Aislamiento de anaerobiosClostridiumLady Martnez Zuleyma Bayona Karen Rincn Dayro Caldern

Profesor: Carolina Guzmn Luna

Mtodo de identificacinLos Clostridios son bacterias esporuladas, que por tanto tienen una gran persistencia en el agua, se eliminan las clulas vegetativas por calentamiento y se detecta crecimiento de bacterias que reducen el sulfito. La reduccin del sulfito se detecta por ennegrecimiento del cultivo (SPS Agar). 1SPS Agar (Sulfito Polymyxina Sulfadiazina) 2 Para el aislamiento y enumeracin de Clostridium perfringensContiene un amplio espectro de nutrientes.Sulfito: reducido por clostridios (incluyendo Cl. perfringens) a sulfuro, que reacciona con el citrato de hierro y hace que las colonias sean de color negro. Otros microorganismos sulfito reductores son suprimidos por polimixina y sulfadiazina (sulfapirimidina). (Angelotti, R et al 1962). 3 El bajo contenido de sulfito permite el crecimiento de clostridios sulfito-sensibles, que muestran una adecuada ennegrecimiento de las colonias. (PUT et al 1961;.. BEERNS et al 1961). 3 Choque trmico destruccin de las formas vegetativas y se mantiene la termo resistencia de las esporas ,se les suministra las condiciones para que pasen a la fase vegetativa

Materiales6 tubos para dilucin Bao Mara 80 C

6 tubos cnicos estriles (FALCON) 270 ml de peptona salina

Agar SPS doblemente concentrado (2X)Pipetas de 5 ml Pera

MetodologaSe tomaron 30 gr de lodo de la zona profunda (Zona anaerobia) de la columna de Winogradsky y se disolvieron en 270 ml de solucin peptonada para hacer una dilucin 1:300.Mediante el vortex se logro conseguir una solucin homognea. Fue llevada a choque trmico (bao mara) 80 durante 10 minutos Se realizaron diluciones seriadas ( -1, -2) por duplicado para posteriormente realizar la siembra en agar SPS

Se incub en la cmara de anaerobiosis a 46. Se observ a las 24 o 48 horas, colonias en superficie e incluidas en el medio. Conteo, multiplicar por el factor de dilucin para obtener el total de colonias.

La siembra se realiz en tubos Falcon. Cada tubo contena 10 ml de cada dilucin y se completo con el agar SPS fundido para lograr un volumen final de 50 ml

Resultados

Se observo un crecimiento masivo de colonias en todo el medio de cultivo, lo cual dificult el conteo de las mismas. Por lo tanto sea hace necesario realizar una dilucin mas para realizar un recuento adecuado.

Imagen tomada de: Pascual M,Calderon V, Microbiologia alimentaria,investigacin y recuento de Clostridium sulfito-reductores,2da edicin,editorial acriba,Zaragoza Espaa. 2006 4

Bibliografa1. Evaluacin de la calidad microbiolgica del agua: Cuantificacin e identificacin de bacterias. [ en lnea] disponible en: http://www.ugr.es/~pomif/pom-ali/ma-ii/ma-ii-3-metodos.htm visitado (01/04/2012) SPS AGAR (SULFITE POLYMYXIN SULFADIAZINE). Pronadisa micro y molecular biology. [en lnea] disponible en: http://www.condalab.com/pdf/1082.pdf ( visitado 30 /03/2012) 2.

3. SPS AGAR : Medium proposed by ANGELOTTI et al. (1962) for the isolation and enumeration of Clostridium perfringens and Clostridium botulinum in all types of foodstuffs. [ en lnea] disponible en: http://85.238.144.18/analytics/Micro_Manual/TEDISdata/prods/1_10235_0500.html visitado (01/04/2012) 4. Pascual M,Calderon V,Microbiologia alimentaria, investigacin y recuento de Clostridium sulfito-reductores,2da edicin, editorial acriba, Zaragoza Espaa. 2006. 5. Ciencia y tecnologa alimentaria. Sociedad mexicana de nutricin y tecnologa de alimentos. [ en lnea] disponible en: http://redalyc.uaemex.mx/pdf/724/72420205.pdf visitado ( 02/04/2012)

Gracias