Microbiologa II UNIVERSIDAD DE

BELGRANO

MARISA M RODRIGUEZ Licenciada en Ciencias Biolgicas

ANALISIS BACTERIOLOGICO DE AGUAS

AGUA POTABLE y Libre de microorganismos patgenos y libre

de minerales, de sustancias orgnicas que puedan producir efectos fisiolgicos adversos.

y Libre de turbidez visible, color y sabor aceptables. y Podr ser ingerida o utilizada en el

procesamiento de alimentos sin temor por los efectos nocivos que pueda producir sobre la SALUD.

Artculo 982 "Agua potable de suministro pblico y uso domiciliario" (1994) PARAMETROS MICROBIOLOGICOS

Aguas para consumo humano y Rcto. de Bacterias Aerobias Mesfilas < 500 UFC/ml y Rcto. Coliformes totales NMP igual o < de 3/100 ml y Rcto. Escherichia coli ausencia en 100 ml y Rcto. Pseudomonas aeruginosa ausencia

en 100 ml

Tratamiento de aguas residuales antes de su eliminacin o reutilizacin. Mtodos de purificacin del agua

para proporcionar agua potable y segura.

Control microbiolgico del agua

Como evitar las enfermedades de

transmisin hdrica? P R E V E N C I O N

Pero y En que nmero? y Que microorganismo? y Sistema de deteccin temprana

"alarma?

Aislamiento de microorganismos

patgenos H2O de peligro potencial para la salud.

Que buscamos? y Indicadores de contaminacin fecal. y Deben estar presente en gran nmero

en el intestino del hombre y animales de sangre caliente

y Fcilmente detectable por mtodos analticos simples y econmicos y No debe proliferar en aguas naturales y Debe tener una persistencia en el

agua similar a la de los patgenos.

Que buscamos? y FAMILIA ENTEROBACTERIACEAE y Enterobacterias y Coliformes totales y Coliformes termotolerantes y E. coli

BACILOS GRAM NEGATIVOS NO ESPORULADOS OXIDASA NEGATIVA

AEROBIOS ANAEROBIOS FACULTATIVOS UTILIZAN GLUCOSA (ACIDO Y GAS)

REDUCEN NITRATOS

Coliformes totales CARACTERSTICAS y Origen (habitat) fecal y no fecal y Bacilos gram-negativos, oxidasa (-) y Crecen en presencia de sales biliares y Fermentan lactosa con produccin de cido y gas a 35-37 C en 48 hs

? ?

?

Microorganismo Oxidasa

Pseudomonas aeruginosa +

Neisseria spp. + Aeromonas spp. +

Vibrio spp.* + Moraxella +

Familia Enterobacteriaceae -

La prueba debe realizarse utilizando cultivos frescos (18-24 horas), y que

no provengan de medios con azcares con pH cido

G (-) cepas que fermenten

la lactosa

ssales biliares Violeta cristal Rojo neutro

Lactosa Peptona

un indicador visual de pH, distinguiendo as las bacterias gram negativas que pueden fermentar la lactosa (Lac+) y las que no pueden (Lac-).

Presencia de coliformes totales

Desventajas: Crecimiento en el sistema de distribucin. Ser habitantes normales del suelo, plantas y agua. No siempre estn presentes durante los brotes de origen hdrico.

Coliformes totales

Coliformes termotolerantes Su presencia en agua tratada indica: y Contaminacin fecal y Inadecuado tratamiento para remocin

de bacterias fecales. y En agua cruda indica el grado de

contaminacin, el tipo de tratamiento para potabilizarla y el riesgo sanitario.

?

son capaces de fermentar lactosa a 44-45 C se

conocen como coliformes termotolerantes

Coliformes termotolerantes CARACTERSTICAS y Coliformes que fermentan la lactosa a

44,5C con produccin de gas. y Incluyen Escherichia coli, Citrobacter

spp.,Klebsiella spp. y Enterobacter spp. y Origen (hbitat) predominantemente

fecal

Escherichia coli y Pertenece a los Coliformes

Termotolerantes y Origen (hbitat) intestino del hombre y animales de sangre caliente Su presencia indica: y Contaminacin fecal y Inadecuado tratamiento para remocin

de bacterias fecales

Pseudomona aeruginosa CARACTERSTICAS y Patgeno oportunista y Bacilo gram- negativo, no fermentador,

oxidasa positivo, mvil, produce pigmentos

y Muy diseminado en el medio ambiente y Moderada resistencia a la cloracin

Mtodos para Detectar Coliformes y NMP y Basado en probabilidad estadstica y NO es recuento directo y Tcnica lquida y Medio Slido y Recuento directo en medio

{

NMP/MPN y Las bacteria tienen una distribucin al

azar. y Los organismos no se aglutinan. y Si hay un microorganismo presente,

crecer. y PERO. y Existen las condiciones apropiadas para

crecer

NMP-El mtodo y Serie de diluciones de la muestra de

cultivo, en un medio lquido adecuado para el crecimiento de dicho organismo de un volumen diez veces mayor.

y Se incuban las muestras de esos tubos y, pasado un tiempo, se examinan los tubos.

NUMERO MS PROBABLE El mtodo se basa en determinar la presencia o ausencia (positivo o negativo) de atributos especficos de microorganismos en copias obtenidas por diluciones consecutivas a partir de muestras de suelo u otros ambientes. Se basa en el principio de que una nica clula viva puede desarrollarse y producir un cultivo turbio.

NMP y Aquellos tubos que recibieron una o

ms clulas microbianas procedentes de la muestra, se pondrn turbios, los tubos que no recibieron ninguna clula permanecern transparentes.

NPM y Al aumentar el factor de dilucin, se

alcanza un punto en el que algunos tubos contendrn tan slo un microorganismo y otros tubos no contendrn ninguno.

y Al calcular la probabilidad de que los tubos no hayan recibido ninguna clula, se puede estimar el nmero ms probable de microorganismos presentes en la muestra original, a partir de una tabla estadstica.

y La precisin del mtodo del nmero ms probable aumenta con el nmero de tubos que se usan.

10 ml Caldo Brila-Fluorocult

5 ml Caldo Brila-Fluorocult

Sembrar 10ml

Sembrar 1ml

Sembrar 0.1ml

Incubar 48 hs a 37C.

Seleccionar los tubos que posean gas en el interior de la campana de Durham

TABLA 1 Nmero ms probable en 100 ml. usando 3 tubos sembrados con 10, 1 y 0,1 ml. de muestra

Mtodo de Wilson en caldo Brila Fluorocult

Produccin de gas +

Coliformes totales - No Coliformes UV

fluorescencia Reactivo de

Kovacs(indol)

Fluorescencia +

Fecales (E. coli)

Sin turbidez Anillo rojo +

En el mismo tubo

Turbidez

Caldo citrato (48hs a 37C)

No fecales Ausencia de NO FECALES

MEDIDAS DEL CRECIMIENTO MICROBIANO.

Rcto. de clulas totales

Muestras en porta (Camara de Petroff-

Hausser)

TURBIDIMETRIA

MD

MID

No diferencia clulas viables de no viables

Contadores electrnicos de partculas

MCFARLAND

Estndares de turbidez Saber que el nmero de bacterias (UFC/mililitro) Una escala que va de 0.5 a 10. Patrones de BaCl2/ H2SO4

0.5 1 2

Escala 0.5 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Nro. Aprox de bacteria x108

1.5 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30

BaCl2 (1%) 0.05 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0

H2SO4(1%)

9.95 9.9 9.8 9.7 9.6 9.5 9.4 9.3 9.2 9.1 9.0

Precipitacin qumica y una suspensin

bacteriana.

RECUENTO DE CLULAS VIABLES VIABLES Clulas capaces de dividirse y dar descendencia. EXTENCION EN PLACA:

Superficie seca Vol de siembra 100l Cc inculo inicial

UFC

Hasta cuando?

100l

DILUCIONES Seriadas 1/10

Inculo

Del tubo del inculo pipetear 100 l y trasvasar al tubo 1, homogeneizar bien y repetir la operacin para los otros tres tubos. Luego sembrar 100l en la placa que corresponde a cada dilucin.

1/10 1/100 1/1000 1/10000

1 2 3 4

100 l 100 l 100 l 100 l

100 l 100 l 100 l 100 l

Diluciones del inculo

900 l caldo(MH/BHI/TS) o SF c/u

Recuento de inculo

Dilucin 1 / 10 Dilucin 1/100 5000 colonias 500 colonias Dilucin 1/1000 Dilucin 1/10000 50 colonias 5 colonias

VERTIDO EN PLACA

TC agar fundido Homogenizacin

UFC al vol de siembra