Clase 6

ANALISIS INSTRUMENTAL

Espectrometría

2014-2015

Espectroscopia Ultravioleta visible (UV-Vis)

Electrones implicados

1. Electrones p, s y n en moléculas orgánicas 2. Electrones d y f en metales de transición 3. Electrones de transferencia de carga en complejos

metálicos

Absorción: Ley de Lambert Beer

La ley de Lambert – Beer establece una relación entre la transmisión de la luz y la concentración de la sustancia

A: Absorbancia (adimensional) l : longitud de la celda (cm) C : concentración (M) E: coeficiente de absorción molar (M-1cm-1)

https://www.youtube.com/watch?v=ILeKva55dWY




Componentes de un espectrofotómetro

Cromatografía

La cromatografía se define como la separación de una mezcla de dos o mas compuestos por distribución entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la otra una fase móvil. Todos los sólidos finamente pulverizados tienen el poder de adsorber en mayor o menor grado otras sustancias sobre su superficie y similarmente, todas las sustancias pueden ser adsorbidas, unas con más facilidad que otras. Este fenómeno de adsorción selectiva es el principio fundamental de la cromatografía.

Cromatografía

Eter

CaCO3

Clorofila

Cromatografía

Colores

Tswett

n33-Entremeses-Diaz.pdf

Cromatografía en capa fina

La fase estacionaria es una placa de vidrio o aluminio recubierta con material adsorbente, el mas común la silica gel. La fase móvil puede ser: éter de petróleo, tolueno, diclorometano, acetato de etilo, ciclohexano,etc

https://www.youtube.com/watch?v=4IyGp6tqFqA













H igh

erformance

L iquid

C hromatography

P

HPLC

Fase Móvil – Fase Estacionacia

https://www.youtube.com/watch?v=WO0OsxaPYs8&list=UUAi08vpGsxeDRb20qu2EnRw&index=21

La afinidad con la fase móvil y la fase estacionaria varía con el soluto.

La separación ocurre debido a la diferencia en la velocidad de movimiento

Fuerte Débil

Fase

Movil

Fase

Estacionaria




















La separación esta

basada en la diferencia

de migracion entre la

fases movil y la fase

estacionaria.

Injector

Detector

Columna

Solventes

Pumps

Residuo

HPLC

11

Injector

Detector

Column

Solvents

Mixer

Pumps

Chromatogram

Start Injection

mAU

time

HPLC

Injector

Detector

Column

Solvents

Mixer

Pumps

Chromatogram

Start Injection

mAU

time

HPLC

Injector

Detector

Column

Solvents

Pumps

Mixer

Chromatogram

Start Injection

mAU

time

HPLC

22

Injector

Detector

Column

Solvents

Pumps

Mixer

Chromatogram

Start Injection

mAU

time

HPLC

Injector

Detector

Column

Solvents

Pumps

Mixer

Chromatogram

Start Injection

mAU

time

HPLC

Fase Móvil

Bomba

Inyector

Horno de la columna

Detector

HPLC

Injección

to

tR

mAU

tiempo

tR

Cromatograma

to – tiempo muerto

tR- tiempo de retención

Area o altura

proporcional a la

cantidad de

analito

Aplicaciones del HPLC

• Proteínas

• Péptidos

• Poliestirenos

• Barbituricos

• Corticoides

• Antidepresivos

• HC poliaromáticos • Iones inorgánicos

• Herbicidas

• Lípidos

• Antioxidantes

• Azucares

• Aminoácidos

• Vitaminas

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