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ANTICUERPOS ANTI-CITOPLASMÁTICOS

Y MITOTICOS

MI Alarcón Torres

Servicio de Análisis Clínicos

Hospital Universitario de Gran Canaria-HUGCDN

AUTOANTICUERPOS: DE LA IMAGEN AL DIAGNÓSTICO

Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017

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CITOPLASMA CELULAR

Retículo endoplasmático liso

Membrana nuclear

Mitocondrias

Nucleolo

Nucleo

Lisosomas

Ap de Golgi

R E rugoso

Membrana celular

Ribosomas

Centriolos

Vacuolas

Ribosomas

Citoesqueleto

Vesículas


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AC ANTI CITOPLASMA DE CELULA HEp-2


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Consenso internacional sobre estandarización

de la nomenclatura de los patrones sobre células Hep-2

(ICAP) Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017

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PROPUESTA ICAP

• Nombre: Golgi-like

• Descripción morfológica: Polar citoplásmico

• Identificación de autoantígeno: Giantina, golgin-160

• Relevancia clínica: Descripción

En cada patrón definido debe constar de 4 conceptos básicos:


http://www.google.es/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=&url=http%3A%2F%2Fworthclark.com%2Freason-for-move-in-inspections%2F&psig=AOvVaw1AB2TVpCP-4PR8mQZE9wvR&ust=1510219279247103

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Patrones citoplasmáticos

AC-15 ___ AC-23


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Nivel experto

Nivel competente


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PATRONES CITOPLASMÁTICOS

EN CÉLULAS HEp-2

Código Competente Experto Anticuerpo

AC-15 Fibrilar Lineal Actina

AC-16 Fibrilar Filamentoso Citoqueratina y vimentina

AC-17 Fibrilar Segmental Tropomiosina, a-actinina

AC-18 Moteado Puntos discretos Lisosomas, GW

AC-19 Moteado Denso Fino PL7/PL12

AC-20 Moteado Fino Jo1, OJ, EJ

AC-21 Reticular Mitocondrias

AC-22 Golgi Golgi

AC-23 Rods and Rings IMPDH2


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AC-15: Fibrilar Lineal

Nivel competente Nivel experto


Tinción • Fibras del citoesqueleto,

con pequeños depositos granulares

• Cables de actina estriados

que atraviesan el eje de las células

Asociación clínica

Actina / miosina

– Hepatitis crónica activa - EMTC

– Cirrosis hepática – Miasthenia gravis

Actina - Hepatitis autoimmune – Enf Crohn – CBP – VHC

- Hemodialisis (long term) – Raro en EAS

AC-15: Fibrilar Lineal Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017

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Ac Anti-músculo liso

Antígeno “diana”:

Actina y F-actina

Asociación clínica:

HAI-1

CBP, EAS

Métodos de detección:

IFI HEp2

IFI Tejido estomago de rata

IBlot (F-Actina)

Tinción

AC-15:Citoplasmática fibrilar lineal


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AC-16: Fibrilar Filamentoso



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Tinción Microtubulos y filamentos intermedios,

se extiende desde el borde nuclear


Anti-Vimentina

Reacción cruzada con ac anti-hélice,

- Enferm. infecciosas o inflamatorias

- Hemodiálisis a largo plazo

- Sujetos sanos

Anti-Queratina - Enf. hepática alcohólica (69%)

- Común en EAS y psoriasis

AC-16: Fibrilar Filamentoso Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017

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AC-17: Fibrilar Segmental


EKL Chan, CA von Muhlen. ICAP 2014


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Se asocia a ac anti-α-actinina, vinculina y tropomiosina

Tinción

Mayor tinción de segmentos cortos,

cuerpos densos, a lo largo de las fibras


- Miastenia gravis,

- EII: E. Crohn y Colitis ulcerosa

AC-17: Fibrilar Segmental Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017

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AC-18: Moteado Puntos discretos


Autoantigenos:

Anti-argonaute2 (Ago/Su):

Componente de puntos GW (GWB),

GW182


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Se asocia a:

Ac anticuerpos GW y lisosomas*

(Ag: GW182, Ago2/Su)

Tinción Granular brillante en cuerpos GW

en el citoplasma de las células

en interfase con alto numero

durante finales de S y G2 fases del ciclo

Asociación clínica - CBP, SAF, EAS,

- procesos neurológicos y autoinmunes

AC-18: Moteado Puntos discretos

(*) no hay evidencia molecular para sustentar que este patrón,

esté asociado a objetivos lisosomales


18 EKL Chan, CA von Muhlen. ICAP 2014

AC-18: Moteado Puntos discretos Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017

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AC-19: Denso Fino y Homogéneo



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Se asocia a ac anti-sintetasas y ribosomas

Antígenos frente a PL7, PL12, Proteina P ribosomal

Tinción

Homogénea nuboso y mate

en el citoplasma


- Síndrome anti-sintetasa, PM/DM,

- RNP rib, LES, LES neuropsiquiátrico

AC-19: Denso Fino y Homogéneo Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017

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Antigeno diana: Anti-PL-7 Sintetasa de treonil ARNt

Anti-PL-12 Sintetasa de alanil ARNt


Anti-PL7/PL12 (Solomon J. 2011)

• Frecuente en mujeres (PL7-63% y PL12-75%)

• Mayor incidencia de EPI (70-100%)

• Menor incidencia de miositis (<50%)

• Pronóstico depende de la severidad de la EPI

• Respuesta a tto inmunosupresor variable

• Ac Anti-PL7: En sujetos con EPI y ANA y anti-Jo1 (-),

Anti PL7 en el 77% de casos, con afectación muscular,

Raynaud y Artritis en 42% de casos

• EUMYONET (PL7): (Labirua-Iturburu, 2012)

- 18/964 (1.87%); 83 % en mujeres.

- EPI 78%, Miositis 75%, Artritis 56%, Raynaud 40%,

Fiebre 30% y Pericarditis en 22%.

- Otros ac asociados: ANA, Ro52 y SSa/Ro

Método de detección:

- IFI- Hep-2: AC-19: Citoplasmático denso fino

- IB: Ag recombinante Solomon J. J Bras Pneumol 2011. Labirua –Iturburu A, Medicine,2012

Anti PL12

Ac anti-sintetasa: PL7/PL12 Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017

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AC-20: Moteado fino

Autoantigeno: Histidil-Sintetasa



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Tinción

Pequeñas gránulos dispersos

en el citoplasma, sobre todo

homogéneo o bien densa con

fondo moteado


- Síndrome Jo-1 (miositis y EPI)

- Síndrome anti-sintetasa, PM / DM

- Esclerodermia limitada

- Enfermedades neurológicas

- Derrame pleural idiopático

Patrón Fino Moteado-AC20

Anti-Jo1 y PL12 - EPI

AC-20: Moteado fino Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017

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Anti Jo-1

Ac anti-sintetasas:Jo1/PL1, OJ, EJ


Enzimas citoplasmáticas:

Anti-Jo1/PL1 Sintetasa Histidil RNAt

Anti-EJ Sintetasa de glicina ARNt

Anti-OJ Sintetasa de isoleucil ARNt


20-40% pacientes con MII

48% en PM, ES=95% , Artritis 90%

Con frecuencia está asociado a EPI (60-70%)

Relacionado con la actividad de la MII

Se asocia a anti- Ro52 con EPI severa y extensa

Método de detección :

IFI Hep2, ELISA, IBlot

Tinción

AC-20:Citoplasmática moteado fino


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AC-21: Moteado Reticular Nivel competente


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Se asocia a ac anti-mitocondriales:

1) Piruvato dehidrogenasa E2 (PDC-E2/M2*)

2) Cadena ramificada del complejo E2 (BCOADC-E2)

3) 2-oxo glutarato dehidrogenasa complejo E2 (OGDC-E2)

4) Subunidad E1 de PDC

5) E3 BP/proteina X

* PDC-E2, antígeno mas importante en la patogenesis de la CBP

Tinción

Granular brillante grueso filamentoso y moteado


• CBP

• Esclerosis sistémica (43%), SSj

• Ac centroméricos frecuentemente asociados

• Raro en otras EAS

AC-21: Moteado Reticular Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017

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M1 a M9: M2 (Piruvato deshidrogenasa)

M4 (Sulfito Oxidasa)

M9 (Glucógeno Fosforilasa A)


En CBP, presenta Ac. anti-M2, M4, M8 y M9

M2: Marcador de CBP (prevalencia 95%)

M4 y M8: baja prevalencia, asociados a M2

M9: estadíos iniciales de CBP (82%)


IFI-Hep-2, IFI-Tejido de riñón de rata

ELISA (detecta y cuantifica subtipo M2),

IBlot: anti-M2, anti-3E-BPO

Tinción:

AC-21: Citoplasmática moteado reticular

Ac anti-mitocondrias Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017

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AC-22: Citoplasmático Polar-Golgi Nivel competente

Autoantigenos:

Giantina/Macrogolgina, golgina95/GM130,

golgina-97, golgina-160 y golgina-245


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Tinción

Golginas: Aparato de Golgi


• Raro en el SSj

• LES, AR, EMTC, y otras EAS

• Ataxia cerebelar idiopática,

• Degeneración cerebelar paraneoplásico

• Infecciones virales - EBV y VIH

AC-22: Citoplasmático Polar-Golgi Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017

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AC-23: Rods and Rings (R&R) Nivel competente

Autoantigeno:

Inosin-5-monofosfato dehidrogenasa 2


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Se asocia al antígeno IMPDH2 (inosin-5-monofosfato dehidrogenasa 2)

y otros

Tinción Distintas varillas y estructuras de anillos en el

Citoplasma de celulas en interfase.

Algunos R&R también se encuentran en núcleo

Asociación clínica • VHC, post tratamiento IFN/ Ribavirina, resistencia al tto

• Raro en LES

• Hashimoto

• Sujetos sanos

AC-23: Rods and Rings (R&R) Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017

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Ac anti-citoplasma - HEp-2

HAI SAS, DM/PM

Anti-Sintetasas

(Jo1, EJ, OJ,

PL7, PL12) y SRP(*)

Anti-músculo liso (Actina)

Anti-SSa y

Anti-Ro52 (*)

SS

AC-15 Fibrilar Ac-19 y AC-20

Moteado Moteado

CBP

Anti-Mitocondrias (M2, BPO)

AC-21 Reticular

Criterios Clínicos

Inmunoblot Triple tejido /Inmunoblot Inmunoblot


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Autoantígeno:

SRP (Signal Recognition Particle): Proteina de 54 kDa

y 72 kDa del complejo citoplasmático

de 6 RNA-proteínas (Proteínas-7SL RNA)

Asociación Clínica:

Presente en 5% de pacientes con MII, ES 93%

- 7-10% Polimiositis y 2-3% Dermatomiositis

- Relacionado con la actividad de la MII

- No se asocia a otros Ac

Síndrome de miopatía necrotizante

- Altos niveles de CK

- Enfermedad severa y Afectación miocárdica

- Rápida progresión y Mal Pronóstico

- Resistencia y mala respuesta a tto

- Supervivencia. 20-30%


- Patrón IFI-Hep-2: No definido por la ICAP

Citoplasmático débil moteado granular denso y difuso

- IB: Ag recombinante

Ac anti-SRP Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017

• Autoantígeno:

No pertenece al complejo scRNP.

Proteína de 52 kDa es una ubiquitin-ligasa E3 de la familia de proteínas TRIM 21 (tripatite motif protein) de localización citoplasmática

• Asociación Clínica

20% en SSc: l-SSc 60% y d-SSc 36%, asociado a EPI

MII: PM, DM, S. Overlap y CBP (80%).

Inf. viricas y neoplasias 62%

Tb asociado a HAI y SLA 76-96%

• Asociado a otros Ac:

Ssa/Ro 60 kDa, 90% LES y SS, 72%

Jo1 60%, EPI mas severa y extensa (Vacnsa, 2009)

Otras Antisintetasas, 99%

Tb Cent B y A, Scl70, RNA polIII, Pm/Scl y Ku, 60%

• Valor pronóstico

• Método de detección

- Patrón IFI: No definido por la ICAP

Citoplasmático no especifico o negativo en HEp-2 y

Moteado fino en HEp2000 (transfectadas con Ro)

- ELISA, IB: Ag recombinantes

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Anti-anti-Jo1/Anti-Ro52/TRIM21:

• Severidad

• EPI

• Miositis

• Afectación articular

• Riesgo de cáncer

MII: DM (24%), PM (27%), MCI (21%)

Otros: S. Sjögren, LES, SScl

Ac anti-Ro52/TRIM21 Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017

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INMUNOTRANSFERENCIA EN LINEA (LIA)


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Patrones mitóticos

AC-24 ___ AC-28


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Nivel experto


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AC-24: CENTROSOMAS

Sinónimo

Centriolos

Antígenos Asociados

Pericentrina, Nineína,

Cep250, Cep110

Enfermedades Asociadas

Raro en ES,

Fenómeno de Raynaud,

Infecciones (virales y por micoplasmas)

Descripción

Centriolos, visibles como pequeños

puntos nítidos (1-2/célula) en citoplasma

o en los polos del huso mitótico.

Nivel experto


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Sinónimo Huso mitotico


HsEg5

Enfermedades

Asociadas

Raro en SSj

LES y otras conectivopatías.

Descripción

Tinción en las fibras del huso entre los polos en células en

mitosis, junto con una tinción con forma de pequeños conos

en los polos.

Las fibras del huso pueden teñirse tanto en patrones

parecidos a NuMA como en algunos no-NuMA.

Los patrones NuMA conllevan tinciones moteadas en el

núcleo.

Nivel experto

AC-25: HUSO MITÓTICO Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017

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Sinónimo MSA-1v, Centrofilina

Antígenos Asociados NuMA

Enfermedades Asociadas SSj,

LES Y otros

Descripción

Tinción granular nuclear con

tinción de fibras del huso

mitótico

Nivel experto

AC-26: HUSO MITÓTICO like Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017

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Sinónimo Cuerpo medio


Ninguno


Raro en ES,

Fenómeno de Raynaud,

Tumores malignos

Descripción

Tinción del puente que une las

dos células hijas al final de la

división celular, pero antes de que

las células se separen totalmente.

Nivel experto

AC-27: PUENTE INTERCELULAR Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017

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Raro en lúpus discoide (LED),

Leucemia linfocítica crónica (LLC),

SSj, Polimialgia reumática.

Descripción

Tinción punteada en el borde de los cromosomas de

células en profase y metafase, sin ninguna tinción

en células en interfase

Nivel experto

AC-28: ENVOLTURA

CROMOSÓMICA MITÓTICA

Sinónimo

Proteína de cobertura

cromosómica, antígeno de células

en división, autoantígeno de

cromosomas mitóticos (MCA)

Antígenos

Asociados Histona H3 modificada, MCA-1


RECOMENDACIONES

Desde la CEI/SEQC recomendamos, en consenso con la GEAI/SEI:

1.- Utilizar la nomenclatura estandarizada para definir los patrones de IFI, tal como se

establece en el Consenso Internacional sobre nomenclatura de Patrones de células Hep-2

2.- Configurar en los SIL e informes del laboratorio, la definición de los patrones de células

HEp-2, nucleares y citoplasmáticos, al menos a nivel competente, tal como se indica en

dicho Consenso

3.- Realizar la búsqueda y confirmación de las distintas especificidades de forma

ordenada y racional, tomando como base la imagen, siguiendo siempre las pautas

establecidas en las GPC

4.- Utilizar los algoritmos de consenso internacionales y criterios clínicos establecidos

para el diagnóstico de EAI para lograr una mejor adecuación de la demanda y rentabilidad

de las pruebas de Autoinmunidad


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Muchas Gracias

[email protected]


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