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ANALISIS INSTRUMENTAL
Espectrometría
2014-2015
Espectroscopia Ultravioleta visible (UV-Vis)
Electrones implicados
1. Electrones p, s y n en moléculas orgánicas 2. Electrones d y f en metales de transición 3. Electrones de transferencia de carga en complejos
metálicos
Absorción: Ley de Lambert Beer
La ley de Lambert – Beer establece una relación entre la transmisión de la luz y la concentración de la sustancia
A: Absorbancia (adimensional) l : longitud de la celda (cm) C : concentración (M) E: coeficiente de absorción molar (M-1cm-1)
https://www.youtube.com/watch?v=ILeKva55dWY
Componentes de un espectrofotómetro
Cromatografía
La cromatografía se define como la separación de una mezcla de dos o mas compuestos por distribución entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la otra una fase móvil. Todos los sólidos finamente pulverizados tienen el poder de adsorber en mayor o menor grado otras sustancias sobre su superficie y similarmente, todas las sustancias pueden ser adsorbidas, unas con más facilidad que otras. Este fenómeno de adsorción selectiva es el principio fundamental de la cromatografía.
Cromatografía en capa fina
La fase estacionaria es una placa de vidrio o aluminio recubierta con material adsorbente, el mas común la silica gel. La fase móvil puede ser: éter de petróleo, tolueno, diclorometano, acetato de etilo, ciclohexano,etc
https://www.youtube.com/watch?v=4IyGp6tqFqA
H igh
erformance
L iquid
C hromatography
P
HPLC
Fase Móvil – Fase Estacionacia
https://www.youtube.com/watch?v=WO0OsxaPYs8&list=UUAi08vpGsxeDRb20qu2EnRw&index=21
La afinidad con la fase móvil y la fase estacionaria varía con el soluto.
La separación ocurre debido a la diferencia en la velocidad de movimiento
Fuerte Débil
Fase
Movil
Fase
Estacionaria
La separación esta
basada en la diferencia
de migracion entre la
fases movil y la fase
estacionaria.
Injector
Detector
Columna
Solventes
Pumps
Residuo
HPLC
11
Injector
Detector
Column
Solvents
Mixer
Pumps
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
Injector
Detector
Column
Solvents
Mixer
Pumps
Chromatogram
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mAU
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HPLC
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Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
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HPLC
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Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
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HPLC
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Column
Solvents
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Mixer
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Column
Solvents
Pumps
Mixer
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HPLC
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
22
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
HPLC
Fase Móvil
Bomba
Inyector
Horno de la columna
Detector
HPLC
Injección
to
tR
mAU
tiempo
tR
Cromatograma
to – tiempo muerto
tR- tiempo de retención
Area o altura
proporcional a la
cantidad de
analito
Aplicaciones del HPLC
• Proteínas
• Péptidos
• Poliestirenos
• Barbituricos
• Corticoides
• Antidepresivos
• HC poliaromáticos • Iones inorgánicos
• Herbicidas
• Lípidos
• Antioxidantes
• Azucares
• Aminoácidos
• Vitaminas