AcreditacinISO 15189:2007Cmo hacerlo.fcilVerificacin de la Imprecisin. Primera ParteDr. Alberto Zamora PalmaDefiniciones:

PrecisinLa Precisin de un Mtodo Analtico es el grado de proximidad entre resultados independientes obtenidos en condiciones estipuladas. Se expresa cuantitativamente en trminos de Imprecisin, Error Aleatorio, Desviacin Estndar (SD) o como coeficiente de variacin (CV) de una serie de medidas.Precisin IntermediaLa Precisin Intermedia es una cantidad que indica la dispersin de una serie de medidas desarrolladas sobre un material, con el mismo procedimiento de medida, en el mismo laboratorio sobre un perodo extenso de tiempo.RepetibilidadLa Repetibilidad o Precisin Intra-corrida es una cantidad que indica la dispersin de una serie de medidas, desarrolladas en idnticas condiciones (dentro de una misma corrida).VeracidadLa Veracidad de un Mtodo Analtico es el grado de proximidad entre el valor promedio obtenido de una distribucin de resultados y el valor verdadero de la muestra. La medida de Veracidad es expresada usualmente como el Bias o sesgo.Validacin:Verificacin de que los requisitos especificados son adecuados para el uso previstoVerificacin:Aportacin de evidencia objetiva de que un elemento satisface los requisitos especificados.Vocabulario Internacional de Metrologa

AcreditacinISO 15189:2007Cmo hacerlo.fcilIntroduccinCon la creciente cultura de la calidad entre los Laboratorios Clnicos, tambin a aumentado la necesidad de la evaluacin del desempeo de los mtodos analticos que utiliza para la realizacin de los exmenes ofrecidos a sus clientes; una de las herramientas estadsticas que de inicio suelen utilizar para lograr este objetivo es la evaluacin de la Precisin, sin embargo, al intentar realizar esta actividad, el profesional del laboratorio encontrar dos opciones la primera es el documento EP15-A2, publicado por el CLSI, formalmente conocido como NCCLS, este es uno de los primeros documentos de referencia que se han publicado en el mundo para promover las buenas prcticas de laboratorio y es un protocolo riguroso para asegurar la integridad cientfica de los resultados emitidos por el laboratorio.

El otro documento que el profesional encontrar es la Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativos empleados por el laboratorio clnico, publicada por la EMA (Entidad Mexicana de Acreditacin), el cual resulta un documento sencillo y prctico, que toma como base la informacin publicada en libros emitidos por alguna autoridad en la materia (por ejemplo: ICH, ILAC, ISO, IUPAC, NCCLS, IFCC), mtodos establecidos o autorizados por organismos cientficos nacionales o internacionales (ejemplo: NOM-199-SSA1- 2000), publicados en artculos o revistas especializadas, mtodos revisados por pares o publicados en directrices internacionales, regionales o nacionales, as como los mtodos de examen especificados por el fabricante del equipo. Aunque actualmente para fines de acreditacin la Entidad Mexicana de acreditacin acepta los ensayos con cualquiera de las dos aproximaciones, le corresponder al profesional del laboratorio tomar en cuenta los costos, y la complejidad de las dos propuestas para tomar una decisin correcta en la medicin de la imprecisin. A continuacin se explican las dos opciones.

AcreditacinISO 15189:2007Cmo hacerlo.fcil1. EP15-A2 User Verification of Performance for Precision and Trueness. Este documento debe utilizarse cuando se ha establecido un mtodo analtico inicialmente en un laboratorio clnico, con la finalidad de verificar el desempeo del mtodo antes de ser utilizado con muestras de pacientes, sin embargo, tambin puede emplearse vara verificar el desempeo de un mtodo despus de implementar Acciones Correctivas para Programa de Ensayos de Aptitud no aprobados. Para evaluar la precisin.

CLSI recomienda utilizar los documentos EP15-A y EP05-A2. EP05-A se utiliza para validar un mtodo contra los requisitos del usuario y es utilizado generalmente por proveedores de reactivos e instrumentos para demostrar la precisin de sus mtodos. En contraste EP15-A2 se emplea para verificar que el desempeo de un laboratorio es consistente con las especificaciones del fabricante.

AcreditacinISO 15189:2007Cmo hacerlo.fcilEvaluacin de la Imprecisin. Mtodo.

AcreditacinISO 15189:2007Cmo hacerlo.fcilEvaluacin de la Imprecisin. Mtodo. Donde :D = Nmero total de diasn = Nmero total de rplicas por diaXdr = Resultado por cada replica en el daXd = Promedio de todas las rplicas en el da.Repetibilidad utilizando Calcio Nivel 1 (mmol/L)La repetibilidad se estima utilizando la siguiente frmula:

Corrida / DaRplica 1Rplica 2Rplica 312.0152.0131.96322.0192.0021.97932.0251.9592.00041.9721.9501.97351.9811.6561.957

AcreditacinISO 15189:2007Cmo hacerlo.fcilEvaluacin de la Imprecisin. Primer Paso. Calcule la media de los replicados por da Reste la media a cada uno de los resultados Eleve al cuadrado el valor resultante.Media de las rplicas por da:La suma de las diferencias al cuadro es 0.0055 y sabemos que:D = 5 y n = 3Sr = 0.0055 (3 -1)Sr = 0.023 mmol/L

Promedio por da(R1- Promedio)2(R2- Promedio)2(R3- Promedio)21.9970.000320.000260.001162.0000.000360.000000.000441.9950.000920.001270.000031.9650.000050.000220.000061.9650.000270.000080.00006

AcreditacinISO 15189:2007Cmo hacerlo.fcilEvaluacin de la Imprecisin. Segundo Paso. El siguiente paso es calcular la varianza de los promedios diarios (Sb2) utilizando la siguiente ecuacin.D = Nmero total de dasXd = Promedio de todas las rplicas en el daX = Promedio de todos los resultadosUtilizando los valores de nuestro ejemplo, la media de todos los resultados es 1.984 mmol/L. En el da 1 la media de las tres rplicas es 1.997 (ver tabla 2), de manera que el cuadro de las diferencias es (1.997-1.984)2 = 0.000162.Tabla 3: Clculos para los siguientes das

AcreditacinISO 15189:2007Cmo hacerlo.fcilEvaluacin de la Imprecisin. Segundo Paso. Sumando los cuadrados de las diferencias tendremos un total de 0.00127. As, la varianza de los promedio diarios es:Sb2 = 40.00127 = 0.000318 Calculo de la Precisin Intra laboratorioPodemos realizar el clculo utilizando la siguiente ecuacinDonde:n = Nmero de rplicas por diaAs, utilizando los valores del ejemplo tendremos Evaluacin de los resultadosEl mtodo EP15-A2, se utiliza para verificar que el mtodo cumple con las especificaciones del fabricante, por lo tanto la si la repetibilidad y la DS son menores que las indicadas por el fabricante para el analito en particular, podemos afirmar que el ensayo es aceptado y no se requiere ninguna verificacin 2,3,4.

AcreditacinISO 15189:2007Cmo hacerlo.fcil2. PROTOCOLO PUBLICADO EN LA GUIA PARA LA VALIDACIN Y LA VERIFICACIN DE LOS PROCEDIMIENTOS DE EXAMEN CUANTITATIVOS EMPLEADOS POR EL LABORATORIO CLNICO. (ema.ac) Entidad Mexicana de Acreditacin Para evaluar la imprecisin de acuerdo al protocolo propuesto por la ema.ac, se puede aplicar alguna de las siguientes opciones:

Realizar el examen de un material (muestras de pacientes, muestras control, etc.) de valor conocido o no, analizado por lo menos 20 veces en forma continua, llamado intraserial o intracorrida o 20 veces en el transcurso del da (24 h) llamado intrada.

b) Utilizar 20 valores obtenidos uno cada da de la misma muestra de un paciente o bien obtenidos de una curva de un programa de control de calidad interno de 20 das diferentes y del mismo lote (interserial o intercorrida).

En ambos casos se debe calcular la media, la desviacin estndar y el Coeficiente de Variacin expresado en porcentaje.

Criterio de Aceptabilidad

Acorde al fabricanteLa precisin del mtodo obtenida por el laboratorio debe ser menor o igual a la precisin del mtodo que proporciona el fabricante.

En caso de que sea mayor, el laboratorio deber presentar la justificacin estadstica documentada de que no existe una diferencia significativa.

AcreditacinISO 15189:2007Cmo hacerlo.fcil2. PROTOCOLO PUBLICADO EN LA GUIA PARA LA VALIDACIN Y LA VERIFICACIN DE LOS PROCEDIMIENTOS DE EXAMEN CUANTITATIVOS EMPLEADOS POR EL LABORATORIO CLNICO. (ema.ac) Entidad Mexicana de Acreditacin Precisin acorde a criterios del Clinical Laboratory Improvement Amendments (CLIA).

Los resultados en la corrida intraserial o en la intrada tendrn menor precisin que la interserial, por lo tanto el criterio de aceptabilidad debe ser diferente.

Para la precisin intraserial o intrada, la desviacin estndar obtenida debe ser igual o menor a del error total permitido esto es:

DE intraserial o DE intrada 0,25 ET (error total permitido)

De manera similar para la precisin interserial, la desviacin estndar debe ser de o menor del error total, esto es:

DE interserial 0,33 ET (error total permitido)

Una mayor desviacin estndar implica un mayor coeficiente de variacin y por lo tanto una mayor precisin del mtodo analtico 5.

AcreditacinISO 15189:2007Cmo hacerlo.fcil2. PROTOCOLO PUBLICADO EN LA GUIA PARA LA VALIDACIN Y LA VERIFICACIN DE LOS PROCEDIMIENTOS DE EXAMEN CUANTITATIVOS EMPLEADOS POR EL LABORATORIO CLNICO. (ema.ac) Entidad Mexicana de Acreditacin Ejemplo:Tabla 4: Imprecisin de Calcio Nivel 1 Con los datos anteriores generamos la siguiente tabla:Tabla 5: Modelo para el Informe de la Imprecisin

AcreditacinISO 15189:2007Cmo hacerlo.fcil2. PROTOCOLO PUBLICADO EN LA GUIA PARA LA VALIDACIN Y LA VERIFICACIN DE LOS PROCEDIMIENTOS DE EXAMEN CUANTITATIVOS EMPLEADOS POR EL LABORATORIO CLNICO. (ema.ac) Entidad Mexicana de Acreditacin ANALISIS:

Es evidente que el protocolo EP15-A2 User Verification Of Performance For Precision And Trueness, resulta un tanto mas complejo que el propuesto en la Gua Para La Validacin Y La Verificacin De Los Procedimientos De Examen Cuantitativos Empleados Por El Laboratorio Clnico. Publicado por la (ema.ac) Entidad Mexicana de Acreditacin. Sin embargo, tambin es uno de los protocolos con mayor solidez metrolgica para evaluar la imprecisin, la dificultad que presenta del modelo matemtico es impactante de inicio pero basta con familiarizarse con la metodologa para entender que es muy prctico y til para la evaluacin del desempeo de los mtodos analticos; por otra parte, el modelo propuesto por la ema.ac, es mucho mas sencillo y no es menos confiable que el primero para evaluar la imprecisin. Ambos mtodos son herramientas estadsticas fundamentales que le permiten al profesional del laboratorio evaluar confiablemente el desempeo de sus mtodos analticos.

AcreditacinISO 15189:2007Cmo hacerlo.fcil2. PROTOCOLO PUBLICADO EN LA GUIA PARA LA VALIDACIN Y LA VERIFICACIN DE LOS PROCEDIMIENTOS DE EXAMEN CUANTITATIVOS EMPLEADOS POR EL LABORATORIO CLNICO. (ema.ac) Entidad Mexicana de Acreditacin CONCLUSIONES

Probablemente la actividad esencial del profesional del laboratorio es la medicin, lo hacemos todos los das, y en un mundo globalizado lo debemos hacer con base en estndares internacionales, de manera que nuestros resultados puedan tener trazabilidad y por lo tanto validez en cualquier pas. Dos herramientas bsicas y tiles son el modelo propuesto por el CLSI con el protocolo EP15-A2 User Verification Of Performance For Precision And Trueness, y el protocolo propuesto por la ema.ac en la Gua Para La Validacin Y La Verificacin De Los Procedimientos De Examen Cuantitativos Empleados Por El Laboratorio Clnico, el primero con mayor difusin internacional y probablemente con mayor aceptacin, sin embargo, el propuesto por la ema.ac. es interesante por su fcil aplicacin e interpretacin sin perder su validez metrolgica.

Es necesario realizar evaluaciones comparativas y prospectivas para saber cual de los mtodos propuestos refleja mejor el desempeo de los mtodos analticos.Independientemente del protocolo que decida emplear el usuario, no debe perderse de vista que esta actividad metrolgica siempre deber hacer con bases cientficas y con la responsabilidad suficiente de manera que puedan brindarse resultados confiables y siempre con la idea de medir correctamente en beneficio de nuestros pacientes.

AcreditacinISO 15189:2007Cmo hacerlo.fcil2. PROTOCOLO PUBLICADO EN LA GUIA PARA LA VALIDACIN Y LA VERIFICACIN DE LOS PROCEDIMIENTOS DE EXAMEN CUANTITATIVOS EMPLEADOS POR EL LABORATORIO CLNICO. (ema.ac) Entidad Mexicana de Acreditacin Bibliografa:

JCGM 200:2008. Vocabulario Internacional de Metrologa Conceptos Fundamentales y Generales y Trminos Asociados (VIM). Traduccin al Espaol de VIM 3.

2.Tholen D. CLSI EP Documents, CLSI evaluation protocols.August 2006. Recursos: Acceso el 20 de Julio 2011. www.mlo.online.com.

3. Chesher D, Evaluating Assay Precision. Clin Biochem Rev Vol 29 Suppl (i) August 2008.

4. Clinical and Laboratory Standards Institute. User verification of performance for precision and trueness; approved guideline second edition. CLSI document, EP15-A2. Wayne, PA, USA: CLSI; 2005.

5. Entidad Mexicana de Acreditacin (EMA). Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativos empleados por el laboratorio clnico, publicada. Mxico, Abril 2008.