INTRODUCCIÓN

El ácido úrico es un compuesto orgánico de carbono, nitrógeno, oxígeno e hidrógeno. Sufórmula química es C5H4N4O3.

Es un producto de desecho del metabolismo de nitrógeno en el cuerpo humano (el producto dedesecho principal es la urea), y se encuentra en la orina en pequeñas cantidades. En algunosanimales, como aves, reptiles y muchos artrópodos, es el principal producto de desecho, y seexpulsa con las heces; los animales que excretan mayoritariamente ácido úrico se denominanuricotélicos. El alto contenido de nitrógeno del ácido úrico es la razón por la que el guano estan valioso como fertilizante en la agricultura.

En la sangre humana, la concentración de ácido úrico comprendida entre 2,5 a 6 para la mujery hasta 7,2 para el hombre mg/dl es considerada normal por la Asociación Médica Americana,aunque se pueden encontrar niveles más bajos en los vegetarianos.

La gota en el ser humano está asociada con niveles anormales de ácido úrico en el sistema.

La saturación de ácido úrico en la sangre humana puede dar lugar a un tipo de cálculos renales(nefrolitiasis) cuando el ácido cristaliza en el riñón. Un porcentaje considerable de enfermos degota llegan a tener cálculos renales de tipo úrico.

El aumento de los niveles de ácido úrico en la sangre no sólo puede estar relacionado con lagota, sino que puede ser simplemente una hiperuricemia, que presenta algunos de lossíntomas anteriores o puede ser asintomática. Sin embargo cuanto mayor es el aumento deácido úrico en sangre mayores son las posibilidades de padecer afecciones renales, artríticas,etc.

OBJETIVOS:

Determinar la concentración de ácido úrico en humanos. Conocer el manejo del espectrofotómetro y del analizador semi- automatizado de bioquímica. Conocer técnicas de enzimología.

DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO

FUNDAMENTO TEÓRICO:

El ácido úrico es un metabolito de las purinas, ácidos nucleicos y nucleoproteínas. Habitualmente laconcentración de ácido úrico en suero varía de un individuo a otro de acuerdo a diversos factores talescomo: sexo, dieta, origen étnico, constitución genética, embarazo.Niveles anormales de ácido úrico en suero son índice de desorden en el metabolismo de las sustanciasque lo originan o de inadecuada eliminación.

MATERIALES y EQUIPOS:

Tubo de ensayo Guantes Quirúrgicos Tips Micro pipetas Gradillas Marcadores de cera Cubeta de cuarzo Eppendorf Espectrofotómetro Reactivo Stándar Baño María Agua Bidestilada Cronómetro Centrífuga

FUNDAMENTOS DEL METODO

El esquema reaccional es el siguiente:

ácido úrico + 2H O + O ⎯ alantoína + H O + CO2H O + 4 − AF + 3,5 − DHS ⎯ quinonimina rojaLa cantidad de ácido úrico se determina midiendo la absorbancia de este pigmento.UOD: uricasaPOD: peroxidasa4-AF: 4-aminofenazona3,5-DHS: sal sódica de 3,5-diclorohidroxibenceno sulfónico

REACTIVOS PROVISTOS

A. Reactivo A: solución conteniendo buffer Good pH 7,8 y la sal sódica de 3,5diclorohidroxibencenosulfónico (DHS).B. Reactivo B: solución conteniendo buffer Good pH 7,8, 4-aminofenazona (4-AF), uricasa (UOD),peroxidasa (POD), y ferrocianuro de potasio.S. Stándar: solución de ácido úrico 10mg/dl.

Concentraciones finalesBuufer Good................................................................ 50 mmol/lUOD............................................................................ ≥200 U/lPOD.............................................................................≥1000 U/l4-AF............................................................................0,10mmol/lFerrocianuro de potasio............................................... 6 mmol/lDHS............................................................................. 2,0mmol/l

REACTIVOS NO PROVISTOS:

Calibrador A plus por Wiener lab. Cuando se emplea la técnica automática.

INSTRUCCIONES PARA SU USO:

Standard: listo para usar.Reactivos A y B: listos para usar. Estos pueden usarse separadoso como Reactivoúnico mezclando 4partes deReactivo A + 1 parte de Reactivo B (ej. 4 ml Reactivo A + 1 mlReactivo B).PRECAUCIONES

Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro".No ingerir. Evitar el contacto con la piel y los ojos. En caso dederrame o salpicaduras, lavar conabundante agua la zonaafectada.Utilizar los reactivos guardando las precauciones habitualesde trabajo en el laboratorio de análisisclínicos.Todos los reactivos y las muestras deben descartarse deacuerdo a la normativa local vigente.

ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO

Reactivos Provistos: son estables en refrigerador (2-10°C) hasta la fecha de vencimiento indicada en lacaja. Una vezabiertos, no deben permanecer destapados y fuera del refrigeradordurante lapsosprolongados. Evitar contaminaciones.Reactivo único (premezclado): en refrigerador (2-10°C) esestable 1 mes a partir de la fecha de supreparación.

INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOSREACTIVOS

La dificultad en obtener los valores de los controles dentro delrango asignado (ej. Standatrol S-E 2niveles) es indicio deterioro de los Reactivos. En tal caso, desechar.La turbidez es indicio de deterioro de los Reactivos.Desechar cuando las lecturas del Blanco sean > 0,200 D.O.o las lecturas del Standard seananormalmente bajas.

MUESTRA:

Suero, plasma u orinaa) Recolección: se debe obtener suero o plasma de la manerausual. Separar el coágulo lo antes posible,dentro delas dos horas posteriores a la recolección. Si la muestra esorina, utilizar preferentemente fresca.b) Aditivos: en caso de que la muestra a emplear sea plasma,se recomienda únicamente el uso deheparina como anticoagulantepara su obtención.c) Sustancias interferentes conocidas:- Medicamentos: las sustancias fuertemente reductoras, talescomo el ácido ascórbico (vitamina C), laBuscapina (butilbromuro de hioscina), etc. en dosis elevadas interfieren. Portal razón debe suspenderse lamedicación, siempre que seaposible, 24 horas antes de la toma de muestra.- No se observan interferencias por bilirrubina hasta 10 mg/dl(100 mg/l), triglicéridos hasta 490 mg/dl (4,9g/l), hemoglobinahasta 180 mg/dl y heparina hasta 100 U/ml.Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de lasdrogas en el presente método.d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento:

Las muestras deben ser preferentemente frescas. En caso deno procesarlas en el momento, las muestrasde suero oplasma, pueden conservarse 3 días a 20-25°C, 7 días a 2-10°C o 6 meses a -20°C sinagregado de conservantes.Las muestras de orina pueden conservarse 4 días a 20-25°C a pH > 8. No refrigerar ni congelar.MATERIAL REQUERIDO (no provisto)

- Espectrofotómetro o fotocolorímetro.- Material volumétrico adecuado.- Tubos o cubetas espectrofotométricas de caras paralelas.- Baño de agua a 37°C.- Reloj.CONDICIONES DE REACCION

- Longitud de onda: 505 nm en espectrofotómetro o en fotocolorímetrocon filtro verde (490-530 nm).- Temperatura de reacción: 37°C o 18-25°C- Tiempo de reacción: 5 minutos a 37°C o 20 minutos a 18-25°C- Volumen de muestra: 20 ul- Volumen final de la reacción: 1,02 ml

Los volúmenes de Muestra y de Reactivo pueden disminuirseo aumentarse proporcionalmente (Ej: 50 ulde Muestra + 2,5 ml de Reactivo único o 10 ul + 500 ul).

PROCEDIMIENTO

BBLANCO

SSTÁNDAR

DDESCONOCIDO

REACTIVO 2,5ml 2,5ml 2,5mlMUESTRA ---------------------- ---------------------- 50µlSTÁNDAR ---------------------- 50 µl ----------------------

Incubar 5 minutos en baño de agua a 37 °C. Leer en espectrofotómetro a 505nm.

ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINALEl color de reacción final es estable dos horas, por lo que laabsorbancia debe ser leída dentro de estelapso.

CALCULO DE LOS RESULTADOS

CALCULO DE RESULTADOS

La concentración de proteínas se medirá mediante:[ ] = ×= /

Absorbencia del estándar = 0.228

Factor = 10 mg/dlAbs Standard = 10mg/dl0.228 = 43.8596mg/dlFactor = 43.8596mg/dlAbsorbencia del desconocido = 0.105

Finalmente:

[ ] = × = 43.8596 x 0.105 = . /OBSERVACIÓN:

Observamos que luego de realizar todos los procesos anteriores la coloración en los tubos deensayo Blanco, Desconocido y Stándar son transparente, rosa baja y rosa, respectivamente.

CONCLUSIÓN:

Se concluye que la persona tiene 4,61 mg/dl de ácido úrico en su interior.

WEBGRAFIA

http://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_%C3%BArico http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003476.htm http://geosalud.com/Nutricion/dietaacidourico.htm http://www.directoalpaladar.com/salud/acido-urico-que-es-y-como-prevenir-su-exceso-con-las-

comidas http://misremedios.com/dolencias/acido-urico/