Nombre Agar Diferencial o Selectivo

Composición Fundamento

Staphilococcus

Aureus

Gram (+)

Agar Sal y Manitol

Fórmula (en gramos por litro)

Extracto de carne 1.0

Pluripeptona 10.0

d-Manitol 10.0

Cloruro de sodio 75.0

Agar 15.0

Rojo de fenol 0.025

Una alta concentración de sal promueve el crecimiento de algunos organismos mientras inhibe el crecimiento de otros. AMS es un medio diferencial porque contiene el azúcar manitol y el indicador de pH rojo de fenol. Los organismos que pueden fermentar el manitol liberan subproductos ácidos, que causan un cambio de color. El rojo de fenol presenta un color rojo cereza por arriba de pH 8.5, un color amarillo rojizo desde un pH 6.9 a 8.5, y un amarillo brillante por debajo de un pH de 6.9. Aunque tanto el Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus aureus puede tolerar el alto contenido de sal en el AMS, solamente S. aureus puede fermentar el manitol, causando que el rojo de fenol vire al amarillo.

Microorganismos Crecimiento Características de las colonias

Staphylococcus aureus ATCC 25923 Excelente Amarilla

Staphylococcus epidermidis ATCC

14990 Bueno Roja

Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido Inhibido

Klebsiella pneumoniae ATCC

700603 Inhibido Inhibido

Salmonella spp.

Gram (-)

Agar Verde

Brillante

Fórmula (en gramos por litro)

Pluripeptona 10.0

Extracto de levadura 3.0

Cloruro de sodio 5.0

Lactosa 10.0

Sacarosa 10.0

Rojo fenol 0.08

Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella spp., En el medio de cultivo, la pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente de nitrógeno, vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los hidratos de carbono fermentables, el rojo fenol es el indicador de pH, que vira al amarillo cuando hay producción de ácido a partir de la fermentación de azúcares, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el verde brillante actúa como agente selectivo.}

Microorganismos Características de las colonias

Escherichia coli ATCC 25922 Amarillo-verdosas sobre fondo amarillento

Salmonella enteritidis ATCC 13076 Rosas, blancas o transparentes sobre fondo rojo

Salmonella typhi Crecimiento inhibido

Salmonella typhimurium ATCC 14028 Rosas, blancas o transparentes sobre fondo rojo

Shigella flexneri. ATCC 12022 Crecimiento inhibido

Staphylococcus aureus ATCC 25923 Crecimiento inhibido

Escherichia Coli

Gram (-)

Agar de Acetato

Fórmula (en gramos por litro)

Acetato de sodio 2.0

Sulfato de magnesio 0.2

Cloruro de sodio 5.0

Fosfato de amonio 1.0

Fosfato dipotásico 1.0

Azul de bromotimol 0.08

Agar 14.8

Es un medio de cultivo que contiene una mezcla de sales en la cual, el acetato de sodio es la única fuente de carbono. No posee azúcares ni tampoco inhibidores del crecimiento bacteriano Un microorganismo que es capaz de usar acetato como su única fuente de carbono, utiliza también las sales de amonio como su única fuente de nitrógeno. Debido a la utilización de sales de amonio, se libera amoníaco, que alcaliniza el medio, y esto produce un viraje del indicador azul de bromotimol del color verde al color azul. La mayoría de las enterobacterias utilizan el acetato como única fuente de carbono, excepto Shigella spp., Proteus spp., y Providencia spp. Escherichia coli y Shigella spp., son enterobacterias que presentan gran homología entre sí, y este medio de cultivo es útil para diferenciarlas, especialmente a Escherichia coli,biotipo A-D, inmóvil, anaerogénico, de Shigella spp.

Microorganismos Crecimiento Apariencia

E. coli ATCC 25922 Bueno a excelente Azul

K. pneumoniae ATCC 700603 Bueno a excelente Azul

S. typhimurium ATCC 14028 Bueno a excelente Azul

S. flexneri ATCC 12022 Pobre a bueno Verde

Bacillus subtilis

Gram (+)

Agar Yema de Huevo

o Agar Selectivo B.cereus

Fórmula (en gramos por litro)

Manitol 10.0

Cloruro de sodio 2.0

Sulfato de magnesio 0.1

Fosfato disódico 2.5

Fosfato monopotásico 0.25

Azul de bromotimol 0.12

Piruvato de sodio 10.0

Agar 14.0

En el medio de cultivo, el contenido de peptona es bajo (0.1%), y la adición de piruvato de sodio y emulsión de yema de huevo mejora el aislamiento y esporulación de esta bacteria. Para verificar la utilización del manitol, se usa un indicador de pH, azul de bromotimol. Este medio es selectivo, por el agregado del suplemento para Bacillus cereus (código B03-606-32) con el que se obtiene una concentración final de 100 U de Polimixina B por ml de medio.El diagnóstico primario se basa en la morfología y color de la colonia, en la precipitación de la lecitina hidrolizada y en la falta de utilización del manitol por Bacillus cereus. Las colonias típicas de B. cereus son crenadas, filamentosas de aproximadamente 5 mm de diámetro a las 24 horas de incubación, y tienen un color turquesa (peacock blue) rodeado por un precipitado de hidrólisis de yema de huevo. A las 48 horas de incubación presentan el color con centro grisáceo. Estos hallazgos diferencian B. cereus de B. subtilis y B. licheniformis, pero pueden no diferenciar B. cereus de otras especies de Bacillus, tales como B. thuringiensis, B. anthracis, B. mycoides, y en estos casos, será necesario realizar mas ensayos para su identificación.

Microorganismos Crecimiento

Bacillus cereus ATCC 10876 Bueno

Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bueno

Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido

Bacillus subtilis ATCC 6633 Bueno,

Klebsiella

pneumonae

Gram (-)

Agar Verde

Brillante

Fórmula (en gramos por litro)

Pluripeptona 10.0

Extracto de levadura 3.0

Cloruro de sodio 5.0

Lactosa 10.0

Sacarosa 10.0

Rojo fenol 0.08

Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella spp., En el medio de cultivo, la pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente de nitrógeno, vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los hidratos de carbono fermentables, el rojo fenol es el indicador de pH, que vira al amarillo cuando hay producción de ácido a partir de la fermentación de azúcares, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el verde brillante actúa como agente selectivo.}

Microorganismos Características de las colonias

Salmonella typhimurium ATCC 14028 Rosas, blancas o transparentes sobre fondo rojo

Klebsiella pneumonae ATCC 13883 Colonias mucoides amarillas a verdes.

Shigella flexneri. ATCC 12022 Crecimiento inhibido

Staphylococcus aureus ATCC 25923 Crecimiento inhibido

Shigella Flexneri

Gram (-)

Agar Mac Conkey

Fórmula (en gramos por litro)

Pluripeptona 5.0

Extracto de carne

5.0

Lactosa 10.0

Mezcla de sales biliares

8.5

Citrato de sodio 8.5

Tiosulfato de sodio

8.5

Citrato férrico 1.0

Agar 13.5

Verde brillante 0.00033

Rojo neutro 0.025

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp. Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la formación de ácido sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio. Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obteniéndose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo. Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.. La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formación de sulfuro de hierro. Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en Selenito caldo (B02-120-05).

Microorganismos Colonias

Salmonella typhimurium ATCC 14028 Transparentes, centro negro

Shigella flexneri Incoloras

Shigella sonnei Incoloras

Proteus mirabilis ATCC 43071 Transparentes, centro negro

Escherichia coli ATCC 25922 Rosadas a rojas con halo turbio

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas cremosas y mucosas

Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, de muy escaso crecimiento

Enterobacter

cloacae

Gram (-)

Agar

Eosina Azul de Metileno

Fórmula (en gramos por litro)

Agar 13.5 g

Azul de metileno

0.065 g

Eosina Y 0.4 g

Fosfato dipotásico

2.0 g

Lactosa 5.0 g

Peptonas 10.0 g

Sacarosa 5.0 g

El medio de cultivo eosina y azul de metileno agar es selectivo y diferencial para el aislamiento de bacilos entéricos que permite una diferenciación entre las colonias de organismos fermentadores de lactosa y aquellos que no la fermentan. La presencia de sacarosa permite para ciertos miembros del grupo coliforme, fermentarla con más facilidad que la lactosa. Las colonias lactosa positivas son verdes con brillo metálico o poseen centros oscuros con periferias transparentes incoloras , mientras que aquellas que son negativas en lactosa o sacarosa son rosa pálido translucidas.

Microorganismos Crecimiento

Escherichia coli ATCC 25922 Colonias medianas azul a morado con brillo metálico verdoso.

Enterobacter aerogenes ATCC 13048 o Enterobacter cloacae ATCC 13047

Colonias grandes con centro oscuro y bordes rosados, generalmente sin brillo metálico

Salmonella typhimurium ATCC 14028 o Shigella flexneri ATCC 12022 ó 9199

Colonias medianas transparentes , incoloras a rosa

Proteus mirabilis ATCC 43071 Transparentes o rosadas

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Colonias mucosas rosadas- purpuras

Staphylococcus aureus ATCC 25923 o Enterococcus faecalis ATCC 29212

Inhibición total o colonias puntiformes

Leuconostoc

Gram (+)

Agar Sangre

Fórmula (en gramos por litro)

Infusión de músculo de corazón

375.0

Peptona 10.0

Cloruro de sodio 5.0

Agar 15.0

Leuconostoc se desarrolla bien en placas de agar sangre, es de forma esférica o lenticular y mide de 0,5 a 0,7 µ de ancho por 0,7 a 1 µ de longitud. La temperatura óptima para su desarrollo es entre 20 y 30º C, con un pH entre 4,4 y 5. En la superficie del agar son a-hemolíticas o no hemolítica, por lo que puede confundirse con otros Streptococcus grupo viridans -razón por la que el laboratorio evaluó resistencia a vancomicina por difusión-, Enterococcus o Lactococcus sp. El 30% de estas bacterias pueden reaccionar con antisueros contra grupo D

2,8.

Proteus mirabilis

Gram (-)

Agar

Sulfito de Bismuto

Fórmula (en gramos por litro)

Agar 20.0 g

Dextrosa 5.0 g

Extracto de carne

5.0 g

Fosfato de sodio

4.0 g

Peptonas 10.0 g

Sulfato ferroso 0.3 g

Sulfito de bismuto (indicador)

8.0 g

La presencia de sulfito de bismuto y de verde brillante inhiben el crecimiento de bacterias Gram positivas y de la mayoría de las bacterias Gram negativas. La producción de sulfuro de hidrógeno se manifiesta en el centro de la colonia por un precipitado negro y un halo negro grisáceo con brillo metálico por la reacción de los iones bismuto con el sulfuro de hidrógeno.

Microorganismos Crecimiento

Salmonella typhi ATCC 19430 Colonias con centro negro y bordes claros, a las 48 h con halo negro grisáceo y brillo metálico.

Salmonella enteritidis ATCC 13076 Colonias negras a verdes

Salmonella typhimurium ATCC 14028 Colonias negras a verdes.

Proteus mirabilis ATCC 12453 Colonias pequeñas sin Swarming (crecimiento en olas) verde pálido a veces mucoides

Escherichia coli ATCC 25922 Crecimiento inhibido o colonias verdes

Yersinia

enterocolitica

Gram (-)

Agar CNI Fórmula (en gramos por litro)

Peptona de caseina 10.0

Peptona de carne 10.0

Extracto de levadura 2.0

Manitol 20.0

Cloruro de sodio 1.0

Sulfato de magnesio 0.01

Piruvato de sodio 2-0

Agar 12.5

Mezcla de sales biliares 1

Rojo Neutro 0.03

Cristal violeta 0.001

Varios antibióticos (Suplemento selectivo para Yersinia (CIN) así como el Violeta cristal y el desoxicolato inhiben ampliamente la flora acompañante perturbante. Por otra parte, una base nutritiva de alto valor favorece, conjuntamente con el piruvato, el crecimiento de las Yersinias. Éstas degradan el manitol existente formando ácido, de tal forma, que sus colonias toman un color rojo debido al viraje del indicador Rojo neutro. Las Yersinias crecen como colonias con un centro rojo oscuro y un halo transparente. El tamaño de las colonias, la anchura del borde de las mismas y la estructura superficial, pueden variar dependiendo del serotipo. Ciertos gérmenes acompañantes (por ejemplo algunas Enterobacteriáceas y Pseudomonas) también pueden aparecer en el medio pero con un crecimiento escaso.

Microorganismos Crecimiento Centro rojo en las colonias

Yersinia enterocolitica ATCC 9610 Yersinia enterocolitica ATCC 35669

Bueno/muy bueno Positivo

Escherichia coli ATCC 25922 Nulo

Salmonella typhimurium ATCC 14028 Nulo

Enterobacter cloacae ATCC 13047 Nulo/ligero

Staphylococcus aureus ATCC 25923 Nulo

Diferenciación Salmonella y

Shiguella

Agar

Salmonella Shiguella

Fórmula (en gramos por litro)

Pluripeptona 10.0

Extracto de carne 5.0

Lactosa 10.0

Mezcla de sales biliares

8.5

Citrato de sodio 8.5

Tiosulfato de sodio 8.5

Citrato férrico 1.0

Agar 13.5

Verde brillante 0.00033

Rojo neutro 0.025

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. La selectividad, esta dada por las sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Grampositivas, de la mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteusspp. Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la formación de ácido sulfhídrico a

partir del tiosulfato de sodio

NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50C y distribuir unos 20 ml por placa. Secar la superficie del medio unos minutos en la estufa.

Microorganismos Características de las colonias

Escherichia coli ATCC 25922 Cremiento de colonias rosadas o rojas

Klebsiella Pneumonae ATCC 700603 Colonias rosadas cremosas y mucosas

Salmonella typhimurium ATCC 14028 Colonias Transparentes, centro negro

Shigella flexneri. ATCC 12022 Colonias Transparentes

Proteus mirabilis Colonias Transparentes, centro negro

Diferenciación de Enterobacterias

Agar TSI (Triple Sugar -

Iron)

Fórmula (en gramos por litro)

Agar 20.0 g

Dextrosa 5.0 g

Extracto de carne

5.0 g

Fosfato de sodio

4.0 g

Peptonas 10.0 g

Sulfato ferroso 0.3 g

Sulfito de bismuto (indicador)

8.0 g

El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe

+3 los cuales se combinan con el ácido

sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador

rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido.

El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal

de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.

Bibliografia Consultada

http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/sangreagarbase.htm

http://www.articlearchives.com/manufacturing/food-mfg-dairy-product-cheese/1294421-1.html

http://www.biol.unlp.edu.ar/microbiologiagral/problemas01-08.doc

http://tegra.lasalle.edu.co/dspace/bitstream/10185/1222/1/13961076.pdf

http://80.37.246.49/ScharlabDades/Productos/descargarpdf.php?pag=38&pm=803

http://www.alimentariaonline.com/apadmin/img/upload/MLC006_quesoprobioWSF.pdf

http://www.farmacopea.org.mx/consulta/dispmed/DMD016.pdf

http://www.farmacopea.org.mx/consulta/dispmed/DMD016.pdf

Tubo Microorganismo

Tubo 1 Sin inoculo

Tubo 2 Escherichia coli

Tubo 3 Enterobacter cloacae

Tubo 4 Klebsiella pneumonae

Tubo 5 Pseudomona aeruginosa

Tubo 6 Shalmonella Thyphi

Tubo 7 Shiguella sonnei

Hecho por:

Guillermo Mercado Torres

Orlando Fabrizio Delgado Mota

Antonio Dominguez Garza