63820359 Reporte 3 Bioquimica

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE INGENIERÍA

ESCUELA DE INGENIERÍA QUÍMICA

ÁREA DE QUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

SECCIÓN B

ING. ERWIN ORTÍZ

PRÁCTICA NO.3

PROPIEDADES QUÍMICAS DE PROTEÍNAS

BRENDA MARÍA MONTERROSO WAIGHT

200915024

GUATEMALA, 29 de agosto de 2011

A. OBJETIVOS

1. Identificar los distintos tipos de proteínas mediante pruebas

cualitativas de color y/o coagulación.

2. Determinar a partir de las pruebas realizadas, un grupo en

específico en las cadenas de las proteínas.

3. Determinar el mecanismo de funcionamiento de las distintas

pruebas cualitativas realizadas a las proteínas.

B. RESUMEN

En la práctica no. 3 se realizó distintas pruebas para identificar a los

proteínas a partir de cambios colorimétricos y físicos.

Para ello se realizaron 9 pruebas con 4 distintas proteínas: gelatina,

caseína, clara de huevo y peptona. Estas pruebas fueron: Prueba de Elrich

Diazo, de color o Biuret, Azufre Reducido, Test de Molish, precipitación con

NaCl, precipitación de azúcares, precipitación por FeCl3, precipitación por ácido

clorhídrico y precipitación por ácido nítrico.

Para determinar la positividad de cada reacción, se baso en los cambios de

color esperados y en otros casos observar si hubo o no coagulación de la

proteína, según la teoría esperada.

C. RESULTADOS

a. Prueba Erich Diazo

Tabla no.1

“Prueba de Erich Diazo”

Proteína Conclusión Gelatina Negativa

Caseína Positiva

Clara de Huevo Positiva

Peptona Positiva

Fuente: Pruebas de Identificación

b. Prueba de Color

Tabla no.2

“Prueba de Color”

Proteína Conclusión

Gelatina Negativa

Caseína Positiva


Peptona negativa


c. Prueba de Azufre Reducido

Tabla no.3

“Prueba de Azufre Reducido”


Gelatina Negativa

Caseína Negativa


Peptona negativa


d. Prueba de Molish

Tabla no.4

“Prueba de Molish”


Gelatina Positiva

Caseína Positiva


Peptona Positiva


e. Prueba de NaCl al 5%

Tabla no.5

“Prueba deNaCl al 5%”


Gelatina Negativa

Caseína Negativa


Peptona Negativa


f. Prueba de Precipitación de Azucares

Tabla no.6

“Prueba de Precipitación de Azucares”


Gelatina Negativa.

Caseína Negativa


Peptona positiva


g. Prueba de Precipitación (FeCl3)

Tabla no.7

“Prueba de Precipitación (FeCl3)”


Gelatina Positiva.

Caseína Positiva


Peptona Negativa


h. Prueba de Ácido (HCl)

Tabla no.8

“Prueba de Ácido (HCl)”


Gelatina Negativa.

Caseína Positiva

Clara de Huevo Positiva.

Peptona Negativa


i. Prueba de Ácido (HNO3)

Tabla no.1

“Prueba de Ácido (HNO3)”


Gelatina Positiva.

Caseína Positiva


Peptona Negativa


D. PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN

Prueba no. 1

Nombre de la Prueba

Erich Diazo

Criterio de la Prueba

La presencia de grupos imidazol o fenoles en una muestra se reconocen por la

reacción con el ácido diazobencenosulfónico (diazida del ácido sulfanílico), y forman

productos de sustitución de color rojo al alcalanizar la muestra. [Ref. no. 1, pág. 33]

Reacción

[Ref. no. 1]

Observación

Gelatina Se separo en dos fases.

Caseína Cambio a color rojo.

Clara de Huevo Cambio a color rojo.

Peptona Cambio a color rojo.

Conclusión

Gelatina Negativa

Caseína Positiva


Peptona Positiva

Prueba no. 2

Nombre de la Prueba

Color


Esta prueba se basa en la reacción de Sulfato de Cobre (CuSO4) con compuestos

que tengan dos o más enlaces peptídicos, en un medio alcalino (NaOH). El

producto es un complejo de color violeta, cuya intensidad depende de la cantidad

de enlaces peptídicos presentes. Este complejo de coordinación entre los iones

CU+2 y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de

los enlaces peptídicos. Los dipéptidos y los aminoácidos dan esta prueba negativa.

[Ref. no. 1 ]

Reacción

Observación

Gelatina Color celeste dos fases.

Caseína Color púrpura y otra fase azul.

Clara de Huevo Dos fases, violeta e incoloro.

Peptona Color rojizo.

Conclusión

Gelatina Negativa

Caseína Positiva


Peptona negativa

Prueba no.3

Nombre de la Prueba

Prueba de Azufre Reducido o grupos SH


La proteína se separa mediante un álcali del azufre de los aminoácidos, el cual al

reaccionar con una solución de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo.

Si aparece una coloración negra (de sulfuro de plomo) en el precipitado, la reacción

será positiva, indicando la presencia de azufre. [Ref. no. 4]

Reacción

Observación

Gelatina Dos fases: verde e incoloro

Caseína Se formo precipitado blanco.

Clara de Huevo Se formo varias fases sólidas: café, negro y rojo.

Peptona Formación de precipitado, color amarillo.

Conclusión

Gelatina Negativa

Caseína Negativa


Peptona negativa

Prueba no. 4

Nombre de la Prueba

Prueba o Test de Molish


Reacción cualitativa entre el aminoácido con el -naftol y el ácido sulfúrico, dando

como resultado positivo con un anillo violeta al determinar glúcidos. [Ref. no.7 ]

Reacción

Observación

Gelatina Se formó una fase morada.

Caseína Se formo un anillo morado en la interfase.

Clara de Huevo Anillo morado en la interfase.

Peptona Formación de anillo morado en la itnerfase.

Conclusión

Gelatina Positiva

Caseína Positiva


Peptona Positiva

Prueba no. 5

Nombre de la Prueba

NaCl al 5%


De las proteínas globulares, las albúminas son solubles en agua pura, pero

también son solubles en soluciones salinas. Las globulinas son insolubles en agua

pura, pero se disuelven en soluciones neutras de sales como el cloruro de sodio.

Para permanecer en solución las globulinas necesitan cierta cantidad de sal, al

disminuir la concentración de sal, la globulina precipita. Las proteínas coaguladas

son insolubles en agua, solución salina, ácidos y álcalis diluidos. [Ref. no. 3]

Reacción

La reacción involucra un rompimiento de enlaces coordinados entre diferentes cadenas laterales de los aminoácidos constituyentes de la proteína en los cuales estos al romperse no regresan a su forma original lo que deriva en la perdida de la forma globular de la proteína.

Observación

Gelatina Se formó dos fases.

Caseína No hubo cambios.

Clara de Huevo No hubo cambios.

Peptona Se formo una fase de color amarillo..

Conclusión

Gelatina Negativa

Caseína Negativa


Peptona Negativa

Prueba no. 6

Nombre de la Prueba

Precipitación de Azucares


Si la proteína se encuentra en una solución a un pH mayor a su punto isoeléctrico,

tiene carga negativa, y en este caso, reacciona con cationes de metales, y el

producto (un proteinato del catión) precipita. En este caso al añadir el NaOH se

incrementa el pH, al añadir el CuSO4, la proteína reacciona y precipita. Calentar a

60oC, acelera la coagulación de las proteínas. [Ref. no. 1]

Reacción

proteína-COO-1 + Cu+2 2proteína-COO-1Cu+2 (Precipitado)

Observación

Gelatina Dos fases, una amarilla y se formó

precipitado. .

Caseína Se oscureció (morado).

Clara de Huevo Presento precipitado morado en el fondo.

Peptona Se formo precipitado morado.

Conclusión

Gelatina Negativa.

Caseína Negativa


Peptona positiva

Prueba no. 7

Nombre de la Prueba

Precipitación de FeCl3


Si la proteína se encuentra en una solución a un pH mayor a su punto isoeléctrico,

tiene carga negativa, y en este caso, reacciona con cationes de metales, y el

producto (un proteinato del catión) precipita. Para este caso se añade FeCl3 y se

calienta a 60 [Ref. no.1]

Observación

Gelatina Se formo precipitado amarillo.


Clara de Huevo Dos fases, una transparente y otra naranja. En ambas fases hay partículas

en suspensión.

Peptona Amarillo claro.

Conclusión

Gelatina Positiva.

Caseína Positiva


Peptona Negativa

Prueba no. 8

Nombre de la Prueba

Ácido (HCl)


Toda proteína si se encuentra a un pH por debajo del punto isoeléctrico, tiene

carga positiva, y reacciona con aniones de ácidos. El producto es insoluble en la

solución y precipita. [Ref. no.1]

Observación

Gelatina Color amarillo verdoso, una sola fase


Clara de Huevo Dos fases, una líquida y una sólida

Peptona Una sola fase de color rojizo

Conclusión

Gelatina Negativa.

Caseína Positiva

Clara de Huevo Positiva.

Peptona Negativa

Prueba no. 9

Nombre de la Prueba

Ácido HNO3


Toda proteína si se encuentra a un pH por debajo del punto isoeléctrico, tiene

carga positiva, y reacciona con aniones de ácidos. El producto es insoluble en la

solución y precipita. [Ref. no.1]

Observación

Gelatina Dos fases: una sólida y una líquida, de

color amarillo lechoso.


Clara de Huevo Se formo espuma amarillo lechoso.

Peptona Una sola fase de color amarillo claro.

Conclusión

Gelatina Positiva.

Caseína Positiva


Peptona Negativa

E. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

En la práctica no. 3, se realizaron 9 pruebas cualitativas para identificar y

estudiar las propiedades de 4 proteínas: gelatina, caseína, clara de huevo y

peptona.

Las proteínas son cadenas de distintas secuencias de aminoácidos. A

los enlaces entre los distintos aminoácidos entre el grupo carboxilo y el grupo

amino se le conoce como péptido.

La primera prueba realizada fue la de Elrich Diazo, la cual se utiliza para

identificar el grupo imidazol o fenol, provocando un cambio de color rojo. Por

ello la prueba para la caseína, albúmina y peptona es positiva.

La segunda prueba realizada fue la de color o Biuret. Esta prueba

consiste en agregar CuSO4 a la proteína previamente alcanizada con NaOH.

En esta prueba las muestras de caseína y albúminca (clara de huevo) se

tornaron entre color morado y violeta por lo que se puede concluir que es

positiva. Sin embargo para el caso de la gelatina y la peptona, no hubo cambio

para la primera y el color cambio a rojizo para la segunda, por lo que la prueba

es negativa.

La tercera prueba es el test de azufre reducido, la cual identifica la

presencia de enlaces de azufre en la proteína a partir del precipitado de sulfato

de plomo de color negro-gris. Para este caso, la prueba es positiva solo para la

albúmina de la clara de huevo.

La prueba de Molisch es usado para la identificación de glúcidos y se

manifiesta por medio de la formación de un anillo de color morado en la

interfase. En la práctica la prueba es positiva para las 4 proteínas, lo que indica

que la presencia de glúcidos o carbohidratos en su cadena.

La prueba de NaCl, es una prueba de precipitación salina, que identifica

a las proteínas a partir de su solubilidad. Si la proteína es albúmina: es soluble

en una solución salina y por el contrario, si es globulina no es soluble en sal.

Las proteínas que son solubles en medio acuoso, forman puentes de

hidrógeno. Al agregar sal, ésta libera las moléculas de agua unidas a la

proteína y por lo que aumenta la interacción proteína – proteína y precipita.

En la práctica, para el caso de la clara de huevo, el resultado es positivo,

debido a que como es albúmina, soluble en solución salina, no presento

cambio.

Las pruebas de precipitación por metales, consiste en incrementar el pH

de la solución, para que la proteína se cargue negativamente, y así los iones

metálicos reaccionan con los grupos carboxilo de la proteína, los cuales la

hidrolizan para una posterior precipitación. En la práctica en la prueba de

precipitación de azucares se utilizo el sulfato de cobre con hidróxido de sodio; y

además se calentó la muestra a 60oC. El proceso de calentamiento se utiliza

para acelerar la coagulación de la proteína y así su precipitación, esto debido a

que por sí sola, la proteína en presencia del sulfato de cobre no precipita

inmediatamente, solo cambia a color violeta como se observa en la prueba de

Biuret o de color. Por lo tanto esta prueba es positiva para la clara de huevo

como para la peptona únicamente.

En la prueba de precipitación con cloruro férrico, la prueba dio positivo para la

gelatina, la caseína y la clara de huevo.

Las pruebas de precipitación por ácidos fuertes, consisten en agregar el

ácido a la proteína, para disminuir el pH debajo de su punto isoeléctrico para

cargar positivamente la proteína y con ello hidrolizar la proteína y provocar una

precipitación del producto entre la reacción con los aniones ácidos. Así para el

caso de la práctica, al utilizar ácido clorhídrico, la prueba fue positiva para la

caseína y la clara de huevo. En el caso del acido nítrico, la prueba fue positiva

para la gelatina, caseína y clara de huevo.

F. CONCLUSIONES

1. Las pruebas realizadas para identificar proteínas son de carácter

colorimétrico y de separación física.

2. La prueba de azufre reducido, se utiliza para identificar las proteínas que

poseen azufre en los enlaces de las cadenas de aminoácidos.

3. La prueba de Molish, fue la única prueba positiva para las cuatro

proteínas utilizadas en la práctica.

4. Las pruebas de precipitación al tratar con soluciones ácidas o bases, la

proteína se disuelve y se hidroliza, por lo que los enlaces peptídicos se

rompen para dar lugar a la coagulación de la proteína. En el caso de la

precipitación salina, la sal provoca un aumento en las interacciones

proteína-proteína por las cuales coagula.

5. OBSERVACIONES

a. Prueba de Elrich Diazo

b. Prueba de Color

c. Prueba de Azufre Reducido

d. Prueba de Molish

e. Prueba de NaCl

f. Prueba de Precipitación de Azúcares

g. Prueba de Precipitación FeCl3

h. Prueba de Acido (HCl)

i. Prueba de Ácido (HNO3)

6. REFERENCIAS

1. Manual de Experimentos de Laboratorio para Bioquímica. [en línea]

(28.08.11)

http://books.google.com.gt/books?hl=es&lr=&id=8SAtkthrFEkC&oi=fnd&

pg=PR15&dq=prueba++de+sakaguchi+para+proteinas+y+aminoacidos&

ots=oDjjqoo078&sig=JjvU8yogKnjSTEDRJMfzkO9WhhI#v=onepage&q&

f=true

2. Reconocimiento de Proteínas [en línea] (28.08.2011)

http://www.angelfire.com/scifi/anarkimia/Reconocimiento%20de%20Prot

enas.htm

3. Prácticas de Bioquímica Descriptiva. [En línea] (28.08.2011)

http://books.google.com.gt/books?id=xv8LNjwigGQC&pg=PA168&dq=pr

ueba++de+acido+nitrico+en+proteinas&hl=es&ei=WyhbTpP4Jo6gtwe7vI

G7Dg&sa=X&oi=book_result&ct=result&resnum=3&ved=0CDQQ6AEwA

g#v=onepage&q&f=false

4. Laboratorio de Bioquímica: una visión práctica. [En línea] (28.08.2011)

http://books.google.com.gt/books?hl=es&lr=&id=dAbMDrXcTHsC&oi=fnd

&pg=PA3&dq=prueba++de+sakaguchi+para+proteinas+y+aminoacidos&

ots=ZCV8JvHpAF&sig=m1L-

zfSytpXomURxPDhG5Adk3O4#v=onepage&q&f=false

5. Reacción de molish. [en línea] (28.08.11)

http://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_de_Molisch

http://books.google.com.gt/books?hl=es&lr=&id=8SAtkthrFEkC&oi=fnd&pg=PR15&dq=prueba++de+sakaguchi+para+proteinas+y+aminoacidos&ots=oDjjqoo078&sig=JjvU8yogKnjSTEDRJMfzkO9WhhI#v=onepage&q&f=true




http://www.angelfire.com/scifi/anarkimia/Reconocimiento%20de%20Protenas.htm

http://www.angelfire.com/scifi/anarkimia/Reconocimiento%20de%20Protenas.htm

http://books.google.com.gt/books?id=xv8LNjwigGQC&pg=PA168&dq=prueba++de+acido+nitrico+en+proteinas&hl=es&ei=WyhbTpP4Jo6gtwe7vIG7Dg&sa=X&oi=book_result&ct=result&resnum=3&ved=0CDQQ6AEwAg#v=onepage&q&f=false




http://books.google.com.gt/books?hl=es&lr=&id=dAbMDrXcTHsC&oi=fnd&pg=PA3&dq=prueba++de+sakaguchi+para+proteinas+y+aminoacidos&ots=ZCV8JvHpAF&sig=m1L-zfSytpXomURxPDhG5Adk3O4#v=onepage&q&f=false




http://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_de_Molisch

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