UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE INGENIERIA

E.A.P AGROINDUSTRIAL

DETERMINACION DE BACTERIAS AEROBIOS MESOFILOS VIABLES

CURSO : MICROBIOLOGIA

DOCENTE : BLGO.MBLOGO. ETERIO ALVA

MUÑOZ

ALUMNA : MUÑOZ ROJAS ANDREA GISELA

CODIGO : 0201212035

CICLO: “IV”

NUEVO CHIMBOTE - PERÚ

2013

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I. INTRODUCCION

El recuento aeróbico en placa (APC) tiene propuesto indicar el nivel de microorganismos en un producto. Los procedimientos detallados para determinar el APC de alimentos han sido desarrollados por la Asociación e Química Analítica Oficial (AOAC) y la Asociación Americana de Salud Pública (APHA). El método convencional de recuento en placa para examinar alimentos congelados, helados, pre-cocidos o preparados, se ajusta a los Métodos de Análisis Oficial de la AOAC, sec. 966.23, con un cambio relativo al procedimiento. Según la FDA el rango apropiado del recuento de colonias es de 25-250 Además del método convencional también utiliza el método automatizado de recuento en placa es espiral para la examinación de alimentos y cosméticos, se ajusta a los Métodos de Análisis Oficial de la AOAC, sec 977.27. A diferencia del ICMSF el rango apropiado del recuento de colonias esta entre 30-300 colonias ufc/ml. Además de ello existe otra diferencia en el cálculo de resultados como se podrá apreciar mas adelante.

La mayoría de los alimentos (industrializados excepto, por ejemplo los productos fermentados deben ser considerados inadecuados para el consumo cuando se tiene un gran número de microorganismos, aun cuando estos microorganismos no sean conocidos como patógenos y no hayan alterado de manera apreciable las características organolépticas del alimento. Pueden darse varias razones que justifican esta conducta.

Estables a menudo indican materias primas contaminadas o tratamientos no satisfactorios desde el punto de vista sanitario, mientras que los productos perecederos pueden indicar también condiciones inadecuadas de tiempo/temperatura durante su almacenamiento. La presencia de un número elevado de bacterias aerobias mesofilas que crecen bien a temperatura corporal o próxima a ella, significa que puede haberse dado las condiciones favorables a la multiplicación de los microorganismos patógenos de origen humano o animal.

Algunas cepas de bacterias mesofilas comunes, no generalmente consideradas como agente de enfermedades transmitidas por los alimentos (por ejemplo, Proteus, sp, enterococos y pseudomonas mesofilas) han sido señalas como causa

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de enfermedad cuando existía un número elevado de células viables en los alimentos. 

Todas las bacterias patógenas conocidas vehiculadas por alimentos son mesofilas y en algunos casos contribuyen con su presencia a los recuentos en placa encontrados.

Cuando la alteración de los alimentos es debida al desarrollo en ellos de microorganismos, la causa más frecuente de alteración, debe esperarse en los mismos recuentos elevados. Los niveles de población precisos para producir modificaciones organolépticas ostensibles varían ampliamente según el tipo de alimento y, de modo particular, la clase me microorganismo.

En el momento en que la descomposición puede ser detectada por el olor, gusto o el aspecto, la mayoría de los alimentos contienen más de 10 6 microorganismos.

II. OBJETIVOS:

Conocer el número de microorganismos aerobios mesófilos que contiene un

alimento.

Familiarizarse con métodos directos para la obtención de

microorganismos utilizando el método de recuento de colonias en placa.

Determinar si el producto alimenticio que se analiza está en condiciones

aptas para el consumo humano.

Determinar cuántos microorganismos presenta la muestra que analizamos.

III. MATERIALES:

Material Biológico – muestra líquida:

Jugo de Soya.

Material de laboratorio:

Medio de cultivo: Agar de reecuentro

Pipetas: (1ml y 10 ml).

11 Placas Petri.

Ansa calibrada

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Estufa (29º - 31 ºC).

Tubo de dilución.

IV. PROCEDIMIENTO:

a) Preparación de la muestra:

i) Si es muestra liquida se deberá guardar en refrigeración antes de el análisis correspondiente, para disminuir el metabolismos bacteriano. Y se deberá medir en mililitros.

ii) Si a muestra es solida o semisólida y está congelada, debemos esperar a que se descongele a medio ambiente.

iii) Si la muestra solida o semisólida se encuentra a Tº ambiente, se procederá con el análisis.

iv) Para diluir las muestras solidas es necesario licuarlas, tal es el caso de las verduras. Y luego se pesara.

v) Las diluciones se deberán preparar de la siguiente manera:

Para muestras liquidas:

De la muestra madre sacar 3 ml y diluirlos en 27 ml de agua

Peptonada.

Luego pasar un 1 ml a cada tubo con 9 ml de agua Peptonada,

hacer progresivamente hasta llegar a la dilución 10-3.

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vi) Método de Superficie:

De la dilución 10-¹, sacamos 1 ml y hacemos las diluciones hasta 10-6.

Luego en una placa servida con Agar Plate Count, agregamos 1 ml

sobre la superficie.

Inmediatamente procedemos a expandir el mililitro sobre la

superficie con la espátula de Drigalsky.

Con fines de la práctica solo se trabaja hasta la dilución 10-3 y

con tan solo 1 placa por dilución.

1 ml de muestra+

9 ml de agua pept.

10-1 10-2 10-3

10-310-2

10-1

9 ml DAP

9 ml DAP

1mL 1mL1 ml de jugo de soya + 9 ml de Agua Peptonada al 0.1%

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Se extiende el mililitro sobre la superficie de la placa con la espátula de Drigalsky

A 10-1

B 10-2

C 10-3

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Procedimiento del método a Profundidad

De la dilución 10-¹ sacamos 1 ml y lo pasamos al tubo siguiente

Del tubo con la dilución 10--2

sacamos 1 ml y lo pasamos al tubo siguiente

Hasta la dilución 10--3

Dilución 10--3Agregamos 1ml de cada

dilución a sus respectivas placas coma Agar de recuento

Con la espátula de Drigalsky extendemos la muestra

sobre toda la superficie de la placa

A 10-1 C 10-3

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MÉTODO CONTEO x TIEMPO

24 H 48 H

Total Promedio Total Promedio

Por superficie

10-1 Incontable ---------- Incontable ----------

10-2 200 250 Incontable

10-3 18 20 19 143 150 147

V. RESULTADOS

B 10-2

10-1 10-2

10-3

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En un recuento aproximado de las placas encontramos los siguientes resultados.

Vemos que al multiplicar por la inversa de su concentración hallamos la misma cantidad de colonias, es decir la cantidad que se encuentra en cada placa son equivalentes entre ellas.

Las distintas cantidades halladas se debe a las distintas concentraciones, la explicación a esta en la siguiente tabla.

10-1 10-2 10-3

X conteo 2000 200 20Multiplicado xInversa de su[ . ] 2000

020000 20000

jugo 10-1 10-2 10-3

Ya que para cada dilución, se saca de la anterior dilución , cadaves es menos rico en proteínas por tanto no crecerán muchosMicroorganismos conforme se diluya más.

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VI. CONCLUSIONES

El recuento estándar en placa, permite determinar el número de microorganismos contaminantes encontrados en la muestra.

Los microorganismos aerobios mesófilos son indicadores de alteración según la normativa del peruano, más no indicadores de la calidad higiénica.

La muestra de refresco casero trabajada en laboratorio no ha estado sumamente contaminada, ya que los valores obtenidos se encuentran dentro del rango normal para la normativa que rige en el Perú para el consumo de alimentos.

VII. BIBLIOGRAFIA http://nuevosenderos.blogspot.com/2010_04_01_archive.html http://www.imbiomed.com/1/1/articulos.php?

method=showDetail&id_articulo=23723&id_seccion=269&id_ejemplar=2436&id_revista=46

http://es.scribd.com/doc/108993112/DETERMINACION-DE-BACTERIAS-AEROBIOS-MESOFILOS-VIABLES

http://www.analizacalidad.com/docftp/fi189arm2004-4(2).pdf