INMUNOLOGIA PORCINA

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INMUNOLOGÍA VETERINARIA GUIÓN DE CLASES FUENTE: http://www.revista-anaporc.com/curso/inicio.htm ELABORADO POR: Dra. María Estela Encalada Paredes de Vásquez, Mg. Sc. UNIVERSIDAD DE CUENCA-ECUADOR

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INMUNOLOGÍA VETERINARIA

GUIÓN DE CLASES

FUENTE:

http://www.revista-anaporc.com/curso/inicio.htm

ELABORADO POR:

Dra. María Estela Encalada Paredes de Vásquez, Mg. Sc.

UNIVERSIDAD DE CUENCA-ECUADOR

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INSTITUTO PASTEUR, PARÍS

LABORATORIOS DE MICROBIOLOGÍA E INMUNOLOGÍA

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Sanidad AnimalAgentes

Salud

Microbiología Parasitología

E.

Infe

ccio

sas

E.

Para

sit

ari

as

Medicina preventiva

Ep

idem

iolo

gía

Enfermedad

Manejo - M. AmbienteBienestarBioseguridad

Inmunología

Inmunología

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1901 1996

BehringDoherty Zinkernagel

La inmunología es la parte de la Ciencia que estudia los mecanismos por los cuales los animales pueden diferenciar su propia estructura de la ajena, reaccionar contra lo extraño y memorizarlo para el futuro.

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Bcl 2

Diferenciación

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IgA

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ALTERACIONES DEL SISTEMA INMUNE

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PRIMER CAPÍTULO

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INMUNIDAD NATURAL NO ESPECÍFICA

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INMUNIDAD ADQUIRIDA ESPECÍFICA

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ESQUEMA DE LA OBTENCIÓN DE ANTICUERPOS MONOCLONALES

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BIOLOGÍA MOLECULAR

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CERDOS MINIATURA

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PRODUCCIÓN DE ANTICUERPOS MONOCLONALES

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ESQUEMA DE LINFOCITO B Y SU TRANSFORMACIÓN EN CÉLULA PLASMÁTICA

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ESQUEMA DE LINFOCITO B Y SU TRANSFORMACIÓN EN CÉLULA PLASMÁTICA

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¿CÓMO ES LA ESTRUCTURA DE LAS INMUNOGLOBULINAS

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MOLÉCULA DE INMUNOGLOBULINA

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DOMINIO DE INMUNOGLOBULINAS

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AMINOÁCIDO

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LOCALIZACIÓN DE LOS SITIOS DE UNIÓN CON EL ANTÍGENO

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Esquema de la reacción de citotoxicidad mediada por anticuerpos. La especificidad la proporciona el anticuerpo y la acción citotóxica la

célula

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En el timo se seleccionan los linfocitos para que sólo puedan reaccionar frente a las moléculas extrañas al organismo (selección positiva). Solamente estos linfocitos pasarán al torrente circulatorio. Por el contrario, se produce una destrucción celular (apoptosis) de los linfocitos que pudieran reaccionar contra la propia estructura.

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Reconocimiento específico de un solo determinante antigénico (un determinante = una célula). Tras el reconocimiento hay una proliferación, por la cual unos linfocitos pasan a formar parte de los linfocitos memoria, y otros actuarán como células efectoras.

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Corte histológico a nivel del estroma de la médula ósea porcina (200X) en el que se puede observar las diferentes poblaciones de células hematopoyéticas

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Corte histológico de timo de cerdo (25X) en el que se puede observar un lóbulo con los diferentes lobulillos separados por diferentes septos (a), la zona cortical o corteza (b) con gran presencia de linfocitos, la zona medular o médula (c) formada por células epiteliales y menor número de linfocitos

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Esquema del ganglio linfático de cerdo en el que se puede observar que su distribución celular y circulación linfática es inversa al resto de los mamíferos. La zona cortical con sus folículos linfoides y su tejido linfoide difuso se encuentra en la zona central del ganglio, estando la zona medular en la periferia.

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Corte histológico de un ganglio linfático de cerdo (25 x) en el que se puede observar su distribución diferencial con otras especies animales; así, la zona cortical (a), se localiza en el centro del ganglio con gran presencia de folículos linfoides (b) (linfocitos B y T CD4+) y tejido linfoide difuso (c) y la zona medular en la periferia (d).

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ESQUEMA DEL BAZO

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Corte histológico del bazo de cerdo (100X) en el que se pueden observar la cápsula (a), la pulpa roja (b), la pulpa blanca (c ) y las trabéculas (d)

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Esquema de las tonsilas de cerdo. Se observa, la distribución interna formada por las criptas, con su diferente apariencia según el corte, y los folículos linfoides, con sus centros germinativos y el tejido interfolicular o tejido difuso.

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Corte histológico de tonsila de cerdo (25x) en el que se observan: El epitelio estratificado (a), criptas (b), folículos linfoides ( C ) (fundamentalmente formados linfocitos B) rodeados por tejido linfoide difuso (d) formado fundamentalmente por linfocitos T.

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Corte histológico de la placa de Peyer (25X). Se puede observar los folículos linfoides con su centro germinativo (a) la corona (b) la región interfolicular ( C )

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SEGUNDO CAPÍTULO

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CÉLULAS DEL SISTEMA INMUNE

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LINFOCITOS B y LINFOCITOS T

LOS LINFOCITOS B, SE PRODUCEN EN LA MÉDULA ÓSEA (INMUNIDAD HUMORAL) Y LOS DISTINTOS TIPOS DE LINFOCITOS T DERIVAN DEL TIMO (INMUNIDAD CELULAR)

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CÉLULAS PRESENTADORAS DE ANTÍGENO• FUNCIONES:

Fagocitosis

Presentación de antígenos

Producción de linfocinas

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LINFOCITOS T y B OBTENIDA MEDIANTE MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE BARRIDO

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OBSERVACIÓN

Linfocito teñido con Giemsa, observado mediante microscopia ordinaria

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LINFOCITO T DE CERDO FORMANDO ROSETAS CON ERITROCITOS DE CARNERO

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ESQUEMA DE UN LINFOCITO B

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DETALLE DEL COMPLEJO BcR DE LOS LINFOCITOS B

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ESQUEMA DE LA ESTIMULACIÓN DE UN LINFOCITO B, TRANSFORMACIÓN EN CÉLULA PLASMÁTICA Y LA PRODUCCIÓN DE ANTICUERPOS

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ESQUEMA DE LA FORMACIÓN DE ROSETAS EN LINFOCITOS T DE CERDO CON ERITROCITOS DE CARNERO

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ESQUEMA DEL COMPLEJO TcR DE LOS LINFOCITOS T PORCINOS, FORMADO POR SUS CADENAS PESADAS Y LIGERAS, COMPUESTAS POR UNA PARTE VARIABLE, QUE REACCIONA CON EL ANTÍGENO, Y UNA PARTE CONSTANTE.

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ESQUEMA DE UNA CÉLULA NK EXPRESANDO EL RECEPTOR PARA LA FRACCIÓN Fc DE LAS INMUNOGLOBULINAS

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OBSERVACIÓN, POR MICROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA, DE LAS INMUNOGLOBULINAS DE SUPERFICIE DE UN LINFOCITO B

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ESQUEMA DE LA TÉCNICA PARA LA OBSERVACIÓN DE LAS INMUNOGLOBULINAS DE SUPERFICIE DE UN LINFOCITO B. UN SUERO POLICLONAL O MONOCLONAL (a) MARCADO CON ISOCIANATO DE FLUORESCEÍNA (b) REACCIONA CON LAS INMUNOGLOBULINAS PORCINAS DE LA MEMBRANA

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En la foto (b), se puede observar la formación de rosetas con eritrocitos porcinos en macrófagos infectados con el virus de la Peste Porcina Africana, este fenómeno conocido como hemoadsorción no puede ser confundido con la formación de rosetas con eritrocitos de carnero de los linfocitos T porcinos ( a ).

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CITÓMETRO DE FLUJO PARA EL ESTUDIO DE POBLACIONES DE LINFOCITOS PORCINOS.

UNIDAD BÁSICA DE LECTURA Y EL SISTEMA DE PROCESAMIENTO DE DATOS

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Estudio de doble marcaje (marrón-azul) para la localización de infección con el VPPA (marrón) en células marcadas con un antígeno monoclonal anti macrófago porcino (azul). Se puede observar como no todas las células que reaccionan con el AcM anti macrófago (azul) están infectadas, aunque sí la gran mayoría.

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ESQUEMA DE LA ESTIMULACIÓN BLÁSTICA O BLASTOGÉNESIS

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FOTOGRAFÍA DE UN EQUIPO PARA LA RECOGIDA DE CÉLULAS CULTIVADAS EN PLACA (“HARVESTER”). LAS CÉLULAS QUEDAN EN EL PAPEL DE FILTRO. ESTOS FILTROS SE PASARÁN AL CONTADOR DE CENTELLEO LÍQUIDO O DE PARTÍCULAS BETA.

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REACCIONES CITOTÓXICAS

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ANTÍGENOS DE CLASE I y II

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ANTÍGENOS

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TERCER CAPÍTULO

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CÉLULAS

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FOTOGRAFÍA DE LA SUPERFICIE DE UN MACRÓFAGO, OBTENIDA POR MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE BARRIDO.

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ESQUEMA DE LA ESTRUCTURA DE UN MACRÓFAGO

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LAS CÉLULAS EN SUSPENSIÓN A LOS QUE SE LES HAN AÑADIDO LOS DIFERENTES AcM PASAN A TRAVÉS DE UN TUBO MUY FINO EN UNA SÓLA FILA DE CÉLULAS, Y SON LEÍDAS POR EL LÁSER Y EL HAZ DE LUZ; EL PRIMERO IDENTIFICA LOS ANTICUERPOS MARCADOS Y EL SEGUNDO, EL TAMAÑO DE LAS CÉLULAS.

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CÉLULAS

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ESQUEMA DEL NEUTRÓFILO O POLIMORFONUCLEAR

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ETAPAS DEL PROCESO DE LA FAGOCITOSIS Quimiotaxis o atracción Adherencia y opsonización Ingestión y vacuolización Digestión o destrucción

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EOSINÓFILOS

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ESQUEMA DE LA PRESENTACIÓN DE Ags POR LINFOCITOS B.

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Un linfocito B estimulado por un antígeno cambia su estructura y función. El linfocito B se divide produciendo varios clones, posteriormente se transforma, desarrollando retículo endoplásmico rugoso, formándose finalmente una célula plasmática.

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INMUNOGLOBULINAS

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Esquema de la cooperación celular para la presentación de antígenos mediante células presentadoras (macrófagos o células dendríticas)

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INMUNOGLOBULINAS

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INMUNOGLOBULINAS

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PAPEL DE LAS MUCOSAS

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ESTIMULACIÓN DEL TEJIDO LINFOIDE DE LAS MUCOSAS BALT o GALT. ESTE MECANISMO PERMITE QUE, AUNQUE LA ESTIMULACIÓN ANTIGÉNICA HAYA SIDO LOCAL, LA RESPUESTA INMUNE SEA GENERALIZADA.

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ESQUEMA DE LA ESTRUCTURA DE UNA INMUNOGLOBULINA IgA

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PRESENTACIÓN ANTIGÉNICA EN LA ZONA INDUCTORA DE LAS MUCOSAS

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EL ANTÍGENO EN LA ZONA EFECTORA, ENTRA POR ENDOCITOSIS O A TRAVÉS DE LAS UNIONES ESTRECHAS

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ESQUEMA DE ACTUACIÓN DE LA IgA

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CUARTO CAPÍTULO

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ESQUEMA DE LINFOCITO B y SU TRANSFORMACIÓN EN CÉLULA PLASMÁTICA

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¿CÓMO ES LA ESTRUCTURA DE LAS INMUNOGLOBULINAS?

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ESTRUCTURA BÁSICA DE LAS INMUNOGLOBULINAS FORMADA POR DOS CADENAS PESADAS (ROJO) Y DOS CADENAS LIGERAS (AMARILLO)

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ESTRUCTURA DE LOS DOMINIOS DE LAS INMUNOGLOBULINAS. EN LAS CADENAS LIGERAS EXISTEN DOS DOMINIOS, UNO VARIABLE (VL) Y OTRO CONSTANTE (CL). LAS CADENAS PESADAS PRESENTAN UN DOMINIO VARIABLE (VH) Y TRES A CUATRO CONSTANTES (CH).

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AMINOÁCIDO

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LOCALIZACIÓN DE LOS SITIOS DE UNIÓN CON EL ANTÍGENO

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ESQUEMA DE LA REACCIÓN DE CITOTOXICIDAD MEDIADA POR ANTICUERPOS. LA ESPECIFICIDAD LA PROPORCIONA EL ANTICUERPO Y LA ACCIÓN CITOTÓXICA LA CÉLULA

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CADENAS PESADAS DE LAS INMUNOGLOBULINAS

¿CÓMO SE REGULA LA FORMACIÓN DE INMUNOGLOBULINAS?

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CADENA LIGERA DE LAS INMUNOGLOBULINAS

¿CÓMO SE REGULA LA FORMACIÓN DE INMUNOGLOBULINAS?

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ESQUEMA DE LA PRODUCCIÓN DE LA CADENA LIGERA DE LAS INMUNOGLOBULINAS PORCINAS

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ESQUEMA DEL CAMBIO DE ISOTIPO DE LAS INMUNOGLOBULINAS

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¿CÓMO SE REGULA LA FORMACIÓN DE INMUNOGLOBULINAS?

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¿CÓMO SE REGULA LA FORMACIÓN DE INMUNOGLOBULINAS?

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¿CÓMO SE REGULA LA FORMACIÓN DE INMUNOGLOBULINAS?

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¿CUÁNTOS TIPOS DE INMUNOGLOBULINAS SE CONOCEN?

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ESQUEMA DE LA ESTRUCTURA DE LA IgM. EN VERDE LA CADENA J

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ESQUEMA DE LA ESTRUCTURA DE LA IgG

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ESQUEMA DE LA IgA MONOMERICA

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ESQUEMA DE LA IgA EN FORMA DE DÍMERO UNIDOS POR LA CADENA J

Page 103: INMUNOLOGIA PORCINA

ESQUEMA DE LOS DIFERENTES NIVELES DE ACTUACIÓN DE LA IgA (1) EN EL LUMEN, (2) ENTEROCITOS Y (3)

LÍQUIDO HÍSTICO

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ESQUEMA DE UNIÓN DE DOS MOLÉCULAS DE IgE CON EL BASÓFILO

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¿QUÉ PAPEL TIENEN LAS INMUNOGLOBULINAS EN LA RESPUESTA INMUNE?

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¿QUÉ PAPEL TIENEN LAS INMUNOGLOBULINAS EN LA RESPUESTA INMUNE

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¿QUÉ PAPEL TIENEN LAS INMUNOGLOBULINAS EN LA RESPUESTA INMUNE?

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ESQUEMA DE ACTUACIÓN DE LA IgA La IgA puede actuar a nivel de la luz intestinal (lumen), evitando la adherencia al epitelio de virus y/o bacterias (1), dentro de los enterocitos incluso neutralizando virus (2) y por último, en el líquido hístico (3).

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QUINTO CAPÍTULO

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ESQUEMA DE FUNCIONAMIENTO DEL CITÓMETRO DE FLUJO PARA LA DETECCIÓN DE INMUNOGLOBULINAS DE SUPERFICIE EN LINFOCITOS B.

Las células en suspensión a los que se les han añadido los diferentes AcM (anti IgA e IgG) pasan a través de un tubo muy fino en una sola fila de células y son leídas por el láser y el haz de luz; el primero identifica los anticuerpos marcados y el segundo, el tamaño de las células.

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IMAGEN DE UNA AGLUTINACIÓN EN TUBO

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KITS COMERCIALES PARA ESTUDIOS SEROLÓGICOS

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MÉTODO ELISALOS SUEROS POSITIVOS SON DE COLOR AZUL Y LOS SUEROS NEGATIVOS SIN COLOR

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¿CÓMO SE ESTUDIAN LAS INMUNOGLOBULINAS?

FASES DE LA TÉCNICA ELISA SANDWICH

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¿CÓMO SE ESTUDIAN LAS INMUNOGLOBULINAS?

FASES DE LA TÉCNICA ELISA INDIRECTO

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¿CÓMO SE ESTUDIAN LAS INMUNOGLOBULINAS?

FASES DE LA TÉCNICA ELISA DE COMPETICIÓN

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Material necesario para la realización de la inmunotransferencia: Tiras de nitrocelulosa antigenadas. Tampón PBS. Sueros de referencia positivo y negativo. Conjugado. Solución Sustrato y soporte plástico para realizar todos los procesos.

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Fase final de la técnica. Se puede observar la aparición de las diferentes bandas, con las que ha reaccionado el suero problema y los sueros control.

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Técnica de inmunofluorescencia indirecta. Células MS infectadas con el virus de la Peste Porcina Africana. Se puede observar como los anticuerpos se han unido a las células infectadas, destacándose en el citoplasma unas zonas con una intensidad mayor, que corresponden a zonas de mayor replicación viral, y por tanto mayor fijación de anticuerpos.

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TAPIZ CELULAR INFECTADO

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¿QUÉ SON LOS SEROPERFILES?

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¿QUÉ SON LOS SEROPERFILES?

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¿QUÉ SON LOS SEROPERFILES?

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¿QUÉ SON LOS SEROPERFILES?

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¿QUÉ SON LOS SEROPERFILES?

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¿QUÉ SON LOS SEROPERFILES?

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¿QUÉ SON LOS SEROPERFILES?

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¿QUÉ SON LOS SEROPERFILES?

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¿QUÉ SON LOS SEROPERFILES?

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¿QUÉ SON LOS SEROPERFILES?

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¿QUÉ SON LOS SEROPERFILES?

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¿QUÉ SON LOS SEROPERFILES?

SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD BAJA

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¿QUÉ SON LOS SEROPERFILES?

SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD MEDIA

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¿QUÉ SON LOS SEROPERFILES?

SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD ALTA

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¿QUÉ APLICACIONES PRÁCTICAS PRESENTAN LOS SEROPERFILES?

El tiempo de cuarentena idóneo depende del agente infeccioso, su periodo de incubación y su capacidad de expresión. En general, de 4 a 8 semanas es el tiempo recomendado para las enfermedades porcinas.

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En el momento ideal de vacunación (zona amarilla) los anticuerpos maternales no interfieren con la vacunación, pero todavía son protectivos (línea azul). Esta situación permite el desarrollo de los anticuerpos vacunales (línea verde), evitando la infección y la posterior aparición de los anticuerpos de infección.

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GRÁFICA MODELO DE LA EVOLUCIÓN DE LOS ANTICUERPOS MATERNALES Y APARICIÓN DE LOS ANTICUERPOS DE INFECCIÓN (A PARTIR DE LOS 60 DÍAS) EN LA E. A. SE PUEDE OBSERVAR LA ZONA CRÍTICA DE INFECCIÓN, GENERALMENTE, ENTRE LOS 35 A 40 DÍAS.

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SEROPERFILES

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SEROPERFILES

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SEROPERFILES

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GRACIAS A LA UTILIZACIÓN DE VACUNAS gE NEGATIVAS Y MÉTODOS DE ELISA INDIRECTO DE COMPETICIÓN PARA LA VALORACIÓN DE ANTICUERPOS ANTI gE y gB, SE PUEDE DETERMINAR, EN LA ENFERMEDAD DE AUJESKY, MEDIANTE UNA SOLA DETERMINACIÓN, SI UN SUERO CORRESPONDE A UN ANIMAL (1) VACUNADO (SÓLO TIENE ANTICUERPOS ANTI gB), (2) INFECTADO (TIENE ANTICUERPOS ANTI gB Y ANTI gE), (3) NEGATIVO A ENFERMEDAD Y NO VACUNADO (NO TIENE ANTICUERPOS NI FRENTE A gE, NI gB).

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SERONEGATIVIZACIÓN

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SEROCONVERSIÓN

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ESTADO BASAL

Page 145: INMUNOLOGIA PORCINA

EN LA TÉCNICA DE SERONEUTRALIZACIÓN, SE VALORA LA CAPACIDAD DEL SUERO PROBLEMA (A DIFERENTES DILUCIONES) PARA NEUTRALIZAR LA INFECTIVIDAD DE UN VIRUS, SOBRE UNA LÍNEA CELULAR SENSIBLE. SI EL ANTICUERPO PROBLEMA NEUTRALIZA EL VIRUS, NO HABRÁ REPLICACIÓN VIRAL (AUSENCIA DE EFECTO CITOPÁTICO), SI NO LO NEUTRALIZA, HABRÁ REPLICACIÓN VIRAL (EFECTO CITOPÁTICO). EN LOS VIRUS QUE NO PRODUCEN EFECTO CITOPÁTICO, LA POSIBLE REPLICACIÓN VIRAL SE OBSERVA MEDIANTE TÉCNICAS DE INMUNOFLUORESCENCIA

O PEROXIDASA.

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SEXTO CAPÍTULO

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LAS CITOCINAS

UNIÓN DE LA CITOCINA AL RECEPTOR

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DIMERIZACIÓN DEL RECEPTOR Y ACTIVACIÓN DE LAS QUINASAS JAK, PRODUCIÉNDOSE LA FOSFORILACIÓN DEL RECEPTOR.

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FOSFORILACIÓN Y DIMERIZACIÓN DE LOS SATS, ACTIVACIÓN DE LA TRANSCRIPCIÓN DE LOS GENES-DIANA.

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ACTUACIÓN DE LAS CITOCINASA: Autocrina; E: Endocrina; P: Paracrina

La acción de las citocinas es predominantemente de carácter local (autocrina y paracrina) y en menor proporción Endocrina

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¿CÓMO INTERVIENEN LAS CITOCINAS EN LA RESPUESTA NATURAL O INNATA?

Las citoquinas juegan un papel fundamental en la respuesta natural mediante mecanismos de acción directa frente al agente invasor (evitando la infección de las células por diferentes virus) o mediante mecanismos de activación celular (NK y macrófagos) que a su vez liberan más citocinas

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RESISTENCIA TRANSITORIA

Page 153: INMUNOLOGIA PORCINA

DEGRADACIÓN DEL ARN MENSAJERO. INHIBICIÓN DE LA SÍNTESIS DE PROTEÍNAS

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ACTIVACIÓN DE GENES QUE EXPRESAN PROTEÍNAS ANTIVIRALES

Page 155: INMUNOLOGIA PORCINA

INCREMENTO DE LA EXPRESIÓN DEL SLA

Page 156: INMUNOLOGIA PORCINA

Cooperación celular para la presentación de antígenos y producción de anticuerpos. Las citocinas juegan un papel fundamental en estos procesos

Page 157: INMUNOLOGIA PORCINA

MEDIANTE LAS TÉCNICAS DE CITOTOXICIDAD POR LIBERACIÓN DE CROMO 51 SE PUEDEN VALORAR LOS MECANISMOS CITOTÓXICOS “IN VITRO”

Page 158: INMUNOLOGIA PORCINA

¿CÓMO ACTIVAN LA HEMATOPOYESIS Y LA ATRACCIÓN DE LOS LINFOCITOS?

Principales citocinas que estimulan la hematopoyesis

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CITOCINAS DEL GRUPO ALFA

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CITOCINAS DEL GRUPO BETA

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CITOCINAS DEL GRUPO GAMA

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¿CÓMO SE ACTIVAN LOS LINFOCITOS?

Esquema de la cooperación celular en la respuesta inmune adquirida. Las citocinas juegan un papel muy importante en estos procesos

Page 163: INMUNOLOGIA PORCINA

ACTIVACIÓN DE LOS LINFOCITOS B

Page 164: INMUNOLOGIA PORCINA

MÉTODOS PARA ESTUDIAR LAS CITOCINAS

1. MÉTODO INMUNOLÓGICO

Page 165: INMUNOLOGIA PORCINA

MÉTODOS PARA ESTUDIAR LAS CITOCINAS

2. MÉTODO MOLECULAR

Page 166: INMUNOLOGIA PORCINA

SÉPTIMO CAPÍTULO

Page 167: INMUNOLOGIA PORCINA

MECANISMO DE ACTIVACIÓN DE LA RESPUESTA INMUNE. RESPUESTA NATURAL Y ADQUIRIDA.

FAGOCITOSIS

La activación de la fagocitosis se realiza en cuatro fases:

1. Quimiotaxis

2. Adherencia

3. Ingestión

4. Destrucción

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LISIS CELULAR POR LA ACTIVACIÓN DEL COMPLEMENTO POR LA VÍA CLÁSICA

Page 169: INMUNOLOGIA PORCINA

LAS CITOQUINAS JUEGAN UN PAPEL FUNDAMENTAL EN LA RESPUESTA NATURAL MEDIANTE MECANISMOS DE ACCIÓN DIRECTA FRENTE AL AGENTE INVASOR (EVITANDO LA INFECCIÓN DE LAS CÉLULAS POR DIFERENTES VIRUS) O MEDIANTE MECANISMOS DE ACTIVACIÓN CELULAR (NK Y MACRÓFAGOS) QUE A SU VEZ LIBERAN MÁS CITOCINAS

Page 170: INMUNOLOGIA PORCINA

Mecanismos de presentación de antígenos. Cooperación celular entre las células presentadoras de antígeno y los linfocitos T CD4 y los B. La actuación de diferentes citocinas es fundamental en el proceso.

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RESPUESTA INMUNE

Page 172: INMUNOLOGIA PORCINA

En la técnica de seroneutralización, se valora la capacidad del suero problema (a diferentes diluciones) para neutralizar la infectividad de un virus, sobre una línea celular sensible. Si el anticuerpo problema neutraliza el virus, no habrá replicación viral (ausencia de efecto citopático) si no lo neutraliza, habrá replicación viral (efecto citopático). En los virus que no producen efecto citopático, la posible replicación viral se observa mediante técnicas de inmunofluorescencia o peroxidasa.

Page 173: INMUNOLOGIA PORCINA

ESQUEMA DE LA ESTRUCTURA DE LAS INMUNOGLOBULINAS

Page 174: INMUNOLOGIA PORCINA

Estimulación del tejido linfoide de las mucosas. BALT o GALT. Este mecanismo permite que aunque la estimulación antigénica haya sido local, la respuesta inmune sea generalizada.

Page 175: INMUNOLOGIA PORCINA

El interferón interviene en la respuesta natural, induciendo una resistencia transitoria en las células

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VIRUS DE LA PPC

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Page 178: INMUNOLOGIA PORCINA

Replicación viral

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Page 182: INMUNOLOGIA PORCINA

CÉLULA NK

Page 183: INMUNOLOGIA PORCINA

REACCIÓN CITOTÓXICA

Page 184: INMUNOLOGIA PORCINA

Mecanismos inmunitarios frente a bacterias y parásitos

Page 185: INMUNOLOGIA PORCINA

Aspecto de colonias de bacterias GRAM positivo

Page 186: INMUNOLOGIA PORCINA

OCTAVO CAPÍTULO

Page 187: INMUNOLOGIA PORCINA

VACUNACIÓN Y SUEROTERAPIA

Page 188: INMUNOLOGIA PORCINA

Un agente infeccioso (completo o fragmentado, vivo o muerto) capaz de inducir una respuesta inmune, más o menos duradera, sin producir ningún tipo de lesiones se considera como una vacuna.

Page 189: INMUNOLOGIA PORCINA

FOTOS DEL LABORATORIO-MUSEO DE LOUIS PASTEUR, PARÍS

Page 190: INMUNOLOGIA PORCINA

VACUNAS ATENUADAS E INACTIVADAS

VACUNAS ATENUADASEstimulación CD4+ y CD 8+

CITOCINAS (Interferón)

MENOR ANTÍGENO

MENOR ESTABILIDAD ALMACENAMIENTO

MENOS SEGURAS

ADYUVANTES NO CRÍTICOS

VACUNAS INACTIVADASFundamentalmente CD4+

Menos CITOCINAS

MAYOR ANTÍGENO

MAYOR ESTABILIDAD ALMACENAMIENTO

MÁS SEGURAS

ADYUVANTES SON CRÍTICOS

El principal problema de este tipo de vacunas, es que la atenuación no sea estable y pueda revertir a las formas virulentas. La estabilidad de la atenuación es el factor más crítico en estas vacunas.

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La mayoría de los virus se cultivan en líneas celulares estables. Estas células generalmente se adhieren a la superficie de los frascos de cultivo (algunas líneas celulares están en suspensión) donde posteriormente serán infectadas con el inóculo viral para la producción de gran número de partículas virales.

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Cultivo de virus en huevos embrionados. Algunos virus no se pueden cultivar en líneas celulares y se replican en huevos de ave.

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La superficie para cultivar células se puede incrementar mucho más utilizando los microcarries, los cuales son unas partículas que permiten que millones de células puedan adherirse y crecer sobre ellas. De esta manera se multiplica por “n” veces la superficie para cultivar células

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Vista parcial de una unidad de centrifugación industrial de bacterias para la producción de vacunas bacterianas.

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SEGURIDAD EN LAS VACUNAS

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VIRUS DE LA PESTE PORCINA AFRICANA (PPA)

Fotografías del virus de la Peste Porcina Africana (PPA) por microscopía electrónica y lesiones que provoca.

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¿QUÉ INCONVENIENTES PUEDEN PRESENTAR LAS VACUNAS CONVENCIONALES?

La estructura molecular y antigénica es idéntica tanto para el agente infeccioso como en el vacunal por lo que los anticuerpos inducidos por ambos son idénticos.

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VIRUS DE LA PESTE PORCINA CLÁSICA (PPC)

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NOVENO CAPÍTULO

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VACUNAS DE NUEVA GENERACIÓN

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Una vez conocido el fragmento de ADN y su secuencia, la proteína de interés inmunológico, se aísla el fragmento de ADN (1), y se inserta en un plásmido (2), este plásmido se introduce en un vector de expresión (E. coli, Baculovirus) (3). Algunos aceptarán el gen y producirán el recombinante (4). Otros, la mayoría, no (5).

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Microscopía electrónica de la estructura de un VLP (“virus like particles”) de varias proteínas del virus de la “lengua azul”. Cortesía de P. Roy.

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LESIONES OCASIONADAS POR EL VIRUS DE LA FIEBRE AFTOSA EN EL CERDO

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VACUNAS DE NUEVA GENERACIÓN

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VACUNAS VIVAS DELECCIONADAS

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Esquema de la estructura del virión, sus diferentes proteínas (con su nueva nomenclatura) y del ADN del virus de la E. A.

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Esquema de la estructura del ADN del virus de la Enfermedad de Aujeszky. En el fragmento Us se localizan los genes de las gE y gl.

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Esquema de la estructura del virión del virus de la EA con la localización de las diferentes proteínas

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RECOMBINANTES VIVOS

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Esquema de la construcción del recombinante entre el virus de la Mixomatosis y la proteína vp 60 del virus de la Enfermedad vírica hemorrágica del conejo.

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Microscopía electrónica de partículas virales de Mixoma y Enfermedad vírica hemorrágica del conejo

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VACUNAS DE ADN

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El antígeno (1) induce unos anticuerpos (2) cuyos sitios de unión son complementarios a la estructura (1). Cuando los sitios de unión de (2) se inoculan a otro animal, inducirán otros anticuerpos (3) cuyos sitios de unión serán complementarios de (2) e idénticos a (1) ya que presentan la misma estructura. Estos sitios de unión podrían ser utilizados como vacuna frente al antígeno (1).

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Esquema del método ELISA de Competición para el diagnóstico de la Enfermedad de Aujeszky. Los animales vacunados presentarán anticuerpos sólo frente a gB, mientras que los infectados tendrán anticuerpos frente a gE.

ELISA DE COMPETICIÓN

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Imagen de la última parte del desarrollo de la técnica ELISA

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Proceso de clonación de la proteína E2 y expresión en baculovirus para la producción de la vacuna de subunidades frente al virus de la PPC

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Los animales enfermos de PPC, presentan anticuerpos frente a las diferentes proteínas del virus, mientras que los animales vacunados con la vacuna de subunidades E2, sólo presentarán anticuerpos frente a E2.

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El método ELISA diferencia para animales vacunados con la vacuna de subunidades (E2). Los animales vacunados sólo presentan anticuerpos frente a E2, los portadores y/o enfermos, presentan anticuerpos contra E2 y Erns.

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DÉCIMO CAPÍTULO

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Esquema de la cooperación celular en la respuesta inmune adquirida

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El antígeno que penetra en los enterocitosis se destruye rápidamente por los lisosomas. Sin embargo, el antígeno que es capturado por las células M, es transportado sin degradación y presentado a los linfocitos intraepiteliales. A partir de ahí va a los ganglios linfáticos.

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Las citocinas juegan un papel fundamental en la respuesta natural mediante mecanismos de acción directa frente al agente invasor (evitando la infección de las células por diferentes virus) o mediante mecanismos de activación celular (NK y macrófagos) que a su vez liberan más citocinas.

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Una de las acciones de las citocinas en su capacidad para la atracción de las diferentes células del sistema inmune.

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Esquema de los diferentes tipos de vacunas de nueva generación

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Esquema de la producción de anticuerpos monoclonales

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Imagen de microscopía electrónica de retrovirus

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En la actualidad, los cerdos transgénicos y especialmente los politransgénicos del futuro parecen ser la especie animal candidata