InmunologíA

GeneraL

Por: Francisco Riveros N.

Otoño 2010

Universidad Mayor

16/03/10

Evaluaciones:

3PP's

o 1° 25%

o 2° 25%

o 3° 30%

Seminarios (entran como materia en pp's) 10%

Promedio controles de lectura 10%

Powerpoints

o hasta el jueves en la mañana el profe revisará las presentaciones, después de eso no

o inmuninvierno@gmail.com

Buscar cosas en google académico o en dominios con .edu

Las pruebas de inmunología general son los lunes en la tarde, durante la hora de seminario

Inmunología:

Ciencia que estudia todos los mecanismos fisiológicos de defensa, específicas e inespecíficas, a fin de mantener la integridad y homeostasis (balance, equilibrio) del organismo animal, identificando y diferenciando lo propio de lo extraño (antígeno) y destruyendo éste último

Anteriormente ligado a la microbiología

Identificación: o reconocimiento del cuerpo, lo propio

o se diferencia lo extraño

El 95% de los linfocitos creados son eliminados naturalmente por el cuerpo

Solo el 5% son inmunológicamente maduras y activas

El sistema inmune tiene que ser tolerante con lo propio, no existe tolerancia con lo extraño

Enfermedades autoinmunes ---> se pierde la tolerancia a lo propio

Leucocitosis: alza en n° de leucocitos

Leucopenia: baja en n° de leucocitos

Fagocito de primer ataque

o rápido, peón, muchos, débiles, Polimorfo nuclear NEUTROFILO

Fagocitos de segundo ataque

o más lento, caballería, MONOCITO

Células más inmaduras son normalmente más grandes, con núcleos más claros

Respuestas Inmunes:

Inmunidad innata ---> natural o inespecífica

Inmunidad adaptativa ---> específica

La primera fase de cualquier respuesta inmune consiste en el reconocimiento [del agente agresor] del patógeno o del material extraño, a fin de iniciar reacción para eliminarlo

Células del Sistema Inmune: (se generan en la médula ósea – tejido hematopoyético)

Eosinofilia:

Aumento de eosinofilos en la sangre

Frecuente en alergias y parasitismos

Kuppfer:

Importante porque el hígado trae en la sangre desechos que deben ser eliminados

Células Mieloides: Granulociticas

-neutrofilos (fagocitos) -basófilos (inflamatorio no fagocito) -eosinófilos (inflamatorio citotoxico) Monociticas

-macrofagos (tejidos) -langerhans (piel) -kuppfer (hígado) -Células dentríticas?

Células Linfoides: Linfocitos T

-helper -citotóxicas

-supresoras

Linfocitos B

-células plasmáticas

Células dentríticas?

22/03/10

Componentes del Sistema Inmune

*Acción contra lo propio ---> Lupus ---> ataca al Colágeno, la cual es una proteína estructural, en muchas (casi todas) las células. Los anticuerpos atacan al colágeno y también a trozos de éste. Acción del Sistema Inmune Benéficos:

Protección contra agentes invasores

Eliminación de células propias alteradas

Deletéreo:

Inflamación

Acción contra lo propio (autoinmunidad) ‡ tolerancia inmunológica ---> tolera propio

Sobrerreacción (hipersensibilidad) – Alergia tipo 1

Sobrerreaciones:

Rash cutáneo: enrojecimiento en pintita en la piel

Shock anafiláctico: inflamación sistémica por hipersensibilidad

Puntos cardinales de la inflamación:

Dolor

Rubor

Tumor (aumento de volumen)

Calor

Pérdida de función

Vacunas polivalentes:

Tienen diferentes antígenos

Con éstas vacunas se corre el riesgo de que el organismo no actúe con la misma eficiencia ante el antígeno

*Estrés ---> libera sustancias, entre ellas corticodes, los cuales afectan la respuesta inmune. Cuando el estrés es muy fuerte, pueden proliferar células cancerígenas. *El corticodes tiende a generar retención de líquidos

Innato (inespecifico o natural)

Humoral -serie de moleculas

-complemento: mecanismo de defensa

-interferón

-factor necrotico tumoral -lisozima (lagrimas

Celular -macrofagos

-neutrofilos fagocitosis

Adaptativo (especifico)

Humoral -anticuerpos o inmunoglobulinas

Celular -linfocitos T

-más otras células efectoras que colaboran con gran asociación

23/03/10

Inmunidad Innata v/s Adaptativa

Innata: -independiente Ag (antígeno) -inmediata

-Ag inespecífico

-sin memoria inmunológica

Adaptativa: -dependiente Ag (sin antígeno, no hay respuesta inmune adaptativa) -periodo latencia (varía según edad, estado de salud, etc.) -Ag específico

-memoria inmunológica

Neutrófilo Macrófago

Multiplicación y especialización (linfocitos B en celulas plasmáticas producen inmunoglobulinas)

Componentes del Sistema Inmune

*Los camélidos tienen eritrocitos nucleados!!

Mecanismos Efectores – Innata

Lugar Componente Función

Piel Células escamosas, glándulas sebáceas y sudoríparas

Descamación, ácidos grasos

Tracto Gastro-intestinal (GI) Células columnares Peristalsis, pH, sales biliares, ácidos grasos

Pulmón Mucus, cilios Clearance ciliar, surfactante

Ojos – Nasofaringe Mucus, saliva, lagrimas Flushing, lisozima (enzima preformada, destruye

peptidoglicanos bacterianos)

Sangre – Órganos linfoides Fagocitosis, células K, NK / LAR (células activadas por

linfoquinas ---> citoquinas provenientes de linfocitos)

Fagocitosis / destrucción intracelular, citolisis directa y

dependiente de Ac (anticuerpos)

Innato Adaptativo

Barreras físicas -piel, vellos intestinales, cilios pulmonares, etc.

Factores solubles -citoquinas (mensajeras), interferón, complemento (preformadas), etc.

Células -fagocitos*, células NK, eosinofilos (citotóxicas), células K

*Función de fagocitosis

-macrófagos -neutrófilos

Killer (citotóxica) tiene una condición: el antígeno debe estar rodeado de inmunoglobulinas

Cualquier célula que tenga receptores para la región FC (fracción cristalizable) de las inmunoglobulinas puede actuar como célula K

No

Inmunoglobulinas

Linfocitos T y B

Suero y líquidos tisulares Lactoferrina, transferrina (transportadores de fierro)

Deprivación de fierro (Muchas bacterias usan fierro para multiplicarse, así que si se les quita el fierro, tienen

menos posibilidades de proliferar)

Interferón, FNT-a (factor necrótico tumoral α)

Proteínas antivirales y activación fagocítica

Fibronectina / complemento Opsonización, fagocitosis aumentada, inflamación

Opsonización: proceso por el cual un agente bacteriano que puede generar una agresión del sistema, es rodeado por “opsoninas” (Ac, etc.), y producto de ello la célula fagocítica incrementa su apetito, la cual se incrementa en forma inespecífica en una inflamación. ---> Como ketchup a las papas fritas.

En la superficie de los linfocitos B, hay inmunoglobulinas de membrana (son chasconas)

Van hacia afuera las regiones FAB (hipervariable), la cual interactúa directamente con el antígeno

El linfocito T para reconocer el antígeno necesita una Célula Presentadora de Antígeno (CPA), el cual podría ser un linfocito B, pero no es su función principal ser CPA (la cual es dar lugar a las células plasmáticas para la producción de inmunoglobulinas)

El macrófago podría ser CPA, pero las Células Dendríticas Interdigitales son las CPA por excelencia

Hemobartonella felis ---> parásito intracelular

Litiasis (cálculos) biliares ---> obstruye paso de salida de la bilis, causando hiperbilirrubinemia, a su vez causando ictericia, sin necesariamente ser un problema hepático.

29/03/10

Se debe volver a la homeostasis (con apoptosis) después del crecimiento y derrota de los antígenos para evitar una inflamación crónica que daña progresivamente el tejido de manera irreparable.

Tipos de Respuesta Inmune Adaptativa

*CPA: célula dendrítica interdigitante

Suero es la parte que contiene proteínas solubles en el plasma sanguíneo

TCR ---> receptor de los linfocitos T ---> interactúa con un macrófago (CPA), formando un complejo, para generar moléculas de coestimulación, para poder activar a un linfocito T helper.

El helper libera sustancias ---> linfoquinas (citoquinas provenientes de linfocitos T) hacia un receptor de linfoquina del macrófago, y así se estimula la actividad y capacidad fagocítica del macrófago, estimula la capacidad de la liberación de sustancias.

Después de la lisis, los viruses se liberan, para que actúen las inmunoglobulinas, ya que no pueden actuar intracelularmente.

Células linfoides:

1. Linfocitos B

2. Linfocitos T Helper (Th) o colaboradoras

3. Linfocitos T Citolíticas (Tc) 4. Linfocitos Grandes Granulares (LGG)

*95% de Natural Killers (NK) son LGG

*Cáncer ---> reacciones citotóxicas celulares predominan en su combate.

Inmunidad Humoral

Bloquea infecciones y elimina a los microbios extracelulares

Inmunidad mediada

por células

Linfocito T Helper

+

Macrófago

Activación de macrófagos para matar a los microbios fagocitados

Lisis de células autólogas para interrumpir el ciclo de reproducción del virus al destruir su reservorio de infección

Célula autóloga infectada por virus

+

Linfocito T citolítica

30/03/10 Linfocitos: Células B:

Cada linfocito B está programado genéticamente para codificar un receptor de superficie específico de un antígeno determinado.

Si reconoce al antígeno, se multiplica y diferencia a célula plasmática para la producción de inmunoglobulinas (anticuerpos)

Células T: según función

Th: interacción con célula B (multiplicación, diferenciación, producción anticuerpos)

Th: interacción con fagocitos mononucleares (destruyen patógenos intracelulares)

Tc: destrucción célula huésped infectadas por virus u otro patógeno intracelular

LGG: reconocen células huésped que carecen o han perdido expresión de ciertas moléculas (antígenos) CMH (células tumorales infectadas por viruses)

Maduración de los Linfocitos:

*Linfocitos B ---> Inmunidad adaptativa humoral *Linfocitos T ---> Inmunidad adaptativa celular ---> Existe maduración también (no solo en el Timo) sino que en la piel y en el epitelio intestinal ---> Aves ----> se encuentran en la Bursa de Fabricio en la cloaca

La maduración de los linfocitos ocurre en gran parte en el tejido linfático asociado a la piel

La maduración implica que el linfocito esté listo para poder defender

Clases de Linfocitos:

Linfocito B ---> neutralización, fagocitosis, activación del complemento ---> (respuesta adaptativa)

Linfocito T Helper ---> activación de macrófagos

---> inflamación (neutrófilo) (respuesta adaptativa) ---> activación de linfocitos T y B (diferenciación)

Linfocito T Citolítica ---> matar células infectadas intracelularmente ---> (respuesta adaptativa)

Natural Killer ---> matar células infectadas intracelularmente ---> (respuesta innata)

Linfocitos T:

Para su activación deben reconocer al antígeno (con el uso del CPA: célula presentadora de antígeno – CMH)

CMH: moleculas especializadas codificadas en un conjunto de genes denominado complejo de mayor (o principal) histocompatibilidad

Linfocito T posee receptor específico TCR que reconoce: péptido Ag-CMH ---> activación linfocito T por moleculas de coestimulación

Linfocito activado libera citoquinas (proteínas solubles): transmisión de señales a otras células o interactúa directamente con otras células

*Reticulocitos: eritrocitos nucleados por inmadurez

*Encontrar compatibilidad sanguínea es más fácil que encontrar compatibilidad de órganos, ya que la sangre tiene sus antígenos de membrana mucho menos especializadas que los órganos

Célula autóloga ---> CMH I CPA ---> CMH I y CMH II ---> pueden de tener un péptido antigénico para llevarlo a la membrana CMH II

La célula autóloga, si está infectada, puede expresar un CMH I con una anormalidad, gracias a péptidos virales adheridos a sus antígenos de membrana normales, los cuales toman contacto con las NK, y al no poder expresar su inhibidora de apoptosis (como normalmente lo haría, en un caso normal), la NK detecta un problema y la lisa

Células Citotóxicas:

Linfocito T Citotóxico (Tc)

Linfocito granular grande (LGG)

Células natural killer (NK)

Polimorfonucleares eosinófilos

Todas éstas células destruyen a las células afectadas o alteradas a través de la liberación de sustancias de los gránulos intracelulares en la cercanía de ella (los citotóxicos liberan también sustancias tóxicas contenidas en el citosol).

*Cél K ---> Adcc (citotoxicidad dependiente del Ac.) ---> ~~ Antibody dependent on citotoxic cells

Células mediadoras de Inflamación:

Basófilos (circulantes) / Mastocitos o células cebadas (tisulares):

Contienen gran cantidad de gránulos

Pueden sintetizar y secretar mediadores que controlan las respuestas inmunes

Mastocitos están cercanos a vasos sanguíneos y ejercen función sobre endoteliocitos

Plaquetas: trombogénesis o Ag-Ac induce activación con liberación de mediadores de la inflamación

*Células cebadas ---> ej. Adventicia conectiva de arteriolas

Fx: quimiotaxis leucocitaria y de mediadores solubles hacia el punto de infección

Mediadores liberan histamina a los mastocitos en sus receptores H1, el cual causa relajación (vasodilatación), aumentando la permeabilidad a su vez causando edema (exceso de líquido intersticial).

Mediadores solubles: (sérico ---> suero sanguíneo, plasma sin elementos figurados que coagulan)

Inmunoglobulinas

Citoquinas

Proteínas de fase aguda

Complemento

*Las citoquinas son liberadas hacia el hígado para sintetizar las proteínas de fase aguda, la cual es inflamatoria (ej. PCR). * Las inmunoglobulinas, las proteínas de fase aguda y el complemento son las moléculas que promueven la fagocitosis, es decir, se comportan como opsoninas.

05/04/10

Antígeno: o cuerpos extraños al organismo o toda respuesta inmune comienza con un reconocimiento del antígeno o incapaz por sí mismo de unirse a un BCR o un TCR, pero si puede unirse a un linfocito T

activado

Inmunógeno: o cuerpo capaz de activar una respuesta inmune, de despertar o capaz de unirse a un BCR o TCR (receptores de linfocitos B y T)

Hapteno: o molécula muy pequeña o incapaz de desencadenar una respuesta inmune o antígeno, pero no inmunógeno

Epítopo o Determinante Antigénico: o son algunos sectores de un antígeno que inducen reacción inmune o H1N1 ---> gripe porcina // H1N5 ---> gripe aviar o en un mismo microbio, pueden haber más de un tipo de epítopo

Anticuerpo: o glicoproteína o la producen células plasmáticas o éstas células las producen cuando hay presencia de inmunógenos

Tolerógenos: o antígeno reconocido para que ya no se reaccione ante su presencia

Factores que influencian la inmunogenicidad del inmunógeno

Carácter de extraño (inmunógeno) o Xeno (de especies distintas) ---> xenoantígeno

injerto de piel de cerdo a un humano o Alo (de la misma especie, de un individuo distinto) ---> aloantígeno

injerto de piel de un humano a otro o Auto (del mismo individuo) ---> autoantígeno

injerto de piel del mismo individuo

Tamaño o macromoléculas

Composición Química

o Estructura primaria ---> determinante de secuencia

o Estructura secundaria Proteínas o Estructura terciaria Determinantes conformacionales o Estructura cuaternaria

Forma Física o Particuladas > soluble o Denaturada > nativa

Degradabilidad o Ag procesado por CPA o Hidratos de carbono no son degradables

Factores que influencian la inmunogenicidad

Contribución del Sistema Biológico

Genética o especies o individual

Edad o lentitud al tener muy poca edad o vejez

Factores que influencian la inmunogenicidad

Método de Administración

Dosis y Ruta o > subcutánea > intragástrica

Adjuvante o sustancias que aumentan la respuesta inmune a Ag

Naturaleza Química de los Inmunógenos

Proteínas (las mejores)

Polisacáridos

Ácidos nucleicos

Lípidos (los peores) o algunos glicolípidos y fosfolípidos pueden ser inmunogénicos (células T)

Tipos de de Antígenos

T – Independientes

Si el Ag es capaz de activar directamente sin linfocito T helper es un T – independiente

Polisacáridos

Propiedades

o estructura polimérica (se repite el epítopo en los monómeros) o activación policlonal células B:

positivo ---> tipo 1 (TI – 1) ---> capaz de activar muchos linfocitos B

negativo ---> tipo 2 (TI – 2) ---> monoclonal u oligoclonal o resistente a la degradación

o ejemplos: polisacárido pneumococo, lipopolisacárido

flagelos

Tipos de de Antígenos

T – Dependientes

Protéicos

Estructura

o epítopos son diferentes

Degradables

Ejemplos: o proteínas microbianas

o proteínas extrañas o propias alteradas

Conjugados Hapteno – Carrier

Definición: se tiene que unir a una macromolécula que le da la estructura y complejidad (carrier)

Estrucura

o determinantes nativos

o determinantes hapténicos

Depende del carrier, si es polisacárido o proteína si es T – independiente o T – dependiente

El carrier puede tener determinantes nativos (propios de la proteína o polisacárido), y además se puede tener determinantes de los haptenos conjugados con el carrier

Los haptenos se unen al carrier para poder generar una respuesta inmunológica

Determinantes Antigénicos

Reconocidos por Células B y Ac

Composición

o proteínas, polisacáridos, ácidos nucléicos

o determinantes de secuencia (lineares) o determinantes conformacionales

BCR las reconoce todas

TCR solo reconoce los determinantes de secuencia

06/04/10

Determinante Antigénico Reconocidos por células B y Ac.

Número o límitado (epítopos inmunodominantes) o superficies externas de los Ags.

Determinante Antigénico Reconocidos por células T

Composición o proteínas (algunos son lípidos) o determinantes de secuencia o procesado (no es directo) o presentación MHC ---> presentación de lípidos por MHC – like CD1

*solo los CPA expresan MHC II

Tamaño o 8 – 15 residuos

Número o ilimitado a aquellos que se puedan unir a MHC

*Un hepatocito tiene el gen del MHC II pero no lo expresa

Superantígenos

Definición o Antígeno capaz de producir una reacción enorme en el sistema inmune, en

comparación con otros antígenos o normalmente un antígeno activa una respuesta inmune de 1:104 linfocitos

o un super antígeno activa 1:4 linfocitos

Determinantes Reconocidos por el Sistema Inmune Innato

Sistema inmune adaptativo o determinante discreto o reacciona con patógeno específico

Sistema Inmune Innato o amplio patrón molecular o reacciona con una variedad de patógenos o patrón molecular asociado a patógeno (PMAP o PAMP (en inglés)) o patrón de reconocimiento de receptores (PRR)

Afinidad: o fuerza de enlace que se establece entre el antígeno y el anticuerpo

Avidez: o fuerza de unión debido a enlaces multivalentes

Anticuerpos se unen a antígenos por uniones no-covalentes; a mayor distancia entre ellos, menor afinidad

A mayor kd (constante de disociación) menor afinidad

Inmunoglobulinas

La mayoría son γ-globulinas, pero pueden ser α o β con

Función General de Inmunoglobulinas

Unión a Ag o puede ser protectiva o Valencia: sitio de unión de un Ac. con un epítopo (si es un punto de unión, la valencia es

1; si son dos puntos de unión, la valencia es 2; etc.)

Funciones efectoras o fijación del complemento o unión a varias células o inmunidad al feto o inmunidad de mucosa o hipersensibilidad inmediata o regulación de la respuesta inmune

Estructura Básica de Ig.

Ig – heterogéneos

Mieloma proteínas – homogéneas

Cadenas pesadas y ligeras

L = 23 – 25 kD

H = 5 – 77 kD

Puentes disulfuro o intercadena (intercatenarios) o intracadena (intracatenarios) o H 450 – 550 aa's; 3 – 15% carbohidratos o L 220 aa's; no contiene carbohidratos

Región variable y constante o VL y CL

o VH y CH

Región de Bisagra

Estructura de la Región Variable

Hipervariable (HVR) o región determinante de complementaridad (CDR)

Región de entramado

Fragmentos de las Ig.

Fab (fracción que se une al antígeno) o unión al antígeno o valencia = 1 o especificidad determinada por VH y VL

Fc (fracción cristalizable) o funciónes efectoras o *cadenas pesadas son identicas entre sí

Clases de Ig.

IgG – Gamma cadenas pesadas

IgM – Mu cadenas pesadas

IgA – Alpha cadenas pesadas

IgD – Delta cadenas pesadas

IgE – Epsilon cadenas pesadas

Tipos de Ig. (cadenas ligeras)

Kappa

Lambda: o Lambda 1 o Lambda 2 o Lambda 3 o Lambda 4

Nomenclatura Ig.

IgM (kappa)

IgA1 (lambda 1)

IgG

Heterogéneos

IgG

Propiedades: o alta concentración sérica o mayor concentración en espacio extravascular o transferencia placentaria o la más versátil

IgM

Estructura: o pentómero (19s) normalmente o dominio extra (CH4) o cadena J

Propiedades: o 3era Ig sérica o primera Ig sintetizada por el feto y las células B vírgenes o fija complemento o opsonizante

*Sólo los antígenos que no son polisacáridos pueden activar a las células B para producir más de una clase distinta cada vez que vuelva el antígeno, y quede el linfocito de memoria para clonación. Esto se llama conmutación de clase

o Ig aglutinante o se une a receptores Fc o Ig de superficie de células B

IgA

Sérico – monómero

Secreciones (sIgA) o dímero (11s) o cadena J o componente secretorio

2da Ig sérica

Mayor Ig de secreción (inmunidad de mucosas o local)

IgD

Monómero

Porción hidrofóbica (extremo ácido)

No fija complemento

IgE

Monómero

Dominio extra (CH4)

La menor proporción en el suero

Une a basófilos y células cebadas (no requiere unirse a Ag)

Reacción Alergica

Infecciones parasitarias (particularmente helmintos) o unión a receptor Fe de eosinófilos

no fija complemento

Isotipos, Alotipos e Idiotipos

Isotipos o variabilidad isotípica

Hay variaciones estructurales en la secuencia de aa. en la región constante de las cadenas H y L

Cadenas ligeras = kappa, lambda

Cadenas pesadas = mu, alpha, gamma.... Isotipos:

Son los determinantes antigénicos que caracterizan las clases y subclases de las cadenas pesadas y los tipos y subtipos de las cadenas ligeras

Importancia: o cuantificación de los isotipos o caracterización de tumores de células B o inmunodeficiencias

Alotipos:

Son determinantes antigénicos específicos para formas alélicas de los genes de Ig

Variabilidad genética entre individuos de la misma especie

Alotipos representan pequeñas diferencias de secuencia el aa L y H

Frecuencia: en algunas personas solamente

Genética (alelos) o co-dominancia, genes autosomales

Exclusión alélica: la decisión de un linfocito de seguir un alelo especifico por el resto de su existencia y ningún otro

Importancia: o monitoreo trasplantes de médula o medicina forense o test de paternidad

Estructura Básica de una Inmunoglobulina

Intracatenarios

Intercatenarios

Extremo amino Extremo ácido

Vh

Vh

Vl

Vl

Ch1

Ch2 Ch3

Ch1

Ch2 Ch3

Cl Cl

Dominio variable de cadenas pesada y ligera (V)

Unión a receptores

Dominio constante de cadenas pesada y ligera (C)

12/04/10 *Imprimir powerpoint para el profe! Inmunología a escala zoológica

Todos los organismos tienen algún sistema de defensa inmunológica

Unicelulares: marcadores de membrana y formación de geles de defensa

Invertebrados: innato

o celular celomocitos o hemomocitos

nódulos y encapsulación

citotoxicidad inespecífica (carece de memoria) o humoral

opsoninas, aglutininas

pentraxinas ---> proteína C reactiva

Vertebrados: o barreras fisico-quimicas

piel reflejo de la tos, estornudo, mucus

Evolución órganos linfoides

o timo: a partir de los condrictios

o ganglios linfáticos: reptiles ---> también parten los linfocitos T helper o aves y mamíferos: células de membrana

Ciclóstomos: complemento

Proteínas de fase aguda ---> opsoninas

Interferón: limita reproducción viral

Anfibios ---> solo tienen IgY (por peso molecular)

Lisozimas se han encontrado en insectos, moluscos, y equinodermos

13/04/10 Idiotipos:

Definición o determinantes antigénicos, únicos presentes en una molécula individual o en moleculas

de especificidad idéntica (mismas regiones hipervariables) o variabilidad del dominio variable, tanto la cadena pesada como la ligera o determinan especificidad del paratopo (Vh Vl) o idiotipos privados y públicos de reacción cruzada o idiotipo – Anticuerpo anti-idiotipo

Importancia o marcadores de región variable o regulación de la respuesta inmune o vacunas o tratamiento de tumores de células B

Vacunas

El objetivo de toda vacuna es inducir inmunidad especifica que evite la invasión de microorganismos, eliminar a los que han entrado y neutralizar las toxinas microbianas, la inmunidad debe ser duradera

Que sean inocuas, que sean baratas, fácil almacenaje, no puede producir autoinmunidad, ni hipersensibilidad

Dosis apropiada

Características químicas Inmunidad protectiva

Vía de administración

Tipos de vacunas Vacunas elaboradas por Biotecnología

1. Aislar gen específico e insertarlo en el ADN de ciertos microbios o células de mamíferos, se

convierten en “fábricas” que producen el antígeno deseado *a microorganismos muertos *a microorganismos atenuados Lo clásico (Mejor, pero con el peligro de presentar la patología) 2. Insertar gen o genes del antígeno deseado en el ADN de un virus vaccinia (ej. virus pox del

canario) y se inyecta, se produce respuesta tanto al virus como al antígeno que codifica los genes introducidos (vacunas recombinantes)

3. Vacunas de ADN: se localizan los genes de un antígeno de un antígeno, se clonan, insertan en

un plásmido y se inyectan, la célula del huésped expresará el antígeno deseado

Plásmido: molécula extracromosomal de ADN doble helicoidal, se replican en forma independiente

Transfección: transferencia del ADN del virus al de una célula propia (muscular, etc.)

4. Síntesis química de antígenos al conocer el gen que codifica un determinado inmunógeno se conoce la secuencia exacta de aminoácidos que lo componen (vacunas de subunidad) lo que constituye un antígeno purificado

5. Vacunas anti-idiotipo, el paratopo es un reflejo tridimensional del epítopo de un antígeno

(espejo)

Se usa el anti-idiotipo como vacuna porque da la respuesta inmune para producir los anti-anti-idiotipos, que también funcionan para los primeros antígenos, sin necesidad de tener el original

Génetica en la Inmunología

Historia

La misma región C se puede asociar con muchas regiones V

o IgG posee diferentes especificidades

La misma región V se puede asociar a muchas regiones C

o mismo idiotipo en IgG e IgM

Regiones C y V se codifican por genes separados

H y L son codificados por 3 familias de genes

Para H: para kappa y para lambda

Genes Familiares Cadena Ligera

Organización línea genética germinal

*genes cadena ligera lambda: n=30

*genes cadena ligera kappa: n=300

Reordenamiento y expresión genética

Genes Familiares Cadena Pesada

Organización línea genética germinal

*genes cadena pesada; Vn=1000 , Dn=15

Exones que codifican para dominios de cadena H están separadas por intrones

Reordenamiento y expresión genética

19/04/10 Inmunidad en Neonatos y Vacunaciones Polivalentes

Neonato: periodo e mayor riesgo, tiempo varía según especie

Inmunidad fetal o formación timo y órganos linfoides secundarios

o aparición de los linfocitos B e Ig's

o Gato: linfocitos maduros a los 42 dias

La vía por la que llegan las Ig maternas al feto depende de que tipo sea la placenta (en relación al grado de invasión de la placenta en el tejido materno), esto es porque si es, por ejemplo, una placenta hemocorial (primates, roedores) las Ig's de la madre pasarán directamente de su sangre a la sangre del feto.

Infecciones intauterinas: toxoplasmosis, lengua azul, rinotraqueitis infecciosa bovina, rubeola

Inmunidad neonatal o inmunidad pasiva (propia) o sistema inmune completo, pero inmaduro

o ayuda muchisimo el calostro (primera leche que secreta la madre, conteniendo muchos Ig's)

El cachorro solo recibirá las Ig's contra las enfermedádes que la madre haya sido inmunizada

Vacunas

o inmunización activa sintetizada

o hay vacunas inactivadas o vivas atenuadas (más fuertes)

Vacunas polivalentes

o triple (gato), sextuple (perro) y octuple (sextuple plus) o 6ta a 8va semana ---> inicio del calendario de vacunación

o últimos avances ---> vacunas recombinantes

20/04/10

Mecanismos de Reordenamiento del ADN

Secuencia de señales de recombinación (RSS o SSR en español) o nonámero o heptámero o 1 o 2 señales de vuelta

RAG-1 y RAG-2

Kappa: o 1 exón C o corriente abajo de exón V ---> RSS tipo 1 o corriente arriba de exón J ---> RSS tipo 2

Porque una célula B individual produce una sola clase de Ig de una misma cadena L y de una misma H

Porque una célula B produce una Ig de una especificidad

Puede cambiar el isotipo pero no el idiotipo (conmutación de clase

*Cuando el antígeno es un hidrato de carbono, no hay conmutación de clase

Porque hay exclusión alélica

Heptámero Nonámero

CACAGTG – 23hp – ACAAAAACC

GTGTCAC – 23hp – TGTTTTTGG

Heptámero Nonámero

TGTTTTTGG – 23hp – GTGTCAC

ACAAAAACC – 23hp – CACAGTG

2 turnos

RSS

1 turno

RSS 2 1

Orden de Expresión de Genes de Ig

Célula B progenitora

Gen Cadena Pesada

Reordenamiento Productivo

Si

V-D-J recombinación

Transcribe

Cadena Pesada

No

Apoptosis

2do

+

–

1ro

Materno Paterno o

Célula Pre-B

Gen Cadena Ligera

Reordenamiento Productivo

Si

Transcribe

Cadena Ligera

V-J recombinación

–

Célula B Madura

No

Apoptosis

4to

+

1ro kappa 2do kappa 3ro lambda

Orígen de la Diversidad Ac

Historia

Definición: diversidad (repertorio) es el total de todas las especificidades de Ac que el organismo es capaz de expresar

Teorías o teoría de la línea germinal o teoría de la mutación somática

Conceptos actuales

Múltiples genes V

Uniones VJ y VDJ

Recombinación variable (o imprecisas)

Inserción de regiones N: enzima terminal transferasa o mutación somática o conversión génica o combinación por asociación o multiespecificidad

Receptor Célula T

Heterodímero de una cadena alfa y otra beta

Estructura y expresión genética de cadena alfa análoga a cadena ligera de la Ig

Estructura y expresión genética de la cadena beta, análoga a cadena pesada de la Ig

*Tiene cadenas variables y constantes porque son análogas

No presenta mutación somática en la células T

Órganos Linfoides

Primarios: Timo y Médula ósea (Bolsa de Fabricio) o maduración (linfopoyesis): adquieren receptores específicos para cada tipo de Ag o selección de linfocitos: autotolerancia

Secundarios o Periféricos: Ganglios linfáticos, Bazo, Tejidos linfáticos asociados a mucosa (MALT).

o interacción entre células (linfocitos, CPA, células accesorias) y reconocimiento del Ag o diseminar la respuesta inmune al resto del organismo

*Vías respiratorias tienen MALT porque constantemente antígenos entran, y deben ser reconocidos

*La mucosa intestinal tiene millones de bacterias (flora bacteriana), y si hay permeabilidad del intestino, puede ocurrir translocación de bacterias y finalmente, sepsis.

Órganos Primarios Timo

2 lóbulos (en humano) – lobulillos (trabéculas conectivas)

Lobulillo tímico: timocitos

o corteza (gran densidad célular – inmaduras)

o médula (menor densidad celular – maduras)

Estroma tímico: varios tipos celulares no linfoides

o epiteliales o células dendríticas interdigitantes (límite córtico-medular) o macrofagos (localización similar a células dentríticas)

Células del estroma expresan en su superficie MHC I y/o II y participan en la maduración y selección de linfocitos T maduros

*Células procedentes de la médula ósea entran a timo – división activa en corteza – 95% mueren por apoptosis – 5% va a la médula (maduración) – salen del timo como células T vírgenes maduros (inmunocompetentes) por venas postcapilares

Interacción células T con células estromales induce selección de timocitos: o selección positiva: generan TCR que reconozcan MHC propio o selección negativa: de ellos, se eliminan los autorreactivos

Médula Ósea

Los linfocitos B se desarrollan en islotes de células hematopoyéticas

La médula ósea además de linfocitos B, presenta células T maduras y abundantes células plasmáticas (órgano linfoide secundario)

En aves, los linfocitos B se desarrollan en la Bolsa de Fabricio, que contiene folículos (corteza y médula)

Órganos Secundarios

1. Capsulados

a. Ganglios: capturan Ag de la piel y de superficies internas b. Bazo: captura Ag desde la sangre

2. No capsulados: asociados a mucosas (MALT) o (> 50% del tejido linfoide total) protección frente a Ag que penetran por epitelios

mucosos (1er encuentro – iniciación) como tracto gastrointestinal, tracto respiratorio y genitourinario, siendo su principal mecanismo efector la secreción de IgA (más abundante)

3. Acúmulos difusos (no capsulados): dispersos por todo el cuerpo Ganglio Linfático

Corteza: rica en células B 1. Folículos primarios: B maduros reposo (sin reacción) 2. Folículos secundarios: estimulación antigénica con centro germinal y manto (células que

reaccionaron)

Paracorteza: rica en células T y células dendríticas interdigitantes

Gradiente de diferenciación

Médula: células B, T, plasmáticas, abundantes macrófagos

Seno subcapsular: donde van Ag timo-independientes

En su recorrido permite interacción Ag con macrófagos y otros CPA (procesan Ag y presentan conjunto con MHC II) – activación linfocitos Th – en centro germinal hay activación, proliferación y diferenciación de linfocitos B (células plasmáticas y de memoria: manto)

Linfa sale por eferente (rico en Ac y linfocitos: tanto los que proliferaron más lo que ingresaron desde la sangre por las vénulas postcapilares del endotelio alto (HEV)

Bazo

Captación y reservorio, cápsula conectiva – trabéculas + más red reticular

Cada compartimiento: pulpa blanca y pulpa roja o Pulpa blanca: tejido linfoide, zona más densa alrededor de las arteriolas: capa linfoide

periarteriolar (CLP), constituye la zona T (células CPA – MHC II – Th); por fuera del CLP zona más difusa rica en células B y macrófagos (folículos primarios, células B vírgenes y secundarios centro germinal)

o Pulpa roja: red de sinusoides venosos y cordones celulares que contienen macrófagos residentes especializados: hematocateresis (destruir, y recuperar material de linfocitos viejos, y son fagocitados)

27/04/10

Tejido linfoide asociado a mucosas (MALT) Intestino:

Placas de Peyer; agrupadas pero no capsuladas

Compartimientos Celulares

Lámina Propia:

Células T CD4+

Macrófagos, células dendríticas

Pocas células T CD8+

Muchas células productoras IgA

Mastocitos, eosinófilos Membrana Epitelial:

Células T CD8+

Células T CD4+

Células T CD4–, CD8– Pocas

Células no-TCD3–, CD7+ *Inflamación Basófilos Mecanismo de Desgranulación ¿Cómo? vasodilatación (Liberación de Histamina) Células M: Facilita la captación de antígenos y los permite avanzar, in hacerles nada, hacia el lugar donde están las células del MALT

Organización del Sistema Inmune

Órganos, tejidos y células ampliamente difundidos por el organismo

Órganos ---> vasos sanguíneos y linfáticos – transporte celular (linfocitos)

Primario: proliferación y maduración de linfocitos

Secundario: captura e interacción con el antígeno

Hematopoyesis:

Célula madre ~~ stem cell ---> células sanguíneas

saco vitelino (en embrión) – hígado /bazo --- médula ósea (en adultos)

médula ósea: las células madre son 1 en 10.000 son autorregenerativas

*maduración mieloide y linfoide: microambiente dado por la matriz celular del estroma + factores de crecimiento

Cada tipo celular tiene regulación diferente (ej. vida media de eritrocitos: 120 dias; PN: pocos días; algunos linfocitos T: más de 30 días)

*Regulación fase estacionaria: citoquinas propias del estroma

*Hematopoyesis inducible: (en caso de infección o hemorragia) citoquinas producidas por macrófagos y linfocitos Th activados – células específicas – migran al foco de infección

Muerte Celular Programada o Apoptosis: Características:

Programada genéticamente como respuesta adaptativa

Reducción de tamaño celular y citoesqueleto (pliegues en membrana celular)

Condensación cromatínica y fragmentación nuclear (nucleasas)

Descomposición celular en fragmentos llamados “cuerpos apoptóticos” rodeados por membrana, contienen gránulos intactos

Macrófagos y PMN fagocitan y degradan los cuerpos apoptóticos sin inducir respuesta inflamatoria ---> deben tener receptores para antígenos de superficie

myc, p53 (inductores ; bcl y otros (inhibidores) Marcadores de Superficie de Leucocitos

Se producen en órganos linfoides primario (1000 millones al día), de ahi van a órganos linfoides secundarios y a espacios tisulares

Adultos (humano) existe 1 billón de linfocitos (2% peso corporal)

Representan el 20% – 30% de leucocitos totales

Existen 3 poblaciones de linfocitos funcionalmente distintos, difícil de diferenciar morfológicamente, caracterizada por un juego de marcadores de superficie (T, B, NK)

Los linfocitos T y B (específicos)

NK (innato) Linfocitos T y B Vírgenes

Son pequeños (6μ) poco citoplasma con cromosomas condensados (heterocromatina)

Pocas mitocondrias y poco RER y Golgi

En ausencia de antígeno tienen vida media corta (días a pocas semanas) y fácilmente sufren apoptosis

En contacto con el antígeno, se origina linfoblasto (15μ) – citoplasma con Golgi bien desarrollado; estas proliferan y se diferencian en 2 subpoblaciones 1. Células efectoras: vida corta

2. Células de memoria: vida larga (algunas toda la vida del individuo) Linfocitos B

Generado en médula ósea (mamíferos), Bursa de Fabricio (aves)

Reconocen al antígeno por medio de Ig de membrana (aprox. 150.000 moléculas de IgM, clases M y D con la misma especificidad antigénica), que forman la parte del receptor de membrana (BCR)

Poseen otros marcadores de superficie MHC II, receptores del complemento: CD35 (CR1), CD21 (CR2), receptor para IgG exógena CD32 (FcgR II)

Si hay contacto con antígeno, selección y proliferación clona en dos subpoblaciones: células plasmáticas productoras de Ac y otra célula de memoria (pero con reconocimiento de Ag)

Células Plasmáticas

Carecen de Ig de membrana y poseen más citoplasma que las B

Gran síntesis de Ac. (RER) con idéntica especificidad antigénica que B original

No circula por sangre ni por vasos linfáticos (en órganos linfoides secundarios y en zonas de respuesta inmunológica)

Son células en fase terminal, carecen de capacidad mitótica – apoptosis (viven pocos días)

Linfocitos B (cebadas; proviene de tener mucho apetito) de memoria pueden vivir en reposo (20 – 30 años), reexpuestas al antígeno, respuesta inmunitaria rápida, intensa y mayor afinidad

Linfocitos T

Diferenciación temprana en Timo – regresión y diferenciación posterior en piel y mucosa intestinal

Posee receptor de membrana TCR, solo interactúa con antígeno asociado no covalente al complejo CD3

Reconocimiento del antígeno por TCR, solo interactúa con Ag presentado en superficie de células asociado a moléculas de MHC (esto es una diferencia con el BCR)

Existen 2 tipos de TCR: TCR (delta-gamma: 5-10%) y el TCR2 (alfa-beta unido S-S: 90-95% células T)

TCR1: no son circulantes, localizadas en epitelios (intestinos): reconocimiento de ciertos patógenos que ingresan vía mucosa

TCR2 se subdivide a su vez en 2 tipos: 1. TCR2CD4+: funcionan como células cooperadoras (Th), reconocen el Ag expuesto por el

MHC II propio de células presentadoras de antígenos (CPA): se activan y proliferan clonalmente, liberan citoquinas para activar otras células (T, B, macrófagos, etc.)

2. TCR2CD8+: funcionan como células citotóxicas (Tc), reconocen el Ag expuesto en moléculas MHC I, de células propias del huésped, infectadas con un virus o neoplásicas, que en conjunto con la acción de citoquinas específicas, se activan, proliferan clonalmene, diferenciándose a linfocitos T citotóxicos, citolíticos.

Células Natural Killer

Carecen de especificidad y memoria, maduración extratímica

Sus marcadores distintivos son CD16 y/o CD56. Carecen de CD3

En su mayoría, morfológicamente corresponden a LGG

Poseen gránulos azurófilos densos con membranas, mitocondrias y ribosomas libres, poro RER, gran aparato de Golgi

Existen 2 tipos de funciones: citotóxica y regulación de la respuesta inmune (a través de citoquinas). Inducen apoptosis a células infectadas o células tumorales (menor expresión en superficie MHC I)

NK es activada por IFN-γ (interferón gamma) e Il-2 (interleukina-2) generándose una célula LAK (lymphokine activated killer cell)

*El interferón y la interleukina son citoquinas (proteínas/mensajeras)

04/05/10 Células mieloides: 1. Fagocitos: PMN y Monocito – Macrófago 2. Células Dendríticas 3. Eosinófilos 4. Basófilos 5. Mastocitos o células cebadas PMN Neutrófilos:

95% de los granulocitos – cientos de millones al día

Núcleo multilobulado (2-5 lóbulos), gránulos en citoplasma: azurófilos (inmaduros) contienen hidrolasas ácidas proteasas, mieloperoxidasas y lisozima / secundarios (específicos) que contienen lactoferrina, cofactores NADPH oxidasa

Después de salir de la médula espinosa, circulan de 7-10 horas, luego pasan a tejidos, donde mueren a los 2-3 días

Los circulantes son los primeros fagocitos atraídos por quimiotaxis al foco de infección

Ingieren los microorganismos, quedando en fagosomas luego se unen a lisosomas conformando el fagolisosoma: encargado de destruir al agente

Pueden ser activadas por IC en liberación de sustancias desde sus gránulos e inducen acción citotóxica (hipersensibilidad tipo II)

*Neutrófilos en banda: precursores de PMN neutrofilo; médula las manda cuando no alcanza a producir toda la demanda *Piogénico: productor de pus ---> Detritos celulares + PMN neutrófilos muertos = Pus Fagocitos Mononucleares: Monocitos: Características:

Vida más larga (semanas a meses), con abundante RER y gran cantidad de mitocondrias y enzimas

Destruyen viruses, bacterias, protozoos intracelulares

Pertenecen al sistema inmune innato (fagocitosis y producción de citoquinas) pero participan activamente en el sistema adaptativo

10-18μ diámetro, núcleo en forma de herradura

Citoplasma con gránulos azurófilos: que contienen peroxidasas e hidrolasas ácidas para la destrucción del patógeno, Golgi bien desarrollado

Adherencia e ingestión a través de receptores especializados (ciertos carbohidratos de la pared bacteriana, o a IgG y el complemento que recubren al patógeno)

Aprox. 8 horas de haber abandonado la médula, migran a los tejidos – macrófagos

Célula circulante

Macrófago: 1. En tejidos:

Kuppfer: sinusoides hepáticos

Células mesangiales en glomérulos renales

Macrófagos alveolares en pulmón

Macrófagos de serosas (peritoneo)

Células de microglía en cerebro

Osteoclastos en huesos

Sinoviocitos A en articulaciones

Histiocitos en tejido conectivo 2. Libres:

Estratégicamente ubicados en órganos linfoides secundarios: macrófagos de sinusoides esplénicos (bazo) y senos medulares (ganglios linfáticos)

Mecanismos de Destrucción – O2 Dependiente:

Los PMN neutrófilos producen H2O2 para destruir Ag

Radicales libres de oxigenos de la H2O2 son tóxicos para las células

H2O2 + O2

Glucosa + NADP+

G6P deshidrogenasa

Pentosa

+ NADPH

NADPH + O2

+ O2

NADP+

2O2 + 2H+

Superóxido dismutasa

Citocromo b558

2O2 + H2O2 OH + OH + O2

Activación

Mieloperoxidasa cataliza reacción entre peróxido y cloro para formar un aluro, muy tóxico celularmente

Se inactiva por el peligro de si la célula muere y el peróxido se libera al medio y mata el tejido propio

Mecanismos de Destrucción – NO:

Óxido nítrico (NO) la producen las células endoteliales como sustancia vasodilatadora

NO sintetasa ---> O2 + L-Arginina → NO + Citrulina cofactor: tetrahidrobiopterina

Esto la estimula el FNT-α e interferón gamma

El linfocito Th produce el interferón gamma y el FNT-α lo produce el mismo macrófago

Rol del Fagocito en Respuesta Inmune Especifica:

1. Como CPA: péptidos Ag se asocian con CMH II, y en la superficie son reconocidos por linfocitos Th, e induce su activación

2. Macrófagos activados por linfocitos Th: aumenta capacidad fagocítica y destructiva: celula efectora, en especial sobre cuerpos opsonizados (IgG's – complemento)

*Participa en reconocimiento, presentación y fase efectora *Si bien el macrófago es una célula del sistema innato, puede ser considerada una célula efectora del sistema inmune adaptativo

H2O2 + Cl-

Mieloperoxidasa OCl- + H2O

OCl- + H2O O2 + Cl- + H2O

2O2 + 2H

Superóxido dismutasa

H2O2 + O2

2H2O2

Catalasa

H2O + O2

Inactivación

Células Dendríticas:

1. Células Dendriticas Interdigitantes:

Línea mieloide, presentes en intersticio de la mayor parte de los órganos: corazón, pulmón, riñón, tracto GI

Prototipo: células de Langerhans de piel, rica en CMH II; en contacto con Ag migra por vasos linfáticos eferentes a paracorteza de ganglios regionales, se convierten en CD interdigitantes, alli presentan el Ag a linfocito Th

Éstas células son las más potentes inductoras de respesta inmune relacionada con CMH II 2. Células Dendriticas Foliculares:

No derivan de la médula ósea (no se relaciona con la interdigitante)

Gran cantidad de receptores para complemento

Presentes en folículos secundarios de áreas ricas en células B de los ganglios y bazo, y en folículos linfoides de mucosa

No tienen moléculas CMH II en su superficie, pero presentan gran cantidad de receptores para FcgR

Parece que tienen rol en el desarrollo de células B

Eosinófilos:

Granulocito, PMN, en sangre y tejidos (1-3% de los leucocitos)

Poseen núcleo bilobulado, abundantes gránulos de contenido básico (se tiñen bien con colorantes ácidos) rodeados de membrana con cristaloide en su interior

Migran desde la sangre a los tejidos por acción quimiotáctica

Acción fagocítica mínima, mayor rol corresponde a defensa inespecífica frente a grandes parásitos (ej. Helmintos: se unen a las larvas recubiertas por IgE o IgG y luego se desgranulan, vierten la toxina (proteína básica) y enzimas que controlan la respuesta inflamatoria, hidrolizan factores anafilacticos liberados por mastocitos

Puede actuar como célula K dadas las condiciones (presencia de Ig) ya que tiene función citotóxica y receptores de la región Fc para Ig's

También en sus gránulos contienen histaminasa regulando la inflamación

Alto n° en casos de parasitismos y alergias; complejo granuloma eosinofílico (felinos)

Basófilos y Mastocitos:

Nucleo bi o multilobulado (basófilo) y redondeado (mastocito)

Poseen abundantes y densos gránulos azul-violeta

Carecen de función fagocítica (< 1% de leucocitos)

Basófilos son circulantes y mastocitos están en los tejidos

Ambos poseen abundantes receptores FcrRI (fracción cristalizable IgE)

Papel preponderante en la hipersensibilidad tipo I o inmediata (Ag – IgE en la superficie de la célula, liberan sustancias vasoactivas como la histamina, responsable de los síntomas en alergias

Función natural: protección frente a parásitos multicelulares

10/05/10

Sangre y Transfusiones en Caninos

Sangre:

Tejido Líquido

Plasma y elementos figurados

Función: transporte, regulación de la temperatura, regulación de sales y electrolitos

Elementos figurados: trombocitos, eritrocitos, leucocitos

Compatibilidad Sanguínea:

Aloanticuerpos

Grupos Sanguíneos:

DEA: dog erythrocite antigen

Se han tipificado 8 de 15 antígenos de membrana en la sangre

DEA1 (A):

Más antigénico

Si no posee ningúno de la 3 antígenos es A-

A- se considera un donador universal

Bazo: pulpa roja ---> hemocaterésis

Volumen sanguíneo: volemia

Anemia: Disminución de hemoglobina, eritrocitos, y la baja cantidad de O2 en sangre para transporte de tejidos

VCA: recuento eritrocitario en una muestra sanguínea

Cross Match: No debe tener muestras de aglutinación en una compatibilidad

11/05/10

Complemento:

Descubierto por Bordet en 1895

Representan actividad lítica en suero fresco

Su actividad lítica se destruye cuando se calienta a 56° por 30’’

Proteínas ---> Enzimas ---> Zimógenos

Funciones:

Benéficos: o Opsonización (fagocitosis) o Atracción y activación fagocítica o Lisis de bacteria y de células infectadas o Regulación de la respuesta inmune humoral innata o Remoción de complejos inmunes (Ag-Ac) o Remoción de células apoptósicas

Deletéreas: o Inflamación [cuando es crónica], anafilaxia (reacción alérgica sistémica)

Proteínas del sistema del Complemento (nomenclatura)

C1(qrs), C2, C3, C4, C4, C5, C6, C7, C8, C9

Factores B, D, H, I, properdina (P)

Lectina que liga manosa (MBL), MBL asociado a serina proteases (MASP-1, MASP-2)

Inhibidor de C1 (C1-Inh, serpina), proteína fijadorea de C4 (C4-BP) factor acelerador de la degradación (DAF o CD55)

Receptores del C (CR1-CD35; CR2-CD21), proteína S

Productos Activados de Proteínas del Complemento

Componentes activados siguen a menudo una sustancia número-alfabética (C1qrs)

Cuando se rompe enzimáticamente, la porción más grande se une al complejo de activación, y el péptido más pequeño se libera al microambiente

La letra “b” usualmente se agrega al péptido más grande que se une a la membrana y “a” se designa al péptido más pequeño (ej. C3b/C3a, C4b/C4a, C5b/C5a) EXCEPTO C2 (el más grande, ligado a membrana es C2a: el más pequeño es C2b)

Activación del Complemento

Generación de C3 convertasa en Vía Clásica:

IgG y IgM activan tradicionalmente el complemento

Parátopos de inmunoglobulinas con C1qrs para su activación

Para que se active el complemento se requiere de un agente extraño

C1s activa (corta, escinde y separa la molecula) a la siguiente molécula (C4)

Luego, C1s activa también a C2

Quedan en el microambiente el C4a y C2b; mientras que C4b y el C2a y se unen a la membrana

C4b2a (conocido como cabeza) es C3 convertasa de la vía clásica

Una vez que se activa C3, se forma el C4b2a3b o C5 convertasa, lo cual conduce a la formación del CAM

Vía Clásica Vía de Lectinas Vía Alternativa

Dependiente de Anticuerpo

Vía Clásica

Independiente de Anticuerpo

Activación de C3 y Generación de C5 convertasa

Activación de C5

Complejo de Ataque a

la membrana

Componentes de la Vía de Lectinas (unión a manosa):

MBL (manose binding lectine) interactúa con azúcares de membrana de bacteria, activándose

Llega la MASP-1 y MASP-2 uniéndose la MBL

Este complejo se parece mucho estructuralmente al C1qrs

Éste activa al C4 (C4b a la membrana, C4a al microambiente)y luego al C2 (C2a a la membrana, C2b al microambiente)

C4b2a es C3 convertasa; conduce a la formación de C5 convertasa

Componentes de la Vía Alternativa:

C3, B, P, D, H2O…

Activación Espontánea de C3:

C3 se une con H2O ---> por hidrólisis obtenemos C3i como molécula partidora

C3i se une con factor B y en ese mismo momento factor D corta a B

Se forma el complejo C3iBb ---> C3 convertasa inicial (partidora)

C3iBb tiene una vida muy corta ---> se une a C3 y se sigue la cadena

Circuito de Amplificación:

Si es generación espontánea

De una mínima cantidad se puede generar constantemente en pequeñas cantidades

Anafilotoxinas: C3a, C4b, C2b patentes estimuladores de monocitos, músculos, desencadenan reacción anafiláctico

*IC: inmunocomplejo (Ac-Ag)

*CAM o MAC: complejo de ataque a membrana

*DAF: factor acelerador de la degradación

Control de Activación Espontánea de C3 vía DAF:

DAF impide la unión del factor B a C3b

CR1 es receptor de C3b, se fija en la membrana (linfocitos B; células dendríticas foliculares)

DAF disocia al factor Bb unido al C3b

Control de Activación de C3 vía CR1:

Factor H hace sinergia con DAF para poder disociar a la C3 convertasa

Estabilización de C3b y Activación de C5:

C3b encuentra un activador (protector) de membrana

C3b se une a B y luego D corta a B y se forma C3 convertasa

Una molécula estable para proteger, estabilizar: P

C3BBbC3b ---> C5 convertasa estable en la vía alternativa

C5 convertasa:

C5 convertasa para la vía clásica y la vía de lectinas ---> C4b2a3b

C5 convertasa para la vía alternativa ---> C3bBbC3b

Vía Lítica:

Generación de C5 convertasa conduce a la formación del complejo de ataque a membrana (CAM)

C5,

C6, C7, C8, C9

Activación C5, Ensamblaje CAM, Inserción del CAM a membrana:

C5 convertasa vía clásica y/o lectina

C5b de acopla a C6 y se unen a C7

El complejo C5b67 se transforma a una molécula hidrofóbica para poder pegarse a la membrana del agente extraño

C8 se une (inserción de complejo de ataque a membrana en una membrana celular para ayudar en acople a la membrana

C9 son monómeros que se van polimerizando, produciendo poros, causando cambios osmóticos desfavorables en la célula invasora

*Se puede proteger de los CAM al endocitar a las perforinas

17/05/10

Diferencias Inmunológicas entre Cerdos y Aves

Cerdos

Ganglios

Bazo

T. Linfoide o placas de peyer o tonsilas

Aves

Médula ósea

Bazo

T. Linfoide

BALT

GALT (placas de peyer y tonsilas cecales)

Linfocito Null:

Sin marcadores de superficie

Sin función

LGG

Cerdo

Heterófilos:

Reemplazo neutrófilos en aves

Restringe crecimiento bacteriano

Igs:

Aves: o IgY (IgG) o IgM o IgA

Cerdos: o IgG o IgM o IgD o IgA o IgE

*IgY tiene un dominio extra en relación a IgG, reconoce otras moléculas

18/05/10

Vía Lítica – Cam

Inserción del complejo de ataque a membrana celular

Desequilibrio osmótico a crear un poro por el cual sale líquido celular

Rompimiento C1qrs:

C1 inhibidor escinde a C1qrs en C1r y C1s

Deficiencia inhibidor C1 ---> angioedema hederitaria

C2b:

Proquinina que da origen a la bradiquinina

Potente mediador inflamatorio que produce vasodilatación y aumento de permeabilidad

C5a:

Quimiotácticamente muy fuerte

Activación neutrófilos, monocitos, macrófagos ---> liberan FNT-α

Adhesión neutrófilos

Anafilotoxinas

Mastocitos o desgranulan sustancias vasoactivas:

histamina, heparina, serotonina, bradiquinina; lo que produce:

aumento de permeabilidad vascular y estimulan musculatura lisa, un ejemplo de ello:

o asma ---> contracción de bronquios por ésta causa

C3b ---> formación convertasas ---> opsonina

C4a: hermana menor

C3a: hermana del medio Hacen lo mismo, pero en distintos grados

C5a: hermana mayor

C5a67: quimiotaxis, adhesión a otras membranas ---> proteína S (vitronectina) como reguladora

Anticuerpos Monoclonales:

Misma clase, altamente específica, pero no absoluta

Detección de una molécula dentro de una mucho más grande, por parte de un anticuerpo

1 antígeno – 1 anticuerpo

Hibridomas – año 1975

Mieloma: plasmocitoma (célula tumoral de célula plasmática)

Cultivo de células secretoras de Ac. monoclonales con especificidad predefinida, pudiendo mantenerse indefinidamente, y en grandes cantidades

HAT (Hipoxantina, Aminopterina, Timidina) ---> precursores de ácidos nucleicos

Estimula crecimiento de linfocitos B, pero no del tumor

Mieloma Linfocito B

Hibridoma

Inmortalidad –

capacidad para niveles altos

Producción de Ac –

niveles bajos

Producción de anticuerpos / Inmortal – niveles altos

25/05/10

Cooperación Celular:

Interacción LT y LB

IL-2 ---> inductor de la proliferación de la LB y LT

IL-4 ---> inductor de activación de la proliferación de LB

La interacción hace que las células B inicien el ciclo celular, desarrollo de los centros germinales y de las respuestas de anticuerpos frente a antígenos

Respuesta de los LB al Ag.

El desarrollo de la respuesta inmune humoral va a depender de: o el tipo de Ag: antígeno T-dependiente o antígeno T-independiente o el tipo de célula presentadora de antígeno o la exposición previa o no al mismo antígeno

Mecanismo de Activación

Unión del Ag. con BCR con otras moléculas accesorias y correceptores llevarán a una estimulación de tirosina quinasas que bajo procedimientos de fosforilación activan la fosfolipasa C que generarán compuestos intermediarios para activar a la proteína quinasa C para que junto a la participación de otras quinasas se traducirán en la activación de los factores de transcripción nucleares.

Interacción Ag. T-dependiente

La activación del LB requiere de dos señales de activación proporcionados por el LTh: reconocimiento ligado y moléculas coestimuladoras (CD154 y CD28)

Activación del LB por parte del LTh

CD40 (reposo) + CD154 (activadas) = señal necesaria para inicio celular de LB y generar receptores de IL-2, IL-4 e IL-5

CD28 + CD80/CD86 ausentes en células en reposo, solo activadas = llevan a la expresión máxima de CD154 y secreción máxima de IL-2

Señales de Activación de LB

1. Reconocimiento entre las dos células a través del Ag. ligado al CMH II (reconocimiento ligado)

2. Moléculas coestimuladoras

Interacción Ag. T-independiente

Fases de la Respuesta al Ag.

Respuesta primaria: es la que se desarrolla tras la exposición por primera vez al antígeno

Respuesta secundaria: es la que se desarrolla tras exposiciones sucesivas al mismo antígeno

*La respuesta secundaria dependerá de la naturaleza del Ag del huésped

Conmutación de Isotipos

Está realizado el reordenamiento génico de ADN bajo la presencia de CD40 y citoquinas liberadas por la LTh, siendo la más importante la IL-2

Centros Germinales

Es el lugar donde ocurren los eventos más importantes de los LB y corresponden a los centros linfoides secundarios

Ocurren los fenómenos de proliferación celular y la selección positiva y negativa de los LB

Ocurre durante los primeros seis días de iniciado el contacto Ag-LT

Complejo Mayor de Histocompatibilidad (MHC)

Introducción

Grupo de genes presentes en todos los mamíferos que codifican glicoproteínas (células MHC), fundamentales en el reconocimiento intercelular y discriminación de lo propio y lo ajeno

Rol fundamental en el desarrollo de la respuesta inmune

Genes MHC: se encuentran alineados en una región grande y contínua del genoma

Existen ciertas diferencias en la organización de los genes en las diferentes especies, sin embargo, en la mayoría se pueden apreciar 3 grandes zonas zonas que determinan 3 tipos de moléculas:

o genes de clase I (MHC I): glicoproteínas de membrana, células nucleadas, linfocitos Tc

o genes de clase II (MHC II): glicoproteínas de membrana, CPAs, linfocitos Th o genes de clase III (MHC III): proteínas plasmáticas relacionadas con el sistema

inmune (complemento, TNF y otras proteínas no relacionadas con la respuesta inmune)

*Dominio: secuencia aminoacídica específica

MHC I

3 dominios de cadena α, pleomórficos más 1 dominio β2 microglobulina, invariable

Interacción entre α1 y α2 se produce un surco, el cual se une el péptido a ser presentado

Se presenta ante un LTc (CD8+)

Cadena α tiene un tallo citoplasmático

MHC II

2 cadenas (1 α y otra β)

Ambas tienen tallo hidrofílico transmembrana

2 dominios α y 2 dominios β

Interacción entre α1 y β1 (dominios más distales de la membrana) dormán surco o hendidura para la presentación

Presentación es a LTh (CD4+)

Presentación de péptidos antigénicos de mayor tamaño

Ambas cadenas son codificadas por genes de MHC II, a diferencia de la MHC I que solo su cadena α es codificada y la β2 la codifica otro gen

Ambas cadenas en MHC II son variables, pleomórficas

Puede presentar alta gama de antígenos

MHC III

Complemento

FNT

Procesamiento y Presentación de Antígeno

Para el reconocimiento de una proteína extraña, debe ser degradada en péptidos pequeños que luego forman complejos con moléculas de clase I y/o II ---> procesamiento

Procesamiento y presentación del antígeno junto a una molécula clase I o II está determinado por la ruta de penetración del antígeno en la célula

o antígeno endógeno ---> MHC I o antígeno exógeno ---> MHC II

Restricción MHC

Linfocitos T reconocen a los antígenos unidos a las células y asociados a moléculas MHC

Moléculas MHC de clase I y II actúan como sistemas orientadores de los linfocitos T

Moléculas MHC restringen la especificidad del linfocito T, el que no reconoce a la molécula MHC o al fragmento peptídico, sino solo al complejo MHC-péptido específico

Antígeno Endógeno

Producido dentro de una célula autóloga

Siempre están unidas a MHC I

En el caso de un virus, se introduce en la célula, y altera su ADN, y a su vez los antígeno de membrana

Luego eso las anormalidades de las proteínas de membrana se detectan y la célula se intenta destruir, sin embargo, si no logra autodestruirse, una célula NK podrá venir a terminar el trabajo

Antígeno Exógeno

Se internaliza desde el exterior

Se produce la síntesis MHC II

En algún momento (en el citoplasma) se unen

Luego viaja hacia la membrana y se ancla

31/05/10

Mecanismos de Evasión de la Respuesta Inmune de la Influenza Aviar y la Gripe Porcina

Virus:

sin vida independiente

necesitan ADN de células ajenas

cápside protéica protege genoma viral

neuraminidasa y hemaglutinina

Influenza:

A y B (8 segmentos) o C (7 segmentos)

alta patogenicidad

A es de mayor riesgo pandémico

Mecanismos de Evasión:

NS1 proteínas o inactiva genes para citoquinas, quimioquinas o inhibición pkr o previene transcripción del gen del IFN-β

Inhibición nks ---> baja de citotoxicidad ---> aumento de unión de dos receptores inhibidores a las células infectadas

Variación antigénica, “drift”, acumulación de mutaciones

Virus recombinantes, “shift”, mezcla de ARN en caso de contacto con otro animal, se forma un nuevo virus:

o virus cerdos + virus aves + virus humanos = nueva cepa

1/06/10

La parte final el Golgi, la proteína invariante sufre escindación por parte de enzimas proteasas, quedando un “clip” taponando el surco de la molécula MHC (antígeno exógeno)

Comparación MHC clase I y II

Característica MHC I (HLA) MHC II (HLA)

Genes A, B, C DR, DP, DQ

β2m Si No

Cadenas Alfa Alfa – Beta

Expresión Constitutiva APC; Inducida

Células T CD8+ Tc CD4+ Th

N° Péptidos 8 – 9 aa 12 – 20 aa

Procedencia Ag. Citosol Fagocitosis

MHC y enfermedad

Algunas enfermedades se asocian a determinados alelos del MHC: o procesan autoinmunes o suceptibilidad a virus o alteraciones neurológicas o alergias

Polimorfismo del MHC: amplía la varieda de antígenos que se pueden reconocer y la protección frente a numerosos agentes infecciosos

o enfermedades afectan al polimorfismo del MHC

*Endogamia de guepardos; nuevos viruses atacan a leones

Hipersensibilidad

Respuesta inmune adaptativa exagerada o inadecuada que puede resultar en un daño al organismo (alergia, anafilaxis, atopía)

Respuesta inmunitaria normalmente beneficiosa que llega a provocar reacciones inflamatorias y lesiones tisulares con disfunción orgánica

Provocada por diferentes antígenos (alergenos)

Agentes con capacidad de provocar hipersensibilidad son diferentes en cada individuo

No se manifiesta en la primera exposición al antígeno, sino que suele aparecer tras un contacto posterior

la hipersensibilidad se refiere a los procesos patológicos que se deban a interacciones inmunitarias específicas, entre antígenos (endógenos y exógenos) y los anticuerpos humorales o linfocitos sensibilizados

Se describen 4 reacciones de HS (Coombs y Gell): tipos I, II, III, IV, de acuerdo al mecanismo inmunológico involucrado

En la práctica estas HS tienden a superponerse unas con otras

HS tipos I, II y III: mediadas por anticuerpos (HS humoral)

HS tipo IV: mediadas por linfocitos T y macrófagos (HS celular)

Hipersensibilidad tipo I

Reacción alérgica que aparece inmediatamente después de una segunda exposición a un alergeno

Las reacciones características se producen como consecuencia de la estimulación específica de los mastocitos sensibilizados con IgE

Se caracteriza por la producción de anticuerpos IgE contra proteínas ajenas presentes en el medio

El término alergia fue definido por “Von Pirquet” como: una capacidad alterada del organismopara reaccionar ante sustancias ajenas.”

Ahora se define como: “enfermedad debido a una respuesta del sistema inmune a un antígeno comúnmente inocuo.”

El término atopía está ligado a este fenómeno

Se define como una reacción inmunitaria de desarrollo rápido, que desencadena algunos minutos después de la combinación de un antígenos con un anticuerpo ligado a mastocitos y basófilos en el huésped, previamente sensibilizado

Mastocitos

Procedentes de la méddula ósea

Distribuida en los tejidos

Se encuentran cerca de los vasos sanguíneos y en localizaciones subepiteliales, donde tienen a producirse las reacciones locales tipo I

Citoplasma con gránulos rodeados de membrana, contienen mediadores químicos biológicamente activos

Posee receptores de Fc de IgE

Basófilos

No se encuentran habitualmente en tejidos

Circulantes en sangre en baja cantidad

Posee receptores Fc IgE

Citoplasma granulado

Son atraídos por focos inflamados

IgE

Glucoproteína que contiene dos cadenas ligeras y dos pesadas

Se encuentra presente en el suero y en los líquidos tisulares de todos los mamíferos

Es dintetizada por los linfocitos B, previa a una estimulación de linfocitos T

Posee receptores Fc, que pueden ser de alta o baja afinidad

Los mastocitos y basófilos tienen receptores de alfa afinidad para IgE

Mediadores Primarios

Liberados por la desgranulación del mastocito

Aminas biógenas: histamina y adenosina

Mediadores quimiotácticos o enzimas: proteasas, hidrolasas ácidas o proteoglicanos: heparina (anticoagulante fisiológico)

Mediadores Secundarios

lipídicos o leucotrienos o prostaglandina D2 mediadores inflamatorios o factor activador de plaquetas (FAP)

Citoquinas

Regulación por Citoquinas

Síntesis de IgE

Crecimiento de Mastocitos

Crecimiento y activación de eosinófilos

7/06/10

A mayor sensibilidad, mayor liberación de histamina por parte de los mastocitos

Mala perfusión de los tejidos por HS, es decir, shock anafiláctico

Histamina también estimula la secreción de glándulas respiratorias y broncoconstricción (en general, constricción del músculo liso)

Al haber una baja de presión sanguínea rápida, gracias a la rápida extravasación por histamina, se afecta mucho al tejido nervioso, pudiendo causar ceguera temporal o desmayos

Fasas de la HS

Respuesta inicial o se manifiestan entre los 5 a 30 minutos después del contacto con el alérgeno o actúa de inmediato el mastocito con sus gránulos de secreción

Respuesta tardía o reclutación de leucocitos por gránulos del mastocito o el más importante el eosinófilo, por su gran cantidad de mediadores

Anafilaxis

Reaccción sistémica o local mediada por IgE, que se produce en una persona previamnte sensibilizada que recibe al antígeno nuevamente

Sistémica: por administración de hormonas, enzimas y fármacos

Aparece picor, ronchas, eritema cutáneo (enrojecimiento de la piel), contracción de bronquiolos, insuficiencia respiratoria. Luego puede entrar en shock, incluso morir al cabo de una hora

Local: producida por alérgenos exógenos, como el polen, caspa de animales, polvo, pescado, etc.

Alergia atópica (predisposición genética) ---> alergia a muchos componentes por contacto

Urticaria

Angioedema

Rinitis alérgica o Fiebre del Heno

Asma

Tratamiento

Evitar el contacto con el alérgeno

Inmunoterapia con el alérgeno o producir una hiposesibilización (desensibilización), inyectando un extracto de alérgeno por vía subcutánea en dosis creciente

Antihistaminicos ---> prevención o casos leves

8/06/10

Hipersensibilidad tipo II

Citotoxicidad dependiente de anticuerpos, de clase IgG e IgM que se unen en forma específica a determinadas células o tejidos

Los anticuerpos dirigidos contra antígenos situados en superficies celulares o sobre tejidos interaccionan con el complemento o con una serie de células efectoras y provocan daño en la célula diana (célula blanco)

Consecuencias de la activación del complemento o fragmentos C3 y C5 atraen macrófagos y PMN y estimulan mastocitos y

basófilos o activación vía clásica del complemento, depósito de C3b, C3bi sobre la

membrana celular de la célula diana o tras activación vía clásica y vía lítica del complemento se forma complejo de

ataque a la membrana C5b9 o células efectoras se unen al complejo Ag-Ac mediante sus receptores de Fc o al

complemento o Adcc ---> antibody dependant cell citotoxicity

Hipersensibilidad tipo III

La interacción de antígenos con su correspondiente anticuerpo circulante conduce a la formación de complejos Ag-Ac

Los inmunocomplejos circulantes se depositan en los tejidos

Se desencadenan diversos procesos inflamatorios o interacción con el sistema del complemento (formación de C3a y C5a) o estimulación a los macrófagos (liberación de citoquinas) o interacción directa de los inmunocomplejos con basófilos y plaquetas

(mediante receptores Fc) e inducción a la liberación de aminas vasoactivas

Los inmunocomplejos circulantes se depositan entre las membranas endoteliales y membrana basal

Los neutrófilos son llamados por el complemento a la pared del vaso sanguíneo, pero como no puede fagocitarlo, solo libera su batería de enzimas, dañando los tejidos

Etapa 1

Se forma una gran cantidad de complejos Ag-Ac en sangre y no pueden ser completamente eliminados por los macrófagos

*Un ejemplo es de las enfermedades del glomérulo renal, el cual es un manojo de capilares, y los inmunocomplejos se depositan allí por el proceso de filtración que allí ocurre.

Etapa 2

Los complejos Ag-Ac se depositan en el lecho capilar entre las células endoteliales y la membrana basal

Etapa 3

Los complejos Ag-Ac activan el complemento por la vía clásica produciendo vasodilatación

Etapa 4

Las proteínas del complemento y los complejos antígeno-anticuerpo atraen leucocitos al sitio de lesión

Etapa 5

Los leucocitos descargan sus mediadores de lisis y promuevan masivamente en inflamación local

Esto puede producir daño de tejido y hemorragia

Hipersensibilidad tipo IV

3 tipos o por contacto o de tipo tuberculínico o granulomatosa

Las dos primeras se presentan dentro de las primeras 72 horas del desafío antigénico

La reacción granulomatosa se desarrolla en un período de 21 a 28 días

Puede haber más de un tipo de reacción de un antígeno y éstos pueden superponerse

Los linfocitos T causan un daño directo a reacciones DTH o atacando células blanco

Sus reacciones se deben a células Th1 efectores Ag-Ac

Peptide

mediators of inflamation, phagocyte recruitment

C4a, C3a, C5a

Removal of inmune complexes

Opsonization of pathogens

Binds to complement

receptors on phagocytes

C3b

Linfocitos T, CD8+ y CD4+ activan macrófagos (IFN-gamma) e inducen inflamación (TNF)

Los CD8+ citolíticos matan directamente a las células blanco (MHC I)

El daño tisular es producido por macrófagos activados (hidrolasas, radicales de oxígeno, óxido nítrico, citoquinas proinflamatorias)

Las células endoteliales vasculares de las lesiones pueden expresar MHC II y moléculas de adhesión elevadas

Las reacciones crónicas producen fibrosis por incremento de citoquinas y factores de crecimiento

*Se estimulan los fibroblastos, que reemplazan tejido funcional por colágeno del tejido conectivo (fibrosis)

Hipersensibilidad por Contacto

Las células de Langerhans internalizan y procesan el hapteno y se lo presentan a células T-antígeno dependientes

Las citoquinas producidas por células inmunocompetentes (queratinocitos, células de Langerhans, células T) reclutan células T no-antígeno específicas y macrófagos

Hipersensibilidad a Tuberculina

El desafío intradérmico con tuberculina, activa células T antígeno-específicas, que secretan TNF-α y linfotoxínas (TNF-β); los que actúan sobre las células endoteliales induciendo secuencialmente, moléculas de adhesión: E-selectiva, ICAM1, VCAM1, los que reclutan leucocitos al sitio de reacción

Intervienen inicialmente neutrófilos a las 4 horas, monocitos a las 12 horas y células T

Reacciones Granulomatosas

Hay un balance entre inmunidad protectora y daño a tejido tisular mediado por células T dirigidas hacia antígeno insoluble

Un ejemplo es la lepra tuberculoide

La persistencia del antígeno conduce a la diferenciación de macrófagos a células epiteloides y a fusión para formar células gigantes (células de Langans)

La reacción granulomatosa lesiona tejidos

*Aparato bucal de garrapatas que queda en la piel es un antígeno que causa una reacción granulomatosa

Técnicas Inmunológicas

La vacuna del clostridium (tetano) está hecha de un suero hiperinmune de equino

Este suero hiperinmune tiene anticuerpos policlonales

Interacción Ag-Ac

Interacción reversible a través de enlaces no-covalentes

“In vitro”

Interacción primaria: no visualizable (se puede marcar el Ag o Ac mediante unión covalente, moléculas como fluorocromo, isótopos radioactivos o enzimas: inmunofluorescencia, RIA, ELISA)

Interacción secundaria: aparición de fenómeno visible como aglutinación o precipitación (para que esto ocurra es indispensable determinadas concentraciones y características de los Ag-Ac

Inmunodifusión Simple

Permite identificar (cualitativamente) clases de anticuerpos o antígenos solubles presentes en el suero (muestras biológicas)

Matriz semisólida de Agar (algas de Agar agar), en donde se encuentra disuelto el anticuerpo específico se adiciona en una celdilla central de Ag y en las celdillas que rodean diferentes muestras biológicas a estudiar

Método simple y económico

Inmunodifución Radial

Permite cuantificar anticuerpos (clases) o antígenos solubles presentes en el suero (muestras biológicas)

Matriz semisólida de Agar, en donde se encuentra disuelto el anticuerpo específico

La muestra biológica se agrega en celdillas y a medida que el Ag difunde en forma radial se alcanza la relación Ag-Ac que permite la precipitación visible

Curva de calibración (muestra patrones de concentración conocida)

R del precipitado es proporcional a la concentración de Ag

Test simple y económico

Inmunoelectroforésis

Técnica cualitativa que permite la identificación de diferentes componentes protéicos presentes en distintas muestras biológicas (suero, orina, etc.) a través de arcos de precipitación

Gel agarosa o de poliacrilamida, acetato de celulosa

Etapas: 1° separación electroforética; 2° precipitación de proteínas con Acs específicos

15/06/10

Inmunofluorescencia

Permite detectar Ag tisulares, celulares nucleares, caracterizar poblaciones celulares (citometría de flujo), etc.

Puede ser directa o indirecta

Requiere equipamiento sofisticado (microscópio epifluorescencia, equipo lector computacional (citómetro: células en suspensión))

Similitud técnica con la inmunoperoxidasa (microscopio óptico)

Técnica directa: 1Ag-1Ac mareado con fluorcromo

Técnica indirecta: 2Ac (primero es AntiAg, no está marcado; segundo es AntiAc, marcado) 1Ag ---> les permite amplificar la reacción, aumenta la sensibilidad

Inmunoperoxidasa

Más barata

Más simple, colorante de enzimas

Inmunoanálisis: ELISA

Utiliza anticuerpos marcados por una enzima (ej. peroxidasa) para visualizar reacción Ag-Ac

Se usa tanto para la determinación de Ags como de Acs

La reacción se puede cuantificar mediante la lectura de D.O. a través de un espectrofotómetro

Método muy sensible y económico

Permite realizar gran cantidad de determinaciones en corto tiempo

Los antígenos se pueden determinar mediante pruebas de tipo “sándwich” o competitivas

Western Blot

Permite identificar Ag-Ac – muy sensible

Etapas:

Separación electroforética de proteínas en geles de poliacrilamida

Transferencia (blotting) de dichas proteínas a un soporte sólido (membrana de nitrocelulosa)

Detección de una o más bandas identificadas por Acs específicas

Migración depende fundamentalmente de PM (peso molecular) de sus péptidos

Prueba comúnmente usada como confirmación, corroboración para pacientes VIH ELISA+

Autoinmunidad

Proceso patológico que se genera porque el sistema inmune reacción frente a los Ags propios (autoantígenos).

Se alteran los mecanismos responsables de la autotolerancia

Mecanismos efectores: o anticuerpos contra Ag propios o células efectoras y sus productos

Clasificación General

Local: afectan a un órgano o tejido específico (endocrino, muscular, etc)

Sistémico: afectan a varios órganos o tejidos (Ac. contra diferentes componentes tisulares, nativos o alterados: ADN, colágeno, células sanguíneas, etc.)

Predisposición Genética

Modelos animales y observaciones en humanos sugieren que existe predisposición genética para la manifestación de enfermedades autoinmunes

Asociación entre ciertos antígenos HLA y enfermedades autoinmunes: HLA: B8, B27, DR2, DR3, DR4, DR5, etc.

Etiología

La etiología exacta patologías. AI no se conoce

Teorías

Exposición Ag ocultos: AutoAg de desarrollo tardío (no expuestos durante diferenciación de células T) o confinaados a tejidos protegidos (testículo, cerebro, etc.) pueden estimular respuesta inmune y autoinmunidad al ser liberadas por acción injuria traumática o quirúrgica (ej. por cambios moleculares: epítopos nuevos en proteínas de membrana normales ---> hepatitis crónica canina, factor reumatoide (Ac antiFc Ig: LES, artritis reumatoídea, etc)

Escape clones autorreactivos: selección negativa de linfocitos a nivel del Timo puede no reconocer todos los Ag propios o algunos no haber sido apropiadamente procesados y/o presentados

Reacción cruzada Ags: (mimetismo molecular) Ags de ciertos patógenos poseen determinantes que presentan reacción cruzada con autoAgs y la respuesta inmune contra dichos determinantes puede conducir a células efectoras o Ac contra Ag tisulares (propias)

Mecanismo Daño Tisular

Autoanticuerpos

Linfocitos T autorreactivos

Inmunocomplejos

Tipo de Reacción: Reacciones de HS

HS II

Anemia hemolítica autoinmunitaria (citotoxicidad)

Púrpura trombocitopénica (destrucción trombocitos)

Células tiroides: Tiroiditis (inflamación, gran infiltración celular)

Receptor de acetilcolina: Miastenia gravis

Receptor de insulina: Diabetes

HS III

Ac. + AutoAg

SLE: glomerulonefritis membranoproliferativa

Artitis reumatoídea: Ac. contra estructuras articulares: membrana sinovial, cartílago, etc.

HS IV

Provocada por Tc o esclerosis múltiple (humana) o diabetes mellitus insulinodependiente

Destrucción del páncreas

Hipotiroidismo (Hashimoto)

Gran infiltración leucocitaria – linfoide

Tejido ya no funcional