos TGI, inflamatorio 39

Cavidad oral, 1 molar, ausencia 1

Órganos TGI, poco contenido alimenticio 2

Estómago, serosa, ventral, forma linear 1

Omento, nefroesplénico, tensionado 1

Generalizado, puntos negros 1

Intestino delgado, duodeno, pared, edema 1

Órganos TGI, adherencia 2

Rumen, traumatismo 4

50

Figura 27. Dilatación abdominal severa en un macho infante

Fuente. Autor

Cardiovascular

La cardiomegalia fue el hallazgo de mayor importancia en este sistema, observado

en 15 casos; los procesos inflamatorios ocuparon el segundo lugar solo 4 casos por

debajo del primero, donde el hallazgo principal fueron los nódulos miocárdicos con

compromiso pericardial; 9 casos presentaron efusión pericárdica, 8 infartos de

miocardio, 7 trombos, ese mismo número de casos presentó adherencias de

pericardio y miocardio (Tabla 7).

Tabla 7. Hallazgos en el sistema cardiovascular

Hallazgo N° Casos

Autolisis 2

Corazón, aumentado de volumen 15

Corazón, aurícula derecha, punción, iatrogénica 1

Corazón, congestión 2

Corazón, degeneración 1

Corazón, hemorragia 2

Corazón, infarto 8

Corazón, trombo 7

Múltiples órganos, inflamatorio 11

Múltiples órganos, adherencia 7

Pericardio, efusión 9

51

Endocrino

La autolisis se presentó en dos casos; el órgano de mayor importancia fue hígado,

en el cual la congestión junto a la megalia reportaron el mayor número de casos

(Figura 28), estos hallazgos también se reportaron en páncreas y glándulas

adrenales en un grado menor, los trastornos inflamatorios fueron evidentes en 9

casos, donde la nuevamente el hígado cumplió un papel importante con la presencia

de nódulos y granulomas a nivel de parénquima, en un caso se reportó la vesícula

biliar pletórica (Tabla 8).

Tabla 8. Hallazgos del sistema endocrino

Hallazgo N° Casos

Autolisis 2

Hígado, adherencia, diafragmática 2

Hígado, degeneración 4

Hígado, fibrosis 3

Hígado, friable 2

Hígado, ictericia 1

Hígado, inflamatorio 9

Múltiples órganos, congestión 21

Múltiples órganos, hemorragia 4

Múltiples órganos, megalia 17

Múltiples órganos, palidez 2

Vesícula biliar, pletórica 1

Figura 28. Hepatomegalia, O. virginianus, macho, infante

Fuente. Autor

52

Urogenital

En este sistema los hallazgos renales fueron los de mayor frecuencia; siendo la

congestión renal el más frecuente, la nefritis ocupó el segundo lugar, en 5

oportunidades se reportó vejiga pletórica; los órganos de reproductivo presentaron 3

reportes de hallazgos uterinos (Tabla 9).

Tabla 9. Hallazgos de sistema urogenital

Hallazgo N° Casos

Autolisis 2

Reproductivo, útero, cuello, engrosado 1

Reproductivo, útero, grávido 1

Reproductivo, útero, restos de placenta 1

Riñón, asimetría 1

Riñón, megalia 2

Riñón, estriaciones 4

Riñón, indiferenciación, cortico-medular 3

Riñón, adherencia 4

Riñón, nefritis 8

Riñón, congestión 15

Múltiples órganos, hemorragia 4

Riñón, pálido 3

Riñón, derecho, hematoma, múltiple 1

Riñón, friable 2

Riñón, grasa peri-renal, severa 1

Vejiga, pared, engrosamiento 1

Vejiga, pletórica 5

Músculo esquelético

Las fracturas se reportaron en 12 casos, en las cuales los huesos largos son los

más frecuentes a presentar fractura, en especial de miembros anteriores y

posteriores, aunque los huesos costales también son reportados con frecuencia, en

dos casos se presentó fractura de mandíbula; los hematomas son el segundo

hallazgo (10 reportes); a nivel inflamatorio se presentaron 7 casos de abscesos

53

mandibulares, los hallazgos denotan que en este sistema los trastornos

degenerativos no se han presentado (Tabla 10).

Tabla 10. Hallazgos a nivel músculo esquelético

Hallazgo N° Casos

Autolisis 2

Articulación, dislocada 2

Óseo, fractura 12

Múltiples tejidos, hematoma 10

Traumatismo 4

Múltiples tejidos, inflamatorio 7

Nervioso

A nivel nervioso solo se reportó la congestión como principal hallazgo (6 reportes), 2

casos presentaron autolisis y uno edema cerebral (Figura 29); en 16 reportes este

sistema no fue evaluado.

Figura 29. Edema cerebral discreto

Fuente. Autor

54

Linfático

Los linfonodos muestran un similar de reportes a los observados en bazo; el

principal hallazgo es linfomegalia a nivel de mesentéricos, reportado en 10 casos.

La palidez esplénica ocupa el primer lugar de los hallazgos en este órgano con 4

reportes, los demás hallazgos tanto esplénicos como linfáticos presentaron entre 1 y

2 reportes (Tabla 11).

Tabla 11. Hallazgos reportados en el sistema linfático

Hallazgo N° casos

Autolisis 2

Bazo, caudal, ruptura 1

Bazo, congestión 1

Bazo, friable 1

Bazo, hiperplasia de pulpa blanca 2

Bazo, pálido 4

Bazo, parénquima, nódulo, múltiple 1

Bazo, parénquima, puntos rojos 1

Ganglio, congestión 1

Ganglio, hemorragia 2

Ganglio, megalia 10

Causas de muerte

La categorización de los diversos procesos que desencadenan la muerte de un ser

vivo es de importancia para el desarrollo de estrategias de manejo poblacional, para

este caso, se usó la clasificación empleada por Matushima (2007): colapso

respiratorio, colapso cardiorrespiratorio, choque neurogénico, choque séptico,

choque endotóxico, choque hipovolémico, inanición, sacrificio In extremis e

indeterminado. La Figura 30 presenta los resultados de la clasificación donde la

categoría indeterminado posee el primer puesto debido al análisis de los hallazgos

reportados en las necropsias, muchas veces, estos no explican la muerte del

paciente, por ende es válido clasificar en indeterminado, ya que de esta manera se

pueden realizar otras técnicas o pruebas para determinar la causa de muerte del

55

animal, en segundo lugar se encuentra el colapso respiratorio, esto asociado a la

numerosa presentación de alteraciones que afectan la fisiología de este sistema

tanto directas como indirectas, los choques séptico y neurogénico se encuentran en

3 y 4 lugar ya que en algunos casos de observaron hallazgos compatibles con

sepsis y con alteraciones nerviosas directas pero principalmente indirectas, el

colapso cardiorrespiratorio se observó en menor cantidad a igual que el choque

hipovolémico, el sacrifico In extremis fue dado en 7 casos debido al criterio del

profesional a cargo, finalmente el choque endotóxico y la inanición fueron las

categorías de menor frecuencia. La mortalidad presentada en 2006 no posee

patrones similares para determinar un evento de importancia en la población.

Figura 30. Identificación de las causas de muerte para la población

0 10 20 30 40 50 60

Inanición

Choque endotóxico

Choque hipovolémico

Sacrificio In extremis

Colapso cardiorespiratorio

Choque neurogénico

Choque séptico

Colapso respiratorio

Indeterminado

N° casos Sin información

56

DISCUSIÓN

El protocolo aquí propuesto es novedoso, debido a que presenta de manera

detallada el paso a paso para el abordaje clínico de la especie (incluyendo el

condicionamiento previo), con respecto a los documentos de la revisión de literatura,

donde se encontraron protocolos de manejo para cérvidos en los cuales el

componente clínico no es abordado en detalle, mientras que los datos de manejo

nutricional e infraestructura son más profundizados, a nivel médico-veterinario la

información encontrada se remite a las principales enfermedades infecciosas y no

infecciosas que posee la especie (The Wildlife Society, sf; Michigan Department of

Natural Resources and Environment, sf.), el protocolo con mayor temática

encontrado es el manual de cuidado para tapíridos de la AZA (2013).

Protocolo anestésico

La tabla 12 presenta una comparación las dosis reportadas para inmovilización de

cérvidos, en cuanto a la ketamina la dosis de 7,14± 3,39 mg/kg fue relativamente

mayor a las dosis reportadas en la literatura, ya que Muller et al., (2007) empleó una

dosis de 7.8 mg/kg pero nuestra SD es de 3.39 mg/kg, la dosis más baja fue de 2

mg/kg reportada por García et al. (1998) en ciervo ibérico. En cuanto a la xilacina la

dosis empleada se encuentra en los rangos que reporta la literatura 0.48-2.2 mg/kg.

Tabla 12. Relación dosificación de ketamina y xilacina para la inmovilización de

cérvidos

Autor ±-

SD

Kreeger et al. (1986)

Wallingford et al. (1996)

García et al. (1998) +

Monteith et al. (2012) *

Muller et al. (2007)

Ketamina (mg/kg)

7.2± 3.4 4,75 1,8 - 4,4 2 1,92 7,8

Xilacina (mg/kg)

0.81±

0.2

1,58 1,1 - 2,2 0,8 0,48 1,6

* Empleando T/Z

+ Protocolo empleado en Cervus elaphus hispanicus

57

García y colaboradores (1998) usaron X 0.8 mg/kg y K 2 mg/kg, en 10 hembras de

la especie Cervus elaphus hispanicus, el tiempo de inducción fue de 2.1 min con un

rango entre 1 y 5 minutos, 3.5 min por debajo del tiempo de inducción presentado

en este estudio. Monteith y colaboradores emplearon Tiletamina-Zolazepam (T-Z) a

2.41 mg/kg junto a K y X, disminuyendo las dosis de K y X así: K 1.92 mg/kg y X

0.48 mg/kg, lo cual es significativo por disminución de los volúmenes, protocolo

empleado para la captura de O. virginianus en vida libre. Con T-Z/K/X el periodo de

recumbencia esternal fue de 8.65 min, el de recumbencia lateral de 12.11 min

(Monteith et al., 2012), este primero un minuto por debajo del observado en esta

investigación 9.9+/- 8.8 min, empleando solo K/X.

Después de la aplicación de xilacina disminuye el interés por los estímulos externos

posteriormente se presenta bradicardia, bradipnea y depresión pulmonar (García et

al., 1998) en esta investigación se pudo presenciar la disminución a los estímulos

externos, pero al haber aplicado la xilacina junto a la ketamina no podemos afirmar

que dicho efecto sea causado por esta o por su sinergismo con la ketamina.

A dosis elevadas de xilacina se puede observar parálisis lingual, la cual se observa

por visualización de la lengua fuera de la boca, también se puede generar un

aumento en la producción de saliva, la cual sale al exterior de la cavidad oral

(García et al., 1998); En dos individuos donde se emplearon dosis de 1 y 1.1 mg/kg

se observó la parálisis lingual, pero sin presentación de sialorrea, aunque en un

individuo la dosis empleada fue de 1.8 mg/kg y no observado ninguno de estos

efectos. Así como sugiere García et al. (1998), durante el periodo de inducción los

animales inclinaron la cabeza, perdieron estación y se posicionaron primero en

decúbito esternal y finalmente en decúbito lateral (Figura 31).

58

Figura 31. Posicionamientos post-aplicación IM de XK. a) Imagen izquierda,

posicionamiento en decúbito esternal, b) Imagen derecha, posicionamiento en

decúbito lateral izquierdo.

a)

b)

Fuente: Correa, 2013.

La yohimbina se ha empleado a 0.25mg/kg, con reincorporación en 2 minutos post-

aplicación, un estudio donde fue exitoso en 8 de 10 individuos (García et al.,1998),

en este caso se empleó a 0.3mg/kg, presentando un tiempo total de anestesia de

61,8+/- 12.7 min, la yohimbina se suministró al minuto 60 post-aplicación de xilacina,

59

es decir se presentó un tiempo de 1.8 minutos en promedio, en el protocolo

realizado se mantuvo al animal tranquilo durante 5 minutos post-aplicado, y después

se estimulaba para inducir su reincorporación, esta fue exitosa en 17 de los 18

animales. Monteith y colaboradores (2012) emplearon el antagonista 47.3 post-X, a

dosis de 0.11 mg/kg, teniendo un tiempo de recuperación de 74.5 ± 13.1 min,

aunque en dicho estudio se evaluó el efecto de la Tolazolina como antagonista

observando un tiempo de recuperación de 12.5 ± 12.3 min a dosis de 4 mg/kg, por

lo cual reportan mejores efectos con este principio activo, teniendo en cuenta el

periodo de recuperación presentado en este estudio, en condiciones de cautiverio y

procedimientos cortos el protocolo empleado por nosotros es recomendado.

Hemograma

El promedio de glóbulos rojos presentado (9.96 x 106 µL) difiere con los reportados

en la literatura para O. virginianus, ISIS (2002) 12.01 x 106 µL, Lovera (2011) en un

estudio realizado Perú con animales en cautiverio determinó este parámetro en

10.12 x 106 µL, mientras que Powell y DelGuicide (2005) en 7.8 x 106 µL para

neonatos; teniendo en cuenta las condiciones ambientales y de distribución el

estudio de Lovera se asemeja más a este, por los cual la comparación se realizó

con el mismo; el hematocrito, hemoglobina, volumen corpuscular medio,

hemoglobina corpuscular media y concentración de hemoglobina corpuscular media

observados en este trabajo fueron mayor con relación a los valores presentados por

Lovera (2011), esto puede deberse a las diferencias reportadas en altitudes

mayores (Claxton y Ortíz, 1996), teniendo en cuenta que Lima, Perú se encuentra al

nivel del mar y Tocancipá a 2650 smnm; Estudios en otras especies como ciervo

común (Marco y Lavin, 1999; Topal et al., 2010) y en ciervo del pantanal (Szabó et

al., 2005) presentan diferencias de hasta dos unidades en la mayoría de analitos, el

trabajo realizado por Topa y colaboradores (2010) es el que presenta mayor

similitud en los valores, pero se debe tener en cuenta que son dos especies

diferentes y las condiciones ambientales también difieren.

60

Diarrea viral bovina

Técnicas diagnósticas - ELISA

En este estudio se tomaron muestras del 62.5% de la población, de los cuales el

90% fueron individuos negativos, 5% sospechosos y 5% positivos, el individuo

sospechoso corresponde a un neonato (hembra) el cual se encontró muerto en el

encierro, al realizar la evaluación clínica se decidió realizar venopunción tanto

femoral como intracardiaca; una vez identificada la madre de este cervatillo se

capturó al examen serológico este individuo corresponde al positivo, por lo cual se

deja abierta la posibilidad de trasmisión en periodo pre natal o perinatal de este

agente, aunque también se pueden atribuir estos niveles de anticuerpos con la

inmunidad materna (Smith y Grotelueschen, 2004).

Teniendo en cuenta el fundamento de la técnica (cuantificación de anticuerpos

específicos a una proteína no estructural “p80/125”), y que esta población no ha

expuesta a vacunación, la evidencia de reacción inmune en este individuo se

atribuye a multiplicación post-infección. Un estudio similar fue realizado por

Kirchgessner et al. (2012) empleando un kit comercial diferente, donde tomaron

muestras de O. virginianus en Nueva York y Pennsylvania con prevalencia de 6.01%

y 0.34% respectivamente, las muestras sospechosas y positivas se confirmaron

mediante seroneutralización.

En California se realizó un estudio para monitorear el estado sanitario del venado

bura (Odocoileus hemionus), donde VDVB presentó prevalencia de 17.1%, para

2619 muestras tomadas entre 1990-2007 (Roug et al., 2012). En bovinos se han

comparado las técnicas de neutralización viral (NV) y ELISA, esta última presentó

una sensibilidad menor, es decir de 64 muestras positivas logró identificar 60, es

decir, una sensibilidad de 93.75% (Zarkov y Jarullah, 2012), aunque Beaudeau et al.

(2001) y Solis-Calderon et al. (2005) postulan sensibilidad de 96.9 - 97.9% y

especificidad entre 97.3-97.9% para ELISA indirectos y de bloqueo, en sueros de

bovino. Los antígenos E2, E0 y NS3 revelan especificidad entre 98.6-100% aunque

su sensibilidad es menor 76.9-93.8%, siendo NS3 el mejor (Chimeno Zoth y Taboga,

2006).

61

Los estudios que involucran VDVB en O. virginianus describen prevalencias entre

0.34 y 63%, realizados en poblaciones In situ de Estados Unidos y México (Aguirre

et al., 1995; Cantú et al. 2008; Kirchgessner et al., 2012), cabe resaltar que en la

mayoría de las investigaciones VDVB se encuentra dentro del panel de agentes

infecciosos. En infecciones experimentales se ha demostrado que los individuos

pueden estar seronegativos pero mediante técnicas biológica como RT-PCR

demostrar la presencia del virus, e incluso mediante hisopados nasal y rectal tener

resultados positivos en aislamiento viral (AV) e hibridación In situ (HIS) (Raizman et

al., 2009). En 2007 Passler y su grupo de estudio demostraron la presencia de un

venado coliblanco persistentemente infectado, con el genotipo DVB-2, diagnosticado

mediante aislamiento viral, IHQ y RT-PCR.

Desarrollo clínico

El examen clínico del cervatillo sospechoso evidenció: a) condición nutricional

regular determinada por el grado de desarrollo de musculatura esquelética y su

relación con la palpación y visualización de accidentes óseos y b) pelaje hirsuto, los

demás órganos y sistemas no presentaban anormalidades; el estado nutricional

regular se encuentra relacionado con estados caquécticos y pelaje hirsuto, signos

evidenciados en infección con VDVB-1 (Tessaro et al. 1999, Flores et al., 2000); por

otro lado, la infección con VDVB-2 es caracterizada por: anorexia progresiva, atonía

ruminal, diarrea parda oscura sanguinolenta, tenesmo, deshidratación, congestión

conjuntival, disnea, secreción nasal muco-purulenta e incluso muerte, este cuadro

puede desarrollarse entre 7 y 10 días post-infección (Flores et al., 2000). Según los

estadios de infección fetal propuestos por Grooms (2004), este individuo pudo

contraer la infección en los 2 últimos tercios, ya que en estos el individuo puede

desarrollar inmunotolerancia (2/3) o simplemente ser seropositivo (3/3), en los dos

casos el individuo no exhibe signos clínicos de enfermedad, cabe aclarar que las

infecciones en tercio medio pueden ocasionar abortos y alteraciones congénitas, las

cuales favorecen la muerte peri-natal. Ridpath y su grupo de estudio en 2012

determinaron que los efectos del virus en O. virginianus infectados en segundo y

62

tercer tercio de gestación son similares a los observados en bovinos (abortos o

animales con serología negativa pero niveles de anticuerpos maternos).

En el estudio retrospectivo el 47.79% de la mortalidad observada involucró neonatos

e infantes, con un promedio de 3 individuos por año, teniendo en cuenta el hallazgo

del individuo sospechoso, es necesario analizar si la mortalidad de este grupo etario

está relacionada con VDVB directa o indirectamente.

La hembra positiva no presentó alteraciones al examen clínico, esto puede deberse

al carácter asintomático del VDVB en cérvidos (Chase et al., 2008): en 1999

Tessaro y colaboradores evaluaron el desarrollo de infección experimental en

Cervus elaphus, siendo de curso asintomático, por otro lado se evidenció la

seroconversión de un individuo del grupo control que estuvo en contacto con

animales infectados, demostrando que la especie es susceptible a la infección y

puede transmitirla a otros individuos. En 2007 Ridpath y colaboradores observaron

evolución clínica de cervatillos infectados, donde la fiebre y la linfopenia fueron los

hallazgos de mayor importancia. De esta manera se puede probar que la infección

es similar en venados y en bovinos.

Exámenes paraclínicos

El hemograma y química sanguínea del cervatillo sospechoso reveló: a)

hematocrito, hemoglobina y VCM elevados, b) leucocitosis con neutrofília, monofilia,

c) trombocitopenia, las enzimas AST y ALT se encontraron por debajo del rango

mientras que el BUN elevado; la leucocitosis puede asociarse a los hallazgos a la

necropsia (ver siguiente párrafo), por otro lado, la trombocitopenia es un hallazgo

común en infecciones con VDVB según Lértora (2003) y Rondón (2006). Se ha

reportado que en terneros con alteraciones inmunológicas, estas se pueden

relacionar a infección con VDVB, la cual se puede cuantificar mediante IHQ por

marcación de antígeno a nivel de megacariocitos y células mieloides (Spagnuolo et

al., 1997). Mientras que los exámenes paraclínicos de la hembra positiva no

evidenciaron alteraciones compatibles con infección por VDVB, el hemograma se

encontró dentro de los rangos, mientras que la enzima GGTP estuvo elevada y

63

albumina, bilirrubinas (indirecta, directa y total), AST y colesterol total se

encontraron discretamente por debajo del rango.

Necropsia

Al examen necroscópico se observó: enteritis acuosa discreta y congestión

pulmonar discreta; En el estudio retrospectivo el 22.79% presentaron colapso

respiratorio como causa de muerte, mientras que el 66.17% de la población

presentó alteraciones respiratorias a la necropsia, los principales hallazgos fueron:

congestión pulmonar moderada a severa, pleurobronconeumonia exudativa

moderada a severa y edema pulmonar severo; la congestión pulmonar

principalmente se presenta como medida de protección (migración de leucocitos)

ante un proceso infeccioso en estadio inicial (Ridpath, 2010b).

Los individuos 1, 3, 11(19), 14, 15, 16 y 20 fallecieron durante el estudio, a la

necropsia se pudo evidenciar que los 6 individuos presentaron un estado nutricional

regular, también se observó neumonía exudativa severa en 3 animales (1, 3, 11(19))

los cuales eran 2 machos y una hembra adultos, los casos 14, 15 y 16 corresponden

a 3 neonatos uno de ellos sospechoso, ninguno de estos animales presentó signos

en común, el individuo 20 tuvo una fractura completa de tarso, se realizó

intervención quirúrgica pero al poco tiempo reincidió en la fractura después del

examen médico-veterinario se optó por la eutanasia

Diéguez et al. (2009) postula una posible relación entre poblaciones positivas a

VDVB y la presentación de neumopatías; así mismo, se reporta que los trastornos

respiratorios y entéricos son observados en infecciones por VDVB, ya que el efecto

inmunosupresor hace que otros agentes infecciosos como: Rinotraqueitis Infecciosa

Bovina (IBR), Parainfluenza-3 (PI-3), Mycoplasma bovis y Mannheimia haemolytica

se replique en el individuo generando los cuadros infecciosos y patológicos

conocidos en cérvidos (Orr, 1991; Aguirre et al., 1995; Dyer et al., 2004; Ridpath,

2010a; Maggi et al., 2013). Ridpath (2010a) postula que el desarrollo del cuadro

clínico es favorecido por factores como: la virulencia de la cepa, el tiempo de

exposición, el tipo de infección y la presencia de patógenos secundarios, aunque los

64

animales PI tienen mayor riesgo de mortalidad respiratoria, debido a infecciones

secundarias. Los trastornos dermatológicos también pueden estar asociados a este

agente (Odeón et al., 2003).

En cuanto a la mortalidad perinatal, el 45% de los casos posee información de

histopatología donde se observa que el 30% presentaron trastornos a nivel de

sistema respiratorio y el 13% trastornos digestivos (Figura 32). A nivel respiratorio

las neumonías intersticiales y las bronconeumonías purulentas fueron las de mayor

importancia, y las cuales pueden estar relacionadas con Mycoplasma bovis o

Mannheimia haemolytica, dos agentes que se favorecen de los efectos

inmunosupresores de VDVB (Dyer et al., 2004; Maggi et al., 2013). Se ha

determinado que en infecciones asociadas entre VDVB y Neospora caninum se

favorece la presentación de abortos (Stahl et al., 2006 y de Melo et al., 2004).

Figura 32. Principales causas de mortalidad en neonatos

Colombia y VDVB

La literatura menciona que en Colombia se desconoce la presencia de los genotipos

y subgenotipos de VDVB, la investigación ha revelado su importancia dentro del

complejo reproductivo, al generar pérdidas por abortos, aumento de días abiertos,

Respiratorio 30%

Digestivo 13%

Endocrino 20%

Cardiovascular 7%

Séptico 7%

Deshidratación severa

3%

Urinario 3%

Sin lesiones 17%

65

baja calidad de semen de los reproductores, disminución en la reproducción y

costos en el tratamiento así como su asociación al complejo respiratorio bovino, las

pérdidas estimadas por el complejo reproductivo ascienden a 44.000.000 millones

de pesos anuales, donde se cree que gran parte de estas involucran VDVB (Vargas

et al., 2012);

Mortalidad

Para el estudio retrospectivo la principal causa de muerte fue el choque respiratorio

(22.79%), seguido de choque séptico (11.76%), choque neurogénico (11.03%),

colapso cardiorrespiratorio (8.09%), choque hipovolémico y sacrificio In extremis

(5.15%) cada uno, choque endotóxico (1.47%) y finalmente inanición (0.74%).

Estudios en poblaciones In situ denotan que los eventos traumáticos

(intraespecificos, autoinducidos e interespecificos) o inducida por actividades

antrópicas como los atropellamientos son la principal causa (Dinkines et al., 1992;

Nettles et al. 2002; Vreeland et al., 2004). Un estudio descriptivo determinando la

mortalidad de poblaciones In situ de Capreolus capreolus en Suecia, determinó: que

los traumatismos (19%) son la principal causa de muerte, seguido de inanición

(18%), Enteritis y gastritis (15%), infecciones bacterianas (11%), infecciones

parasitarias (11%), enfermedades sistémicas (11%), neoplasias (2%) y finalmente

desordenes congénitos (1%) (Aguirre et al., 1999).

Mientras que en poblaciones ex situ las causas varían; según Hattel et al. (2004),

procesos infecciosos como bronconeumonías, enterocolitis son las principales

causas de mortalidad, aunque la desnutrición y los traumatismo también son

frecuentes.

Se conoce el riesgo de la especie a desarrollar abscesos intracraneales

desencadenados principalmente por Arcanobacterium pyogenes, ingresando por vía

dérmica, este proceso ocasiona eventos de mortalidad en Estados Unidos (Karns et

al., 2009).

66

Mediante este trabajo se realizó un abordaje integral a una población de O.

virginianus con el fin de determinar el estatus epidemiológicos hacia VDVB, para ello

se postuló un protocolo de manejo clínico el cual fue basado en el acercamiento

metodológico desarrollado; este acercamiento demostró la efectividad del

condicionamiento operante al capturar individuos mediante técnicas de aplicación

farmacológica a distancia, ya que durante los abordajes anestesiológicos no hubo

complicaciones cardiorrespiratorias y sistémicas (P.e. parada cardiorrespiratoria,

miopatía de captura) presentadas en individuos sometidos a procesos agudos de

estrés (Koncan et al., 1980; Beringer et al., 1996).

Con los resultados serológicos se evidenció el desarrollo de actividad inmunológica

en la población, la cual se vio reflejada en el individuo positivo, con lo cual se deja

abierta la posible presencia del VDVB en la población, debido a la baja expresión

inmunológica de los individuos se postula la posible presencia de una cepa no

citopática, debido a que la reacción inmune en estas cepas es menor a comparación

de cepas CP.

El individuo positivo se capturo por segunda vez 57 días después dando resultado

negativo, lo cual se puede asociar al periodo de viremia de este agente por lo cual

57 días después los niveles de anticuerpos pueden encontrarse disminuidos; por

otro lado, como la técnica es diseñada para identificar animales PI (bovinos) no es

conocido como es el PI a nivel inmunológico en cérvidos, por lo cual se deja abierta

la posibilidad de que este individuo sea inmunotolerante (Passler, 2007; Passler,

2008; Roug et al., 2012).

67

5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

Conclusiones

Mediante el protocolo de manejo clínico diseñado e implementado se proporciona

un protocolo anestésico práctico, eficiente y eficaz, así como la facilidad de emplear

los formatos utilizados por la institución. También se logra obtener un rango de

parámetros hematológicos y de química sanguínea para la especie en condiciones

de cautiverio, y en altitud mayor a 2500 msnm.

La utilización del condicionamiento operante en poblaciones de cérvidos es

adecuada para disminuir los niveles de estrés al momento de la captura, así como

favorece la aplicación de fármacos anestésicos a distancia ya que reduce la

distancia del operario y el individuo a capturar. Así mismo el condicionamiento

puede llegar a brindar la posibilidad de tomar muestras (p.e. hisopados, saliva,

secreción nasal y pelo) sin tener que realizar inmovilización química. Por otro lado,

el condicionamiento se dificulta debido al carácter social de la especie, ya que los

individuos de mayor jerarquía limitan el acercamiento al operario de individuos de

menor jerarquía.

El protocolo anestésico brindó resultados adecuados tanto en el funcionamiento

cardiorrespiratorio de los individuos intra y post-anestesia, así como en los tiempos

de inducción y recuperación, los volúmenes utilizados no sobrepasaron los 3 mL lo

cual facilita el ingreso de la mezcla anestésica al momento del impacto del dardo, el

volumen también facilita el uso de dardos tamaño pequeño, lo cual favorece al

operario ya que al utilizar cerbatana se puede obtener mayor distancia de disparo.

Se demostró la presencia de anticuerpos específicos para VDVB en la población

cautiva de venados coliblancos; con lo cual se brinda información de importancia

para el monitoreo de VDVB en poblaciones de venados cola blanca, teniendo en

cuenta su importancia en la interfaz con animales de producción como bovinos.

También se demuestra que debido a las características inmunológicas del virus, la

transmisión, la replicación y el cuadro clínico desarrollado en venados se hace

68

necesaria a aplicación de dos técnicas diagnósticas para confirmar la presencia del

agente en un individuo o una población

Mediante el desarrollo del estudio retrospectivo de observó la importancia de un

buen diagnóstico clínico, la realización de una técnica necroscópica adecuada, la

descripción adecuada de alteraciones, el análisis de los hallazgos y la importancia

del diagnóstico histopatológico para la determinación de mortalidad en una

población con el fin de desarrollar estrategias de control.

Recomendaciones

La determinación de anticuerpos relacionada con los efectos secundarios y sus

consecuencias hacen de vital importancia la aplicación de otra técnica diagnóstica

para confirmar la sospecha de VDVB, el autor recomienda una técnica de

aislamiento viral o antigénica. Por lo cual, para obtener resultados de mayor

impacto, se recomienda para futuros estudios emplear dos técnicas diagnósticas

una que evalúe anticuerpos y otra que determine antígenos o el agente como tal.

También se recomienda la captura de la totalidad de la población estudiada,

principalmente de los machos para determinar la presencia de animales PI.

Se recomienda evaluar otros protocolos anestésicos, para aumentar el espectro

farmacológico, teniendo en cuenta que los resultados con este protocolo fueron

óptimos, se podrían evaluar otros fármacos como Tiletamina-Zolazepam,

Dexmedetomidina, Azaperona y Butorfanol, entre otros, ya que estos fármacos

actualmente son usados para la inmovilización de cérvidos en el mundo.

Se recomienda crear un banco de sueros para que de tal forma se puedan

conservar muestras que en estudios futuros ayuden a incrementar la muestra (n) del

investigador y de esta forma realizar una evaluación sanitaria de poblaciones a largo

plazo.

Valdría la pena evaluar el estatus epidemiológico de las demás especies de

cérvidos colombianos hacia este agente con miras a futuros planes de monitoreo de

fauna silvestres, en este caso de importancia por su interfaz doméstico-silvestre.

69

6. BIBLIOGRAFIA

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Zúñiga H., A., Rivera G., H., Araínga R., M. y Manchego S., A. 2006. Evaluación de

anticuerpos contra el virus de la diarrea viral bovina de un hato en proceso de

82

erradicación de la enfermedad. Revista de Investigaciones Veterinarias del Perú.

Vol. 17(1): 44-50.

83

Anexo 1. Protocolo de manejo de venado coliblanco (O. virginianus) en colecciones

zoológicas.

Objetivo

Proporcionar a instituciones zoológicas una guía de manejo clínico para venado

coliblanco, con énfasis en manejo químico, examen clínico y toma de muestras

Introducción

El manejo médico de animales en cautiverio es una herramienta indispensable en

colecciones zoológicas, teniendo en cuenta herramientas como el entrenamiento

este manejo puede ser cada vez menos traumático y estresante para los animales;

los venados son animales que por sus condiciones en vida libre suelen ser muy

nerviosos, en cautiverio se han adaptado con buenos resultados, en general el

manejo médico suele ser traumático y de dificultad, por lo cual el condicionamiento

operante es una herramienta con grandes ventajas al ser usada en la especie, con

ella se pueden estimular conductas como la adaptación y el acercamiento a

personal dentro del encierro, con lo cual la administración de medicamentos (orales)

puede ser satisfactoria, así como el manejo químico de los animales. Este protocolo

brinda a las instituciones una guía básica de manejo clínico de venado coliblanco.

Pasos

1. Observación preliminar del estatus sanitario:

Esta observación se realiza previa a la captura, su objetivo es seleccionar el o los

individuos a capturar, para ello, se debe conocer el objetivo del procedimiento (p.ej.

evento medico de importancia (absceso, fractura, neumopatía, enteropatía, etc.),

marcaje, toma de muestras para chequeos sanitarios (sanguíneas, hisopados,

biopsias, etc.); una vez tenga identificado el individuo, debe realizar una evaluación

médica con la cual determine el estado general del animal, en el examen debe tener

en cuenta: el comportamiento del animal solo e interactuando con otros individuos,

la conducta del animal con el personal de la institución (condicionamiento, ver más

84

adelante), si presenta signos de enfermedad (consistencia heces, secreciones en

mucosas, tos, signos neurológicos, etc.), si se decide realizar la captura del animal

esta información deberá quedar registrada en el formato de evolución del individuo.

2. Contención química:

Evaluación estado sanitario del animal: esta evaluación es similar a la presentada

en el paso 1, solo que esta se realizada justo antes de la captura del animal, de ella

depende la captura, ya que animales con signos de estrés no van a presentar una

respuesta anestésica adecuada, así como el riesgo a presentar de miopatía de

captura, esta evaluación se registra en el formato de anestesia , en la casilla de

observaciones (el formato de anestesia puede ser el empleado por su institución, en

este protocolo se presenta el formato empleado en la institución donde se realizaron

las capturas).

Evaluación de condiciones ambientales: es de suma importancia antes de

planear la captura evaluar las condiciones ambientales (precipitación y temperatura

principalmente), ya que si su institución no posee infraestructura para evitar las

condiciones ambientales, el manejo químico puede ser riesgoso para la salud del

animal (hipotermia o hipertermia), aunque este factor no es indispensable para la

realización de la captura (puede trasladar el animal a la clínica y mantener control

de temperatura en ella).

Evaluación logística: esta evaluación se realiza previa a la captura, en ella se

deben preparar todos los instrumentos y materiales que vaya a emplear, se

recomienda llenar una hoja de chequeo (protocolo recomendado Ketamina 7.2+/- 3.4,

Xilacina 0.81+/- 0.2, usando Yohimbina 0.3 mg/kg como antagonista.

Preparación de material: en este paso se deben armar y probar los equipos que va

a emplear para la contención: dardos y equipo de aplicación del dardo (cerbatana,

pistola de aire comprimido, o la que posea su institución), posteriormente con las

dosificaciones previamente realizadas se arma el dardo y deja cargado (bajo

supervisión de una persona).

Captura: para la captura usted debe cumplir las cuatro actividades anteriores, debe

tener en cuenta que con la cerbatana usted alcanza máximo 15 metros de distancia

(con viento a favor), con la pistola se pueden alcanzar distancias de 30 metros; sin

tener en cuenta la técnica a emplear, usted deber realizar un acercamiento

despacioso y con cuidado de no alterar la población, en este paso el

condicionamiento de los animales juega un papel importante, ya que con este las

distancias entre el veterinario y el animal se pueden disminuir considerablemente

85

(Tenga en cuenta que durante el procedimiento se debe llenar el registro de

anestesia).

Nota: una vez el animal este bajo los efectos anestésicos y se realice la contención

física debe iniciarse el monitoreo cardiaco, el monitoreo respiratorio debe realizarse

durante todo el procedimiento; este debe realizarse minuto a minuto registrando en

el formato cada 5 minutos, la temperatura debe tomarse mínimo tres veces (inicio,

intermedio y final).

3. Contención física

Tenga en cuenta que la contención física se debe realizar con el animal bajo

anestesia para seguridad tanto del personal como del animal. El manejo debe incluir

mínimo tres personas distribuidas así: miembros anteriores, miembros posteriores y

cabeza, los miembros se deben sujetar por encima de tarsos y carpos haciendo

énfasis a la inmovilización de estos, la cabeza se sujeta desde los occipitales (si es

macho de la base de las astas).

Nota: durante la contención física se deben cubrir los ojos con un textil negro, para

limitar la visión del individuo y de esta manera brindar mayor calma al animal.

Posicionamiento: el animal se debe posicionar en decúbito lateral izquierdo para

favorecer la salida de gases y evitar el timpanismo, continuando con la sujeción de

miembros y cuello.

Manejo intra y post-operatorio: debe tener en cuenta que el animal todo el tiempo

debe mantenerse con sujeción física.

4. Examen clínico

Para la realización del examen clínico se debe llenar el formato empleado en su

institución.

Anamnésicos: en este se llenan los datos de identificación del animal así como una

breve reseña del paciente.

Inspección general y signos vitales: se evalúan el estado de condición corporal,

el estado general, el estado de hidratación y las constantes fisiológicas.

Evaluación sistemática: evaluación de cada uno de los sistemas para determinar

signos de enfermedad (piel y pelaje, cavidad oral, sistema digestivo, respiratorio,

circulatorio, reproductivo, músculo esquelético, linfático, urinario y nervioso).

86

Lista de problemas y diagnósticos diferenciales: una vez tenga sus resultados

clínicos debe realizar la lista de problemas para determinar los diagnósticos

diferenciales

Nota: deben registrarse los medicamentos aplicados con dosis del fármaco, dosis

aplicada y concentración del producto.

5. Toma de muestras

Sanguínea: se emplea la vena yugular izquierda, para ello el animal debe

encontrarse bajo anestesia, se posiciona en decúbito lateral derecho, los miembros

anteriores se dejan pegados al cuerpo pero estirados y la mandíbula se deja en

ventro-extensión con el fin de dejar expuesto el cuello, justo antes de la entrada al

tórax se realiza una ligera presión en el canal yugular para visualizarla a lo largo del

cuello, posteriormente se aplica alcohol como método de desinfección y al mismo

tiempo para visualizar el vaso, para la venopunción se emplea aguja hipodérmica de

calibres 21½ o 16G y jeringa de 10 mL o venoject® con camisa, para ingresar al

vaso se posiciona la jeringa a 45° aproximadamente y se ingresa aproximadamente

1,5 cm de la aguja de forma paralela al surco yugular. Al obtener la muestra

sanguínea se coloca en tubos sin anticoagulante par suero y con EDTA para sangre

completa.

Órganos:

Técnica de necropsia por abordaje lateral

Este abordaje se realiza cuando el tamaño del animal imposibilita el abordaje por

línea media, o en sospechas de problemas respiratorios para realizar una extracción

de un gradíl costal, esta técnica de describe debido a episodios de mortalidad que

se pueden presentar post-captura, los cuales deben esclarecerse con necropsia u

otras herramientas diagnósticas.

a. Posicionamiento

En esta técnica el cadáver se posiciona en decúbito lateral derecho, en los

rumiantes es de importancia ya que de este modo el rumen queda expuesto y se

disminuye la probabilidad de perforación de órganos.

87

Figura 1. Posicionamiento en decúbito lateral.

b. Extracción de miembros contralaterales

Ya posicionado el cadáver se procede a retirar los miembros anterior y posterior

izquierdos, El miembro anterior izquierdo se retira realizando un corte a nivel axilar y

se separa la fascia subescapular hasta retirar el miembro; para el pelviano se realiza

un corte de musculatura glútea y femoral hasta llegar a la articulación coxofemoral,

en la articulación se inciden todos los ligamentos y se desarticula cabeza de fémur

de fosa acetabular (Figura 2 y 3).

Figura 2. Extracción de miembros anterior

}

88

Figura 3. Extracción de miembros posterior

c. Primera abertura

Se realiza el mismo corte que en la técnica anterior, pero en esta, se separa la piel

desde el corte hasta la línea dorsal desde la región cervical alta hasta el sacro

(Figura 4).

Figura 4.Primera incisión

d. Visualización de cavidades

Mediante esta técnica se obtiene una visualización lateral de ambas cavidades, para

el examen de cavidad se realiza un corte de peritoneo que bordeé la cavidad; para

89

despejar la cavidad torácica se cortan las costillas a nivel de unión costo-esternal en

un extremo y vertebral en el otro (es necesario antes realizar la prueba de presión

negativa) (Figura 5).

Figura 5. Cavidades torácica y abdominal

e. Extracción de lengua

Se realiza un corte a nivel de la sínfisis mandibular por la cara medial abarcando

toda la superficie de la rama mandibular, dicho corte se realiza en las dos ramas,

posteriormente, se exterioriza la lengua a nivel de los cortes por el plano ventral, al

exteriorizar lengua se corta paladar blando hasta llegar a epiglotis y separar lengua,

tráquea y esófago de columna vertebral (es recomendado que dichas estructuras se

aíslen con la menor cantidad de tejido subcutáneo y muscular), este corte se realiza

hasta la entrada a cavidad torácica.

f. Extracción de primer conjunto

Una vez se tenga visualizada la cavidad se cortan nervios y paquetes vasculares

encontrados a la entrada de cavidad, se visualiza el esófago, se coloca una pinza

hemostática antes de cruzar el diafragma y se corta de tal manera que la pinza

quede en el cadáver, posteriormente se continua aislando de craneal a caudal sobre

la columna vertebral tomando como soporte la lengua, para que dicho paquete

quede solo siendo unido por la vena cava posterior, la cual se corta igual que el

esófago (antes de sobrepasar el diafragma). En resumen el primer conjunto consta

de: lengua, faringe, amígdalas, tráquea, esófago, glándulas tiroides y para-tiroides,

pulmón, corazón, timo y linfonodos mediastínicos.

90

g. Segundo conjunto

Este consta de omento y bazo, para ello, se realiza un corte bordeando la curvatura

mayor del estómago para así extraer el omento junto al bazo, finalmente se procede

a separar bazo de omentos.

h. Tercer conjunto

Se colocan dos pinzas hemostáticas caudal al páncreas dejando un espacio

considerable (dependiendo de la especie) para realizar un corte entre ambas pinzas,

posteriormente, se ubica el recto se traccionan hacia craneal las heces, se coloca

una pinza lo más caudal posible y se corta, para aislar las asas intestinales se corta

el mesenterio siguiendo el recorrido de las asas.

i. Cuarto conjunto

Este conjunto consta de diafragma, hígado, vesícula biliar, rumen, retículo, omaso,

abomaso, duodeno, páncreas y ganglios mesentéricos; para su extracción se corta

diafragma contorneándolo, y así se separa del cadáver (cabe resaltar que se debe

tener cuidado al extraerlo porque se pueden cortar las glándulas adrenales).

j. Quinto conjunto

Sistema genitourinario, adrenales y ano; para ello, se remueve masa muscular de

región púbica hasta visualizar los forámenes obturadores; se cortan con ayuda de

un costótomo las ramas craneal y caudal del pubis, luego se aíslan los riñones del

cadáver teniendo cuidado de no cortar adrenales ni uréteres, aislar hasta llegar a

ano y realizar un corte contorneándolo.

k. Sistema nervioso

En posición decúbito ventral se realiza una incisión cráneo-caudal longitudinal por

línea media, para así, exponer bóveda craneana, remover masa muscular, para

dejar expuesto el hueso, posteriormente con una sierra se realizan tres cortes uno

lateral el otro contralateral y el otro craneal, dichos cortes se realizan con dirección

al foramen magno, finalmente con la remoción de la bóveda craneal se procede a

aislar encéfalo cortando pares craneales en dirección cráneo-caudal.

91

Nota: cabe resaltar que al momento de realizar una necropsia el profesional encargado

debe tener criterio para separar o no los conjuntos, en algunos casos el animal puede

ser tan pequeño que se dificulta la separación por conjuntos y se pueden llegar a

lesionar los tejidos. Así como en cada paso tomarse las muestras de los órganos a

evaluar (microbiología), la muestras de histopatología se pueden tomar al final después

de la evaluación macroscópica.

a. Condicionamiento operante

El condicionamiento operante, es una herramienta de suma importancia para

diseñar un protocolo de esta especie ya que la interacción entre el entrenador y los

animales favorecen la realización de diversos procesos (p.ej., suministro de

medicamentos vía oral, examen general, toma de muestras como hisopados de

nariz y cavidad oral, toma de saliva).

Acercamiento inicial y determinación de refuerzos positivos: durante el

condicionamiento se recomienda que las personas que lo realicen sean constantes,

es decir, realizarlo todos los días con una duración mínima de 30 minutos, estos

acercamientos tienen como objetivo familiarizar la población con el entrenador, para

ello se recomienda emplear la comida; para la determinación de los refuerzos

positivos, se recomienda, suministrar a los animales el alimento de la ración y

observar cual es el que ellos prefieren, para así trabajar con ese alimento, la

selección de conductas a reforzar requiere de un análisis previo del

condicionamiento, es decir, determinar para que va a ser usada esta herramienta,

en este caso la conducta a reforzar es la adaptación a personas en un primer paso y

el acercamiento a estas como segunda conducta.

Desarrollo de conducta a reforzar: el desarrollo de dichas conductas

generalmente es lento, una vez ganada la confianza de los animales se puede

iniciar con realizar puntos de alimentación con la presencia del entrenador, si esto

es exitoso la distancia entre los animales y el entrenador se pueden hacerse

menores.

Monitoreo de la conducta: este monitoreo es básicamente realizar la rutina en el

día a día para no perder el entrenamiento, tenga en cuenta que una vez se pierda el

entrenamiento debe iniciar de cero.

92

Documentos de interés

Barbanti Duarte, J.M. y Gonzáles, S. 2010. Neotropical cervidology: biology and

medicine of Latin American deer. FAPESP.

West, G., Heard, D. y Caulkett, N. 2007. Zoo and wildlife immobilization and

anesthesia. Blackwell pub professional. Pp 718. Capitulo cérvidos.

93

Anexo 2. Descripción de los animales capturados

Caso

Identificación

Sexo

EDB

Procedencia

V01 Manolo M G Nacimiento

V02 Orejera 05 H G Nacimiento

V03 Orejera 07 H A Nacimiento

V04 Orejera 24 H A CAV

V05 Orejera 26 M j Nacimiento

V06 Orejera 29 M A Nacimiento

V07 Orejera 31 H A Indeterminado

V08 Orejera 33 M A Nacimiento

V09 Orejera 34 H j Nacimiento

V10 Orejera 35 M A Nacimiento

V11 Orejera 36 M A Nacimiento

V12 Orejera 42 M A Nacimiento

V13 N2 H N Nacimiento

V14 N3 H N Nacimiento

V15 N1 M N Nacimiento

V16 Orejera 43 H A Nacimiento

V17 Orejera 50 M A Nacimiento

V18 Orejera 36 M A Nacimiento

V19 Chip 58 H J Nacimiento

V20 Orejera 41 M A Nacimiento

94

Anexo 3. Formato examen clínico

EXAMEN CLÍNICO

Fecha: ________ Identificación: _________________________ Peso: _______

Sexo: M H Condición corporal: ____________

Temperatura: _____ F. respiratoria: _____ F. cardiaca: ______ TLLC: _____

Examen N AN NE Observaciones

Estado general

Hidratación

Piel y pelaje

Cavidad oral (piezas dentarias)

Sistema digestivo

Sistema respiratorio

Sistema circulatorio

Sistema genitourinario

Sistema musculo esquelético

Sistema linfático

Otros

Observaciones:

___________________________________________________________________

___________________________________________________________________

Medicamentos usados:

___________________________________________________________________

___________________________________________________________________

* Adaptado del formato usado en la unidad de rescate y rehabilitación de animales silvestres URRAS - UNAL

95

Anexo 4. Casos indeterminados al diagnóstico clínico y de necropsia

Caso Hallazgo

26 Edema pulmonar severo

28 Neumonía necrótica exudativa

41 Pulicosis

42 Infarto cardiaco

44 Edema pulmonar severo

45 Edema pulmonar severo

49 Politraumatismo

50 Pulicosis severa

53 Enteritis acuosa

54 Politraumatismo

55 Edema pulmonar severo

56 Edema pulmonar

57 Congestión pulmonar

60 Edema pulmonar severo

64 Congestión pulmonar

77 Timpanismo ruminal

78 Isquemia cardiaca

82 Edema pulmonar severo

83 Politraumatismo

94 Nefritis intersticial

95 Congestión pulmonar

99 Enteritis acuosa

101 Mucosas anémicas generalizadas

106 Nefritis intersticial

110 Neumonía abscedativa multifocal

112 Hepatosis

135 Sin información

136 Sin información

96

Anexo 5. Casos con muerte súbita a la clínica, diagnosticados con la necropsia.

Caso Hallazgo

1 Neumonía multifocal

2 Neumonía multifocal

6 Omasitis y tiflitis parasitaria

7 Neumonía abscedativa multifocal severa

9 No se observan Hallazgos

20 No se observan Hallazgos

30 Peritonitis traumática

38 Bronconeumonía

59 Pulicosis

61 Neumonía aspirativa

63 Pulicosis severa

67 Pulicosis severa

69 Enteritis acuosa generalizada

71 Infarto cardiaco

72 Infarto cardiaco

74 Pulicosis

75 No se observan Hallazgos

79 Linfomegalia de mesentéricos

80 Autolisis severa

81 Edema pulmonar severo

85 Politraumatismo

86 Nefritis multifocal

89 Neumonía

93 Caquexia moderada

97 Timpanismo ruminal

98 Infarto cardiaco

108 Politraumatismo

109 Nefritis intersticial

111 Neumonía abscedativa discreta

118 Hematoma cerebral

121 Caquexia moderada

124 No se observan Hallazgos

97

Anexo 6. Valores hematológicos para O. virginianus en cautiverio en la sabana

bogotana.

Analitos Promedio SD Rango

Número

animales

Valor

mínimo

Valor

máximo

Hematíes (106 µL) 9,96 1,73 8,23 11,69 20 6,94 12,08

HT (%) 35,45 4,16 31,29 39,61 20 26 46

Hb (g/dl) 12,48 1,31 11,17 13,79 20 10,1 14,8

VCM (fL) 36,59 7,70 28,89 44,29 20 29,93 54,76

HCM (pg) 12,90 2,70 10,20 15,60 20 9,77 18,16

CCMH (g/dl) 35,49 4,50 30,99 39,99 20 28,83 50,77

Plaquetas (105 µL) 6,44 3,09 3,35 9,53 20 1,05 13,75

Leucocitos (103 µL) 5,48 3,17 2,31 8,65 20 2,4 13,3

Neutrófilos (103 µL) 3,52 2,16 1,37 5,68 20 1,18 7,92

Linfocitos (103 µL) 1,70 1,46 0,25 3,16 20 0,26 5,93

Monocitos (103 µL) 0,04 0,09 -0,05 0,13 20 0 0,36

Eosinófilos (103 µL) 0,22 0,25 -0,03 0,47 20 0 0,85

Basófilos (103 µL) 0,00 0,00 0,00 0,00 20 0 0

Bandas (103 µL) 0,00 0,00 0,00 0,00 20 0 0

98

Anexo 7. Valores de química sanguínea para O. virginianus en cautiverio en la

sabana bogotana.

Analitos Promedio SD Rango

Número

animales

Valor

mínimo

Valor

máximo

Glucosa (mg/l) 195,02 85,89 109,13 280,91 15 84,31 345

BUN (mg/dl) 27,04 16,72 10,32 43,77 18 0,4 76

Creatinina (mg/dl) 1,51 0,57 0,94 2,08 19 0,6 2,94

Colesterol ttal (mg/dl) 95,75 27,34 68,40 123,09 15 34,7 128

AST (UI) 108,75 67,65 41,10 176,41 15 25 270

Bilirrubina ttal (mg/dl) 0,93 0,53 0,40 1,45 18 0,15 1,8

Bilirrubina ind (mg/dl) 0,44 0,32 0,12 0,75 18 0,01 1

Bilirrubina dir (mg/dl) 0,46 0,29 0,16 0,75 18 0,08 1,13

FALK (UI) 92,64 105,90 -13,25 198,54 18 5,7 386,3

GGPT (UI) 64,86 35,17 29,68 100,03 14 2,1 116,8

CPK ttal (UI) 293,20 337,44 -44,24 630,64 8 6,2 1048

ALT (UI) 44,79 19,47 25,32 64,26 9 20,2 71,9

PT (g/dl) 6,43 0,73 5,71 7,16 18 5,2 8,2

Albumina (g/dl) 1,96 0,56 1,40 2,52 18 1,18 3,16

Globulinas (g/dl) 4,50 0,88 3,62 5,38 18 3,2 6,83

99

Anexo 8. Resultados análisis hematológico para O. virginianus en cautiverio en la

sabana bogotana.

Analitos N° venado 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 17 18 19 20

Hematíes (106 µL) - N N - N + N N N + + - N N N N N N N

HT (%) N N N N N + N N - N N N N N + N N N N

Hb (g/dl) N - N - N N - N N + N N N - + N N N N

VCM (fL) N N N + N N N N N N N + N N + N N + N

HCM (pg) + N N N N N N N N N N + N - N N N + N

CCMH (g/dl) N N N N N N N N + + N N N - N N N N N

Plaquetas (105 µL) N N - N N - N N N N N - N N - N N N N

Leucocitos (103 µL) + N N + N N N N N N N N N N + N N + N

Neutrófilos (103 µL) + N N N N - N - N N N N N - + N N + N

Linfocitos (103 µL) N N N + N N N N N N N N N N N N N + N

Monocitos (103 µL) N N N N N N N N + N N N N N + N N N N

Eosinófilos (103 µL) N N N + N N N N N N N N N N N N N + N

Basófilos (103 µL) N N N N N N N N N N N N N N N N N N N

Bandas (103 µL) N N N N N N N N N N N N N N N N N N N

Química sanguínea

Glucosa (mg/l) - - + N + + - N N N

- N N N +

BUN (mg/dl) + N N N N N N N N N - N + N N + N

Creatinina (mg/dl) N + N N N + N N N N N - + N N N N N

Colesterol ttal (mg/dl) + N N + N - N + N N - N - N N

AST (UI) N + N N N N N N N N N - - - +

Bilirrubina ttal (mg/dl) N + N + N N N - + N - N N - - N +

Bilirrubina ind (mg/dl) N N N + N N N - + N - N N - N N +

Bilirrubina dir (mg/dl) N + - N N N - N N N N N + - - N N

FALK (UI) N N N N N N N N N N N N N N + + N

GGPT (UI) - N N N - - + N N N N + N +

CPK ttal (UI) + N N N N N N N

ALT (UI) N N N + N - + N

PT (g/dl) + N + - N N - N N N N - N N N N

Albumina (g/dl) N N N - N + N N + N N N N - N - N

Globulinas (g/dl) + N N N N - - N N N N N N N N N N

Convenciones Elevado Normal Disminuido Sin información

100

Anexo 9. Relación parámetros hematológicos hemograma

Analitos

Navas et al, 2013 ISIS, 2002 Lovera et al.,

2011

DelGuidice et al., 1992

*hembras

Powell y DelGuicide,

2005 * Neonatos

Marco y Lavin, 1999 * Cervus

elaphus

Topal et al., 2010 * Cervus

elaphus

Szabó et al., 2005 * Hembras

Blastocerus dichotomus

Szabó et al., 2005 * Machos

Blastocerus dichotomus

Prom SD N Prom

SD N Prom

SD N Prom

SD N Prom

SD N Prom

SD N Prom

SD N Prom

SD N Prom SD N

Hematíes (106

µL) 9,96 1,73 20 12,01 3,81 76 10,12 1,64 25 7,8 0,3 22 10,9 2 20 9,04 1,69 10 11,5 4,1 25 11,3 3,5 17

HT (%) 35,45 4,16 20 40,3 0,09 166 28,9 3,8 25 29,8 1,2 22 44 7,7 20 35,2 4,6 10 45 5 25 46 4 17

Hb (g/dl) 12,48 1,31 20 14,1 2,6 69 9,5 1,1 25 8,5 0,3 22 15,9 2,4 20 12,4 2 10 9,2 1,82 29 8,3 1,6 15

VCM (fL) 36,59 7,7 20 35,7 11,6 70 28,8 3,2 25 29,9 0,4 59 38,2 0,5 22 40,5 4,1 20 39,9 3,4 10 45 23,1 25 46,7 22,1 17

HCM (pg) 12,9 2,7 20 12,3 4 67 9,6 1,3 25 35,8 0,2 59 10,9 0,2 22 15,8 5 20

CCMH (g/dl) 35,49 4,5 20 35,3 2,5 65 33,2 1,8 25 28,5 0,4 22 35,1 5,3 20

Plaquetas (10

5 µL)

6,44 3,09 20 4,35 1,4 10 - - - 3,11 1,17 20 7,49 1,8 10

Leucocitos (10

3 µL)

5,48 3,17 20 3,53 1,72 151 3,71 1,03 25 3,1 0,2 59 3,1 0,3 22 2,97 1,05 20 4,3 0,72 10 15,3 4,2 25 17 5,9 17

Neutrófilos (10

3 µL)

3,52 2,16 20 2,04 1,54 146 55.5 11,2 25 1,59 0,97 20 4,5 2,3 25 4,7 1,8 17

Linfocitos (10

3 µL)

1,7 1,46 20 1,22 0,68 146 39,8 11,3 25 1,04 0,41 20 8,4 3 25 9,6 3,8 17

Monocitos (10

3 µL)

0,04 0,09 20 0,12 0,12 110 0,1 0,3 25 0,11 0,08 20 0,4 0,3 25 0,5 0,7 17

Eosinófilos (10

3 µL)

0,22 0,25 20 0,26 0,26 115 4,6 2,6 25 0,18 0,11 20 1,9 1 25 1,9 1,3 17

Basófilos (10

3 µL)

0 0 20 0,047 0,038 25 0 0 25 0,01 0,03 20 0,1 0,2 25 0,2 0,2 17

Bandas (103

µL) 0 0 20 0,16 0,22 15 20

101

Anexo 10. Relación parámetros hematológicos química sanguínea

Analitos Navas ISIS

Lovera et al., 2011

Powell y DelGuicide, 2005

* Neonatos

Topal et al., 2010 * Cervus elaphus

Prom SD N Prom SD N Prom SD N Prom SD N Prom SD N

Glucosa (mg/dl) 195,02 85,89 15 141,98 59 84 117,2 28,35 10

BUN (mg/dl) 27,04 16,72 18 27,07 10,02 86 21,4 1,4 22 7,07 2,14 10

Creatinina (mg/dl) 1,51 0,57 19 1,59 0,5 70 2,1 0,4 25 1,1 0,1 22 1,58 0,27 10

Colesterol ttal (mg/dl) 95,75 27,34 15 74,27 30,9 84

AST (UI) 108,75 67,65 15 174 163 83 59,6 0,12 10

Bilirrubina ttal (mg/dl) 0,93 0,53 18 0,99 0,7 66

Bilirrubina ind (mg/dl) 0,44 0,32 18 0,4 0,29 15

Bilirrubina dir (mg/dl) 0,46 0,29 18 0,11 0,11 15

FALK (UI) 92,64 105,9 18 173 270 62 104,33 20,24 10

GGPT (UI) 64,86 35,17 14 77 45 35

102

Anexo 11. Examen clínico individuos

N° Caso

Estado general

Hidratación Piel y pelaje

Cavidad oral (piezas dentarias)

Sistema digestivo

Sistema respiratorio

Sistema circulatorio

Sistema genitourinario

Sistema musculo esquelético

Sistema linfático

Otros

V01 Regular N Hirsuto Total I 3/3 N N N N N N N

V02 Regular N Hirsuto Total I 3/3 N N N Mucosa vulvar congestionada N N N

V03 Regular N N Total I 3/3 N N N

Secreción blanquecina en vulva N N N

V04 Bueno N N Parcial I 3/3 N N N N N N N

V05 Bueno N N Parcial I 1/3 N N N N N N N

V06 Bueno N N Parcial I 3/3 N N N N N N N

V07 Bueno N N

Ausencia medio izquierdo N N N N N N N

V08 Bueno N N Rasamiento I 1/3 N N N N N N N

V09 Bueno N N Parcial I 1/3 N N N N N N N

103

Anexo 11. Examen clínico individuos (cont.).

N° Caso Estado general

Hidratación Piel y pelaje

Cavidad oral (piezas dentarias)

Sistema digestivo

Sistema respiratorio

Sistema circulatorio

Sistema genitourinario

Sistema musculo esquelético

Sistema linfático

Otros

V10 Bueno N N Parcial I 3/3 N N N N N N N

V11 Bueno N Hirsuto Parcial I 3/3 N N N N Masa rama mandibular izquierda

N N

V12 Bueno N Hirsuto Parcial I 1/3 N N N N N N N

V13 Bueno N N Total I 3/3 N N N N N N N

V14 Regular N Hirsuto Leche 3/3 N N N N N N N

V15 Regular N Hirsuto Leche 3/3 Dilatación N N N N N N

V16 Regular N Hirsuto Leche 3/3 N N N N N N N

V17 Bueno N N Total I 3/3 N N N N N N N

V18 Bueno N N Total I 3/3 N N N N N N N

V19 Bueno N Hirsuto Parcial I 3/3 N N N N Masa rama mandibular izquierda

N N

V20 Bueno N N Definitivos 2/3

N N N N Fractura tarso MPI

N N