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Anlisis Microbiolgico del AguaColegio Nacional E. M. D. Asuncin Escalada

Sara CrdenasFtima CaeteCristian DomnguezVanina Pertile Braulio VantrateIntegrantes:Bachillerato Tcnico en Qumica IndustrialAnlisis Microbiolgico del AguaSe puede definir el anlisis microbiolgico como el conjunto de operaciones encaminadas a determinar los microorganismos presentes en una muestra problema de AGUA.

El inters se centra en los microorganismos patgenos, que son los diferentes tipos de bacterias, virus, protozoosy otros organismos, quetransmiten enfermedades

ENFERMEDADAGENTEORIGEN BACATERIANOFiebres tifoideas y paratifoideasSalmonella typhi, Salmonella Paratyphi A y B

Disentera bacilar

ShigellacleraVibrio choleraeGastroenteritis agudas y diarreas

Escherichia coli.CampylobacterYersiniae nterocoliticaSalmonella spShigellas

Normalmente estos microbios llegan al agua en las heces y otros restos orgnicos que producen las personas infectadas

TOMA DE MUESTRAS PARA ANLISIS MICROBIOLGICOS

Las muestras que se tomarn para el anlisis deben ser representativas para poder determinar as su calidad microbiolgica.

Su anlisis debe comenzar antes de que hayan transcurrido 6 horas desde el momento de la toma de muestras.

En circunstancias excepcionales, las muestras pueden conservarse a una temperatura de 4C durante un periodo mximo de 24 hs antes de su anlisis.

Para su recogida debe utilizarse frascos estriles y debe recolectarse cantidades comprendidas entre 500 y 1000 ml.

Cuando se estime probable que el agua a analizar contenga trazas de cloro, cloramina u ozono, ser necesario neutralizar su efecto bactericida en el momento del muestreo.

Se aadir una cantidad suficiente de tiosulfato sdico. Para un volumen de 250 ml son suficientes 0,2 ml de una solucin acuosa al 3% de tiosulfato sdico

Mtodos de anlisis: 1. Bacterias coliformes y Escherichiacoli(E. coli): 2. Enterococos 3. Clostridium perfringens (incluidas las esporas)Otros tests complementarios: Salmonelas Estafilococos patgenos Bacterifagos fecales Enterovirus Protozoos Animlculos (gusanos-larvas), Invertebrados bntico

CARACTERSTICAS DE LOS MICROORGANISMOS: ENTEROCOCOS FECALESLos enterococos pueden considerarse como indicadores de contaminacin fecal. Algunos enterococos presentes en las aguas pueden proceder de otros hbitats. Se pueden detectar y cuantificar las especies: Enterococcus faecalis, E. faecium, E. duransy E. hirae. Como enterococosintestinales se consideran aquellos microorganismos capaces de reducirel cloruro de trifeniltetrazolio(TTC) y de hidrolizar la esculina.

Clostridium perfringens (incluidas esporas)

Los bacterias incluidas en el gnero Clostridium tienen morfologa bacilar, son Gram positivas, anaerobias estrictas y capaces de formar esporas.

La especie C. perfringens estn normalmente presente en heces. Sus esporas son resistentes al calor, a los procesos de desinfeccin y a los tratamientos de depuracin habituales de las aguas (cloracin), por lo que su supervivencia en agua es mayor.

La diferenciacin de C. perfringens de otras especies de Clostridium, se basa en su capacidad de fermentar la sacarosa con produccin de cido, en su incapacidad de fermentar la celobiosa y en la produccin de fosfatasa cida.

Bacterias aerobias

Son organismos que slo pueden desarrollarse en presencia de oxgeno atmosfrico, del que precisa para la respiracin. La atmsfera puede ser area o subacutica, ya que existe aire disuelto dentro de las masas de agua (los peces son organismos aerobios que respiran aire disuelto). La atmsfera area contiene, al menos, 20 veces ms oxgeno que la acutica, lo que condicionael diseo de los rganos respiratorios delos animales de vida area o acutica.

BACTERIAS COLIFORMESLos coliformes reagrupan ciertas especies bacterianas pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, de morfologa bacilar, Gram negativas, aerobias o anaerobias facultativas, oxidasa negativa, no esporuladas y que fermentan la lactosa con produccin de cido a 37Cen 24-48 horas

Del grupo coliformes forman parte varios gneros: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter.-Escherichia coli produce dolor abdominal, diarrea, nauseas, vmitos y fiebre. -Klebsiella produce enfermedades respiratorias.-Citrobacter produce alteraciones a nivel del colon y a nivel intestinal

Determinacin Instrumental:

Anlisis MicrobiolgicoMtodo de filtracin de membrana.

FUNDAMENTO: Las bacterias coliformes de origen fecal son aquellas comprendidas en el grupo anterior (coliformes totales), que adems son capaces de fermentar la lactosa, con produccin de cido y de gas a 44C, en un tiempo mximo de 24h.2.

COLIFORMES FECALES

MTODO: El mtodo consiste en la determinacin del n de coliformes mediante filtracin de volmenes determinados del agua a analizar por filtros de membrana e incubacin sobre medio de lactosa enriquecido(agar de lactosa TTC con heptadecilsulfato de sodio) y una temperatura de 44,5C(+/-0,2C).3. TOMA DE MUESTRA Y ALMACENAMIENTO: Se utiliza la muestra de agua tomada para el anlisis de coliformes totales que se encontraba guardada en frigorfico a 4C

4. PROCEDIMIENTO:

Colocar un filtro de membrana estril sobre el soporte de filtracin. Adaptar el embudo y conectar el matraz a una bomba elctrica de vaco.Filtrar 100 ml de muestra si se trata de agua potable, y 0,1 y 1 ml si se trata de aguas no potables, previamente homogeneizadas. Lavar con unos 30 ml de agua destilada. Retirar el embudo. Mediante las pinzas esterilizadas, transferir la membrana filtrante sobre el medio de cultivo contenido en una placa de Petri, de modo que la superficie de filtracin quede hacia arriba. Cerrar e invertir la placa e incubar a 44C(+/-1C) durante 24h ( +/-2h ).

5. LECTURA E INTERPRETACION:

La lectura de los resultados requiere el examen de las colonias aparecidas sobre la membrana y el examen de los halos en la capa de agar subyacente a la membrana.

La fermentacin de la lactosa provoca la formacin de un halo amarillo.

Se considera coliformes aquellas colonias que presentan halo amarillo, halo amarillo con centro naranja(Escherichia y Citrobacter).

halo amarillo con centro rojo ladrillo(Klebsiella y Enterobacter). La densidad se estima como el total de coliformes totales por 100ml, utilizando aquellos filtros de membrana que tengan 20-80 colonias de coliformes y no ms de 200.

Determinacin NOInstrumental:

Anlisis MicrobiolgicoDeterminacin de vibrios choleroe en aguas

El gnero de Vibrio se encuentra dentro de la familia vibrionaceae junto con tres gneros ms, Aeromonas, Photobacterium y Plesiomonas.Las cepas de Vibrio chelerae que reaccionan con el antisuero somtico 01, se denominan V. cholerae 01, las restantes o variedades se denominan no 01, siendo las primeras las causantes de la enfermedad del clera.

Procedimiento:

Enriquecimiento directoUna vez llegada a la muestra al laboratorio, se coloca el volumen de muestreo (500ml) en un recipiente conteniendo el mismo volumen de agua peptonada alcalina (APA) a PH 0.6 de borde concentracin. Incubar a 37C durante 6 a 8 hs.

Filtracin por membranaLa filtracin se realiza como esta descripta en la diferencia 2.1 pero colocando un per filtro estril sobre la membrana ara las muestras muy turbias. Una vez filtradas se colocan todas las membranas y los pre filtros de la muestra en un recipiente con 100 ml de APA (peptonada alcalina) simple concentracin. Incubar 6 a 8 hs a 37C.

Hisopo de MooreColocar el hisopo en frasco de boca ancha con APA simple concentracin e incubar a 37C a 6 por 8 hs. Aislamiento de Vibrio choleraeIndependientemente del mtodo de procedimiento empleado, posteriormente a la incubacin en APA, sembrar un ansado de la pelcula superficial del agua peptonada alcalina en placas de Petri con medio TCBS, e incubar por 24hs a 37C.

Seleccionar colonias sospechosas es decir, colonias amarillas (porque fermenta la sacarosa), placas ligeramente convexas de 2mm de dimetro con centro opaco y bordes translucidos. No todas las colonias amarillas desarrolladas en este medio son de V. cholerae. Replicar las colonias seleccionadas (aproximadamente un nmero de 8 a 10). En placas con medio TSA e incubar a 24hs a 37C.

25Conclusin:Para detectar la presencia de estos microorganismos como Bacterias coliformes y Escherichiacoli(E. coli), Enterococos, Clostridium perfringens se deben realizar anlisis microbiolgicos correspondientes para demostrarlos microorganismos presentes en una muestra problema de AGUA.El agua que contenga pocos patgenos por litros puede estar lo suficientemente contaminada para causar algunas enfermedades.