BIOQUIMICA LABORATORIO

UNIVERSIDAD DE CUNDINAMARCA Extensión Facatativa

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS PROGRAMA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

PRACTICAS DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

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PRACTICA 1

Bioseguridad

Introducción

Las normas de bioseguridad son un conjunto de medidas preventivas destinadas a proteger la salud y seguridad de las personas que realizan actividades en el laboratorio frente a riesgos procedentes del manejo de agentes biológicos, físicos o químicos.

Objetivos

• Identificar métodos y técnicas para la observación cuantitativa de poblaciones microbianas

• Aplicar criterios disciplinares para la intervención segura en ambientes de laboratorio

Normas de Bioseguridad

En el laboratorio de Microbiología todas las áreas deben estar debidamente marcadas con la señal de riesgo biológico y su nivel de contención. Se deben utilizar siempre elementos de barrera apropiados según las necesidades: blusa blanca limpia y en buen estado, guantes, tapabocas, gorro y gafas protectoras.

No se debe pipetear con la boca. El pipetear líquidos con la boca es una práctica inadecuada y altamente riesgosa. Deben utilizarse pipetas mecánicas para evitar cualquier riesgo de contaminación oral. Todas las pipetas deben tener tapones de algodón para reducir la contaminación de los dispositivos de pipeteo. Las pipetas contaminadas deben sumergirse en un recipiente irrompible con hipoclorito de sodio al 5% a 5000 ppm durante 18 – 24 horas. En la zona de trabajo del laboratorio no se debe comer, beber, fumar, guardar alimentos ni aplicar cosméticos. No se deben llevar a la boca lápices, etiquetas o cualquier otro material utilizado en el laboratorio. Para evitar esto acostumbre el uso de tapabocas. Se debe mantener el laboratorio limpio y aseado. Una vez concluida la práctica, se debe organizar el laboratorio, desinfectando la superficie de trabajo con hipoclorito de sodio a 500 ppm o alcohol y dejando tanto el material como el equipo utilizado limpio y en el lugar adecuado. Se deben lavar las manos después de haber manipulado material infeccioso, así como al abandonar el laboratorio.




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Todos los materiales, muestras y cultivos contaminados se deben descontaminar antes de eliminarlos o de limpiarlos para su reutilización. Se deben introducir en bolsas de plástico de cierre hermético con código de color, para esterilizar en autoclave o incinerar fuera del laboratorio. Sólo se debe permitir el paso a la zona de trabajo del laboratorio a las personas autorizadas. Durante el trabajo se mantendrán cerradas las puertas del laboratorio. Todo el personal debe poner especial cuidado en evitar el contacto de la piel con materiales potencialmente infecciosos. Con este fin deben usarse guantes cuando se manipulen muestras o cultivos que contengan posibles patógenos. Los guantes deben ser desechados antes de salir del área de trabajo. Jamás se debe salir de la misma con los guantes puestos, ni con ellos se debe coger el teléfono. Si un cultivo líquido se voltea o salpica, se debe cubrir el área con hipoclorito de sodio a 10.000 ppm y avisar al instructor. Posteriormente se debe enjuagar las manos con jabón y agua. Marque y rotule adecuadamente las láminas, cajas y tubos con las siembras realizadas. Estos deben llevar claramente escrito en un lugar visible, el nombre o identificación del grupo de trabajo, el ensayo o experiencia realizada, el medio de cultivo, la temperatura de incubación y la fecha. A la terminación de cada práctica es indispensable que organice adecuadamente las cajas o tubos por incubar y los entregue según instrucciones. Es importante conocer los agentes, sustancias y productos peligrosos que existen en el laboratorio. de igual manera el manejo de cada uno de los equipos existentes en el laboratorio. El transporte de las muestras dentro o entre laboratorios se debe realizar de tal manera que, en caso de caída, no se produzcan salpicaduras. Lo recomendable es hacerlo en cajas herméticas o neveras transportables. Estas cajas o neveras deben ser rígidas y resistentes a los golpes, contar con materiales absorbentes en su interior y de fácil desinfección. Se deben etiquetar o identificar de forma oportuna y no deben ser utilizadas para otros fines. Bajo ningún concepto se pueden transportar las muestras a mano. En la nevera no deben almacenarse cultivos de microorganismos patógenos por inhalación en recipientes que no estén convenientemente cerrados. No deben almacenarse reactivos que contengan compuestos volátiles inflamables (éter etílico, por ejemplo) en neveras que no posean un sistema de protección antideflagración. Los productos inflamables (gases, alcohol, éter, etc.) deben mantenerse alejados de las llamas de los mecheros. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, se hará al baño María, nunca directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas se debe tener mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama. Nivel de Contención




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Al hablar de contención, se hace referencia a las medidas de seguridad (protocolos y métodos) que se deben tener en cuenta en el laboratorio al manejar materiales o agentes biológicos (determinadas bacterias, hongos, virus, Rickettsias, Chlamidias, parásitos, productos recombinantes, alérgenos, cultivos de células humanas y animales y los agentes infecciosos potenciales que contengan estas células, viroides, priones) potencialmente infecciosos, con el fin de eliminar o reducir el riesgo que estos podrían ocasionar tanto a las personas que estén expuestas a ellos como al medio ambiente. Para el manejo de agentes biológicos existen cuatro niveles de contención o protocolos a seguir según el nivel de riesgo de infección, y la función del laboratorio. Nivel 1. Es el nivel básico en el cual los agentes biológicos no causan enfermedades en los seres humanos, pero se deben tener precauciones en el manejo de estos agentes para evitar la contaminación del medio ambiente. Este nivel hace referencia a los laboratorios para prácticas estudiantiles y deben seguir protocolos para el diseño, construcción de laboratorios y equipos. En este nivel es importante tener cuidado con las personas inmunodeprimidas debido a que microorganismos no causantes de enfermedades en personas sanas, pueden convertirse en patógenos al ser manipulados por personas inmunodeprimidas. Nivel 2. Este nivel hace referencia a agentes biológicos de riesgo moderado que pueden causar enfermedades en las personas que los manipulan si no siguen los protocolos de seguridad. Generalmente aplica en laboratorios clínicos y diagnósticos, y algunos laboratorios de enseñanza donde se manipulan sangre, fluidos corporales (líquido cefalorraquídeo, secreción vaginal), tejidos o células humanas. La contaminación puede ser ocasionada por cortes accidentales, por salpicaduras o ingestión del material contaminante, motivo por el cual ha de tenerse extremo cuidado con agujas o instrumentos contaminados. El uso de tapabocas, guantes, el cuidado en el manejo de objetos corto punzantes, entre otros, son medidas de prevención útiles. Entre las posibles enfermedades ocasionadas en este nivel están las causadas por virus como son. el sida, la hepatitis y la toxoplasmosis. Nivel 3. Es el nivel relacionado con estudios clínicos, diagnóstico, de enseñanza e investigación donde se manipulan agentes biológicos que no son autóctonos y pueden transmitirse por vía respiratoria originando enfermedades graves como es el caso de la tuberculosis causada, por la bacteria Mycobacterium tuberculosis. Este nivel exige un mayor y estricto grado de cumplimiento en las medidas de seguridad como colocación de la señal de riesgo biológico, acceso restringido al personal, instalaciones con ventilación que eviten la liberación de aerosoles infecciosos a otras zonas, tratamiento del aire mediante filtros. En este nivel se pone especial énfasis en evitar la autoinoculación. Nivel 4. Es el nivel de mayor riesgo de contaminación, para el que no existe ningún tratamiento clínico. Razón por la cual el diseño de la construcción y el equipo de seguridad deberán estar en un lugar totalmente aislado, con sistemas de ventilación y




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manejo de desechos que impidan la salida de los agentes contaminantes. Ejemplos de agentes contaminantes en este nivel serían Ebola y otros virus que producen fiebre hemorrágica. Cuestionario desarrollo en el laboratorio 1. ¿Que es bioseguridad? 2. ¿Cuáles serían para usted las normas básicas de bioseguridad en el laboratorio de microbiología? 3. ¿Cómo puede usted evitar en el laboratorio daños a su salud? 4. Mencione las clases de esterilización, cuales son los agentes de esterilización con más uso en el laboratorio; en que consiste cada uno de ellos y para qué materiales se utilizan.




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PRACTICA 2

DETERMINACION DE pH Y ACIDEZ DE PRODUCTOS

1. OBJETIVO

Determinar el pH de diferentes sustancias

Determinar el contenido de acidez de diferentes sustancias

Identificar la relación existente entre pH y Acidez

2. FUNDAMENTO TEÓRICO

La teoría de Brönsted-Lowry define los ácidos como las sustancias que donan iones

hidronios, H30+ (protones) y las bases como las sustancias que reciben iones hidronios. De

esta manera, solo existe el ácido, si la base está presente y viceversa.

La ecuación general se puede escribir así:

HA + H20 H30+ + A-

Ácido I Base II Ácido II Base I

En esta ecuación A- es la base conjugada de HA. Por otro lado H30+ es el ácido conjugado

de H20.

Los ácidos y bases se clasifican en fuertes y débiles. Los ácidos y bases fuertes son aquellas

sustancias que se disocian (ionizan) totalmente. Para los ácidos fuertes, la concentración

de iones hidronios es muy grande.

Los ácidos y bases débiles son las sustancias que en soluciones acuosas se disocian (ionizan)

parcialmente. Para los ácidos débiles la concentración de iones hidronios (H30+) es muy

pequeña.




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Un ácido de Brönsted-Lowry donará iones hidronios (H30+) a cualquier base cuyo ácido

conjugado sea más débil que el ácido donante.

Se define el pH como el logaritmo decimal negativo de la concentración de los iones

hidronios.

pH = - log [H30+]

Las soluciones acuosas de ácidos tienen un pH < 7 y las soluciones básicas un pH > 7 y las

soluciones neutras pH = 7

Un indicador ácido-básico es un ácido débil que cambia de color cuando pierde iones

hidronios. Por ejemplo, la fenolftaleína, que es un indicador que cambia de incolora (en

medio ácido) a rosado intenso (en medio básico).

Fenolftaleina + 0H- Feolftaleína- + H20

Incoloro Rosado

En una solución neutra las dos formas de la fenolftaleína incolora y rosada se encuentran

en equilibrio y predomina la incolora.

Para medir el valor exacto del pH de una solución o producto, se utiliza un pH-metro.

También utiliza para indicar la característica de ácido de una sustancia el contenido o

porcentaje de acidez. Mediante una determinación, generalmente gravimétrica, se

determinan los equivalentes de ácido que se encuentran presentes en la sustancia. Ya que

las sustancias tienen en general más de un ácido haciendo parte de su composición, se

refiere el contenido de acidez en términos de que se encuentra e mayor proporción.

3. BÚSQUEDA DE INFORMACIÓN

Los estudiantes deberán ampliar el fundamento teórico presentado en esta guía y si es el

caso, completarlo. Específicamente consultar formas de determinar acidez y pesos

equivalentes de los ácidos cítrico y láctico que se requerirán para los cálculos al finalizar la

práctica.




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4. MATERIALES Y REACTIVOS

- Beakers o vasos de precipitado de 50 y 100 m

- Erlenmeyers

- Embudo de vidrio

- Potenciómetro (opcional)/ papel para determinar pH

- Balanza analítica ó Balanza de precisión

- Frasco lavador

- Agitador

- Papel de filtro

- Bureta de 25 ó 50 ml

- Pipetas de 10 ml

- Un pipeteador o pera de caucho

- Agua destilada

- Hidróxido de sodio 0.1 N

- Fenolftaleína en solución alcohólica 1%

- Materiales adicionales: Naranja o limón, jugos (preferiblemente diferentes sabores), leche,

un trozo de carne o hígado crudo, una muestra de orina, agua (potable y de charco),

leche de magnesia, vinagre

5. PROCEDIMIENTO

A. DETEMINACIÓN DE pH

En el caso de la papa, la naranja y el limón, se precisa obtener su extracto o jugo para

realizar la determinación. Péselos, por separado y tritúrelos o lícuelos con un 100 – 150 ml de

agua destilada, agite y filtre a través de papel de filtro. Tome el filtrado e introduzca en él el

electrodo del potenciómetro o en su defecto la tira de papel indicador universal de pH.

Determine de esta forma el pH de todos filtrados y/o líquidos dispuestos parra esta práctica.

Cuando la inicial se encuentra en estado líquido, la determinación se puede hacer

directamente.

*Se sugiere verificar que el pH del agua destilada sea 7.0 para evitar que su acidez influya

sobre el resultado correspondiente a la muestra.

Tome todos los datos necesarios, escriba sus resultados.




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B. DETERINACION DE ACIDEZ

Tome en un vaso de precipitado pequeño 10 ml del filtrado obtenido de los productos

sólidos que ha llevado a la práctica; en el caso de sustancias líquidas con densidad similar

a la del agua, toma 10 ml del líquido y en caso de sustancias líquidas con densidad

diferente a la del agua, tome un vaso de precipitado, péselo, tome la respectiva tara y

dispense dentro del mismo 10 g de muestra. Adicione unas tres gotas de solución de

fenolftaleína, agite y con ayuda de la bureta dispense la solución de NaOH lentamente y

sin detener la agitación hasta que observe la aparición de una cloración ligeramente rosa.

Repita el mismo procedimiento para cada una de las muestras. Tome nota de los

volúmenes de solución de soda gastados en cada caso.

Calcule los miliequivalentes de soda presentes en cada uno de los volúmenes utilizados.

miliequivalentes = vol (ml) * 0.1

Determine ahora la acidez par cada una de las muestras, considerando que el ácido

presente en cada muestra sea el ácido cítrico o el ácido láctico, según sea el caso.

Indique la acidez de cada producto en % p/p

6. TABLAS DE DATOS

MUESTRAS valor de

pH

peso de

la muestra

volumen

de

NaOH 0.1 N

miliequivalent

es

% de Acidez

Muestra No

1

Muestra No

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7. PARA EL ANÁLISIS DE LA PRÁCTICA

Compare y analice los datos obtenidos.

- Hay diferencia entre los valores de pH obtenidos de un producto a otro?

- Cual es el pH normal de estos productos?

- Que indica el pH en cuanto a calidad y/o funcionalidad de los productos?




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- Por qué en algunos casos se indica la acidez como % de ácido láctico y en otros como

acido cítrico?

- Se pueden comparar los datos obtenidos para la acidez? Por que?

- Cuales son su apreciaciones generales respecto a la práctica? Justifique




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PRACTICA 3

SOLUCIONES BUFFER

1. OBJETIVO

Verificar el comportamiento de las soluciones buffer o tampón

2. FUNDAMENTO TEORICO

a. Acidos y Bases. El entendimiento de los conceptos de ácido y base es esencial para

la comprensión del comportamiento bioquímico de las moléculas orgánicas. Las

macromoléculas poseen características fisicoquímicas que son muy importantes en

la homeostasis. Por ejemplo, las cargas eléctricas son importantes en la catálisis

enzimática, así como en la estabilidad de proteínas y ácidos nucleicos.

En general se define un ácido como un donador de protones y una base como un

aceptor de protones.

b. Constante de disociación. En sistemas cerrados todas las reacciones son reversibles y

en la naturaleza muchas de ellas lo son. Los productos formados por los reactantes

reaccionan para dar nuevamente origen a los reactantes originales incluso cuando

estos están formando más productos. Luego de cierto tiempo la reacción directa e

inversa ocurrirán a la misma tasa. Cuando esto ocurre se dice que la reacción ha

alcanzado el equilibrio, que se define como Keq.

Un donador de protones y su aceptor correspondiente conforman un par

conjugado ácido-base. El ácido acético, un donador de protones y el anión

acetato, su aceptor de protones correspondiente, constituyen por ejemplo, un para

conjugado relacionado por la siguiente reacción:

CH3COOH ===== H+ + CH3 COO-

Cada ácido tiene un tendencia característica para perder sus protones en solución

acuosa. Cuanto más fuerte el ácido, mayor la tendencia a perder su protón. La

tendencia de cualquier ácido (HA) a perder su protón y formar su base conjugada (A-)

está definida por la constante de disociación Ka para la reacción reversible:

HA ===== H+ + A-




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Keq = [[H+] [A-]] / [HA] = Ka

La constante de equilibrio para las reacciones de ionización se llama constante de

disociación y se designa como Ka.

c. Tampones, Buffers o Amortiguadores. El buen funcionamiento de los sistemas

biológicos requiere de un control estricto del pH. Las enzimas son bastante sensibles

a los cambios de pH, tienen una actividad máxima a un pH característico llamado

óptimo fuera del cual su actividad se ve afectada notoriamente. Por tal razón, los

organismos tiene un control de pH muy estricto y efectivo. La regulación del pH del

suero (pH sérico) es necesaria para la supervivencia, el organismo mantiene este

valor de pH entre 7,4 +/- 0,4. valores de pH fuera de este rango son perjudiciales

para el organismo.

Un tampón es una solución que ante la adición de cantidades pequeñas de H+ o de

OH- se resiste a cambios dramáticos de pH. Los tampones comunes están formados

por dos sustancias: un ácido y su base conjugada.

Si tomamos el logaritmo de la constante de disociación escrita más arriba Ka

Log ka = log [H+] + log [A-] – log [HA]

Reordenando log [H+] = log Ka – log [A-] + log [HA]

Multiplicando por –1 -log [H+] = -log Ka + log [A-] – log [HA]

De donde pH = pKa + log [A-] / [HA]

Que en su forma general es pH= pKa + log (aceptor de protones /donador)

Esta es la ecuación de Henderson-Hasselbach y permite calcular la relación molar

entre una sal y un ácido que forman parte de un tampón para un pH y pK

determinados.

Una solución buffer o tampón puede consistir en un ácido débil y su sal (pH 1-7) o un

base débil y su sal (pH 7 – 14) dependiendo del pH deseado para la solución buffer.

La clave para comprender la acción de un buffer es recordar que un ácido débil o




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base débil, sólo está disociada en una proporción muy pequeña mientras que las

sales están completamente disociadas. La combinación resultante del ácido débil y

su sal completamente disociada resulta en la solución tampón con el ácido

mayormente en su forma molecular, una gran proporción del ión común de la sal y

una pequeña proporción del ión H+. Podemos ignorar la gran proporción del ión

positivo de la sal.

d. Curvas de titulación revelan el pKa de los ácidos débiles. La titulación se usa para

determinar la cantidad de un ácido en una solución dada. Un volumen medido de

un ácido es titulado con una solución de una base fuerte de concentración

conocida. La base es adicionada en pequeños incrementos hasta que el ácido es

consumido (neutralizado) comprobando esto con un indicador o pH-metro. La

concentración original del ácido puede ser calculada a partir del volumen y

concentración de la base usada.

2. MATERIALES Y REACTIVOS

3 Beakers de 100 ml

papel indicador de pH

pipetas

solución tampón

3. PROCEDIMIENTO

Tomar 100 ml de solución tampón fosfato 0.02 M pH 7,5.

Medir el pH y separar la solución en dos beakers de 50 ml. Preparar otros dos beakers con

50 ml de agua cada uno.

En el beaker 1:

a. agregar 0.5 ml de solución de HCL 0,1 N a la solución tampón. Medir nuevamente

el pH

b. medir el pH de 50 ml de agua destilada. Agregar 0,5 ml de solución de HCl y medir

nuevamente el pH.

En e l beaker 2:




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c. agregar 0.5 ml de solución de NaOH 0,1 N a la solución tampón. Medir

nuevamente el pH

d. medir el pH de 50 ml de agua destilada. Agregar 0,5 ml de solución de NaOH y

medir nuevamente el pH.

En los beakers que contienen la solución tampón seguir agregando según corresponda

volúmenes de solución de HCl o NaOH, mezclar y medir el pH. Repetir 10 veces

4. INFORME

Anote las lecturas realizadas en el pHmetro o con papel indicador

Cómo reaccionaron las soluciones tampón al adicionar solución de ácido o base? Como

cambió el pH?

Cambió el pH del agua al añadir HCl o NaOH?

Se comporta la solución tampón de la misma manera que el agua frente a las adiciones de

soluciones?

Grafique la respuesta del buffer ante la adición de diferentes cantidades de ácido o base.




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PRÁCTICA 4

GLÚCIDOS - CARBOHIDRATOS

1. OBJETIVO

Estudiar y comparar algunas propiedades de los azúcares.


Los carbohidratos, llamados también hidratos de carbono o glúcidos, son un grupo

numeroso y diverso de sustancias compuestas principalmente de carbono, hidrógeno y

oxígeno y son los aldehídos y cetonas polihidroxilados. Los carbohidratos se forman en las

plantas por efecto de fotosíntesis a partir de agua y el bióxido de carbono bajo efecto de

la radiación ultravioleta y catalizado por la clorofila:

6CO2 + 6H2O + luz UV ----------------- C6H12O6 + 6O2.

En el organismo humano los carbohidratos constituyen una fuente de energía, cuando son

sometidos al proceso de digestión.

Según la posibilidad de desdoblamiento, los carbohidratos se clasifican en hidrolizables

(oligosacáridos y polisacáridos) y no hidrolizables (monosacáridos). Según los grupos

funcionales que poseen, los monosacáridos pueden ser aldosas (los que tienen la función

aldehído) y cetosas (los que tienen función cetona). Según el número de átomos de

carbono que contienen, los monosacáridos se clasifican en triosas, tetrosas, pentosas,

hexosas, etc.

GLUCOSA:

La glucosa o dextrosa es el monosacárido más importante. Su estructura corresponde al

hexopentol-al y se trata de una aldosa:

O=CH - CH(OH) - CH(OH) - CH(OH) - CH(OH) - CH2OH.




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La glucosa se encuentra en composición de muchas frutas, principalmente la uva. Es un

elemento de fácil digestión y provee energía inmediata. En medicina se emplea en forma

intravenosa, cuando el paciente necesita una fuente de energía disponible rápidamente.

FRUCTOSA:

La fructosa es una cetohexosa que se encuentra en algunos frutos y en la miel de abejas.

Se obtiene junto con la glucosa en la hidrólisis de la sacarosa. Su fórmula es:

CH2OH - CO - CH(OH) - CH(OH) - CH(OH) - CH2OH.

SACAROSA

La sacarosa o azúcar de mesa es el disacárido más importante por su uso como

edulcorante. Está formada por el enlace glicosido de las moléculas de glucosa y fructosa.

ALMIDON

El almidón es un polisacárido formado por la polimerización tipo condensación de un

elevado número de moléculas de glucosa y su peso molecular sobrepasa de 300 000.

El almidón constituye la reserva de energía más importante en las plantas, encontrándose

en los frutos, tubérculos, raíces, trigo, maíz, etc. Al tratarse con agua caliente, el almidón

puede separarse en una fracción soluble, llamada amilosa (20%) y una fracción insoluble,

llamada amilopectina (80%). La amilosa se reconoce por la coloración azul intensa que

toma en contacto con la solución de yodo, mientras que la amilopectina da una

coloración rojiza.

Bajo el efecto de los ácidos y de las enzimas, que actúan en la digestión, el almidón se

hidroliza en dextrinas (polisacáridos de menor peso molecular), desdoblándose finalmente

el estado de glucosa, por lo que el almidón constituye una importante fuente de energía.

3. PROCEDIMIENTO

MATERIALES

- Gradilla con 4-5 tubos

- 2 vasos de precipitación




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- Capsula de porcelana

- Varilla

- Espatula

- Probeta de 25 o 50 ml

- Glucosa

- Almidón soluble

- Miel de abeja

- Azúcar común

- Reactivo de Fehling

- HCl concentrado

- Lugol

- Solución saturada de carbonato de sodio

MONOSACARIDOS

Solubilidad en agua: Coloque una pequeña cantidad de glucosa en un tubo de ensayo

conteniendo 1 ml de agua destilada, y agite. Anote sus observaciones.

Prueba de Fehling: En un tubo de ensayo mezcle 10 gotas de solución A con 10 gotas de

solución B del reactivo de Fehling. A esta mezcla agregue 10 gotas de la solución de

glucosa del ensayo anterior. Caliente la mezcla a baño-maría. Anote sus observaciones.

DISACÁRIDOS Y MEZCLAS DE MONOSACÁRIDOS

MIEL

Prueba de Fehling: Disuelva 5 gotas de miel de abeja en 1 ml de agua destilada. Agregue

esta solución a una mezcla de soluciones A y B del reactivo de Fehling (10/10 gotas de

cada una) y caliente a baño-maría. Anote sus observaciones.

SACAROSA

Prueba de Fehling: Disuelva una pequeña cantidad de azúcar común en 1 ml de agua

destilada, agite y ensaye con el reactivo de Fehling, como en caso anterior. Anote sus

observaciones.




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INVERSION DE SACAROSA (HIDROLISIS)

Disuelva en 1 ml de agua destilada una pequeña cantidad de azúcar común, agite y

agregue dos gotas del ácido clorhídrico concentrado. Caliente a baño-maría por unos 10

minutos y neutralice con una solución saturada de carbonato de sodio, hasta que ya no se

formen más las burbujas de bióxido de carbono. Ensaye con el reactivo de Fehling como

en casos anteriores. Anote sus observaciones.

Explique la diferencia de las propiedades de la miel y del azúcar común.

ALMIDON (polisacáridos)

Solubilidad: En un vaso de precipitados ponga 25 ml de agua destilada y caliente a

ebullición. Aparte, en un tubo de ensayo mezcle aproximadamente 0.25 g de almidón y

unas gotas de agua destilada fría hasta formar una pasta. Vierta la pasta al agua

hirviendo, agitando con la varilla de vidrio. Anote sus observaciones.

Prueba de yodo: En un tubo de ensayo ponga unas 10 gotas de la solución preparada de

almidón y añádale unas gotas de solución de lugol (yodo). Anote las observaciones.

Ensayo de Fehling.: En un tubo mezcle 10 gotas de solución A del reactivo de Fehling con

10 gotas de la solución B. A esta mezcla adicione 10 gotas de la solución de almidón.

Caliente a baño-maría. Anote las observaciones.

Transformación del almidón en dextrina: Con la ayuda de una espátula coloque una

pequeña cantidad de almidón en una cápsula de porcelana, caliente lenta y suavemente

mientras agita con una varilla de vidrio para no quemar el almidón. Cuando el almidón

adquiera un color café, continúe calentando 1-2 minutos más y enfríe. Con la espátula

pase una pequeña cantidad del residuo a un tubo de prueba, añada 2 ml de agua

destilada, agite y agregue 2-3 gotas de solución de yodo (lugol). Anote sus observaciones.

Ensayo De Fehling: Tome otro poco del residuo de la cápsula y disuélvalo en 2 ml de agua

destilada en un tubo de ensayo. Realice la prueba de Fehling, como en casos anteriores.

Anote sus observaciones.




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HIDROLISIS DE ALMIDON

En un tubo de ensayo coloque 1 ml de la solución de almidón, añada 5 gotas del ácido

clorhídrico concentrado. Caliente a baño-maría durante unos 15 minutos. Enfría y

neutralice con la solución de carbonato de sodio hasta que ya no se desprendan más

burbujas de bióxido de carbono.. Efectúe la prueba de Fehling, como lo hizo en ensayos

anteriores.

Prueba de yodo: Tome 1 ml de almidón hidrolizado y añada unas gotas de lugol (yodo).

Compare el resultado con el ensayo del almidón no hidrolizado

6. PARA EL ANALISIS DE LA PRÁCTICA

o Aparte del ión cúprico, ¿qué otros iones pueden ser reducidos por la solución de

glucosa?

o ¿Qué nombre químico tiene el azúcar común?

o ¿Cuál es la diferencia entre la miel de abeja y el azúcar común? ¿Cómo se puede

demostrar esta diferencia?

Explique, en qué consiste la hidrólisis del almidón.




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PRACTICA 5

LIPIDOS

1. OBJETIVO:

• Comprobar la solubilidad de los lípidos en diversos solventes.

• Ensayar las reacciones de saponificación y la solubilidad de sales metálicas de ácidos

grasos en agua dura.

• Ensayar las reacciones de identificación de colesterol.


Los lípidos representan una serie de sustancias insolubles en agua, que se encuentran en las

células animales y vegetales y se pueden extraer con los solventes poco polares como éter,

hexano o cloroformo.

Los lípidos son los esteróides, los terpenos. Las ceras y las grasas.

GRASAS

Las grasas son productos de esterificación de ácidos carboxílicos de cadena larga (ácidos

grasos) saturados e insaturados y el glicerol. A las grasas también se les llama glicéridos. Las

grasas líquidas se llaman aceites y son generalmente de origen vegetal.

Cuando las grasas se exponen al calor y al aire, éstas se oxidan y se descomponen en

aldehídos, cetonas y ácidos grasos de bajo peso molecular. El proceso de rancidez se debe a

la ruptura de las cadenas insaturadas de los ácidos superiores que se rompen formando

compuestos menores.

Las uniones de éster en las grasas son débiles y se destruyen fácilmente por acción de agua y

soluciones ácidas y básicas. La hidrólisis acuosa regenera los ácidos grasos y glicerol. En la

digestión de grasas esta reacción sucede bajo acción de las sustancias llamadas enzimas,

específicamente, estearasas.

La hidrólisis de las grasas con los álcalis se llama saponificación y da, como producto principal,

sal metálica, llamada jabón.




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CERAS

Las ceras son ésteres de ácidos grasos de cadena larga y alcoholes primarios de cadena

larga.

FOSFOLIPIDOS

Los fosfolípidos son ésteres mixtos del glicerol en los que un grupo hidroxílico está esterificado

con el ácido fosfórico y otros dos con los ácidos grasos.

ESFINGOLIPIDOS:

Son derivados del aminoglicerol, similares a los fosfolípidos en su estructura. Intervienen en la

conformación del sistema nervioso.

ESTEROIDES

Los esteróides se encuentran en las plantas y animales y su estructura anular de 17 átomos de

carbono (cuatro anillos) se conoce como ciclo-pentano-perhidro-fenantreno.

El esteóide más común es el colesterol. Se encuentra en la médula y en forma de los cálculos

en la vesícula biliar. Un adulto tiene como promedio, unos 250 mg de colesterol. El colesterol

tiene una reacción muy peculiar frente al ácido sulfúrico, por lo que éste se utiliza para su

identificación.

3. PROCEDIMIENTO

MATERIALES

o Gradilla con 5 tubos

o Dos vasos

o Varilla

o Pinza para tubos

o Colesterol

o Soluciónes de MgCl2, CaCl2,

o Aceite vegetal




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o Etanol

o Acetona

o Cloroformo

o Benceno

o Solución de NaOH 25%

o Acido sulfúrico concentrado

o Solución saturada de NaCl

o Fenolftaleína

o FeCl3

Ensayos de solubilidad.

En 5 tubos limpios y secos coloque 0.5 ml de aceite y agregue a cada tubo 2 ml de los

siguientes solventes: AGUA, ETANOL, ACETONA, CLOROFORMO y benceno, respectivamente.

Agite fuertemente y observe el efecto del solvente en cada uno de los tubos. Anote el

resultado en la siguiente tabla:

SOLVENTE SOLUBILIDAD DE ACEITE

AGUA

ETANOL

ACETONA

CLOROFORMO

BENCENO

Saponificación.

En un vaso pese 10 gramos de aceite (o cualquier tipo de grasa) y añada 5 ml de una

solución al 25% de NaOH.

Caliente a baño-maría agitando con varilla, durante unos 20 minutos.

Añada 10 ml más de solución de NaOH y 5 ml de etanol y continúe el calentamiento hasta la

obtención de un masa pastosa.

Terminado el calentamiento, enfríe un poco el vaso y agregue 50 ml de solución saturada de

NaCl para precipitar el jabón y separar el glicerol.




22

La reacción, es:

CH2-O-CO-R CH2-OH

| |

CH-O-CO-R +3 NaOH - CH-OH + 3R-COONa

| | jabón

CH2-O-CO-R CH2-OH

Ensayos del comportamiento del jabón en agua dura:

Con el jabón obtenido prepare una solución acuosa. Coloque 5 ml de la solución jabonosa

en 3 tubos de ensayo y añada a cada uno 3 ml de las soluciones de: MgCl2, CaCl2 y FeCl3.


Escriba las ecuaciones de las reacciones que pudieran tener lugar en estos ensayos.

Identificación del colesterol (reacción de Salkowsky):

En un tubo de ensayo limpio y seco coloque unos 2 mg (0.002 g) de colesterol. Añada 2 ml

de cloroformo para solubilizar, luego, con sumo cuidado, agregue 1 ml de ácido sulfúrico

concentrado y observe la aparición del anillo rojo en la interfase.

5. PARA EL ANALISIS DE LA PRACTICA

Aprovechando sus conocimientos en Biología Celular y revisando las fuentes bibliográficas,

describa en forma muy sintética la importancia de las grasas, ceras, fosfolípidos,

esfingolípidos y esteroles.




23

PRACTICA 6

PROTEINAS

1. OBJETIVO

Efectuar ensayos físicos y químicos característicos de una proteína.


Las proteínas son las sustancias que conforman los tejidos de los organismos vivientes:

los músculos, la piel, las uñas, los cabellos, la sangre, leche, huevos, plumas, la sangre,

etc. (NOTA: La presencia del exceso de proteína (albúmina) en la orina es,

usualmente, una indicación del funcionamiento anormal de los riñones.)

Son sustancias de estructura compleja que llegan a tener pesos moleculares

superiores a 300’000,000 y su estructura se basa en la unión de unos 20 aminoácidos

formando largas cadenas peptídicas.

Los aminoácidos son los ácidos carboxílicos que poseen, además, una función amina,

generalmente en posición alfa con respecto al grupo carboxílico (alfa-aminoácidos),

pero también hay beta-aminoácidos. Por ejemplo:

H2N - CH2 - COOH (alfa-aminoácido)

H2N - CH2 - CH2 - COOH (beta-aminoácido)

Los aminoácidos se pueden polimerizar mediante la reacción de condensación entre

los grupos amina de un aminoácido y grupo carboxílico, de otro, formando entre ellos

una unión llamada enlace peptídico: -CO-NH-:

H2N - CH2 - COOH + H2N - CH2 - COOH




24

H2N - CH2 - CO - NH - CH2 - COOH + H2O

Las proteínas no se pueden analizar con exactitud debido a su complejidad, pero se

ha desarrollado una serie de ensayos característicos muy sensibles que proporcionan

valiosa información sobre su estructura y propiedades.

3. PROCEDIMIENTO

MATERIALES

o Gradilla con tubos

o Vaso de 250 ml

o Embudo

o Gasa y algodón

o Probeta

o Termómetro

o Pinzas para tubos

o Vaso de 600 ml

o Albúmina de huevo

o Reactivo de Millón

o NaOH al 20% y al 10%

o Solución de NaCl al 1% (suero)

o Solución de CuSO4 al 1%

o Solución de Pb(CH3COO)2 al 10%

o Acido nítrico concentrado

o Agua destilada

o Solución de K4[Fe(CN)6] al 10%

o Alcohol etílico comercial

o Solución de ninhidrina al 0.1%

o Hidróxido de amonio 6M

o Solución de AgNO3 al 1%

ENSAYOS DE SOLUBILIDAD




25

A los 4 tubos de ensayo coloque aproximadamente 1 ml de clara de huevo

(albúmina).

A cada tubo añádale respectivamente 5 ml de:

• agua fría

• agua caliente

• solución de NaCl (suero)

• solución de NaOH al 20%

Resuma sus observaciones en la siguiente tabla:

SOLVENTE SOLUBILIDAD

MUY BUENA

SOLUBILIDAD

PARCIAL

INSOLUBLE PRECIPITA

AGUA FRIA

AGUA CALIENTE

SOLUCION

DE NaCl

SOLUCION

NaOH 20%

PREPARACION DE LA SOLUCION DE ALBUMINA

Vacíe en el matraz aforado la clara de huevo sobrante de la primera parte. Adicione

aproximadamente 1/2 de litro de agua destilada, tape l el matraz aforado y agite

fuertemente.

Arme un equipo de filtración utilizando como filtro una gasa medicinal con una capa

de algodón en medio y filtre la solución preparada a un vaso grande.

ENSAYOS DE COLORACION

Reacción de biuret:

A 1 ml de la solución de albúmina añádale 1 ml de la solución de NaOH al 10% y gota

a gota la solución de CuSO4 hasta observar cambios. La formación de una coloración

violeta denota la presencia del enlace peptídico -CO-NH-, ya que los grupos imina -

NH- del enlace peptídico forman un complejo de coordinación con el ión cúprico:




26

\ \ /

HN: HN NH

/ / \

2 R - CH R - CH CH - R

\ + Cu+2 - | Cu+2 |

CO CO CO

/ \ /

HN: HN NH

/ / \

complejo violeta

Reacción con ninhidrina:

Coloque 3 ml de la solución de albúmina en un tubo de prueba y agréguele 5 gotas

de la solución de ninhidrina al 1%. Caliente hasta la ebullición y enfríe. Anote sus

observaciones. La coloración azul con ninhidrina la producen todos los aminoácidos,

excepto prolina e hidroxiprolina que dan color amarillo.

O O O

|| OH || ||

+ NH2 – R ------ N

2

OH

|| || |

O O O-H+

Ensayo xantoprotéico:




27

Vierta a un tubo de ensayo 2 ml de la solución de albúmina y agregue unas 5 gotas

del ácido nítrico concentrado. Caliente a baño-maría por unos instantes. Deje enfriar.

Luego agregue unas cuantas gotas de hidróxido de amonio NH4OH 6M. La aparición

de una coloración amarilla, que se torna de color naranja intenso con la adición del

hidróxido de amonio denota la presencia de grupos fenilo, que se forman las

nitromodificaciones amarillas.

-[-NH-CH-CO-]- + HNO3 ------------ -[-NH-CH-CO-]-

| |

NO2

NO2 amarillo


Ensayo de Millón:

coloque 2 ml de la solución de albúmina a un tubo de prueba y agregue 5 gotas del

reactivo de Millón. Caliente a baño-maría en ebullición. La aparición del precipitado

blanco, que se torna rojo posteriormente, indica la presencia de los grupos fenólicos

no sustituidos.

-[-NH-CH-CO-]- + Hg2 (NO3)2 ----- -[-NH-CH-CO-]-

| |

OH OHg rojo




28


ENSAYOS DE PRECIPITACION

Las proteínas por efecto de sales metálicas dan precipitados de proteinatos

metálicos, formados por la parte ácida de las proteínas.

Las sales neutras hacen precipitar las proteínas debido al efecto de la

desnaturalización y deshidratación. Las proteínas precipitadas de esta manera,

pueden redisolverse en el solvente original.

En tres tubos de ensayo limpios coloque 3 ml de solución de albúmina y agregue a

cada uno respectivamente, 1 ml de:

• solución de AgNO3 al 5%

• solución de CuSO4

• solución de Pb(CH3COO)2 .

Anote sus observaciones .

DESNATURALIZACION DE PROTEINAS

Efecto de calor:

Coloque 3 ml de la solución de albúmina a un tubo de ensayo y caliente en un vaso

con agua y termómetro . Anote la temperatura a la que comenzó coagularse la

albúmina.

Efecto de alcohol etílico:

A un tubo de ensayo con unos 3 ml de la solución de albúmina, agréguele 5 ml de

alcohol etílico comercial. Anote sus observaciones.

4. PARA EL ANALISIS DE LA PRACTICA

o ¿Qué características presenta la solución acuosa de la clara de huevo?

o ¿Por que la solución preparada de la clara de huevo no se puede filtrar en el




29

papel filtro?

o ¿Cuál es la proteína principal de la clara de huevo?

o Cuando el ácido nítrico cae casualmente en la piel, ¿cuál de las reacciones

efectuadas se produce?

o De acuerdo a lo realizado en la práctica, explique lo que ocurre al cocinar un

huevo.

o La clara de huevo o la leche se usan a menudo como antídotos en los

envenenamientos con algunos metales pesados. como plomo, mercurio, bario,

etc. ¿En qué fenómeno, de los que realizamos en la práctica, se basa esta

aplicación?




30

PRACTICA 7.

RECONOCIMIENTO DE PRINCIPIOS INMEDIATOS EN LA LECHE

1. OBJETIVO

Se pretende conseguir la comprobación de forma sencilla la existencia de diversos

principios inmediatos fundamentales como proteínas, grasas y azúcares en un

alimento básico como la leche, así como el comportamiento de las proteínas lácteas

ante determinados cambios físicos y químicos.

2. PROCEDIMIENTO

MATERIALES

o Gradilla con 12 tubos de ensayo.

o - Pinza de madera para sujetar los tubos.

o - Espátula metálica.

o - Embudo.

o - Papel de filtro.

o - Mechero.

o - Vaso de precipitados.

o - Pipeta Pasteur o gotero

o - Pipetas graduadas.

o Leche entera.

o Leche fermentada de forma natural.

o Ácido clorhídrico puro.

o Ácido clorhídrico: solución al 50 %.

o Ácido nítrico puro.

o Cloruro sódico: solución concentrada.

o Hidróxido sódico: solución al 20 %.

o Reactivo de Benedict o de Fehling.

o Sudan III: solución alcohólica al 0,5 %.




31

Desnaturalización o coagulación de proteínas lácteas.

Hacer una serie de cuatro tubos de ensayo y numerarlos. Al tubo nº 1 se le añade 2 ml

de leche y 2 ml de HCl puro. Al tubo nº 2 se le añade igual cantidad de leche y 2 ml

de una disolución concentrada de NaCl. Al tubo nº 3 añadir 2 ml de leche y 2 ml de

NaOH al 20 %. Al tubo nº 4 se le añade 2 ml de leche y después se le calienta

levemente. Anotar los resultados obtenidos y comparar los diferentes tubos.

Reconocimiento de grasas en la leche.

Colocar 2 ml de leche en un tubo de ensayo, añadir 10 ml de agua y unas gotas de

Sudan III y agitar fuertemente. Observar que se tiñe todo de rosa. Si añadimos 1 ml de

HCl al 50 % y calentamos pueden aparecer dos o tres fases:

a) Superior, de color rosa, formada por las grasas teñidas por el Sudan III, que es un

colorante específico de grasas.

b) Intermedia, con el agua y ciertos compuestos solubles, como la lactosa y algunas

proteínas disueltas (lactoalbúmina y lactoglobulina).

c) Inferior, con las proteínas coaguladas y precipitadas.

Reconocimiento de glúcidos en la leche.

Se recoge aparte con una pipeta Pasteur o cuentagotas la fase soluble de la prueba

anterior, se filtra y se añade 1 ml del filtrado a un tubo de ensayo. A este tubo se le

agrega 1 ml del reactivo de Fehling (o de Benedict) y se le calienta durante unos

minutos. Si la prueba es positiva (hay presencia de un glúcido reductor, en este caso

la lactosa) aparecerá un precipitado de óxido de cobre, de color rojo.

Reconocimiento de proteínas en la leche: Prueba xantoproteica.

Recoger con una espátula el precipitado de la leche coagulada (caseína), llevarlo a

un trozo de papel de filtro y secarlo. Poner en un tubo de ensayo una pequeña




32

porción del precipitado seco, añadir unas gotas de ácido nítrico puro y calentar

ligeramente. Anotar los resultados obtenidos.




33

PRACTICA 8

ESTUDIOS ENZIMÁTICOS

1. OBJETIVO

Verificar el funcionamiento y acción de las enzimas

2. PROCEDIMIENTO

Hidrólisis enzimática del almidón por la saliva: Acción digestiva de la amilasa salivar.

Primero se hace un tubo patrón con 2 ml. de una disolución de almidón al 2 % y unas

gotas de disolución de yodo (lugol). Observar el resultado. Después se calienta

suavemente el tubo hasta que la mezcla pierda el color. Dejar enfriar el tubo bajo el

agua del grifo y esperar unos minutos. Anotar lo sucedido.

Colocar en un segundo tubo 2 ml. de la disolución de almidón y una cierta cantidad

de saliva, mezclar bien la saliva con la disolución y calentar muy suavemente durante

unos segundos. Añadir unas gotas de lugol. Anotar los resultados y dar una

explicación a lo ocurrido.

Reconocimiento de la enzima catalasa en tejidos.

La catalasa se encuentra tanto en tejidos vegetales (patata, zanahoria, lechuga,

etc.) como en tejidos animales (carne, pescado, etc.) produciendo la siguiente

reacción química:

H2O2 (agua oxigenada) ==== H2O + ½ O2 (gaseoso)

Es decir, la enzima descompone el peróxido de hidrógeno o agua oxigenada en

agua y oxígeno gaseoso, que se desprenderá en forma de burbujas en un medio

acuoso.




34

Poner en varios tubos de ensayo previamente numerados distintos tejidos (más o

menos el mismo peso de cada tejido). Añadir 5 ml. de agua oxigenada a cada tubo

y anotar lo que sucede. Explicar lo ocurrido y ordenar los tejidos según su actividad.

Repetir el proceso anterior, pero hervir antes los tejidos durante diez minutos. Explicar

los resultados obtenidos.

Actividad catalítica de la catalasa.

En un tubo de ensayo se coloca un trozo de hígado (o 1 ml. de extracto de hígado) y

10 ml. de agua oxigenada. Se cierra el tubo con un tapón, que se deja algo flojo para

el escape de los gases producidos en la reacción, en cuyo centro exista un orificio por

el cual se pueda introducir un termómetro. Así, hemos hecho un calorímetro.

Se anota la temperatura ambiente, que se toma como temperatura inicial de la

reacción, y después se va anotando las variaciones de temperatura que se producen

en el interior del calorímetro cada treinta segundos durante un período de cinco

minutos. Hacer la gráfica de la reacción y explicar los resultados.




35

PRACTICA 9

REACCIONES DE ALDEHIDOS,CETONAS Y ACIDOS CARBOXILICOS

OBJETIVOS

Aplicar en el laboratorio un método de identificación de aldehídos y cetonas

Aprender a distinguir un aldehído de una cetona por su comportamiento químico .

PROCEDIMIENTO:

MATERIALES:

Acetaldehído, Acetona, Reactivo fehling A y B, 2,4dinitrofenilhidracina, tubos de

ensayo, gradillas, pipetas, peras de seguridad, Agitador de vidrio, mechero, vaso de

precipitado, etanol al 95%, Probeta de 100 ml bicarbonato de sodio.

ALDEHIDOS Y CETONAS

Para la detección de la función aldehído o cetona se hace primero un ensayo

general para compuestos carbonilos (2,4 dinitro fenil hidracina). Si éste es positivo,

indica la presencia de un aldehído o de una cetona.

El paso siguiente es diferenciar entre ambas clases de compuestos, lo cual se hace

con reactivos de fehling , Tollens y Schiff.

Los compuestos carbonilicos (aldehídos y cetonas) pueden reconocerse por sus

reacciones de adición nucleofilica, entre ellas las reacciones mas usadas son :

Reacción con 2,4 dinitro fenil hidracina, Adición de bisulfito de sodio. Formación de

semicarbazonas.




36

Ensayo con 2,4 dinitro fenil hidracina

El reactivo se prepara disolviendo 3 g de 2,4 dinitrofenil hidracina en 15 ml de ácido

sulfúrico. Esta se añade con agitación a 20 ml de agua y 70 ml de etanol al 95%. Se

mezcla fuertemente.

En un tubo de ensayo diferentes, disuelva 2 gotas del compuesto a ensayar

(acetaldehído o acetona) en 0,5 ml de metanol o etanol al 95 %

En un tubo de ensayo coloque 1 ml de 2-4 dinitrofenilhidracina y añádale unas gotas

de la solución a ensayar ( acetaldehído o acetona)

Agitar, si no se forma un precipitado inmediatamente deje reposar por 10 minutos. Si

se obtiene un precipitado de color amarillo naranja o amarillo rojizo, la prueba es

positiva para aldehído y/o cetonas.

Ensayo con el reactivo de Fehling.

Para diferenciar aldehídos de cetonas se usa el reactivo de Fehling, el cual consta de

dos soluciones A y B que se mezclan a partes iguales en el momento de usarse, se

dispone asi de un ión cúprico en medio alcalino que oxida los aldehídos pero no las

cetonas.

Mezcle 1 ml de reactivo A con 1 ml de reactivo B , y añádale 10 mg o 0,5 ml del

compuesto a ensayar (acetaldehído o acetona)




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Coloque el tubo en un baño de agua hirviendo por 3 minutos. Anote sus

observaciones. Un precipitado amarillo naranja de Cu2O es prueba positiva para

aldehídos.

ACIDOS CARBOXILICOS

Ensayo con bicarbonato de sodio

En un tubo de ensayo agregue a unos pocos ml del compuesto a ensayar (ácido

acético) bicarbonato de sodio.

Si se obtiene efervescencia es indicativo de que el compuesto es de carácter ácido o

una sustancia fácilmente hidrolizable.




38

PRACTICA 10, 11 y 12

SINTESIS Y REACCIONES DEL ETANOL

1. OBJETIVO

Aplicar en el laboratorio un método común de síntesis de alcoholes a partir del uso

de microorganismos.

Verificar la obtención experimental del etanol realizando las reacciones típicas de los

alcoholes.

Aprender a identificar un alcohol por su comportamiento químico en algunos

ensayos.

MATERIALES

PARTE A ( PRIMERA SESIÓN)

Erlenmeyer de 250 ml con tapón de caucho, Unión de vidrio, Espátula, Vaso de

precipitado de 150 ml, glucosa, 15 g, levadura, fosfato de amonio, solución de

hidróxido de sodio 10 %.

PARTE B ( SEGUNDA SESIÓN)

Balón de fondo redondo de 250 ml, con desprendimiento lateral y corcho con hueco,

termómetro, refrigerante con corcho, erlenmeyer de 125 ml, trípode, placa de

cerámica, mechero de Bunsen.

PARTE C ( TERCERA SESIÓN)

Vidrio de reloj, microscopio, mechero de Bunsen, vaso de precipitado de 150 ml, tubo

de ensayo, pipeta pasteur, Etanol 5 ml, sodio sólido ( pedazo recién cortado),




39

DICROMATO DE POTASIO AL 10 % 3 ML, Acido sulfúrico concentrado 5ml, hipoclorito

de sodio 10 % 1ml, Acido acético glacial 1 ml.

PROCEDIMIENTO

PARTE A ( PRIMERA SESION)

Disolver aproximadamente 15 gramos de caña de azúcar o glucosa en 50 ml de

agua en un erlenmeyer.

Añada dos medidas de espátula de levadura y 3 gramos de fosfato de amonio (

nutriente).

Tape el erlenmeyer y permita que alcance una temperatura tibia . 30 a 35 °C

Observe el erlenmeyer ocasionalmente y cuando la solución comience a fermentar

coloque el otro extremo de la unión de vidrio dentro de un vaso de precipitado con

solución de hidróxido de calcio.

Registre sus observaciones

Deje que la solución fermente hasta la próxima sesión de laboratorio.

PARTE B ( SEGUNDA SESION)

Después de estos días decante la mayor parte de la solución fermentada, en un

balón de fondo redondo y arme el aparato de la figura y realice la destilación simple

de esa solución:

Asegúrese que el agua este circulando por el condensador antes de iniciar el

calentamiento.




40

Inicie el calentamiento y la recolección del destilado en un erlenmeyer de 125 ml.

Anote la temperatura a la cual destiló el compuesto.

Ensaye por ignición unas gotas de destilado y unas gotas de compuesto son destilar.


Conserve el destilado para la próxima sesión.

PARTE C ( TERCERA SESION)

Coloque unas pocas gotas del etanol en un vidrio de reloj y haga el ensayo de

ignición con un fósforo.

Vierta aproximadamente 2 ml de etanol en un tubo de ensayo y añada una pequeña

pieza de sodio recién cortado del tamaño de un grano de arroz ( tenga mucho

cuidado)

Ensaye cualquier gas que se desprenda con un fósforo encendido.

Cuando todo el sodio este disuelto, cuidadosamente, tibie la solución y coloque unas

pocas gotas sobre el microscopio usando una pipeta Pasteur.

Permita que el etanol se evapore.

Registre todas sus observaciones

Vierta cerca de 2 ml de solución dicromato de potasio en un tubo de ensayo, añada

cuidadosamente 1 ml de ácido sulfúrico concentrado , luego a esta solución añada

2 gotas de etanol y agite el tubo con mucho cuidado.

Caliente con una pequeña llama de mechero de Bunsen por unos minutos el tubo de

ensayo y anote los cambios ocurridos.

Intente detectar el olor del vapor desprendido, con sumo cuidado




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Registre sus observaciones.

Preguntas complementarias:

La palabra fermentación deriva del latin fervere, que significa en ebullición. De las

observaciones realizadas en la práctica usted piensa que es correcto este nombre

para este proceso.

Que evidencia puede indicar usted de que la fermentación es una reacción química.

Investigue y responda las reacciones químicas que ocurrieron para la conversión de

glucosa a etanol.


FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

PROGRAMA DE INGENIERÍA AGRONÓMICA


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BIBLIOGRAFÍA RECOMENDADA

o Amato M, S y Granados P, F. Manual de Laboratorio. Cátedra de Bioquímica.

Universidad Nacional, 1994

o Angulo Ugalde, Y. Bioquímica Manual de Laboratorio. Universidad de Costa Rica.

1999

o Brown, T.L. LeMay, H.E. & Bursten, B.E. Química: La ciencia central. Pearson-Prentice

may, séptima edición. México. 1999

o Budavari, S. The Merck Index: an enciclopedia of chemical drugs and biological.

Guide for safety in the chemical laboratory. Manufacturing Chemists Association.

Whitehouse station, Merck & CO. doceava edición. New York

o Chang, R. Química, editorial McGraw Hill, séptima edición, Colombia. 2002

o Kaplan, L et al. Clinical Chemistry: theory, analysis and correlation. 2nd edition. CW.

Mosby Company, 1989

o Facultad de Medicina UNAM, Departamento de Bioquímica. Bioquímica y Biología

Molecular. Objetivos del curso y manual de prácticas de laboratorio. Mc Graw-Hill

Interamericana Editores, México, 2000.

o Switzer, R. y L. Garrity. Experimental Biochemistry: Theory and exercises in fundamental

methods. 3rd edition, Freeman and Company, New York 1999

o Skoog, D.A. & West, D.M. Química analítica. McGraw Hill. Séptima edición. México.

2001

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