Cerna Julian Geiner Julio - Tesis 2013-1

8/13/2019 Cerna Julian Geiner Julio - Tesis 2013-1

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FACULTAD DE INGENIERAESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE

INGENIERA AGROINDUSTRIAL

EFECTO DEL TIEMPO DE EXTRACCIN DE

EXTRACTOS DE HOJAS DE Manihot esculenta (YUCA),EN LA CONCENTRACIN MNIMA INHIBITORIA(CMI) Y CONCENTRACIN MNIMA BACTERICIDA

(CMB) EN Staphylococcus aureus ATCC 25923.

TESIS PARA OBTENER EL TTULO PROFESIONAL DE:

INGENIERO AGROINDUSTRIAL

AUTOR:

Cerna Julin, Geiner Julio

ASESOR:

Dr. Gonzlez Cabeza, Jos

LNEA DE INVESTIGACIN:

Cultivos Agroindustriales

TRUJILLOPER

2013


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ii

Efecto del tiempo de extraccin de extractos de hojas de Manihot esculenta (Yuca), en

la Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI) y Concentracin Mnima Bactericida (CMB)

en Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Presentada a la Escuela Acadmico Profesional de Ingeniera Agroindustrial de laUniversidad Csar Vallejo para su aprobacin.

TRUJILLOPER

2013

M.Sc. Lennis Reyna L.Presidente

M.Sc. Gabriela Barraza J.Secretario

Dr. Jos Gonzlez C.Vocal

Cerna Julin, Geiner JulioAutor


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DEDICATORIA

A Dios por guiarme, iluminarme y

darme su fortaleza divina en el

transcurso de mi vida, para poder

de esta manera alcanzar todos

los objetivos trazados.

A mis padres Mara y Alberto por

todas sus enseanzas, por el

apoyo mutuo e incondicional en el

transcurso de mi vida, por su

confianza, afecto, y por dejarme

muy claro que con esfuerzo y

entrega se puede lograr todo en la

vida.

A mis abuelos por su apoyo

incondicional y por sus grandes

consejos.

A mis hermanos Harry y Jheyson

por todo su apoyo y sobre todo

por su confianza y amistad.


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iv

AGRADECIMIENTOS

A la Universidad Csar Vallejo, por la formacin profesional durante todo este tiempo

y por permitirme terminar esta etapa en mi vida universitaria.

La elaboracin del presente Proyecto de Tesis, no hubiese sido posible sin el apoyo

de las siguientes personas mencionadas a continuacin, a quienes agradezco mucho

por todos sus conocimientos facilitados.

Al Dr. Jos Gonzlez Cabeza, Asesor Especialista de mi Proyecto de Tesis, por sus

conocimientos facilitados, por su orientacin, paciencia y por todo su apoyo en el

desarrollo de este trabajo de investigacin.

A la Ing. Mara Elena Len Marrou, Asesora Metodloga, en la primera parte de mi

Proyecto de Tesis, por su paciencia, tiempo y por su apoyo constante para realizar de

manera idnea este trabajo de investigacin.

A la Ing. Gabriela Barraza Juregui, Asesora Metodloga, por sus enseanzas,

sugerencias y por el apoyo facilitado en la segunda parte de este Proyecto de Tesis,

orientndome de este manera a desarrollar este trabajo de manera organizada y

ordenada.

Finalmente muestro mi gratitud encarecida a todas las personas mencionadas

anteriormente que hizo posible la realizacin de este trabajo de investigacin.


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vi

PRESENTACIN

Seores Miembros del Jurado:

En cumplimiento con la normativa establecida de Grados y Ttulos de la Facultad de

Ingeniera, Escuela Acadmico Profesional de Ingeniera Agroindustrial de la

Universidad Csar Vallejo, presento a su consideracin el Proyecto de Tesis que tiene

por ttulo:

Efecto del tiempo de extraccin de extractos de hojas de Manihot Esculenta (Yuca),

en la Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI) y Concentracin Mnima Bactericida

(CMB) en Staphylococcus aureus ATCC 25923.

El presente proyecto de investigacin, es de gran importancia considerando que

actualmente no se puede observar la utilizacin de las hojas de Manihot esculenta

(Yuca) en la Industria Alimentaria, las cuales podran contener compuestos naturales

antimicrobianos, optando as por su posible insercin como un empaque o envase

biodegradable, que ayude a la reduccin de la contaminacin microbiana producida

en demasa por Staphylococcus aureus ATCC 25923 en productos alimentarios,

generando de esta manera una posible solucin a los problemas expuestos

anteriormente, como tambin al uso excesivo de lminas plsticas, las cuales

generan contaminacin a corto, mediano y largo plazo.

De esta manera espero que el esfuerzo realizado en la ejecucin de este trabajo de

investigacin cumpla y satisfaga sus expectativas.

Cerna Julin, Geiner Julio


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NDICE GENERAL

PGINA DEL JURADO............................................................................................................... ii

DEDICATORIA .......................................................................................................................... iii

AGRADECIMIENTOS ................................................................................................................ iv

DECLARATORIA DE AUTENTICIDAD...................................................................................... v

PRESENTACIN ...................................................................................................................... vi

NDICE GENERAL ................................................................................................................... vii

NDICE DE CUADROS .............................................................................................................. ix

NDICE DE FIGURAS ................................................................................................................ x

NDICE DE ANEXOS ................................................................................................................ xii

RESUMEN ............................................................................................................................... xiii

ABSTRACT .............................................................................................................................. xiv

I.INTRODUCCIN ................................................................................................................. 1

II.MARCO METODOLGICO .............................................................................................. 10

2.1. Variables ...................................................................................................................... 10

2.1.1. Variables independientes ........................................................................................ 10

2.1.2. Variables dependientes .......................................................................................... 10

2.2. Operacionalizacin de variables .................................................................................. 10

2.3. Metodologa ................................................................................................................. 11

2.4. Tipos de estudio .......................................................................................................... 11

2.4.1. De acuerdo a la orientacin .................................................................................... 11

2.4.2. De acuerdo a la tcnica de contrastacin ............................................................... 11

2.5. Diseo de investigacin ............................................................................................... 11

2.6. Poblacin, muestra y muestreo ................................................................................... 11

2.6.1. Insumos .................................................................................................................. 11


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2.6.2. Materiales y equipos ............................................................................................... 11

2.6.3. Esquema experimental ........................................................................................... 12

2.6.4. Descripcin del proceso experimental .................................................................... 13

2.6.4.1. Estudio piloto ..................................................................................................... 13

2.6.4.2. Preparacin de la cepa ...................................................................................... 13

2.6.4.3. Over Night .......................................................................................................... 13

2.6.4.4. Control positivo .................................................................................................. 14

2.6.4.5. Control negativo ................................................................................................. 14

2.6.4.6. Preparacin de los extractos.............................................................................. 14

2.6.4.7. Determinacin de la Concentracin Mnima Inhibitoria ...................................... 14

2.6.4.8. Determinacin de la Concentracin Mnima Bactericida .................................... 15

2.7. Mtodos de anlisis de datos ......................................................................................... 15

2.7.1. Desviacin estndar .................................................................................................. 15

2.7.2. Anlisis de varianza ................................................................................................... 16

2.7.3. Prueba de tukey ......................................................................................................... 16

III.RESULTADOS ................................................................................................................... 17

IV. DISCUSIN ....................................................................................................................... 28

V. CONCLUSIONES ................................................................................................................ 32

VI. RECOMENDACIONES ...................................................................................................... 33

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS .................................................................................. 34

VIII.ANEXOS .......................................................................................................................... 40


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NDICE DE CUADROS

Cuadro 1. Operacionalizacin de variables ............................................................................... 10

Cuadro 2. Modelo de aplicacin de anlisis de varianza (ANVA) .............................................. 16

Cuadro 3. ANVA aplicada a los resultados de extractos de hojas de M. esculenta(Yuca),

procedentes de T1, T2y T3 ......................................................................................................... 21

Cuadro 4. Prueba de Tukey aplicada a los resultados de extractos de hojas de M. esculenta

(Yuca), procedentes de T1(temperatura ambiente0 minutos) ............................................... 22


(Yuca), procedentes de T2(100 C15 minutos) ..................................................................... 22


(Yuca), procedentes de T3(100 C30 minutos) ..................................................................... 23

Cuadro 7. Resultados de la Concentracin Mnima Bactericida para T1(temperatura

ambiente0 minutos), T2(100 C15 minutos) y T3(100 C30 minutos) ........................... 27

Cuadro 8. Concentracin Mnima Inhibitoria en S. aureus ATCC 25923, para T1..................... 49

Cuadro 9. Concentracin Mnima Inhibitoria en S. aureus ATCC 25923, para T2..................... 49

Cuadro 10. Concentracin Mnima Inhibitoria en S. aureus ATCC 25923, para T3................... 49


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NDICE DE FIGURAS

Figura 1. Esquema experimental ................................................................................................. 12

Figura 2. Efecto de extractos de hojas de M. esculenta(Yuca), procedentes de T1, en la CMI

en S. aureus ATCC 25923.......................................................................................................... 17


en S. aureus ATCC 25923.......................................................................................................... 18


en S. aureus ATCC 25923.......................................................................................................... 19

Figura 5. Efecto de extractos de hojas de M. esculenta(Yuca), procedentes de T1, T2y T3, en

la CMI en S. aureus ATCC 25923............................................................................................... 20

Figura 6. Resultados de la Concentracin Mnima Bactericida (CMB) en S. aureus ATCC

25923, en Agar Meller-Hinton (T1) ............................................................................................. 24





Figura 9. Obtencin de T1(Temperatura ambiente0 minutos) ................................................. 41

Figura 10. Obtencin de T2(100C15 minutos) y T3(100C30 minutos) ............................. 41

Figura 11. Filtrado de Extractos de Hojas de M. esculenta(Yuca) .............................................. 42

Figura 12. Extractos Estriles procedentes de T1(temperatura ambiente0 minutos) .............. 42

Figura 13. Extractos Estriles procedentes de T2(100C15 minutos) ..................................... 43


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Figura 14. Extractos Estriles procedentes de T3(100C30 minutos) ..................................... 43

Figura 15. Medio de CultivoCaldo LB ...................................................................................... 44

Figura 16. Crecimiento en Caldo LB del vial sembrado de S. aureus ATCC 25923.................... 44

Figura 17. Agar Manitol SaladoMedio Selectivo para S. aureus ATCC 25923........................ 45

Figura 18. Proceso de Fermentacin de Manitol SaladoS. aureus ATCC 25923.................... 45

Figura 19. S. aureus ATCC 25923............................................................................................... 45

Figura 20. Resultados de la CMI en S. aureus ATCC 25923Sin Incubar (T1) .......................... 46

Figura 21. Resultados de la CMI en S. aureus ATCC 25923Incubados (T1) ........................... 46






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NDICE DE ANEXOS

Anexo 1. Formato de ensayo macro-dilucin en caldo ................................................................ 40

Anexo 2. Proceso de obtencin de extractos de hojas de M. esculenta (Yuca) .......................... 41

Anexo 3. Preparacin de la cepa (S. aureus ATCC 25923) ......................................................... 44

Anexo 4. Determinacin de la CMI en S. aureus ATCC 25923 con extractos estriles

procedentes de T1........................................................................................................................ 46


procedentes de T2........................................................................................................................ 47


procedentes de T3........................................................................................................................ 48

Anexo 7. Resultados de la Concentracin Mnima Inhibitoria en S. aureus ATCC 25923........... 49


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RESUMEN

En el presente trabajo de investigacin, se evalu la actividad antimicrobiana in vitrode extractos de hojas de Manihot esculenta(Yuca), recolectadas del Valle de Vir, LaLibertadPer, en la Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI) y Concentracin Mnima

Bactericida (CMB) en Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Para esto se obtuvieron extractos acuosos por trituracin de hojas de M. esculenta(Yuca), con posterior proceso de extraccin (tratamiento trmico), en un matrazErlenmeyer aforado con agua destilada, tales procesos de extraccin se dieron de lasiguiente manera, T1(Temperatura ambiente0 minutos), T2(100 C15 minutos) yT3 (100 C 30 minutos), para luego ser filtrados con papel de nitrocelulosa contamao de poro de 0,45 m y finalmente pasar un control de calidad.

La Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI), se determin utilizando el mtodo de

Macrodilucin en caldo, para esto se trabaj con concentraciones decrecientes, eneste caso los extractos de hojas de M. esculenta (Yuca), procedentes de T1(Temperatura ambiente 0 minutos), T2 (100 C 15 minutos) y T3 (100 C 30minutos), los cuales fueron agregados en el medio de cultivo LB, con la cepa (S.aureus ATCC 25923). Para luego de 24 horas de incubacin a 37 C, definirse comoConcentracin Mnima Inhibitoria, aquella donde el primer tubo de ensayo aparezcasin crecimiento (turbidez).

La Concentracin Mnima Bactericida (CMB), se determin mediante la metodologade difusin en placas, para esto se tom alcuotas de 100 L del ensayo de la

Concentracin Mnima Inhibitoria con previo proceso de incubacin, las cuales fueronsembradas en agar Meller-Hinton e incubadas a 37 C durante 24 horas, finalmentese verifico bajo que concentracin ya no existe crecimiento bacteriano.

Se concluye que los extractos de hojas de M. esculenta (Yuca) (T1, T2 y T3),presentaron poder Inhibitorio (CMI) frente a S. aureus ATCC 25923, mas no poderbactericida (CMB), resaltndose como mejor tratamiento a T3(100 C30 minutos),frente a la CMI de S. aureus ATCC 25923.

Palabras claves:Antimicrobiano, Hojas, Yuca, Extractos.


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xiv

ABSTRACT

In this research work, the antimicrobial activity "in vitro" of leaves extracts fromManihot esculenta (Yucca), collected from Vir Valley, La Libertad - Per, in theMinimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bacterial Concentration (MBC)

on Staphylococcus aureus ATCC 25923, was evaluated.

For this aqueous extracts were obtained by crushing of leaves Manihot esculenta(Yucca), with subsequent extraction process (thermal treatment), in a volumetricErlenmeyer flask with distilled water, such extraction processes were the followingway: T1 (ambient temperature - 0 minutes), T2(100 C - 15 minutes) and T3(100 C -30 minutes), for then be filtered with nitrocellulose paper with a pore size of 0.45 pmand finally pass quality control.

The minimum inhibitory concentration (MIC) was determined using the method ofMacro - broth dilution, for this we worked with decreasing concentrations, in this casethe leaves extracts from Manihot esculenta (yucca), originating from T1 (ambienttemperature - 0 minutes), T2(100 C - 15 minutes) and T3(100 C - 30 minutes), whichwere added in the middle of LB cultivation, with the strain (S. aureus ATCC 25923). Toafter 24 hours of incubation at 37 C, defined as the minimum inhibitory concentration,that where the first test tube appeared without growth (turbidity).

Minimum Bacterial Concentration (MBC), was determined by the plate diffusionmethod, for this was taken in 100 L assay Minimum Inhibitory Concentration with

prior incubation process, which were sown in Mueller-Hinton agar and incubated at 37C for 24 hours, finally verified under that concentration the bacterial growth no longerexists.

It is concluded that the leaves extracts from Manihot esculenta(yucca) (T1, T2 and T3),presented inhibitory power (MIC) against S. aureus ATCC 25923, but not bactericidalpower (MBC), highlighting as best treatment to T3(100 C - 30 minutes), against theMIC of S. aureus ATCC 25923.

Keywords:Antimicrobial, Leaves, Yucca, Extracts.


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1

I. INTRODUCCIN

Para una mejor orientacin en la elaboracin de este trabajo de investigacin se

tomaron como referencia trabajos in vitro realizados con anterioridad, con

referencia a extractos y sus posibles propiedades antimicrobianas, los cuales secitan a continuacin:

Estrada (2011) evalu la actividad antibacteriana in vitro de los extractos de

Romero y Tomillo frente a Staphylococcus aureusATCC 25923, Salmonella

typhimurium ATCC 14028, Klebsiella pneumoniae. ATCC 13883, Candida

albicans ATCC 10231 y Pseudomonas aeruginosa. ATCC 27853. Para tal

estudio obtuvieron extractos por maceracin de las hojas y tallos en un baln

aforado con hexano y alcohol agua, luego realizaron el control de calidad yevaporaron el solvente por bao Mara. Posteriormente usaron tres

concentraciones diferentes, frente a distintas bacterias y comprobaron sus

propiedades antimicrobianas utilizando el mtodo de Mitscher el cual consiste en

la determinacin del crecimiento de los microorganismos en presencia de

concentraciones crecientes del antimicrobiano en este caso los extractos, que se

encuentran diluidos en el medio de cultivo. Luego de 24 y 48 horas de

incubacin; observaron que los extractos de ambas plantas presentaban

actividad antibacteriana destacndose la mezcla de los extractos hexnicos a

concentraciones de 10000 y 1000 g/mL frente a Staphylococcus aureus,

Candida albicans y Pseudomonas aeruginosadebido a los compuestos fenlicos

como el timol, carvacrol y cineol presentes en el aceite esencial por lo cual

recomendaron la utilizacin de la mezcla de los extractos de Romero y Tomillo

en infecciones causadas por bacterias y hongos.

De La Paz et al., (2012) realizaron una investigacin orientada a lacomprobacin de la accin antimicrobiana de los extractos elaborados a

partir de la planta Luffa cylindrica L obtenindose las tinturas al 20 %, los

extractos hexnicos, clorofrmicos, acetato de etilo, acuosos y los

correspondientes extractos secos de tallos, hojas y fruto verde. En los

posteriores ensayos microbiolgicos in vitro las tinturas al 20 % de hojas y
http://dspace.espoch.edu.ec/browse?type=author&value=Estrada+Orozco%2C+Silvia+Paolahttp://dspace.espoch.edu.ec/browse?type=author&value=Estrada+Orozco%2C+Silvia+Paola


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tallos y los extractos en diferentes solventes presentaron accin antimicrobiana

frente a cepas de referencia y salvaje de Sthaphylococcus aureus y Escherichia

coli y cepa salvaje de Candida sp como tambin los extractos obtenidos del

fruto.

Cruz et al., (2010) indicaron que uno de los temas ms importantes es la

resistencia bacteriana. En ese contexto optaron por la bsqueda de nuevos

principios activos con actividad antibacteriana, para lo cual eligieron determinar

las propiedades antibacterianas de cuatro especies vegetales, recolectadas en

la ciudad de Tunja (Boyac). Prepararon extractos etanolitos, a partir de las

hojas secas de Bidens pilosa, Lantana camara, Schinus molle y Silybum

marianum, las cuales, fueron sometidas a un anlisis microbiolgico in vitro,

para establecer su actividad antibacteriana y sus concentraciones mnimas

inhibitoria y bactericida, en respuesta a Staphylococcus aureus, Escherichia coli

y Pseudomona aeruginosa. Las actividades, se compararon con un frmaco

estndar, cloranfenicol o gentamicina. Los extractos mostraron actividad contra

S. aureus; la que exhibi la mejor actividad fue B. pilosay L. camara, S. molley

S. marianummanifestaron capacidad moderada para inhibir el crecimiento de S.

aureus. Finalmente concluyeron que las plantas seleccionadas tienen actividad

antibacteriana frente a S. aureus.

Thoene et al., (2008) evaluaron la actividad antimicrobiana de extractos

etanlicos de hojas y corteza secas de P. australis frente a Staphylococcus

aureus y Pseudomonas aeruginosa. Para tal investigacin maceraron hojas y

cortezas secas en etanol 70 % por 5 das, las cuales fueron filtradas, secadas y

esterilizadas. La actividad antimicrobiana fue evaluada mediante el mtodo de

difusin en placas de agar. Posteriormente establecieron las concentraciones

mnima inhibitoria (CMI), bacteriosttica (CBS) y bactericida (CMB). Analizaron el

efecto del extracto etanlico sobre la morfologa deS. aureus y P. aeruginosa

por microscopia electrnica de transmisin. Concluyendo que los extractos

etanlicos de hojas y corteza secas de P. australis mostraron actividad

antimicrobiana contra S. aureus y P. aeruginosa. El extracto etanlico de corteza


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3

present menos actividad antimicrobiana que el de hojas, el cual result

bactericida contra S. aureusy bacteriosttico contra P. aeruginosa.

Por otro lado, Suarez y Merderos (2011), sealan que las hojas de M. esculenta

(Yuca) son simples y estn compuestas por la lmina foliar y el pecolo. Lalmina foliar es palmeada y profundamente lobulada. El nmero de lbulos en

una hoja es variable y por lo general impar, oscilando entre tres y nueve. Los

lbulos miden entre 4 y 20 cm de longitud y entre 1 a 6 cm de ancho; los

centrales son de mayor tamao que los laterales. El tamao de la hoja es una

caracterstica tpica de cada cultivar, aunque depende mucho de las condiciones

ambientales. Son de color verde oscuro, a veces con matices rojizos en los

nervios. Las hojas producidas en los primeros tres a cuatro meses de vida de la

planta son ms grandes que las producidas luego del cuarto mes. El color de las

hojas tambin es una caracterstica varietal, pero que puede variar con la edad

de la planta. Forma parte de la familia Euphorbiaceae;la especie en concreto es

Manihot esculenta Crantz.

Con referencia a los compuestos txicos presentes en toda la estructura de la

yuca, (Gmez, 1982, citado por Aristizbal y Snchez, 2007) menciona al

cianuro como compuesto toxico principal, constituido por dos tipos de glucsidoscianognicos: linamarina y lotaustralina. Aproximadamente el 8590 % del

cianuro total de los tejidos en la yuca se encuentra como cianuro ligado o

linamarina y solo el 1015 % como cianuro libre o lotaustralina.

Los glucsidos linamarina y lotaustralina al hidrolizarse por medio de la accin

de la enzima linamarasa, dan origen a glucosa y cianhidrina, donde esta ltima

se descompone en acetona y cido cianhdrico libre gaseoso; este ltimo es el

que puede ocasionar toxicidad en el organismo cuando supera los niveles de

seguridad (Aristizbal y Snchez, 2007).


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4

Linamarasa

Linamarina + Agua Glucosa + Cianhidrina Acetona + Ac. Cianhdrico

C10H17O6N H2O C6H12O6 C4H7NO C3H6O HCN

Estos compuestos tambin son considerados responsables de la repelencia que

las plantas ejercen sobre algunos insectos fitfagos o herbvoros en general. Lomismo sucede en variedades con altos contenidos de estos glucsidos en lo que

respecta a la tolerancia a ciertas enfermedades. El nivel de glucsidos

cianognicos o cido cianhdrico total presente en la raz o hojas de yuca,

determina la diferencia entre variedades amargas (de mayor toxicidad) y

variedades dulces. Segn las experiencias del Centro Internacional de

Agricultura Tropical (CIAT) en manejo de variedades de yuca (Snchez, 2004,

citado por Aristizbal y Snchez, 2007), las variedades con menos de 180 ppm

de HCN (en base seca) se clasifican como variedades dulces, las que poseen

entre 180 300 ppm se clasifican en el rango intermedio y las que tienen un

contenido de HCN mayor de 300 ppm son consideradas como variedades

amargas.

La concentracin de cianuro en las hojas vara, siendo mayor en las hojas

tiernas o jvenes que en las hojas adultas y, en general, las hojas poseen

concentraciones similares a las encontradas en la cscara de las races(Aristizbal y Snchez, 2007).

En forma natural, la liberacin del HCN se debe a la accin de la enzima

linamarasa, la cual se encuentra normalmente en los tejidos de la planta de

yuca, especialmente en la cscara de la raz y en las hojas. El contacto de la

enzima con la linamarina ocurre cuando los tejidos sufren daos mecnicos o

por trituracin o destruccin de la estructura celular de la planta o tejidos. Por lo

tanto, cuanto mayor sea la trituracin ms fcil es la liberacin del HCN en la

yuca; adems, la temperatura y la humedad aceleran el proceso de liberacin

del HCN. Al picarse las races, la proporcin de cianuro libre aumenta

rpidamente a rangos de 3040 % del cianuro total comparado con los niveles


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de 1015 % de cianuro libre observados en la cscara o en la pulpa cuando se

analizan por separado (FAO y OMS, 1991).

El mtodo comercial ms efectivo para eliminar total o parcialmente el HCN, se

basa en la accin controlada del calor. Temperaturas entre 4080 C sonefectivas para eliminar la mayor parte del cido cianhdrico libre. La liberacin

del HCN puede ocurrir por deshidratacin natural por accin de los rayos

solares, a temperatura entre 3040 C el cual es un sistema seguro para destruir

el cido cianhdrico, sin afectar la accin de la enzima linamarasa (Gmez et al.,

1979, citado por Aristizbal y Snchez, 2007).

Usando temperaturas mayores a 40 C es posible eliminar hasta cerca del 80 %

del cido cianhdrico libre y cuando la temperatura llega a 60 C se puede

eliminar ms del 90 %. El calentamiento a temperaturas mayores de 70 C, con

poca o ninguna humedad, elimina el cido cianhdrico libre; sin embargo, con

este mtodo tambin se destruye la enzima linamarasa que es la enzima que

permite que los glucsidos continen transformndose en cido cianhdrico libre.

El rango de temperatura ptimo para realizar la mxima liberacin del HCN est

comprendido entre 6070 C. Cooke y Maduagwu (1978) demostraron que los

procesos de secamiento lentos a baja temperatura remueven el cianuro residualde manera ms efectiva que los procesos rpidos a alta temperatura. El proceso

de coccin en agua es efectivo para eliminar el HCN libre y es posible eliminar

ms del 90 % de este cocinando la yuca durante 15 minutos. El cianuro libre es

mucho ms fcil de eliminar que el cianuro ligado. Si se sumergen los trozos de

yuca en agua fra antes del proceso de coccin, se puede eliminar la mayor

parte del HCN libre despus de 45 horas, es decir el 1015 % del HCN total de

la yuca. Sin embargo, con este mtodo el HCN ligado (8590 % del HCN total)

permanece casi intacto y es por ello que es necesario someter la yuca a

mayores temperaturas (Aristizbal y Snchez, 2007).


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6

La FAO (1997), menciona que los estafilococos son organismos ubicuos y se

pueden encontrar en el agua, aire, polvo, leche, aguas residuales, pavimento,

otras superficies y todos los artculos que entran en contacto con el hombre,

adems, sobreviven muy bien en el medio ambiente. No obstante, su principal

reservorio y hbitat es la nariz, garganta y piel del hombre y animales. La tasa de

portadores humanos puede ser hasta del 60 % de los individuos sanos, con una

media del 2530 % de la poblacin que es positiva para las cepas productoras

de enterotoxinas. La enfermedad causada por S. aureuses una intoxicacin. Los

sntomas comunes, que pueden aparecer entre 2 y 4 horas despus del

consumo de alimentos contaminados, son nuseas, vmitos y algunas veces

diarrea. Normalmente, los sntomas no duran ms de 24 horas, pero en casos

graves, la deshidratacin puede llevar a la conmocin y al colapso.

As mismo, Ray (2010) seala que S. aureus, es un coco Gram positivo, que por

lo regular se presentan en grupos semejantes a racimos. La mayor parte de las

cepas fermentan manitol y producen coagulasa, termonucleasa y hemolisina,

pero difieren en su sensibilidad a los bacterifagos. Las clulas mueren a una

temperatura de 66 C en 12 minutos y a 72 C en 15 minutos. S. aureus, son

anaerobios facultativos, pero prosperan con rapidez en condiciones aerbicas.

Tienen la capacidad de fermentar carbohidratos y tambin de causar protelisis

por medio de las enzimas proteolticas extracelulares. Son mesfilos y crecen a

un rango de temperatura de 7 a 48 C con proliferacin mayor entre 20 y 37 C.

Otras caractersticas importantes de su crecimiento son su capacidad para

multiplicarse a una (aw) relativamente baja (0.86) y pH bajo (4.8).

S. aureus, produce enterotoxinas comnmente asociadas con enfermedades

transmitidas por los alimentos (Brock, 1993).

Muchos alimentos han sido asociados al brote de enfermedades por

estafilococos. En general, las bacterias proliferan en los alimentos y producen

toxinas cuya presencia no afecta a la calidad del producto pero si a la salud del

consumidor. Entre los principales alimentos que se relacionan con este


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microorganismos, resaltan; jamones, carnes, ensaladas, productos horneados

que incluyen algn tipo de crema, pudines, aderezos para ensaladas, salsas y

quesos. Asimismo las carnes de cerdo, res, pavo y pollo, as como huevos y

productos horneados, se relacionan con altos porcentajes de brotes. Diferentes

tipos de ensaladas junto con una manipulacin excesiva y exposicin a

temperaturas inadecuadas, se han implicado con un nmero relativamente alto

de casos con envenenamiento con estafilococos. Los tres factores que ms

contribuyen a estos brotes son; inadecuada temperatura de conservacin,

higiene personal deficiente y contaminacin de los equipos (Ray, 2010).

A su vez, Ray (2010) menciona que actualmente se observa una disminucin de

S. aureus que tal vez haya sido resultado de mejor uso de temperaturas de

refrigeracin para almacenar los alimentos y mejores prcticas sanitarias que

controlan su contaminacin y proliferacin.

Por otro lado este proyecto de investigacin trata de profundizar principalmente

en el estudio de las posibles propiedades antimicrobianas de las hojas de yuca

(Manihot esculenta) las cuales podran contener compuestos naturales

inhibidores (cido cianhdrico), para esto se utilizara uno de los principales

microorganismos de inters agroindustrial como; S. aureus, tal agentemicrobiano ser inoculado en extractos de hojas de M. esculenta (Yuca), sin

previo tratamiento trmico (temperatura ambiente0 minutos) y con tratamiento

trmico (100 C 15 minutos) y (100 C 30 minutos), para de esta manera

poder determinar las posibles propiedades antimicrobianas, presentes en dichas

hojas.

Por tanto ante los motivos sealados anteriormente, este proyecto justifica la

utilizacin de las hojas de yuca (M. esculenta) en la posible inhibicin de

microorganismos de inters agroindustrial y su utilizacin futura como material

de conservacin de alimentos, ya que actualmente no se observa su

participacin en el mercado alimentario, rescatando de esta manera sus posibles

propiedades protectoras y beneficios para la salud que se podran dar por su


22/63

8

utilizacin como un envase o embalaje biodegradable, as mismo una reduccin

en la utilizacin de lminas plsticas en el mercado alimentario como material

de envase, las cuales a largo plazo generan contaminacin por su posterior

utilizacin y desecho.

Asimismo se observ que el problema real, es la falta de conocimiento por parte

del agricultor en el uso de este material orgnico, ya que en la actualidad al

obtener su cosecha aprovecha solamente su fruto o pulpa, generando de esta

manera un gran desperdicio por el desecho de hojas de M. esculenta(Yuca), las

cuales no son utilizadas para ningn fin. La presente investigacin se realiz con

el propsito de originar una mayor importancia sobre la utilizacin de las hojas

de Yuca, rescatando de esta manera sus posibles propiedades protectoras en

beneficio del mercado alimentario.

La Yuca un tubrculo originario de Sudamrica, se caracteriza por ser una planta

herbcea perenne de la familia de las euforbiceas,que alcanza generalmente

los 3m de altura, se reproduce con mayor eficacia a travs de esquejes, por ser

un producto habitual de Sudamrica recibe diferentes nominaciones en los

diferentes pases en donde es cultivada en el Per es conocida generalmente

como yuca, mandioca guacamota. Las hojas estn dispuestas en espiral, ytienen de 5 a 15cm de longitud, palmeadas, con 3 a 7 lbulos lanceolados y

acuminados, a veces pubescentes en las nervaduras del envs. Son de color

verde oscuro y en algunas ocasiones con matices rojizos en los nervios (Santos,

2006).

En la actualidad esta raz, bsicamente sus hojas no son lo suficientemente

valoradas en nuestra regin y pas, desconociendo de esta manera las

bondades que se pueden encontrar en sus hojas, las cuales se podran aplicar almercado alimentario. Se puede observar que en el comercio con los mercados

locales, este producto es adquirido y se aprovecha tan solo la pulpa con fines

alimentarios, generando de esta manera grandes cantidades de desperdicios los

cuales incluyen principalmente hojas.
http://es.wikipedia.org/wiki/Euphorbiaceaehttp://es.wikipedia.org/wiki/Euphorbiaceae


23/63

9

Por otro lado compuestos naturales repelentes presentes en las hojas de M.

esculenta (Yuca), como son los glucsidos cianognicos (linamarina y

lotaustralina) que por accin de la enzima linamarasa, son convertidos en cido

cianhdrico (Box, 2005), podran utilizarse como inhibidores de microorganismos

de inters agroindustrial como por ejemplo; S. aureus, tales agentes microbianos

generan innumerables riesgos para la salud por un posible insercin en

productos alimentarios, como tambin generan degradacin de los mismos.

Ante lo sealado anteriormente, se plantea como problema de investigacin lo

siguiente:

Afectar el tiempo de extraccin de extractos de hojas de Manihot esculenta

(Yuca), en la Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI) y Concentracin Mnima

Bactericida (CMB) en S. aureus ATCC 25923?

Asimismo, la hiptesis que se formula en el presente trabajo de investigacin, es

la siguiente:

La aplicacin de un tiempo de extraccin de 30 minutos en extractos de hojas de

Manihot esculenta (Yuca), afectar la Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI) y

Concentracin Mnima Bactericida (CMB) en S. aureus ATCC 25923. Ser este

extracto, el que presente mayor poder antimicrobiano.

Por otro lado, el objetivo de este estudio fue determinar el efecto inhibitorio y

bactericida de extractos acuosos de hojas de M. esculenta (Yuca), sobre una

bacteria patgena importante y frecuentemente vinculada con alimentos como S.

aureus ATCC 25923.


24/63

10

II. MARCO METODOLGICO

2.1. Variables

2.1.1. Variables independientes

Tiempo de extraccin (0, 15 y 30 minutos).

2.1.2. Variables dependientes

Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI).

Concentracin Mnima Bactericida (CMB).

2.2. Operacionalizacin de variables

Cuadro 1. Operacionalizacin de variables

VARIABLEDEFINICIN

CONCEPTUAL

DEFINICIN

OPERACIONALINDICADOR

ESCALA D

MEDICIN

Tiempo

Magnitud fsica con la

que medimos la duracin

o separacin de

acontecimientos.

Se determin usando un

cronometro, controlando as

tiempos de 0, 15 y 30

minutos para la obtencin de

los extractos de hojas de M.

esculenta(Yuca).

Minutos Intervalo

Concentracin

Mnima

inhibitoria (CMI)

Es la concentracin ms

baja de un

antimicrobiano que

inhibe el crecimiento

visible de un

microorganismo despus

de su incubacin.

Se determin mediante el

mtodo de macro dilucin en

caldo.

Absorbancia Intervalo

Concentracin

Mnima

bactericida

(CMB)

Es la menorconcentracin capaz de

destruir o matar

bacterias en 1 mL de

medio de cultivo, tras 24

horas de incubacin.

Se determin mediante el

mtodo de difusin en placas

en agar Meller-Hinton.

UFC/mL Razn
http://es.wikipedia.org/wiki/Magnitud_f%C3%ADsicahttp://es.wikipedia.org/wiki/Magnitud_f%C3%ADsica


25/63

11

2.3. Metodologa

Mtodo Experimental

2.4. Tipos de estudio

2.4.1. De acuerdo a la orientacin:Aplicado2.4.2. De acuerdo a la tcnica de contrastacin: Experimental

2.5. Diseo de investigacin

Experimental PuroFactorial

2.6. Poblacin, muestra y muestreo

Para la presente investigacin se trabaj con hojas de M. esculenta (Yuca),

procedentes de valle de Vir, La Libertad Per. Para lo cual se tom comomuestra 270 gr de hojas de M. esculenta(Yuca).

2.6.1. Insumos

Triptona o Peptona

Extracto de Levadura

NaCl

Agar Meller-Hinton

Agar Manitol Salado

Alcohol 96

Agua destilada

2.6.2. Materiales y equipos

Tips de Micro pipeta

Tubos de ensayo

PipetasVasos de precipitado

Placas Petri

Matraces

Mechero

Autoclave


26/63


27/63

13

2.6.4. Descripcin del proceso experimental

2.6.4.1. Estudio piloto

En el presente proyecto de investigacin, se trabaj con diluciones

seriadas de 101109, tal procedimiento fue dado para los extractosde hojas de M. esculenta (Yuca), sin tratamiento trmico (0

minutos) y con tratamiento trmico durante (15 y 30 minutos),

obtenidos por filtracin y previamente estriles, tales muestras de

extractos se dispensaron con la cepa a ensayar (S. aureus ATCC

25923) en tubos de ensayo conteniendo caldo LB, para

posteriormente ser llevadas a incubar durante 24 horas.

2.6.4.2. Preparacin de la cepa

La cepa microbiana empleada fue S. aureus ATCC 25923,

recuperado a partir de viales criognicos (-40 C), este vial se

incub durante 2 horas a temperatura de refrigeracin (4 C) y

posteriormente fue colocado a temperatura ambiente. A partir de

este cultivo, se efectuaron siembras en agar nutritivo (Placas

Master) y verifico las caractersticas fenotpicas de la cepa

mencionada, ms adelante se obtuvieron cultivos puros en caldo

LB, incubados a 37 C durante 24 horas. Posteriormente fueron

sembradas en placas con agar Manitol Salado, las cuales se

constituyeron como material biolgico para ensayos posteriores.

2.6.4.3. Over Night

Para la ejecucin de los ensayos, a partir de las placas master,

fueron obtenidas 23 colonias y se efectuaron los over night; loscuales consisten en cultivos de noche a 37 C durante 24 horas.

Pasado este tiempo, se efectuaron resiembras de 4 mL del over

night sobre 16 mL de caldo fresco LB, hasta alcanzar una densidad

ptica similar al tubo N1 del sistema Nefelmetro de McFarland,

que es equivalente a una carga microbiana de 3x108UFC/mL.


28/63


29/63

15

Los sistemas de ensayo fueron incubados a 37C durante 24

horas, definindose como Concentracin Mnima Inhibitoria,

aquella donde el primer tubo de ensayo aparezca sin crecimiento

(turbidez). Finalmente se efectu, las correspondientes lecturas de

las diluciones ensayadas en el espectrofotmetro a 620 nm.

2.6.4.8. Determinacin de la Concentracin Mnima Bactericida

A partir de cada uno de los sistemas de ensayos establecidos en el

prrafo anterior, se tomaron alcuotas de 100 L seguidamente

estas fueron sembradas en agar Meller-Hinton, y de esta manera

se estableci la Concentracin Mnima Bactericida. Las placas

fueron incubadas a 37C durante 24 horas, pasado este tiempo severific bajo que concentracin ya no existe aparicin de colonias

bacterianas.

2.7. Mtodos de anlisis de datos

2.7.1. Desviacin estndar (DS)

Es una medida de dispersin que indica cunto pueden alejarse los

valores respecto al promedio (media), por lo tanto se aplica paracontrastar la variabilidad de los resultados obtenidos.

Dnde:

S: desviacin estndar: sumatoria

_X: valor de la media

X: valor de un dato


30/63

16

2.7.2. Anlisis de varianza (ANVA)

El anlisis de varianza se deriva de la participacin de la variabilidad total

en los componentes del modelo, intentando explicar las razones de la

variabilidad.En el Cuadro 2 se presenta el modelo de anlisis de varianza (ANVA) que

se utilizar para la presente investigacin.

Cuadro 2. Modelo de aplicacin de anlisis de varianza (ANVA)

Fuente de

Variables

Suma de

Cuadrados

Grados de

Libertad

Cuadrados

MediosF calculado Probabilidad

Factor A SCA a-1 CMA SCA/CME

pError SCE a(n-1) CME

Total SCT N-1

2.7.3. Prueba de Tukey

La prueba de Tukey es la prueba ms aplicada, pues controla de mejor

manera los dos errores ampliamente conocidos en la estadstica (y )

(Montgomery 2003). Esta prueba permite hacer todas las posiblescomparaciones de tratamientos de dos en dos, y por eso se considera la

ms completa de las pruebas estadsticas.


31/63

17

0.033

0.0510.026

0.016

0.035

0.0890.058

0.0160.029

1.058

0.053

0.207

0.734

0.589

0.471

0.588

0.742

0.767

0.942 0.900

0.00

0.10

0.20

0.30

0.40

0.50

0.60

0.70

0.80

0.90

1.00

1.10

d1 d2 d3 d4 d5 d6 d7 d8 d9 d10

Absorbanc

ia

UFC/mL

D. EstandarControl (-)

Control (+)

Promedio (T1)

III. RESULTADOS

Consecuencia de las experiencias obtenidas, se presentan en la Figura 2 los resultados

producto del efecto de extractos de hojas de M. esculenta(Yuca). Este primer proceso

de extraccin careci de tratamiento trmico, mostrando as que en la primera dilucin

(d1) con absorbancia de 0.207, presentara un efecto inhibitorio en el crecimiento de S.

aureus ATCC 25923, no obstante a partir del resto de diluciones existi crecimiento

significativo; de todo lo mencionado anteriormente se deduce que luego del periodo de

incubacin, esta dilucin fue la que present menor crecimiento bacteriano con

referencia a los dems resultados obtenidos; asimismo en la misma Figura 2 se

exponen, los respectivos controles positivo y negativo, concernientes de este

tratamiento (T1).

Figura 2. Efecto de extractos de hojas de M. esculenta (Yuca), procedentes de T1, en la CMI en S. aureus

ATCC 25923


32/63

18

0.021 0.0180.049

0.028 0.019 0.024 0.018 0.037 0.031

1.027

0.067

0.406

0.383

0.401

0.626

0.6890.702

0.743

0.705

0.763

0.00

0.10

0.20

0.30

0.40

0.50

0.60

0.70

0.80

0.90

1.00

1.10

d1 d2 d3 d4 d5 d6 d7 d8 d9 d10

Ab

sorbancia

UFC/mL

D. Estandar

Control (-)Control (+)

Promedio (T2)

Por otro lado, en la Figura 3 se presentan los resultados obtenidos del efecto de

extractos acuosos de hojas de M. esculenta(Yuca), consecuencia de ser sometidos a

extraccin durante 15 minutos 100 C. Se puede observar en este tratamiento (T2)

que las diluciones d1, d2 y d3 con absorbancias de 0.406, 0.383 y 0.401, presentaron

un mayor efecto inhibitorio sobre S. aureus ATCC 25923, deducindose de esta

manera que luego del periodo de incubacin, estas concentraciones fueron las que

mostraron menor crecimiento bacteriano en comparacin a los dems resultados

reportados en este tratamiento; asimismo en la Figura 3 se presentan, los controles

positivo y negativo, correspondientes a este tratamiento (T2).


ATCC 25923


33/63

19

0.007 0.019 0.0060.024

0.0090.009

0.093

0.016

0.068

1.225

0.036

0.1000.075

0.1330.140

0.321

0.376

0.527

0.575

0.633

0.000

0.100

0.200

0.300

0.400

0.500

0.600

0.700

0.800

0.900

1.000

d1 d2 d3 d4 d5 d6 d7 d8 d9 d10

Ab

sorbancia

UFC/mL

D. Estandar

Control (-)Control (+)

Promedio (T3)

Posteriormente en la Figura 4 se exponen, los resultados obtenidos del efecto de

extractos de hojas de M. esculenta (Yuca), producto de haber sido sometidos a

extraccin durante 30 minutos100 C (T3). Se puede observar que las diluciones d1,

d2, d3 y d4 con absorbancias de 0.100, 0.075, 0.133 y 0.140, presentaron un mayor

efecto inhibitorio en S. aureus ATCC 25923, rescatndose que los valores de

absorbancias reportados para estas diluciones fueron las que mostraron una menor

formacin de biomasa, luego del periodo de incubacin; adems en la Figura 4 se

presentan, los respectivos controles positivo y negativo, correspondientes a este

tratamiento (T3).


ATCC 25923


34/63


35/63

21

En el Cuadro 3 se presenta el Anlisis de Varianza (ANVA), aplicada a los resultados de

extractos de hojas de M. esculenta(Yuca), sometidos a extraccin T1(temperatura ambiente

0 minutos), T2 (100C 15 minutos) y T3 (100C 30 minutos), dicha prueba estadstica nos

indica, que los extractos mencionados anteriormente, presentaron efecto inhibitorio sobre S.

aureus, ya que se puede observar que p


36/63

22

En el Cuadro 4 se muestra la Prueba de Tukey, aplicada a los resultados de extractos de

hojas de M. esculenta(Yuca), sin tratamiento trmico T1(temperatura ambiente0 minutos),

dicha prueba estadstica, nos muestra que al realizar las comparaciones correspondientes de

las diferentes diluciones en este tratamiento, d1 con absorbancia de 0.207, sera la mejor

concentracin con poder inhibitorio frente a S. aureus,con referencia a las dems diluciones

ensayadas en este tratamiento T1.

Cuadro 4. Prueba de Tukey aplicada a los resultados de extractos de hojas de M.esculenta (Yuca), procedentes de T1(temperatura ambiente 0 minutos)

DILUCINSUBGRUPOS

1 2 3 4 5d1 0.207d4 0.471

d5 0.588d3 0.589d2 0.734d6 0.742d7 0.767d9 0.900d8 0.942

En el Cuadro 5 se expone la Prueba de Tukey, aplicada a los resultados de extractos de hojas

de M. esculenta (Yuca), sometidos a extraccin durante 15 minutos 100 C, la cual nos

indica que al realizar las correspondientes comparaciones entre diluciones, se refleja en d1,d2 y d3 con absorbancias de 0.383, 0.401 y 0,406 un mayor efecto en la Concentracin

Mnima Inhibitoria (CMI) en S. aureus, en comparacin al resto de diluciones en este

tratamiento T2.

Cuadro 5. Prueba de Tukey aplicada a los resultados de extractos de hojas deM. escu lenta(Yuca), procedentes de T2(100 C 15 minutos)

DILUCINSUBGRUPOS

1 2 3d2 0.383

d3 0.401d1 0.406d4 0.626d5 0.689 0.689d6 0.702d8 0.705d7 0.743d9 0.763


37/63

23

En el Cuadro 6 se presenta la Prueba de Tukey, aplicada a los resultados de extractos de

hojas de M. esculenta (Yuca), sometidos a extraccin durante 30 minutos 100 C, dicha

prueba nos indica que estadsticamente d1, d2, d3 y d4 con absorbancias de 0.075, 0.100,

0.133 y 0.140 presentaron mayor poder inhibitorio frente a S. aureus, ya que luego de realizar

las respectivas comparaciones en este tratamiento (T3), fueron las concentraciones con

resultados ms bajos, con respecto a las dems absorbancias reportadas.

Cuadro 6. Prueba de Tukey aplicada a los resultados de extractos de hojas deM. escu lenta(Yuca), procedentes de T3(100 C 30 minutos)

DILUCINSUBGRUPOS

1 2 3 4d2 0.075d1 0.100

d3 0.133d4 0.140d5 0.321d6 0.376d7 0.527d8 0.575 0.575d9 0.633


38/63

24

En la Figura 6 se muestran los resultados producto del efecto de extractos de hojas de M.

esculenta (Yuca). Este primer tratamiento careci de proceso trmico (T1), mostrndose de

esta manera que de las nueve diluciones ensayadas y posteriormente sembradas en agar

Meller-Hinton, ninguna presento efecto bactericida sobre S. aureus ATCC 25923, ya que

luego del periodo de incubacin, se prolong crecimiento bacteriano en todas las placas Petri

ensayadas en este tratamiento T1.

Figura 6. Resultados de la Concentracin Mnima Bactericida

(CMB) en S. aureus ATCC 25923, en Agar Meller-Hinton (T1)

d1 d1

d1d2

d2d2

d3

d3

d3

d4 d4

d4

d5

d5

d5

d6

d6d6

d7d7

d7

d8d8

d8

d9d9

d9

Control +


39/63

25

En la Figura 7 se presentan los resultados obtenidos del efecto de extractos acuosos de hojas

de M. esculenta (Yuca), consecuencia de ser sometidos a extraccin durante 15 minutos

100 C. Se puede observar en este tratamiento T2, que ninguna de las nueves diluciones

experimentadas y sembradas en agar Meller-Hinton, presentaron efecto bactericida sobre S.

aureus ATCC 25923, ya que luego del periodo de incubacin, se prolong crecimiento

bacteriano en todas las placas Petri ensayadas en este tratamiento T2.

Figura 7. Resultados de la Concentracin Mnima Bactericida (CMB) en S. aureus ATCC 25923, en

Agar Meller-Hinton (T2)

d1

d1

d2

d2 d3

d3

d4

d4 d5

d5

d6

d6

d7

d7d8

d8

d9

d9


40/63

26

Posteriormente en la Figura 8 se muestran los resultados obtenidos del efecto de extractos

acuosos de hojas de M. esculenta (Yuca), consecuencia de ser sometidos a extraccin

durante 30 minutos100 C. Se puede observar en este tratamiento T 3, que ninguna de las

nueves diluciones experimentadas y sembradas en agar Meller-Hinton, presentaron efecto

bactericida sobre S. aureus ATCC 25923.

Figura 8. Resultados de la Concentracin Mnima Bactericida (CMB) en S. aureus ATCC 25923, en

Agar Meller-Hinton (T3)

d1

d1d1

d2

d2 d3

d3

d4

d4

d5

d5

d6

d6d7

d7

d8

d8

d9

d9

Control +


41/63

27

En el Cuadro 7 se presentan los resultados del efecto de extractos de hojas de M. esculenta

(Yuca), consecuencia de los diferentes tratamientos de extraccin T1(temperatura ambiente

0 minutos), T2(100 C15 minutos) y T3(100 C30 minutos), en la Concentracin Mnima

Bactericida en S. aureus, mostrndose de esta manera que ninguno de los tratamientos

ensayados anteriormente, present efecto bactericida ya que luego del periodo de incubacin

reflejaron crecimiento bacteriano.

Cuadro 7. Resultados de la Concentracin Mnima Bactericida para T1(temperatura

ambiente 0 minutos), T2(100 C 15 minutos) y T3(100 C 30 minutos)

N de Placas T1 T2 T3p1 + + +p2 + + +

p3 + + +p4 + + +p5 + + +p6 + + +p7 + + +p8 + + +p9 + + +

Dnde:

(+): Present crecimiento

(-): No present crecimiento


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28

IV. DISCUSIN

Se puede observar en la Figura 2 que el extracto de hojas de M. esculenta

(Yuca) (temperatura ambiente 0 minutos) T1, especficamente en d1 con una

Abs. 0.207 muestra poder inhibitorio (CMI) frente a S. aureusATCC 25923, yaque comparndolo con el Control positivo, Abs. 1.058 refleja poca formacin de

biomasa, frente al resto de diluciones las cuales mantienen valores relativamente

homogneos, los cuales a su vez son elevados, ya que luego del periodo de

incubacin reflejaron demasiada turbidez (crecimiento bacteriano).

Asimismo, en la Figura 6 se puede apreciar que de las nueve diluciones

ensayadas con T1y posteriormente sembradas en agar Meller-Hinton, ninguna

present poder bactericida (CMB) frente a S. aureusATCC 25923.

Contrastando estos resultados obtenidos de T1con referencias tericas, sobre el

principio activo de las hojas de yuca (cido cianhdrico) Gmez (1982), citado

por Aristizbal y Snchez (2007) sealan que bajo trituracin y sin tratamiento

trmico de por medio, tan solo es posible liberar el cido cianhdrico libre

(lotaustralina) de 10-15%, por tanto al no contar con el 100% de este principio

activo, se observa un efecto antimicrobiano poco provechoso, resaltando tan

solo a d1(Abs. 0.207) frente a las ocho diluciones restantes, las cuales no

mostraron un efecto significativo frente a la CMI y mucho menos frente a la CMB

de S. aureusATCC 25923.

Por otro lado, en la misma Figura 2 se puede observar que la desviacin

estndar, centrndonos en la dilucin con mejor poder inhibitorio (d1), nos indica

que la variacin del crecimiento de S. aureusATCC 25923 con respecto al

promedio de (d1) 0.207, es de 0.033.

En el Cuadro 3, el anlisis de varianza (ANVA), estadsticamente nos indica que

los extractos de hojas de M. esculenta (Yuca) procedentes de T1 (temperatura

ambiente 0 minutos), presentaron efecto inhibitorio, deduciendo de esta


43/63

29

manera que el valor de probabilidad (p) experimental (0.000), fue menor que el

valor de la probabilidad terica (0.05).

En el Cuadro 4 la Prueba de Tukey, nos indica que estadsticamente d1 con Abs

0.207, es la dilucin con mayor poder inhibitorio ya que existe un efectosignificativo de esta dilucin frente a la Concentracin Mnima Inhibitoria de S.

aureus ATCC 25923, en comparacin a las dems diluciones, rescatndose de

esta manera que las proposiciones estadsticas coinciden con los resultados

experimentales.

Por otra parte, en la Figura 3 se puede observar que el extracto de hojas de M.

esculenta (Yuca), sometido a extraccin (100 C 15 minutos) T2, refleja un

mayor efecto inhibitorio frente a S. aureus ATCC 25923,ya que en d1 (0.406),

d2 (0.383) y d3 (0.401) se observan valores de absorbancia, bajos en

comparacin al control positivo, Abs. 1.027 y las dems diluciones las cuales a

su vez obtuvieron valores relativamente ms elevados y continuaron un

crecimiento homogneo a partir de la d4, Abs. 0.626, diferencindose de esta

manera de las primeras diluciones.

Adems, en la Figura 7 se observa que de las nueve diluciones realizadas y

posteriormente sembradas en Agar Meller-Hinton, ninguna mostro un efecto

bactericida (CMB) frente a S. aureus ATCC 25923, ya que se observa

crecimiento bacteriano en todas las Placas Petri.

Contrastando los resultados anteriormente mencionados del tratamiento T2, con

lo citado por la FAO y OMS (1991), tales organismos indican que cuando hay

trituracin de las hojas de yuca, en combinacin con la temperatura y humedad

de por medio se acelera el proceso de liberacin del cido cianhdrico de lashojas de M. esculenta(Yuca), obtenindose proporciones de HCN libre de hasta

un 3040 % en comparacin con los niveles de 1015 % de HCN libre obtenido

sin un tratamiento trmico de por medio. Por tanto basndonos en estas

referencias tericas, se puede comprobar que el compuesto activo de las hojas

de yuca (HCN), pudo haber aumentado por la utilizacin de temperatura y


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tiempo de extraccin en (T2), por lo cual se mostraron mejores resultados finales

frente a la Concentracin Mnima Inhibitoria de S. aureus ATCC 25923.

Posteriormente en la Figura 3 se observa que la desviacin estndar,

centrndonos en las diluciones con mayor poder inhibitorio (d1, d2 y d3), nos

indican que las variaciones del crecimiento de S. aureusATCC 25923 con

respecto a sus promedios d1 (0.406), d2 (0.382) y d3 (0.401) son de 0.021,

0.018 y 0.049.

En el Cuadro 3 se puede observar que en el anlisis de varianza (ANVA), la

probabilidad experimental (p), fue de 0.000 dicho valor es menor que la

probabilidad terica 0.05. Por lo cual esto nos indicara, que los extractos

procedentes de T2(100 C15 minutos), obtuvieron efecto inhibitorio frente a S.

aureus, ya que se observ menor generacin de biomasa, con respecto al

control positivo, en los posteriores ensayos realizados.

La Prueba de Tukey en el Cuadro 5 nos indica que estadsticamente (d1, d2 y

d3) de extractos de hojas de M. esculenta(Yuca), sometidos a extraccin (100C

15 minutos) T2, son las diluciones con mayor poder inhibitorio, ya que existe un

efecto significativo, frente a la Concentracin Mnima Inhibitoria de S. aureus

ATCC 25923, en comparacin a las dems diluciones, rescatndose de estamanera el uso del tiempo de extraccin y una temperatura elevada en la

obtencin de este extracto (T2), lo cual influy en los resultados finales.

Por otro lado, en la Figura 4 se observa que el extracto de hojas de M. esculenta

(Yuca) sometido a extraccin (100C 30 minutos) T3, logr el mejor efecto

antimicrobiano, ya que los resultados obtenidos, luego del proceso de

incubacin no fueron muy variables, en las cuatro primeras diluciones y

tendieron a ser regularmente homogneos a partir de la quinta dilucin (d5),

rescatndose de esta manera como el mejor extracto de hojas de M. esculenta

(Yuca), frente a la Concentracin Mnima Inhibitoria de S. aureus ATCC 25923.

As mismo se resalta que los valores de Absorbancia en d1 (0.100), d2 (0.075),

d3 (0.133) y d4 (0.140) se asemejan al Control Negativo, Abs. 0.036 siendo de


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esta manera los valores ms bajos en comparacin a los otros tratamientos

mencionados anteriormente (T1, T2).

Posteriormente en la Figura 8 se observa que el extracto de hojas de M.

esculenta(Yuca) sometido a extraccin (100 C30 minutos) T3, no present unefecto bactericida (CMB) frente a S. aureus ATCC 25923.

Contrastando estos resultados con lo mencionado por Cooke y Maduagwu

(1978) quienes indican, que el rango de temperatura ptimo para realizar la

mxima liberacin del HCN est comprendido entre 6070 C. En la obtencin

de este extracto, pudo influir en demasa el tiempo de extraccin (30 minutos),

ya que al trabajarse con temperatura de 100 C, esto pudo ayudar a una mejor

liberacin de HCN por ende influyo en los resultados finales obteniendo de (T3),

el mejor extracto frente a la Concentracin Mnima Inhibitoria de S. aureus ATCC

25923.

En la Figura 4 se observa que la desviacin estndar, especficamente las

diluciones con mejor poder inhibitorio (d1, d2, d3 y d4), nos indican que las

variaciones del crecimiento de S. aureusATCC 25923 con respecto a sus

promedios d1 (0.100), d2 (0.075), d3 (0.133) y d4 (0.140) son de 0.007, 0.019,

0.006 y 0.024.

En el Cuadro 3 se puede observar que en el anlisis de varianza (ANVA),

estadsticamente nos indica, que los extractos procedentes de T3 (100 C 30

minutos), presentaron efecto inhibitorio, ya que el valor de probabilidad

experimental 0.000 fue menor al valor de probabilidad terica 0.05.

En el Cuadro 6 la Prueba de Tukey nos indica que estadsticamente (d1, d2, d3,

d4, d5, d6, d7, d8 y d9), procedentes de T3(100C30 minutos) T3, fueron las

mejores diluciones, frente a la Concentracin Mnima Inhibitoria de S. aureus

ATCC 25923, en comparacin a las diluciones de extractos de hojas de M.

esculenta(Yuca) procedentes de T1y T2.


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V. CONCLUSIONES

Se determin el efecto del tiempo de extraccin de extractos de hojas de M.

esculenta (Yuca), en la Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI) en S. aureus

ATCC 25923, presentando mayor efecto inhibitorio T3 (100 C30 minutos) con

resultados bajos en cuanto a crecimiento microbiano (Abs. d1 0.100, d2 0.075,

d3 0.133 y d4 0.140), en comparacin a extractos procedentes de T2 (100 C

15 minutos) con (Abs. d1 0.406, d2 0.383 y d3 0.401) y T1 (temperatura

ambiente0 minutos) con (Abs. d1 0.207).

Se determin el efecto del tiempo de extraccin de extractos de hojas de M.

esculenta (Yuca), en la Concentracin Mnima Bactericida (CMB) en S. aureusATCC 25923, obtenindose como resultados finales que tanto T3 (100 C 30

minutos), T2(100 C15 minutos) y T1(temperatura ambiente0 minutos) no

presentaron efecto bactericida (CMB) sobre S. aureus ATCC 25923.


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