Cuestionario 1 - Técnicas de Inmunologia

8/19/2019 Cuestionario 1 - Técnicas de Inmunologia

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Cuestionario de técnicas en inmunología 2016

Integrantes: Sofia Bustos - Lorena Navarrete - Jocelyn Orellana

Este cuestionario debe ser desarrollado por grupos de 3 o 4 estudiantes. Los

grupos se indican en el archivo excel que está en la carpeta de la página web del

curso. El tiempo máximo de entrega es el próximo 18 de marzo de 2016.

1- Los anticuerpos son moléculas ampliamente utilizadas en técnicas inmunológicas. Responda clara y brevemente las siguiente preguntas:

a. ¿Qué es un anticuerpo?

Los anticuerpos son proteínas producidas en los vertebrados en respuesta a la exposición a estructuras extrañas conocidas como antígenos. Los anticuerpos son increíblemente diversos y específicos en su capacidad para reconocer formas extrañas, y son los principales mediadores de la inmunidad humoral

frente a todo tipo de microbios. (1)

b. Mencione al menos 2 características que hacen importante y necesario el

uso de los anticuerpos en el desarrollo de técnicas inmunológicas.

Los anticuerpos presentan una alta especificidad para la determinación de la cantidad de proteínas u otros antígeno, ya que son capacidad de unirse de manera precisa a una determinada molécula blanco, lo cual es de gran utilidad en el caso médico, de esta forma se minimiza la posibilidad de dar un diagnóstico falso a un individuo sano.

Además posee una gran sensibilidad a la hora de los resultados en pruebas de

diagnóstico médico, son indicadores para detectar enfermedades.(2)

c. Menciones y explique 3 técnicas diferentes que involucren el uso de

anticuerpos en técnicas inmunológicas.

Western blot: Esta técnica de inmunotransferencia permite la detección y caracterización de proteínas mediante el reconocimiento entre antígeno y anticuerpo.Para ello debe haber una separación por electroforesis según su peso molecular, estructura, hidrofobicidad, etc. Posteriormente se realiza una transferencia cuantitativa e irreversible a una membrana de PVDF de las proteínas de una mezcla compleja (lisado total celular). Los antígenos que se han transferido a la membrana son reconocidos por anticuerpos monoclonales o policlonales específicos de ellos.

Finalmente, se detecta la

unión antígeno-anticuerpo por actividad enzimática o fluorescencia, entre otros métodos.(3)

https://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_ant%C3%ADgeno-anticuerpohttps://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_ant%C3%ADgeno-anticuerpohttps://es.wikipedia.org/wiki/Enzimahttps://es.wikipedia.org/wiki/Fluorescenciahttps://es.wikipedia.org/wiki/Fluorescenciahttps://es.wikipedia.org/wiki/Enzimahttps://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_ant%C3%ADgeno-anticuerpohttps://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_ant%C3%ADgeno-anticuerpo


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Inmunofluorescencia: En esta técnica se utilizan anticuerpos unidos químicamente a sustancias fluorescentes para determinar la presencia de moléculas específicas.(4)

En la inmunofluorescencia directa, la solución de anticuerpos fluorescentes se

aplica sobre el corte, se incuba y se lava. Los anticuerpos unidos se revelan después con un microscopio provisto de lámpara de luz ultravioleta. La luz ultravioleta se dirige hacia el corte a través del objetivo, con lo que el campo queda oscuro y las áreas con anticuerpos presentan fluorescencia verde. el patrón de fluorescencia es característico para cada antígeno.(4)

En la inmunofluorescencia indirecta, el anticuerpo se aplica sobre el corte, después de lavarlo, con él se prepara antiinmunoglobulina fluorescinada añadiendo antisuero. (4)

Inmunoprecipitación:

Es la técnica mediante la cual un antígeno proteico es precipitado de una solución usando un anticuerpo que se une específicamente a esa proteína.Este proceso puede ser usado para aislar y concentrar un proteína particular de una muestra que contiene muchos miles de proteínas distintas.En algún momento del procedimiento, la inmunoprecipitación requiere de que el anticuerpo este acoplado a un substrato sólido. (4)

2-Existen diferentes tipos de ensayos de ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent

Assay ). Consulte al menos 2 tipos de ELISA, explicando breve y claramente cuál es

la diferencia y los alcances de cada uno. Haga uso de un dibujo o esquema para su explicación. Además Nombre al menos 3 aplicaciones del método de ELISA en la

industria, investigación o diagnóstico (sea específico).

ELISA directo: En esta técnica se cubren los pocillos con la muestra, inmovilizando los antígenos que se presumen está dentro de esta, posteriormente se incuban con anticuerpos marcados capaz de generar un producto detectable, ya sea con un cambio de color o algún otro tipo, los que evidenciarían la presencia de antígenos.


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ELISA Sandwich: En este tipo de elisa se adhiere al pocillo un primer anticuerpo anti antígeno, luego de lavar el exceso se agrega la muestra, que será retenida al ser

reconocida por el primer anticuerpo. Luego de un segundo lavado donde se retira el material o adherido al anticuerpo, se agrega un segundo anticuerpo con una marca.Esta variedad de ELISA posee mayor especificidad y sensibilidad que los demás, ya que el segundo anticuerpo permite amplificar la señal, sin embargo solo permite la detección del antígeno y no del anticuerpo (5).

Aplicaciones del método ELISA:-Diagnóstico para el VIH-Test de embarazo-Enfermedades autoinmune-Enfermedades producidas por virus en frutas-Enfermedades producidas por bacterias como Mycobacterium tuberculosis-Cuantificación de inmunoglobulinas IgG IgE IgA


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3- Para realizar la detección de los complejos antígeno-anticuerpo formados

durante el ensayo de ELISA y proceder a realizar su cuantificación existen 3

sistemas: colorimétricos, fluorescentes y luminiscentes. En qué consiste cada

método.

Colorimétrico: al formarse el producto, se agrega un cromóforo al sustrato, y éste acoplado a la reacción dará lugar a una sustancia coloreada que puede ser medida por un espectrofotómetro.La cantidad de sustancia formada depende de la cantidad de anticuerpo presente, posteriormente para conocer la concentración exacta se compara la absorbancia del problema con la absorbancia del blanco y las muestras de referencia que contienenconcentraciones conocidas de anticuerpos y que se habían procesado en paralelo realizando rectas de calibrado con las concentraciones conocidas. (6)

Fluorescente: variación del colorimétrico, la enzima convierte el sustrato en un producto de reacción que emite fluorescencia cuando es excitado a una determinada longitud de onda, siendo las unidades relativas de fluorescencia (fotones de luz emitidos) proporcionales a la cantidad de producto analizadoEste método de cuantificación es ligeramente más sensible que el colorimétrico, ya que amplía el rango de medida a pesar de ser susceptible a cambios en el pH, temperatura, concentración iónica, concentración de detergente, secado, y a la matriz sólida, lo cual puede conducir a distorsión de luz. (7)

Luminiscencia:

Similar a la fluorescencia, una enzima transforma un substrato e un producto que emite fotones en lugar de dar color visible.hay distintas formas de luminiscencia dependiendo de la forma en que se alcanza el estado excitado. (7)

Fotoluminiscencia: la excitación se alcanza mediante luz de una determinada longitud de onda, es decir, igual que en la fluorescencia. Bioluminiscencia, la excitación se alcanza mediante la utilización de un compuesto que emite luz al ser degradado como luciferina o luciferasa. Quimioluminiscencia: la excitación se alcanza mediante una reacción química, siendo esta última el método más sensible debido a la posibilidad de multiplicación y amplificación de señal (7)


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4- En inmunología es muy importante tipificar los diferentes tipos celulares y sus

características funcionales específicas. Una de las formas más utilizadas para la

identificación de las células del sistema inmune es a través del uso de anticuerpos

que reconocen moléculas específicas en la superficie celular. En este sentido,

responda clara y brevemente:

a. ¿Qué es un “Cluster of differentiation” (CD) y para qué se usan? Además,

¿Cómo se mide e interpreta la expresión de estos CDs en las células del

sistema inmune?

Son moléculas marcadoras en la superficie celular, que reconocen ciertos anticuerpos, y

aon utilizadas para la identificación del tipo de célula, etapa de la diferenciación celular y

actividad de esta misma. Es un sistema de antígenos de superficie celular de los

leucocitos humanos, que se caracterizan mediante anticuerpos monoclonales, permitiendo

la categorización de los leucocitos y otras células hematopoyéticas (de la sangre). También se conocen como cúmulo de determinantes o de designaciones.

Debido a que durante la maduración y diferenciación, los linfocitos inmaduros van

recibiendo en su superficie una serie de receptores inmunitarios, se denomina a dichos

compuestos marcadores de diferenciación, pues le dan a la célula linfocítica componentes

fenotípicos únicos de la etapa de diferenciación en que estén. (10)

b. ¿Qué es la citometría de flujo?

La citometría de flujo es un método analítico que permite la medición rápida de ciertas características físicas y químicas de células o partículas suspendidas en líquido que producen una señal de forma individual al interferir con una fuente de luz. Una de las características analíticas más importantes de los citómetros de flujo es su capacidad de medir múltiples parámetros celulares, como el tamaño, forma y complejidad y componentes celulares o función que pueda ser marcada con un fluorocromo. Las aplicaciones más relevantes de la citometría de flujo en la práctica médica se relacionan con la hematología e inmunología clínicas, midiendo parámetros como número y clasificación de células sanguíneas.

Esta técnica es empleada también en el conteo de subpoblaciones de linfocitos en pacientes con el virus de la inmunodeficiencia humana, así como la caracterización de leucemias agudas y síndromes linfoproliferativos crónicos, entre otros padecimientos.

El principio en el que se basa esta técnica:Hacer pasar células u otras partículas en suspensión alineadas y de una en una por delante de un haz luminoso. La información producida puede agruparse en dos tipos


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fundamentales: la generada por la dispersión de la luz y la relacionada con la emisión de luz por los fluorocromos presentes en la célula o partícula al ser excitados por el rayo luminoso. Las señales luminosas detectadas se transforman en impulsos eléctricos que se amplifican y se convierten en señales digitales que son procesadas por una computadora (11)

c. ¿Qué son los anticuerpos acoplados a fluorocromos y qué ventajas tiene

usarlos?

Los anticuerpos acoplados a fluorocromos o fluoróforos son capaces de teñir diversas estructuras para lograr examinar muestras teñidas con dichos anticuerpos a diferentes longitudes de onda de excitación y de emisión. Con este sistema se pueden observar diferentes moléculas blanco mediante el uso de diferentes fluoróforos a alta resolución.

Este tipo de tinción o marcaje es posible utilizarla, por ejemplo, mediante el uso de

microscopía confocal o de fluorescencia. (12)


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d. Escriba al menos 3 marcadores o “CD” que permitan identificar las siguientes

células, además explique qué significa cada uno de los marcadores que eligió:

Tinciones Qué es cada molécula

Linfocitos 1.CD4 Es una molécula que se expresa en la superficie de algunas células T y en las células dendríticas . Es una glucoproteína

monomérica de 59

kDa de peso que contiene cuatro dominios (D1, D2, D3, D4) de tipo inmunoglobulinas . (13)

2.CD8 CD8 (Cúmulo de diferenciación 8 o cluster of differentation, en inglés ), es una molécula que se expresa en la superficie de algunas células T , conocidos como citolíticas. Es una glucoproteína dimérica de 65-70kDa que cruza la membrana y participa como co-receptor en la estabilización de la adhesión del receptor de linfocitos T a moléculas del Complejo Mayor de Histocompatibilidad tipo I (MHC I). Implicada también en la maduración tímica de linfocitos T y en la transmisión de señales intracelulares durante la activación del HLA I.(14)

3.CD3 En inmunología se denomina CD3 (del inglés cluster of

differentiation) a un tipo de antígeno CD propio del sistemainmune de mamíferos. Se caracteriza por poseer un pesomolecular de γ: 25-28; δ: 20, ε:20 kDa y su naturalezabioquímica lo encuadra dentro de la familia de lasinmunoglobulinas. Su función biológica en la célula es:intervenir en la transducción de señales, expresión del TCR enla superficie de la célula y asociación a este último receptor. Seexpresa específicamente en timocitos y células T. (15)(16)

Monocitos o

macrófagos

1.CD68 CD68(Cúmulo de diferenciación 68 o cluster of differentiation68, en inglés) es una glicoproteína expresada en la membranaplasmática de los macrófagos. La función de CD68 parece serla captación de lipoproteínas de baja densidad.

La macrosialina es el equivalente de CD68 en ratones.(17) (18)

2.CD16 En inmunología se denomina CD16 (del inglés cluster of differentiation 16) o FcγRIII a un tipo de antígeno CD propio del sistema inmune de mamíferos . Se caracteriza por poseer un peso molecular de 50-80 kDa y su naturaleza bioquímica lo encuadra dentro de la familia de las inmunoglobulinas . Su función biológica en la célula es: actuar como componente del receptor de baja afinidad para Fc , FcγRIII, y mediar en la fagocitosis y citotoxicidad debida a células dependientes de anticuerpos. Se expresa específicamente en neutrófilos, células NK y macrófagos . (19)

3.CD13 En inmunología se denomina CD13 (del inglés cluster of

differentiation 13) o aminopeptidasa N a un tipo de

antígeno CD propio del sistema inmune de mamíferos. Se caracteriza por poseer un peso molecular de 150-170 kDa y su naturaleza bioquímica lo encuadra dentro de la familia de enzimas metaloproteasas. Una de sus funciones biológicas conocidas hasta hoy en la célula es: hidrolizar proteínas con su actividad metaloproteasa de zinc. Se expresa específicamente en células mielomonocíticas . (20)

https://es.wikipedia.org/wiki/Expresi%C3%B3n_g%C3%A9nicahttps://es.wikipedia.org/wiki/Biolog%C3%ADa_celularhttps://es.wikipedia.org/wiki/Enzimahttps://es.wikipedia.org/wiki/Bioqu%C3%ADmicahttps://es.wikipedia.org/wiki/Unidad_de_masa_at%C3%B3micahttps://es.wikipedia.org/wiki/Peso_molecularhttps://es.wikipedia.org/wiki/Ant%C3%ADgeno_CDhttps://es.wikipedia.org/wiki/Ant%C3%ADgeno_CDhttps://es.wikipedia.org/wiki/Idioma_ingl%C3%A9shttps://es.wikipedia.org/wiki/Inmunolog%C3%ADahttps://es.wikipedia.org/wiki/Fchttps://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A9lulahttps://es.wikipedia.org/wiki/Biolog%C3%ADa_celularhttps://es.wikipedia.org/wiki/Inmunoglobulinahttps://es.wikipedia.org/wiki/Unidad_de_masa_at%C3%B3micahttps://es.wikipedia.org/wiki/Mam%C3%ADferohttps://es.wikipedia.org/wiki/Idioma_ingl%C3%A9shttps://es.wikipedia.org/wiki/Inmunolog%C3%ADahttps://es.wikipedia.org/wiki/Timohttps://es.wikipedia.org/wiki/Mol%C3%A9culahttps://es.wikipedia.org/wiki/Membrana_lip%C3%ADdicahttps://es.wikipedia.org/wiki/Unidad_de_masa_at%C3%B3micahttps://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A9lula_Thttps://es.wikipedia.org/wiki/Idioma_ingl%C3%A9shttps://es.wikipedia.org/wiki/Inmunoglobulinahttps://es.wikipedia.org/wiki/Unidad_de_masa_at%C3%B3micahttps://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A9lulas_dendr%C3%ADticashttps://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A9lula_Thttps://es.wikipedia.org/wiki/Mol%C3%A9cula


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Información Extra (21) (22) (23)(24):

Anticuerpos monoclonales: sustancias homogéneas con acción sobre un solo determinante antigénico (epitopo: epi=sobre topo=lugar), producidos por un clon celular.

CD1A Timocitos

CD2 Receptor de E rosetas, molécula de adhesión celular, aumenta la afinidad de la interacción celular.

CD3 Células T

CD4 Células T moléculas superficiales, cooperadoras/inductoras

CD5 Células T , subpoblación de células beta

CD6 Células T

CD7 Células T, células NK (Natural killers = destructoras naturales)

CD8 Células T, moléculas superficiales, citotóxicas /supresoras

CD9 Células T activadas, células pre-B y plaquetas

CD10 Antígeno de leucemia linfoblástica aguda común, granulocitos.

CD11 Células T supresoras, células NK, monocitos, granulocitos

CD13 Monocitos, granulocitos

CD14 Monocitos, granulocitos :Se expresa específicamente en células mielomonocíticas.

CD15 Monocitos, granulocitos

CD16 Receptor Fc de IgG sobre células K y neutrófilos

CD19 Células B

CD20 Células B

CD21 Células B, maduras

CD22 Células B

CD23 Células B

CD24 Células B, granulocitos

CD25 Células portadoras de receptor IL-2

CD34 Células progenitoras

CD35 Células portadoras de complemento CR1

CD45 Leucocitos


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5. Los resultados que arroja el citómetro de flujo son gráficos de frecuencia

representados como diagramas de puntos (cuando se analizan dos marcadores en

simultáneo) o histogramas de frecuencia (cuando se analiza la expresión de un solo

marcador). Además con base en el tamaño (forward scatter) y complejidad de la

célula (side scatter) se pueden identificar de una manera “gruesa” los diferentes

tipos celulares que se están analizando.

Diagrama de puntos

Muestra dosparámetrossimultáneamente.Mientras más arriba o más a la derecha -->mayor es la señal.

Histograma: Muestra un único parámetro v/S número de eventos

Tamaño (FSC) y

complejidad (SSC)

Este gráfico es de densidad.

Son del mismo color

aquellos que tengan el mismo número de eventos.

Con base en esta información y en lo consultado, interprete los siguientes gráficos:


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a. Una muestra de sangre periférica contiene los siguientes leucocitos:

monocitos, linfocitos y granulocitos. Con base en el tamaño y

granularidad de cada una de estas poblaciones celulares indique en el

siguiente diagrama de puntos donde se ubica cada una de ellas.

Respuesta:

A: Granulocito

B: Monocito

C: Linfocito

Fundamento: Debido a que FSC, corresponde al tamaño de la célula en este

caso. Aquellos elementos de menor tamaño están hacia la izquierda del eje x (hacia el punto de coordenadas (0,0)). En cambio, El SSC, corresponde a la complejidad celular o granularidad.

En este caso, los linfocitos son células de menor tamaño y granularidad que los Monocitos y Granulocitos. Por ende, corresponden a la población celular marcadas con la letra C. Por otra parte, no hay mucha diferencia de tamaño entre Monocitos y Granulocitos, pero sí en cuanto a su granularidad, aquellas que sean más complejas o granulares tendrán un valor mayor en el eje y. Por lo tanto, al comparar respecto a la granularidad entre monocitos y granulocitos,

son los granulocitos los que poseen mayor granularidad.


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b. Ubique en forma de diagrama de puntos, como se verían las poblaciones

celulares indicadas debajo de cada gráfico:

Respuesta:

6- El sistema inmune es capaz de reconocer y responder ante distintas señales ya

sean provenientes de patógenos (PAMPs) o de elementos propios del organismo

(DAMPs). Mencione al menos dos tipos de receptores que reconocen estos

patrones y expliquen su mecanismo de acción.

- Lectinas de tipo C: corresponde a una familia de moléculas de carbohidratos dependientes de calcio, es sabido que se expresan sobre las membranas plasmáticas de células dendriticas, leucocitos y macrofagos. El mecanismo de acción de algunas de estas consiste en identificar estructuras presentes en los

carbohidratos de la pared celular de algunos microorganismos pero que no se encuentran en células de mamíferos.(25)

- Receptores N-formil Met-Leu-Phe: un ejemplo de estos FPR y FPRL1, se expresan en neutrofilos y macrofagos respectivamente. Reconocen péptidos cortos que contiene residuos de N-formilmetionina. Permiten a los fagocitos identificar y responder a moléculas microbianas ya que en todas las bacterias hay proteínas que comienzan con N- formilmetionina y por lo demás muy pocas de mamíferos las poseen. Estos receptores están acoplados a una proteína G, fijadoras de GTP con siete dominios transmembrana. la unión del ligando al

receptor genera un cambio de GTP por GDP, la proteína G ligada a GTP activa a numerosas enzimas celulares entre ellas una fosfolipasa C específica del fosfatidilinositol cuya función es elevar el calcio intracelular además de activar la proteína cinasa C. (25)

-


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7- ¿Qué es el complejo mayor de histocompatibilidad, conocido en inglés como

MHC (Major Histocompatibility Complex)?. Indique cuáles células expresan MHC de

clase I y cuáles células expresan MHC de clase II y qué función cumplen (La función

relaciónela con linfocitos T).

- El MHC corresponde a un conjunto de proteínas especializadas y que están codificadas en los genes del locus llamado complejo mayor de histocompatibilidad, unas de sus funciones principales es la de presentar antígenos al linfocito T. Además permiten la diferenciación de lo propio y lo ajeno, como el caso del rechazo de injertos de piel de una cepa no consanguínea (26).

- las moléculas MHC-1 contienen dos cadenas polipeptídicas unidas de forma no covalente,además péptidos unidos a moléculas del MCH-1 son reconocidos por linfocitos tCD8, estos últimos reconocen péptidos derivados de proteínas citosólicas y de síntesis endógena. las moléculas del MHC-1 se expresan en general en todas las células humanas nucleadas (26).

- los péptidos unidos a moléculas del complejo MHC-2 son reconocido por los linfocitos TCD4, estos reconocen principalmente péptidos derivados de proteínas extracelulares que se internalizan en las células presentadoras de antígeno. las celulas dendriticas, los macrofagos y los linfocitos B, expresan moléculas del MCH-2 (26).

8- Los genes MHC son altamente polimórficos. Usted hereda un grupo de alelos

tanto del padre como de la madre. ¿De qué forma se expresan estas glicoproteínas?

(Utilice conceptos como dominancia, recesividad, etc) ¿Qué ventaja tiene que estos

genes se expresen de esa forma?

- Estas glicoproteínas se expresan de manera codominante, es decir, se expresan todos los alelos heredados de ambos progenitores de igual forma.- La ventaja de este polimorfismo consiste en que al heredar un grupo de alelos del

padre y otro grupo de la madre hay un significativo aumento del número de moléculas del MHC disponibles para unirse a péptidos y presentarlo a los linfocitos T, es decir, es posible presentar un mayor número de péptidos derivados del patógeno durante una determinada infección, así ocurre un mejoramiento de la potencia de la respuesta inmune contra el patógeno debido a que se aumenta el número de linfocitos T específicos del patógeno activado (27).


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9- Defina qué significa el siguiente termino: restricción de MHC (en inglés, self-MHC

restriction)? ¿Qué experimento hicieron Zinkernagel and Doherty para demostrarlo?

Y qué relación tiene con la reacción mixta linfocitaria o “MLR”?

- La restricción de MHC es una consecuencia de los procesos de selección durante

la maduración de los linfocitos T en el timo , durante esta, las células que expresan receptores del antígeno específicos frente a los péptidos propios asociados al MHC son seleccionadas para vivir y así se da muerte a aquellas células que no diferencian el MHC propio (28).

- El experimento de los científicos demostró que el sistema inmune es capaz de distinguir lo propio de lo extraño. Para demostrar esto los científicos utilizaron linfocitos provenientes de células del bazo de ratones inmunizados contra el virus coriomeningitis linfotoxica (LCMV) y fibroblastos infectados con el mismo virus y marcados con cromo. cuando los fibroblastos infectados provenían de cepa de ratones cuyos antígenos de histocompatibilidad eran distintos ocurría que eran ignorados por los linfocitos T inmunes,entonces no se producía ataque. Si ocurre liberación de cromo como resultado de citotoxicidad, es decir, cuando linfocitos y fibroblastos si compartian antígenos de histocompatibilidad esto significaba que los reconocían como propios (29).

- La reacción mixta linfocitaria ocurre cuando hay proliferación de linfocitos al ser estos incubados en presencia de otras células con antígenos MCH II diferentes, se emplea para determinar histocompatibilidad en trasplantes.

.10- Un co-cultivo es un experimento en el que se ponen en contacto 2 tipos de

células distintas: células presentadoras de antígenos y linfocitos T, esto con el fin

de evaluar la activación de estos linfocitos T. Para realizar el experimento usted cuenta con los siguientes componentes murinos (de ratón):

a. Células presentadoras: Dendritic cell (H-2b), Lung Epithelial cell

(H-2b), Macrophage (H-2b/d)

b. Linfocitos: CD4 T cell (H-2d), CD8 T cell (H-2b)

c. Péptidos: A (para MHC-I), B (para MHC-II). Los péptidos se cargan

inmediatamente en los respectivos MHC y pueden ser reconocidos

por los linfocitos T en cuestión.

Con base en la información consultada y considerando el concepto de la

restricción del MHC ¿Cuáles son las posibles combinaciones entre células presentadoras de antígenos y linfocitos? Necesariamente tiene que escoger

una célula presentadora, un péptido y un linfocito (Esto es una combinación).

Nota: Haplotipos: H-2b, H-2d; H-2b/d (Posee ambos haplotipos). Además

indique cómo mediría usted que los LT maduraron o no (marcadores “CD” y

secreción de citoquinas)


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Antecedentes y respuesta:

La restricción de MHC tiene relación con el reconocimiento del péptido antigénico

por el linfocito T, únicamente si se encuentra unido a una molécula MHC en la

membrana de la célula presentadora.

Los linfocitos T CD8+ tienen una restricción MHC de clase Y, porque solamente

son capaces de reconocer péptidos antigénicos que se presenten unidos a

moléculas MHC de clase I en la membrana de otra célula. Cualquiera de las 3

células antes mencionadas(Dendrítica, epitelial o macrófago) puede actuar como

célula presentadora, ya que todas las células nucleadas del cuerpo poseen MHC-I.

Por lo tanto, en este caso la combinación apropiada entre célula presentadora,

péptido y linfocito es : Célula dendrítica, epitelial o macrófago + CD8+ t +

péptido A (para MHC-I) (31)

Por otra parte, los linfocitos T CD4+ tienen una restricción MHC de clase II, porque

sólo reconocen péptidos unidos a moléculas MHC de clase II en la membrana de

las células presentadoras, por lo que una combinación apropiada para este tipo

sería : Célula dendrítica, epitelial o macrofago (las 3 expresan MHC-II) + CD4+

T + péptido B (para MHC-II). (32)

11- La comunicación entre las células del sistema inmune se da a través de diversas

señales. Entre ellas se destacan dos tipos de moléculas: Citoquinas y

Quimioquinas. Defina cada una de ellas Haciendo énfasis en sus diferencias.

Las citoquinas y quimioquinas son moléculas que permiten la comunicación mediante la interacción con receptores de superficie específicos.

Las citoquinas son proteínas producidas de forma breve y autolimitada por las células linfoides y de otros tipos, que regulan y estimulan la respuesta inmunitaria.

El radio de acción de las citoquinas es corto y generalmente tienen función autocrina (sobre la misma célula que la produce), yuxtacrina (sobre la célula vecina mediante la expresión en membrana de la citoquina) o paracrina (sobre la célula

vecina al liberarse de forma soluble), favoreciendo de esta manera la aparición de fiebre y refuerzan la respuesta inflamatoria, provocando la activación de los macrofagos.

Su acción fundamental consiste en la regulación del mecanismo de la

inflamación, estas pueden actuar sobre diferentes tipos celulares e inducir diversas respuestas. Estas pueden ser pro inflamatorias, las cuales son producidas principalmente por

https://es.wikipedia.org/wiki/Inflamaci%C3%B3n


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monocitos y macrofagos, celulas dendriticas activadas y linfocitos, como también anti inflamatorias (33)(34)

Las quimioquinas son proteínas de bajo peso molecular, que se asocian a la respuesta inflamatoria, ya que están ligadas a la heparina, glicosaminoglicanos y

moléculas de azúcar cargadas negativamente de la superficie celular, direccionando el movimiento de los leucocitos hacia el sitio de la lesión, de esta forma son consideradas citoquinas proinflamatorias.

La forma en que las quimioquinas dirigen el movimiento de las células mononucleares por el organismo

es a través del gradiente hacia las zonas con una mayor concentración de quimioquina, generando una respuesta inmune adaptativa que se denomina quimiotaxis, de esta forma son capaces de activar receptores de neutrófilos, basófilos, monocitos y linfocitos t.

Además, las quimioquinas regulan la adhesión, migración transendotelial,

degranulación, angiogénesis, desarrollo de células hematopoyéticas e inmunes, así como la génesis de órganos linfoides.(34)(35)

12- Un ratón fue infectado con el Virus Respiratorio Sincicial (RSV) y se quiere

evaluar la presencia de proteínas virales en el pulmón, además de su ubicación en

las células infectadas ¿Qué técnica utilizaría usted en un corte histológico

pulmonar para determinar la ubicación de una proteína de interés? Explique el

fundamento de esta técnica y sus aplicaciones.

Para evaluar la presencia de proteínas virales se puede realizar un ELISA para la detección del antígeno mediante anticuerpos específicos del virus respiratorio sincicial.

En cuanto a la ubicación de la proteína, realizaremos una inmunohistoquímica, ya que esta técnica permite identificar la ubicación celular y subcelular, en este caso una proteína, a la cual se le agrega un anticuerpo marcado con fluorescencia, de esta forma se genera un complejo entre la proteína y el anticuerpo marcado, quedando adherido en la muestra del corte histopatológico pulmonar, pudiendo determinar la ubicación de dicha proteína.

Esta técnica es un método de localización específico de un antígeno en el tejido o en la

célula, basado en el reconocimiento antígeno-anticuerpo.

La inmunohistoquímica tiene sus orígenes en la histoquímica, pero extendida a una gran variedad de componentes del tejido, donde el principio básico de este método, como el de cualquier otra técnica de tinción es una evidente visualización de la localización del componente marcado.


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Actualmente ha sido reconocido el potencial de la inmunohistoquímica siendo más que una tinción, un inmunoensayo en el tejido, con características de reproducción y cuantificación de un test de ELISA, el cual no solo detecta la presencia de un analito, proteína o antígeno, en relación al tejido y arquitectura celular sino que también provee de una precisión y fiabilidad en sus mediciones.

El desarrollo de esta técnica ha causado un rol importante en el diagnóstico de patologías como el reconocimiento y clasificación de tumores (36) (37)

Bibliografía

1- Abbas, A. K., Lichtman, A. H., & Pillai, S. INMUNOLOGÍA (Doctoral dissertation, Massachusetts General Hospital).

2- Bielsa, I. (2010). Significado biológico de los autoanticuerpos y técnicas para su detección. Med Cutan Iber Lat Am, 38 (3), 109-116.

3- De la Fuente González, A., Lozano, J. R., & Capdevila, E. F. (2007). Análisis de proteínas mediante electroforesis e inmunotransferencia (Western blot). Piel , 22 (5), 252-258.

4- Siachoque, H. O. (2006). Inmunología. Diagnóstico e interpretación de pruebas de laboratorio. Universidad del Rosario. pág. 19

5- Berg, J. M., Stryer, L., & Tymoczko, J. L. (2007). Bioquímica. Reverté.pág.87

6- Campos, A., Muñoz, C.,Rubio, G. (2004). Manual de prácticas de inmunología. Masson. pág 17

7- Soluciones ELISA, protocolo y técnicas. extraido desde

http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/Soluciones-ELISA-protocolos.pdf

10- Bernard A, Boumsell L (1984). «[Human leukocyte differentiation antigens]». Presse Med 13 (38): 2311–6. PMID 6239187.

11- Barrera Rámirez, L., Drago Serrano, M. E., Pérez Ramos, J., Sainz Espuñez, T., Zamora, A. C., Gómez Arroyo, F., & Mendoza Pérez, F. (2004). Citometría de flujo: Vínculo entre la investigación básica y la aplicación clínica. Revista del Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias, 17(1), 42-55.

12- Mindan, P., & Mindán, F. P. (1998). Compendio de anatomía patológica. Elsevier España.

13- Abbas A, Lichtman A, Pillai S. 2008. Inmunología Celular y Molecular. 7ª Edición. Capítulo 7:Receptores inmunitarios y transducción de señales; La función de los receptores CD4 y CD8 en la activación de los linfocitos T; pag.149

14- Gao G, Jakobsen B (2000). "Molecular interactions of coreceptor CD8 and MHC class I: the molecular basis for functional coordination with the T-cell receptor". Immunol Today 21 (12): 630–6. doi:10.1016/S0167-5699(00)01750-3. PMID 11114424

15- Janeway, Jr et al (2000). Inmunobiología. Masson, SA. ISBN 84-458-1176-2.

https://es.wikipedia.org/wiki/Especial:FuentesDeLibros/8445811762https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11114424https://en.wikipedia.org/wiki/PubMed_Identifierhttps://dx.doi.org/10.1016%2FS0167-5699%2800%2901750-3https://en.wikipedia.org/wiki/Digital_object_identifier


17/18

16- Kuby, Janis; Kindt, Thomas J.; Goldsby, Richard A.; Osborne, Barbara A. (2007). Kuby immunology . San Francisco: W.H. Freeman. ISBN 1-4292-0211-4 .

17- Micklem K, Rigney E, Cordell J, Simmons D, Stross P, Turley H, Seed B, Mason D. A

human macrophage-associated antigen (CD68) detected by six different monoclonal antibodies. Br J Haematol 1989;73(1):6-11. PMID 2803980 .

18- Ramprasad MP, Fischer W, Witztum JL, Sambrano GR, Quehenberger O, Steinberg D. The 94- to 97-kDa mouse macrophage membrane protein that recognizes oxidized low density lipoprotein and phosphatidylserine-rich liposomes is identical to macrosialin, the mouse homologue of human CD68.Proc Natl Acad Sci U S A. 1995; 10;92(21):9580-4. PMID 7568176.



21- HIPERTEXTOS DEL ÁREA DE LA BIOLOGÍA © 1998-2007. Universidad Nacionaldel Nordeste. Fac. de Agroindustrias, Saenz Peña, Chaco República Argentina.Informacion obtenida desde: http://www.biologia.edu.ar/virologia/glosario.htm

22- Setoguchi M, Nasu N, Yoshida S, Higuchi Y, Akizuki S, Yamamoto S (1989). «Mouse and human CD14 (myeloid cell-specific leucine-rich glycoprotein) primary structure deduced from cDNA clones». Biochim. Biophys. Acta 1008 (2): 213–22. doi: 10.1016/0167-4781(80)90012-3. PMID 2472171 .

23- Simmons DL, Tan S, Tenen DG, Nicholson-Weller A, Seed B (1989). «Monocyte antigen CD14 is a phospholipid anchored membrane protein» . Blood 73 (1): 284–9. PMID 2462937 .

24- Janeway, Jr et al (2000). Inmunobiología. Masson, SA. ISBN 84-458-1176-2

.

25- Abbas A, Lichtman A, Pillai S. 2008. Inmunología Celular y Molecular. 6ª Edición. Capítulo 2:Inmunidad innata; pag.21-23.

26.- Abbas A, Lichtman A, Pillai S. 2008. Inmunología Celular y Molecular. 6ª Edición. Capítulo 5 : Complejo principal de histocompatibilidad.

27 - Parham, P. (2006). Inmunología. Ed. Médica Panamericana.pág.98

28 - Abbas A, Lichtman A, Pillai S. 2008. Inmunología Celular y Molecular. 6ª Edición. Capítulo 6: Procesamiento del antígeno y presentación de los linfocitos T. página: 115.

29 - Alonso O,Barcat J.1996. Medicina. revista del órgano de la sociedad Argentina de investigación clínica.,56(1)

31- Parham, P. (2006). Inmunología. Ed. Médica Panamericana.pág.181

32- Martí, M., & Jaraquemada, D.06 Procesamiento de antígenos.Universidad de Córdoba - Procesamiento de antígenos

https://es.wikipedia.org/wiki/Especial:FuentesDeLibros/8445811762https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2462937https://es.wikipedia.org/wiki/PubMed_Identifierhttp://www.bloodjournal.org/cgi/pmidlookup?view=long&pmid=2462937http://www.bloodjournal.org/cgi/pmidlookup?view=long&pmid=2462937https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2472171https://es.wikipedia.org/wiki/PubMed_Identifierhttp://dx.doi.org/10.1016%2F0167-4781%2880%2990012-3https://es.wikipedia.org/wiki/Digital_object_identifierhttp://www.biologia.edu.ar/virologia/glosario.htmhttps://es.wikipedia.org/wiki/Especial:FuentesDeLibros/8445811762https://es.wikipedia.org/wiki/Especial:FuentesDeLibros/8445811762https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7568176?dopt=Abstracthttps://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2803980?dopt=Abstracthttps://en.wikipedia.org/wiki/Special:BookSources/1-4292-0211-4https://en.wikipedia.org/wiki/International_Standard_Book_Number


18/18

33- Grajales, P. J. P. (2009). Inmunología. Una ciencia activa 2 . M. T. R. López, & C. J. M. Guarín (Eds.). Universidad de Antioquia.pág 122- 334.

34- Rugeles, M., Montoya C. (2009). . Inmunología. Una ciencia activa. segunda edicion.Universidad de Antioquia. pág 277-334

35- LEZAMA ASENCIO, P. TEMAS DE REVISIÓN.Rol de quimiocinas y sus receptores en la inflamación. Proteins, 3, C4.pág.113

36- Buys, D. J. L., Lara, T. C. O., & Ortiz, H. C. (2007). Interpretación básica de inmunohistoquímica. Características generales de diversos anticuerpos y su localización celular y subcelular. Patología, 45 (3), 126-140.

37- Dabbs, D. J. (2013). Diagnostic immunohistochemistry . Elsevier Health Sciences.

Cuestionario 1 - Técnicas de Inmunologia

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