repositorio.uteq.edu.ec · 2020. 9. 10. · i UNIVERSIDAD TÉCNICA ESTATAL DE QUEVEDO FACULTAD...

i

UNIVERSIDAD TÉCNICA ESTATAL DE QUEVEDO

FACULTAD CIENCIAS DE LA INGENIERIA

CARRERA INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

Proyecto de Investigación previo

a la obtención del título de

Ingeniero Agroindustrial.

Proyecto de Investigación

“Identificación de la concentración mínima inhibitoria (cmi) de los aceites esenciales

cymbopogon ciratus (hierba luisa) y zingiber officinale (jengibre) en hongos adheridos a

la annona muricata l. (guanábana) para prolongar su vida útil”

Autora

Verónica Liseth Zamora Rodríguez

Directora del proyecto de investigación

Ing. MS.c. Marlene Medina Villacís

Quevedo - Ecuador

2017

ii

DECLARACIÓN DE AUTORÍA Y CESIÓN DE DERECHOS

Yo, Verónica Liseth Zamora Rodríguez, declaro que el trabajo aquí descrito es de mi

autoría; que no ha sido previamente presentado para ningún grado o calificación profesional;

y, que he consultado las referencias bibliográficas que se incluyen en este documento.

La Universidad Técnica Estatal de Quevedo, puede hacer uso de los derechos

correspondientes a este trabajo, según lo establecido por la Ley de Propiedad Intelectual, por

su Reglamento y por la normatividad institucional vigente.

f. _____________________________

Verónica Liseth Zamora Rodríguez

C.C. # 0941573909

iii

CERTIFICACIÓN DE CULMINACIÓN DEL PROYECTO DE INVESTIGACIÓN

La suscrita, Ing. M.Sc. Marlene Medina Villacís, Docente de la Universidad Técnica Estatal

de Quevedo, certifica que la Egresada Verónica Liseth Zamora Rodríguez, realizó la tesis

de grado previo a la obtención del título de Ingeniera Agroindustrial titulada: Identificación

de la concentración mínima inhibitoria (CMI) de los aceites esenciales Cymbopogon

ciratus (hierba luisa) y Zingiber officinale (jengibre) en hongos adheridos a la Annona

muricata L. (guanábana) para prolongar su vida útil, bajo mi dirección, habiendo

cumplido con las disposiciones reglamentarias establecidas para el efecto.

f. _____________________________

Ing. M.Sc. Marlene Medina Villacís

DIRECTORA DEL PROYECTO DE INVESTGACION

iv

CERTIFICADO DEL REPORTE DE LA HERRAMIENTA DE

PREVENCIÓN DE COINCIDENCIA Y/O PLAGIO ACADÉMICO

Ing. MSc. Marlene Medina Villacis.

DIRECTORA DEL PROYECTO DE INVESTIGACIÓN.

Mediante el presente cumplo en presentar a usted, el informe de proyecto de investigación

cuyo tema es “IDENTIFICACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN MÍNIMA

INHIBITORIA (CMI) DE LOS ACEITES ESENCIALES Cymbopogon ciratus (hierba

luisa) Y Zingiber officinale (jengibre) EN HONGOS ADHERIDOS A LA Annona

muricata L. (guanábana) PARA PROLONGAR SU VIDA ÚTIL” Presentado por la

señorita ZAMORA RODRIGUEZ VERONICA LISETH, egresada de la carrera de

Ingeniería Agroindustrial, que fue revisado bajo mi dirección según resolución del Consejo

Académico de la Facultad de Ciencias de la Ingeniería que se ha desarrollado de acuerdo al

Reglamento de la Unidad de Titulación Especial de la Universidad Técnica Estatal de

Quevedo y cumple con el requerimiento de análisis de URKUND el cual avala los niveles

originalidad en un 93 % y similitud 7 %, de trabajo investigativo.

Valido este documento para que el estudiante siga con los trámites pertinentes, de acuerdo a

lo que establece el reglamento.

Por su atención deseo significar mis agradecimientos.

Cordialmente

ING. MARLENE MEDINA VILLACIS; MSc.

DIRECTORA DEL PROYECTO DE INVESTIGACIÓN

v

UNIVERSIDAD TÉCNICA ESTATAL DE QUEVEDO

FACULTAD CIENCIAS DE LA INGENIERIA

CARRERA INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

CERTIFICADO DE APROBACIÓN POR TRIBUNAL DE SUSTENTACIÓN.

PROYECTO DE INVESTIGACION

“IDENTIFICACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN MÍNIMA INHIBITORIA (CMI)

DE LOS ACEITES ESENCIALES Cymbopogon ciratus (hierba luisa) Y Zingiber

officinale (jengibre) EN HONGOS ADHERIDOS A LA Annona muricata L.

(guanábana) PARA PROLONGAR SU VIDA ÚTIL”

Presentado al Consejo Académico de Facultad como requisito previo a la obtención del

título de Ingeniera Agroindustrial.

Aprobado por:

__________________________________ _______________________________

PRESIDENTE DEL TRIBUNAL MIEMBRO DEL TRIBUNAL

__________________________________

MIEMBRO DEL TRIBUNAL

QUEVEDO – ECUADOR

2017

PhD. Juan Neira Mosquera MS.c Robert Moreira Macías

MS.c. Andrea Cortez Espinoza

vi

AGRADECIMIENTO

Me llena de dicha primeramente agradecerle a Dios por bendecirme, brindarme

fortaleza ya que sin él este sueño tan anhelado no hubiese sido posible porque la Fe no

hace que las cosas sean fáciles, hace que sean posibles.

A mi madre; a mi hermano Darío por ser el motor de mi vida e impulsarme cada día a

ser mejor persona y brindarme su apoyo incondicional, a ellos les agradezco por

apostar por mí, porque con el tiempo entendí que el camino era difícil y resbaladizo,

en el cual resbalé pero me recupere gracias al apoyo incondicional que Uds. me

brindaron alentándome cada día y diciéndome que aquello era un resbalón mas no una

caída, gracias por estar conmigo y caminar a mi lado.

A mi directora de proyecto de Investigación, Ing. MS.c. Marlene Medina Villacís y a

la Ing. Flor Marina Fon Fay por brindar su aporte en cuanto a conocimientos y

sugerencias para la realización de este proyecto.

A Ángel Cedeño por el aporte en el campo experimental de esta investigación sin su

conocimiento y su apoyo esto no hubiee sido posible.

A la Universidad Técnica Estatal de Quevedo por permitir ser parte del Proyecto de

Investigación Focicyt y así convertirme en una profesional con ética y moral, gracias a

cada docente que formó parte de este proceso de formación

A los amigos que logré encontrar durante el desarrollo de este proyecto, y a los

compañeros de aula de los cuales guardo gratos recuerdos.

Es necesario pasar por diversas pruebas, para ver la Gloria de Dios

Hechos 14:22

Liseth Zamora Rodríguez

vii

DEDICATORIA

Este trabajo de investigación va en honor a Dios porque creo

en él como el ciego cree en el sol, no porque lo ve, sino porque

lo siento.

A mis padres Manuel y Carmen por ser los mejores del mundo

por cuidarme, protegerme, por el apoyo moral, emocional y

económico, a mis hermanos Livington, Stalin aunque la

mayoría de las veces peleamos, hay momentos en los que la

guerra cesa y nos unimos para lograr nuestros objetivos,

dándonos consejos, y seguir adelante a pesar de las

adversidades; a mi hermano Darío por ser el mejor de todos,

mi pilar, el que me alienta, el que me motiva a ser cada día

quien soy, ya que si no hubieses apoyado mis miedos, no

hubiese llegado hasta aquí; éste título es más tuyo que mío; a

mis cuñadas Ginger y Sasha ya que de una u otra manera

estuvieron alentándome para así no desmayar, gracias por

habernos dado esas bendiciones la cual alegra cada uno de

nuestros días; a mis sobrinos Matheus, Eimy, Renata ya que

ustedes mis pequeños son la alegría de mis días y mi

inspiración, espero esto lo vean como un ejemplo a seguir,

gracias familia por creer en mi Uds. Son la motivación para

que esta investigación se lleve a cabo.

A mis mejores amigas Dayan, Belén, Gema, Nataly, Mariuxi,

Gabriela gracias por su amistad por su apoyo incondicional,

sin duda son las mejores y no podía faltar Jorge, gracias por

esas conversaciones nocturnas por las risas, sin duda alguna

Dios pone a personas increíble en el camino.

Todo lo puedo en Cristo que me Fortalece

Filipenses 4:13

Liseth Zamora Rodríguez

viii

RESUMEN

Esta investigación pretende identificar la concentración mínima inhibitoria (CMI) de los

aceites esenciales Cymbopogon ciratus (hierba luisa) y Zingiber officinale (jengibre) en

hongos adheridos a la Annona muricata L., (guanábana) para prolongar su vida útil, es por

ello esta investigación una propuesta que permitirá valorar la actividad antifungica de los

aceites esenciales Cymbopogon ciratus (hierba luisa) y Zingiber officinale (jengibre) en tres

niveles de concentración (10, 15, 20 %) frente a los hongos Macrophoma sp., Verticillum

sp., microorganismos causantes del deterioro en postcosecha, se aplicó un diseño de bloques

completamente al azar con un arreglo factorial AxBxC que constó de 12 tratamientos y 2

réplicas lo que corresponde a 24 tratamientos. Los factores de estudio fueron: Factor A

(hongos), factor B (aceites esenciales) y factor C (concentraciones). Para establecer las

diferencias entre los niveles se aplicaron pruebas de significación Tukey (p<0,05), mediante

el programa estadístico StatGraphics e Infostat. Los hongos fueron aislados e identificados

a partir de Annona muricata L. (guanábana), se realizó con la técnica de Papa Dextrosa Agar

(PDA) más solución de aceite esencial y tween 20 para una mezcla homogénea en el cual

fue evaluado el crecimiento micelial y el porcentaje (%) de inhibición en 24, 72, 120 horas.

Para identificar la concentración mínima inhibitoria de los aceites esenciales se evaluaron

las concentraciones de (10, 15, 20 %) luego de la comparación con varios autores se

determinó que los aceite esenciales que inhiben totalmente al hongo se les determina la

concentración mínima inhibitoria (CMI) dado que el mejor tratamiento fue a0b0c2= T3

(Macrophoma sp + AE Hierba luisa + 20 %) ya que inhibió en su totalidad al hongo

Macrophoma sp., Se realizó análisis físicos y químicos a la Annona muricata L., (guanábana)

para así determinar su vida anaquelaria en el cual esta logró alcanzar 15 días de conservación

manteniendo su aspecto.

Palabras Claves: Micelio, Concentración mínima inhibitoria, Aceite esencial,

Microorganismos, Crecimiento radial, concentraciones.

ix

ABSTRACT

This research aims to identify the minimum inhibitory concentration (MIC) of the essential

oils Cymbopogon ciratus (herb luisa) and Zingiber officinale (ginger) in fungi attached to

Annona muricata L., (guanabana) to prolong its shelf life, that is why it is investigation a

proposal that will allow to evaluate the antifungal activity of the essential oils Cymbopogon

ciratus (herb luisa) and Zingiber officinale (ginger) in three levels of concentration (10, 15,

20%) against the fungi Macrophoma sp., Verticillum sp., microorganisms that cause

deterioration in post-harvest, a completely randomized block design was applied with a

factorial arrangement AxBxC that consisted of 12 treatments and 2 replications, which

corresponds to 24 treatments. The study factors were: Factor A (fungi), factor B (essential

oils) and factor C (concentrations). To establish the differences between the levels, Tukey

significance tests were applied (p <0.05), using the statistical program StatGraphics and

Infostat. The fungi were isolated and identified from Annona muricata L. (guanábana), was

performed with the technique of Papa Dextrose Agar (PDA) plus essential oil solution and

tween 20 for a homogeneous mixture in which mycelial growth was evaluated and the

percentage (%) of inhibition in 24, 72, 120 hours. To identify the minimum inhibitory

concentration of essential oils, the concentrations of (10, 15, 20%) were evaluated. After

comparison with several authors, it was determined that the essential oils that totally inhibit

the fungus were determined the minimum inhibitory concentration (MIC). ) since the best

treatment was a0b0c2 = T3 (Macrophoma sp + AE Luisa grass + 20%) since it completely

inhibited the fungus Macrophoma sp., Physical and chemical analysis was carried out on

Annona muricata L., (guanábana) for thus determine its shelf life in which it managed to

reach 15 days of preservation while maintaining its appearance.

Key Words: Mycelium, Minimum inhibitory concentration, Essential oil, Microorganisms,

Radial growth, concentrations.

x

Índice

PORTADA………………………………………………………………………...i

DECLARACIÓN DE AUTORÍA Y CESIÓN DE DERECHOS......................... ii

CERTIFICACIÓN DE CULMINACIÓN DEL PROYECTO DE

INVESTIGACIÓN……………………………………………………………....iii

CERTIFICADO DEL REPORTE DE LA HERRAMIENTA DE

PREVENCIÓN DE COINCIDENCIA Y/O PLAGIO ACADÉMICO .............. iv

CERTIFICADO DE APROBACIÓN POR TRIBUNAL DE

SUSTENTACIÓN. ................................................................................................... v

AGRADECIMIENTO ............................................................................................ vi

DEDICATORIA ..................................................................................................... vii

RESUMEN ............................................................................................................ viii

ABSTRACT ............................................................................................................. ix

CÓDIGO DUBLIN ............................................................................................... xix

Introducción ............................................................................................................. 1

CAPÍTULO I

CONTEXTUALIZACIÓN DE LA INVESTIGACIÓN .................................... 3

1.1. Problema de investigación……………………………………………….4

1.1.1. Planteamiento del problema………………………………………………………………………..4

1.1.2. Diagnóstico ............................................................................................................... 4

1.1.3. Pronóstico ................................................................................................................. 5

1.1.4. Formulación del problema ................................................................................... 5

1.1.5. Sistematización del problema .............................................................................. 5

1.2. Objetivos ....................................................................................................... 6

1.2.1. Objetivo General .................................................................................................... 6

1.2.2. Objetivos Específicos ............................................................................................. 6

1.3. Justificación .................................................................................................... 7

xi

1.4. Hipótesis .......................................................................................................... 7

1.4.1. Hipótesis Alternativa ............................................................................................. 7

1.4.2. Hipótesis Nula.......................................................................................................... 7

CAPÍTULO II

FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA DE LA INVESTIGACIÓN ......................... 8

2.1. Marco conceptual ........................................................................................... 9

2.1.1. Concentración mínima inhibitoria ..................................................................... 9

2.1.2. Cymbopogon citratus (Hierba luisa) .................................................................... 9

2.1.2.1. Descripción botánica ........................................................................................ 9

2.1.2.2. Taxonomía de Cymbopogon citratus ............................................................. 9

2.1.3 Zingiber officinale (Jengibre) ............................................................................ 10

2.1.3.1. Descripción botánica ...................................................................................... 10

2.1.3.2. Taxonomía de Zingiber officinale ............................................................... 10

2.1.4. Aceites esenciales .......................................................................................... 10

2.1.5. Obtención de los aceites esenciales ............................................................. 11

2.1.6. Composición química del aceite esencial de Cymbopogon citratus .......... 11

2.1.7. Composición química del aceite esencial Zingiber officinale ................... 12

2.1.8. Propiedades Antifúngicas ............................................................................ 12

2.1.9. Características de las propiedades antifúngica de los

aceites esenciales ........................................................................................... 12

2.1.10.Actividad biológica ..................................................................................... 14

2.1.11. Alteraciones microbianas de las frutas por microorganismos .............. 14

2.1.12.Macrophoma sp ........................................................................................... 14

2.1.13.Verticillium sp .............................................................................................. 15

2.1.14.Annona muricata L. (guanábana……………………………………...16

2.2. Marco referencial ......................................................................................... 16

2.2.1. Identificación de Hongos Fitopatógenos en cultivos de Terceira,

Azores ..................................................................................................................... 16

xii

2.2.2. Efectos de los aceites esenciales amazónicos de citrus limón y

cymbopogon citratus sobre el crecimiento de hongos

fitopatógenos. ........................................................................................................ 17

2.2.3. Efecto antibacteriano y antifúngico del aceite esencial de Mentha

piperita (menta), Origanum vulgare (orégano) y Cymbopogon citratus

(hierba luisa) sobre Streptococcus mutans ATCC 25175,

Lactobacillus acidophilus ATCC 10746 y Candida albicans ATCC

90028. ....................................................................................................................... 18

2.2.4. Evaluación de la Fitotoxicidad y la actividad antifúngica contra

Colletotrichum acutatum de los aceites esenciales de tomillo (Thymus

vulgaris), limoncillo (Cymbopogon citratus), y sus componentes

mayoritarios. .......................................................................................................... 18

2.2.5. Efecto de los extractos etanólicos de Jengibre (Zingiber oficinale)

sobre el crecimiento micelial in vitro de Rhizoctonia Solani AG1 – 1

A………… .............................................................................................................. 19

2.2.6. La situación de las annonaceae en México: principales plagas,

enfermedades y su control .................................................................................. 19

2.2.7. Estudios biológicos y morfológicos del hongo causante de la

pudrición apical de los frutos del guayabo (Psidium guajava L.) ............. 20

2.2.8. Evaluación in vitro de fungicidas para el control del

hongo Macrophoma sp., agente causal de la pudrición apical del

fruto del Guayabo (Psidium guajava L.). ........................................................ 20

2.2.9. Caracterización fisiológica, físico-química, reológica, nutraceútica,

estructural y sensorial de la guanábana (annona muricata l.) ................. 20

CAPÍTULO III

METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN ................................................... 22

3.1. Localización..................................................................................................... 23

3.2. Obtención de materiales para la investigación .......................................... 23

3.3. Métodos de investigación ............................................................................. 23

3.4. Fuentes de recopilación de información..................................................... 24

xiii

3.5. Diseño de la investigación ............................................................................ 24

3.5.1. Factores de estudio ............................................................................................... 24

3.6. Instrumentos de investigación .................................................................... 25

3.7. Tratamiento de los datos ............................................................................. 25

3.8. Recursos humanos y materiales .................................................................. 26

3.8.1. Recursos humanos ................................................................................................ 26

3.8.2. Materiales de laboratorio ................................................................................... 26

3.9. Manejo especifico del experimento ............................................................. 27

3.9.1. Obtención de los aceites esenciales ................................................................... 27

3.9.2. Analisis Fisicos quimicos de la Annona muricata L. (guanabana) ........... 29

CAPÍTULO IV

RESULTADOS Y DISCUSIÓN ........................................................................... 31

4.1. Resultados ....................................................................................................... 32

4.1.1. Aislamiento e identificación de los hongos patógenos presentes en

Annona muricata L. (guanábana) ...................................................................... 32

4.1.2. Resultados del análisis de varianza de las variables a estudiar. .............. 34

4.1.3. Resultados con respecto al Factor A de los (Hongos a0 – a1)

identificados de la Annona muricata L. (guanábana) Resultados de

la prueba de significación (Tukey p<0.05) con respecto a los

Factores de Estudio ..................................................................................... 58

4.1.4. Resultados con respecto al Factor B (Aceites esenciales b0 – b1) ............. 60

4.1.5. Resultados con respecto al Factor C (Concentraciones c0 – c1 – c2) ........ 62

4.1.6. Resultados con respecto a la vida anaquelaria de la Annona

muricata L (guanábana) con revestimiento de tres niveles de

concentración (10, 15, 20 %) de aceite esenciales Cymbopogon

citratus (hierba luisa) y Zingiber officinale (jengibre), mediante

análisis físicos químicos ............................................................................... 64

4.1.7. Resultados con respecto al Factor AxBxC (Hongos a0 – a1 + AEs b0 –

b1 + Concentraciones c0 – c1 – c2) ................................................................ 72

xiv

4.2 Discusión ........................................................................................................... 78

4.3. Tratamiento de hipótesis ............................................................................. 82

CAPÍTULO V

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES................................................... 83

5.1. Conclusiones ................................................................................................. 84

5.2. Recomendaciones ......................................................................................... 85

CAPÍTULO VI

BIBLIOGRAFIA ................................................................................................... 86

6.1. Bibliografía ...................................................................................................... 87

Índice de Tablas

Tabla 1. Concentraciones mínimas inhibitorias de aceites esenciales probados

“in vitro” contra microorganismos patógenos transmitidos por alimentos

(burt,2004)………………………………………………………………13

Tabla 2 Taxonomía del genero Macrophoma sp .......................................... …….15

Tabla 3 Taxonomia del genero Verticillium sp .................................................... 15

Tabla 4. Descripción de los factores de estudio para la identificación de la

concentración mínima inhibitoria (CMI) de los aceites esenciales

Cymbopogon citratus (hierba luisa), Zingiber officinale (jengibre) en

hongos adheridos a la Annona Muricata L. ........................................... 24

Tabla 5. Combinación de los tratamientos propuestos para la Identificación de la



hongos adheridos a la Annona muricata L. ............................................. 25

Tabla 6. Materiales, equipo y reactivos para aislamientos de hongos ........... 26

Tabla 7. Materiales, equipo y reactivos para preparación de PDA ....................... 26

Tabla 8. Materiales, equipo y reactivos para repique de hongo ............................ 27

Tabla 9. Materiales, equipo y reactivos para inhibición de hongos ...................... 27

Tabla 10. Análisis de varianza del crecimiento micelial por 24 h/cm ................. 34

xv

Tabla 11. Análisis de varianza del crecimiento micelial por 72 h/cm ................. 35

Tabla 12. Análisis de varianza del crecimiento micelial por 120 h/cm ............... 36

Tabla 13. Análisis de Varianza porcentaje de inhibición de los hongos a las 24

Horas ..................................................................................................... 37


Horas ..................................................................................................... 38


Horas ..................................................................................................... 39

Tabla 16. Análisis de Varianza del peso (D) de la Annona muricata L.

(guanábana) en 24 horas ....................................................................... 40


(guanábana) en 72 horas ........................................................................ 41


(guanábana) en 144 horas ...................................................................... 42


(guanábana) en 216 horas ...................................................................... 43

Tabla 20. La siguiente tabla, presenta el análisis de varianza del peso (D) de la

Annona muricata L. (guanábana) en 288 horas..................................... 44

Tabla 21. La siguiente tabla, presenta el análisis de varianza del peso (D) de la

Annona muricata L. (guanábana) en 360 horas..................................... 45

Tabla 22. Análisis de Varianza de los sólidos solubles (ºBrix) de la Annona

muricata L. (guanábana) en 24 horas .................................................... 46

Tabla 23. Análisis de varianza de los sólidos solubles (ºBrix) de la Annona

muricata L. (guanábana) en 72 horas .................................................... 47

Tabla 24. Análisis de Varianza de los sólidos solubles (ºBrix) de la Annona

muricata L. (guanábana) en 144 horas .................................................. 48







Tabla 28. Análisis de varianza del pH de la Annona muricata L. (guanábana) en

24 horas 52

xvi


72 horas ................................................................................................. 53


144 horas ............................................................................................... 54


216 horas ............................................................................................... 55


288 horas ............................................................................................... 56


360 horas ............................................................................................... 57

Índice de Gráficos

Gráfico 1. Resultados de las diferencias de medias en tiempos determinados de

crecimiento de los hongos de la prueba de significación Tukey

(p<0.05). .............................................................................................. 58

Gráfico 2. Resultados de las diferencias de medias del porcentaje (%) de

inhibición en tiempos determinados de la prueba de significación

Tukey (p<0.05). .................................................................................... 59

Gráfico 3. Resultados de las diferencias de medias en tiempos determinados

de crecimiento de los hongos y aceites esenciales de la prueba de

significación Tukey (p<0.05). ............................................................... 60


inhibición en horas de la prueba de significación Tukey (p<0.05). ...... 61

Gráfico 5. Resultados de las diferencias de medias entre las horas de crecimiento

de los hongos y las concentraciones de la prueba de significación

Tukey (p<0.05). .................................................................................... 62


inhibición en horas de la prueba de significación Tukey (p<0.05). ... 63

Gráfico 7. Resultados de las diferencias de medias del factor A del peso (D) en

horas de la prueba de significación Tukey (p<0.05). ......................... 64

Gráfico 8. Resultados de las diferencias de medias del factor B del peso (D)

en horas de la prueba de significación Tukey (p<0.05). ....................... 65

xvii

Gráfico 9. Resultados de las diferencias de medias del factor C del peso (D)

en horas de la prueba de significación Tukey (p<0.05). ...................... 66

Gráfico 10. Resultados de las diferencias de medias del factor A de los ºBrix en

horas de la prueba de significación Tukey (p<0.05). ........................... 67

Gráfico 11. Resultados de las diferencias de medias del factor B de los ºBrix en

horas de la prueba de significación Tukey (p<0.05). .......................... 68

Gráfico 12.Resultados de las diferencias de medias del factor C de los ºBrix en

horas de la prueba de significación Tukey (p<0.05). ......................... 69

Gráfico 13. Resultados de las diferencias de medias del factor C del pH en horas

de la prueba de significación Tukey (p<0.05). ..................................... 70

Gráfico 14. Resultados de las interacciones del crecimiento micelial de los

hongos,aceites esenciales y sus concentraciones de la prueba de

significación Tukey (p<0.05). ............................................................. 72

Gráfico 15. Resultados de las medias del porcentaje (%) de inhibición de los

hongos, aceites esenciales y sus concentraciones de la prueba de

significación Tukey (p<0.05). ............................................................. 74

Gráfico 16. Resultados de las medias de la vida anaquelaria de la Annona

muricata L (guanábana) con revestimiento de tres niveles de

concentración (10, 15, 20 %) de aceite esenciales Cymbopogon

(hierba luisa) y Zingiber officinale (jengibre), mediante análisis

físicos químicos de la prueba de significación Tukey (p<0.05). ........ 76

Índice de Figura

Figura 1 Aislamiento e identificación de Macrophoma sp., en Annona muricata L.

(guanábana) ......................................................................................................... 32

Figura 2 Aislamiento e identificación de Verticillum sp., en Annona muricata L.

(guanábana) ......................................................................................................... 33

Índice de Ecuación

Ecuación 1. Porcentaje (%) de inhibición del crecimiento radial de los hongos .............................. 29

xviii

Índice de Anexos

Anexo 1. Crecimiento radial de los tratamientos ............................................................... 94

Anexo 2. Crecimiento radial de los testigos ....................................................................... 95

Anexo 3. Porcentaje de inhibición de los tratamientos en horas ........................................ 96

Anexo 4. Porcentaje de inhibición radial en testigos ......................................................... 97

Anexo 5. Diagrama de flujo del proceso de inhibición de los hongos (Macrophoma sp.

, y Verticillum sp.) aislados de la Annona muricata L. (guanábana) .................. 97

Anexo 6. Peso (D) de la Annona muricata L. (guanábana) ................................................ 98

Anexo 7. ºBrix de la Annona muricata L. (guanábana) ..................................................... 99

Anexo 8. pH de la Annona muricata L. (guanábana) ....................................................... 100

Anexo 9. Fotos de la Fase experimental........................................................................... 101

Anexo 10. Técnicas de Laboratorio ................................................................................. 106

Anexo 11. Certificación INIAP ........................................................................................ 109

xix

CÓDIGO DUBLIN

Título:

Identificación de la concentración mínima inhibitoria (CMI) de los aceites esenciales

Cymbopogon ciratus (hierba luisa) y Zingiber officinale (jengibre) en hongos adheridos a

la Annona muricata L. (guanábana) para prolongar su vida útil

Autor: Verónica Liseth Zamora Rodríguez

Palabras clave: Micelio CMI AE Microorganismos Crecimiento radial Concentraciones

Fecha de publicación: DD-MM-AA

Editorial: Quevedo: UTEQ 2017

Resumen:

(hasta 300 palabras)

Resumen.- Esta investigación pretende identificar la concentración mínima inhibitoria

(CMI) de los aceites esenciales Cymbopogon ciratus (hierba luisa) y Zingiber officinale

(jengibre) en hongos adheridos a la Annona muricata L., (guanábana) para prolongar su

vida útil, es por ello esta investigación una propuesta que permitirá valorar la actividad

antifungica de los aceites esenciales Cymbopogon ciratus (hierba luisa) y Zingiber

officinale (jengibre) en tres niveles de concentración (10, 15, 20 %) frente a los hongos

Macrophoma sp., Verticillum sp., microorganismos causantes del deterioro en postcosecha,

se aplicó un diseño de bloques completamente al azar con un arreglo factorial AxBxC que

constó de 12 tratamientos y 2 réplicas lo que corresponde a 24 tratamientos. Los factores

de estudio fueron: Factor A (hongos), factor B (aceites esenciales) y factor C

(concentraciones). Para establecer las diferencias entre los niveles se aplicaron pruebas de

significación Tukey (p<0,05), mediante el programa estadístico StatGraphics e Infostat. Los

hongos fueron aislados e identificados a partir de Annona muricata L. (guanábana), se

realizó con la técnica de Papa Dextrosa Agar (PDA) más solución de aceite esencial y tween

20 para una mezcla homogénea en el cual fue evaluado el crecimiento micelial y el

porcentaje (%) de inhibición en 24, 72, 120 horas. Para identificar la concentración mínima

inhibitoria de los aceites esenciales se evaluaron las concentraciones de (10, 15, 20 %) luego

de la comparación con varios autores se determinó que los aceite esenciales que inhiben

totalmente al hongo se les determina la concentración mínima inhibitoria (CMI) dado que

el mejor tratamiento fue a0b0c2= T3 (Macrophoma sp + AE Hierba luisa + 20 %) ya que

inhibió en su totalidad al hongo Macrophoma sp., Se realizó análisis físicos y químicos a la

Annona muricata L., (guanábana) para así determinar su vida anaquelaria en el cual esta

logró alcanzar 15 días de conservación manteniendo su aspecto.

Abstract:: This research aims to identify the minimum inhibitory concentration (MIC) of

the essential oils Cymbopogon ciratus (herb luisa) and Zingiber officinale (ginger) in fungi

attached to Annona muricata L., (guanabana) to prolong its shelf life, that is why it is

investigation a proposal that will allow to evaluate the antifungal activity of the essential

oils Cymbopogon ciratus (herb luisa) and Zingiber officinale (ginger) in three levels of

concentration (10, 15, 20%) against the fungi Macrophoma sp., Verticillum sp.,

microorganisms that cause deterioration in post-harvest, a completely randomized block

design was applied with a factorial arrangement AxBxC that consisted of 12 treatments and

2 replications, which corresponds to 24 treatments. The study factors were: Factor A

(fungi), factor B (essential oils) and factor C (concentrations). To establish the differences

between the levels, Tukey significance tests were applied (p <0.05), using the statistical

program StatGraphics and Infostat. The fungi were isolated and identified from Annona

muricata L. (guanábana), was performed with the technique of Papa Dextrose Agar (PDA)

plus essential oil solution and tween 20 for a homogeneous mixture in which mycelial

growth was evaluated and the percentage (%) of inhibition in 24, 72, 120 hours. To identify

the minimum inhibitory concentration of essential oils, the concentrations of (10, 15, 20%)

were evaluated. After comparison with several authors, it was determined that the essential

oils that totally inhibit the fungus were determined the minimum inhibitory concentration

(MIC). ) since the best treatment was a0b0c2 = T3 (Macrophoma sp + AE Luisa grass +

20%) since it completely inhibited the fungus Macrophoma sp., Physical and chemical

analysis was carried out on Annona muricata L., (guanábana) for thus determine its shelf

life in which it managed to reach 15 days of preservation while maintaining its appearance.

Descripción: dimensiones, 29 x 21 cm + CD-ROM 6162

URI: (en blanco hasta cuando se dispongan los repositorios)

1

Introducción

Ecuador es un país biodiverso, tiene variadas formas de vida expresadas en su flora, fauna,

microorganismos y de ecosistemas que se forman gracias a las particulares condiciones

geográficas de ubicación, relieve y clima; es considerado uno de los 12 países

biológicamente más diversos del mundo [1] .

La Annona muricata L. (guanábana) es una de las anonáceas más apreciadas en el país, su

manejo como cultivo es poco conocido por los productores dado a que su siembra se ha

limitado a patios y parcelas, debido a la baja producción de frutos por planta, al ataque de

plagas y las dificultades que presenta el manejo poscosecha de la fruta [2]. También señalan

que hay varios estudios sobre anonacina, el compuesto de la guanábana que tendría efectos

anticancerosos, y que estos estudios fueron realizados in vitro o in vivo en animales [3]. Aun

no existen estudios clínico, en personas, lo que trasborda a los laboratorios a concentrar las

investigaciones en los principios activos, de acetogeninas anonáceas, en vez de la planta [3].

Los aceites esenciales son mezclas de varios compuestos volátiles, entre ellos, los

monoterpenos, formados por unidades de 10 átomos de carbono, son componentes

mayoritarios de estas mezclas, estos compuestos constituyen hasta el 5 % del peso seco de

las plantas, y se aíslan del material vegetal por destilación o extracción [4].

Actualmente existe un renovado interés en el estudio de aceites esenciales ya que se buscan

alternativas de origen natural para la conservación tanto de alimentos como frutas, y así

combatir microorganismos dando solución al rechazo de la sociedad que utiliza compuestos

químicos como aditivos de alimentos y pesticidas, el potencial uso de aceites esenciales ha

explorado el control de patógenos constituyendo una alternativa innovadora y eficaz para el

control de calidad o postcosecha de las frutas en almacenamiento.

A pesar de la actividad antifúngica de los aceites esenciales de Cymbopogon citratus (hierba

luisa) y Zingiber officinale (jengibre), existen pocos trabajos que reporten la CMI de los

mismos que permitan la preservación de frutas lo cual [5] afirma que es necesario investigar

sobre las concentraciones mínimas que inhiban el crecimiento de microorganismos, usando

métodos sensibles y robustos que permitan reportar estos datos y valorar la capacidad

antifungica de los aceites esenciales.

2

Este proyecto se realizó en el laboratorio de Microbiología y Biotecnología de la

Universidad Técnica Estatal de Quevedo donde se seleccionó el material a estudiar Annona

muricata L. de la misma que se aislaron e identificaron los hongos adheridos a la fruta por

la técnica de papa dextrosa agar (PDA) y así se determinó la CMI (Concentración mínima

inhibitoria ) de los aceites esenciales de Cymbopogon citratus (hierba luisa) y Zingiber

officinale (jengibre), para ello se preparó soluciones con diferentes concentraciones a rangos

ya investigados como actividad antifúngica, la vida útil de la Annona muricata L., se

determinó mediante ensayos de observación realizando un diseño de bloques

completamente al azar.

La presente investigación está enfocada en innovar técnicas de almacenamiento que ayuden

a contrarrestar el abuso de agroquímicos que se aplican a diversas frutas tropicales para

alargar su vida útil; dando un uso alterno a los aceites esenciales Cymbopogon citratus

(hierba luisa) y Zingiber officinale (jengibre), para ello se demostró la efectividad de las

propiedades antifúngicas de los mismos, logrando disminuir la contaminación ambiental que

producen los métodos tradicionales de control químico.

3

CAPÍTULO I

CONTEXTUALIZACIÓN DE LA INVESTIGACIÓN

4

1.1. Problema de investigación

1.1.1. Planteamiento del problema

La Annona muricata L. (guanábana) al ser una fruta climatérica es altamente perecedera y

susceptible asía el ataque de microorganismos, que producen grandes pérdidas en

poscosecha.

Actualmente, la antracnosis está siendo considerada en el rubro de guanábana, como una de

las enfermedades que causa una pudrición negra en los frutos y ataca en todas las etapas

de su desarrollo, principalmente en los tejidos tiernos afectando el rendimiento y calidad

del producto final, debido a que las condiciones edafoclimáticas son favorables para la

expansión de la misma [6].

En la actualidad, se están investigando nuevas opciones para controlar la presencia de

hongos fitopatógenos así como las toxinas que ellos puedan producir, utilizando compuestos

de orígenes naturales que sean inocuos tanto para el hombre como para el ambiente, los

aceites esenciales tienen propiedades antifúngicas, estos son productos vegetales

constituidos generalmente por alcaloides, flavonoides, isoflavonoides, taninos, cumarinas,

glicósidos, terpenos, fenilpropanos y ácidos orgánicos, que se caracterizan por poseer

propiedades antisépticas, antimicrobianas, antiinflamatorias, antidepresivas y afrodisíacas,

entre otras [7].

1.1.2. Diagnóstico

El hongo Macrophoma sp., y Verticillum sp., en su mayoría son responsables de las

alteraciones de las frutas y hortalizas, alterando el aspecto físico, características

organolépticas y la conservación de las mismas, estos microorganismos se depositan en el

epicarpio de la Annona muricata L., colonizando masivamente el tejido causando daño, el

estudio del aceite esencial de Cymbopogon citratus (hierba luisa) y Zingiber officinale

(jengibre) como inhibidor de hongos patógenos en Annona muricata L. (guanábana) ha sido

poco habitual debido a esto se desconoce su efecto inhibidor en hongos.

5

1.1.3. Pronóstico

Los aceites esenciales de Cymbopogon citratus (hierba luisa) y Zingiber officinale (jengibre)

inhibe a hongos Macrophoma sp., y a Verticillum sp.

1.1.4. Formulación del problema

¿Cuál es la CMI de los aceites esenciales de Cymbopogon citratus (hierba luisa) y Zingiber

officinale (jengibre) en la inhibición de hongos patógenos presentes en Annona muricata

L. (guanábana)?

1.1.5. Sistematización del problema

Desde hace algunos años se ha venido estudiado las propiedades de los aceites esenciales y

las diversas variedades de usos que pueden aportar se desconoce la CMI de Cymbopogon

citratus (hierba luisa), Zingiber officinale (jengibre) frente a microorganismo fitopatógeno

que ataca a la Annona muricata L. (guanábana).

Estos aceites esenciales han sido estudiados por varios autores demostrando sus propiedades

antifúngicas e inhibitorias en hongos fitopatógeno, por lo cual se lleva a cabo una propuesta

de determinar su CMI para innovar las técnicas de almacenamiento en frutas tropicales.

6

1.2. Objetivos

1.2.1. Objetivo General

Identificar la concentración mínima inhibitoria (CMI) de los aceites esenciales Cymbopogon

citratus (hierba luisa), Zingiber officinale (jengibre) en hongos adheridos a la Annona

muricata L. (guanábana) para garantizar su vida útil.

1.2.2. Objetivos Específicos

Identificar los hongos patógenos presentes en Annona muricata L (guanábana)

Determinar la concentración mínima inhibitoria (CMI) de aceites esenciales de

Cymbopogon citratus (hierba luisa) y Zingiber officinale (jengibre) en tres niveles de

concentración (10, 15 20 %) en hongos identificados de Annona muricata L

(guanábana)

Prolongar la vida anaquelaria de la Annona muricata L (guanábana) con

revestimiento de tres niveles de concentración (10, 15, 20 %) de aceite esenciales

Cymbopogon citratus (hierba luisa) y Zingiber officinale (jengibre), mediante

análisis físicos químicos

7

1.3. Justificación

Debido a la utilización de los aceites esenciales de Cymbopogon citratus (hierba luisa) y

Zingiber officinale (jengibre) como antifúngicos es de gran ventaja ya que al ser estudiados

se le da un valor agregado, con el fin de proporcionar una información ventajosa y así

facilitar una base científica para el desarrollo de la investigación continúa de los productos

nativos.

Asimismo, es importante establecer el potencial antifungico que presentan estas

extracciones, que a su vez permite conocer cuál de estos aceites tiene mayor actitividad

fúngica para investigaciones futuras.

El propósito de esta investigación es identificar la CMI de los aceites esenciales para inhibir

hongos fitopatógeno adheridos a la guanábana con el fin de alargar su vida útil

proporcionando nuevas técnicas de almacenamiento en frutas tropicales.

1.4. Hipótesis

1.4.1. Hipótesis Alternativa

Ha= Los hongos fitopatógeno presentes en la guanábana son inhibidos con la CMI de los

aceites esenciales de Cymbopogon citratus (hierba luisa) y Zingiber officinale (jengibre) en

tres niveles de concentración.

1.4.2. Hipótesis Nula

Ho= Los hongos fitopatógeno presentes en la guanábana no son inhibidos con la CMI de los


tres niveles de concentración.

8

CAPÍTULO II

FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA DE LA INVESTIGACIÓN

9

2.1. Marco conceptual

2.1.1. Concentración mínima inhibitoria

La Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) se define como la mínima concentración de

antimicrobiano (en μg/mL) que inhibe el crecimiento visible de un microorganismo después

de 24 horas de incubación a 37°C, la CMI se ha establecido como "gold Standard" frente a

otros métodos que evalúan susceptibilidad antimicrobiana; además de confirmar resistencias

inusuales, da respuestas definitivas cuando el resultado obtenido por otros métodos es

indeterminado [8].

2.1.2. Cymbopogon citratus (Hierba luisa)

2.1.2.1. Descripción botánica

Planta herbácea, perenne de aspecto robusto, presenta tallos cortos de forma ramificada,

posee una altura de 1 a 2 m con nudos ceríferos, sus hojas son de olor característico, parecido

al limón, que se amontonan cerca a la base y sus medidas son aproximadamente entre 0.30

a 1 m de largo y de 1 hasta 1.5 cm de ancho, su forma es pedalada con bordes y nervio

central duros, semifloresencia compuesta de racimos terminal y axilar, de forma particulada

de 30 a 60 cm de largo [9].

Las raíces se encuentran en una profundidad de entre los 0.30 a 0.90 m, crece en zonas con

temperatura media entre 22 y 28º C, con precipitaciones pluviales en el rango de 1,500 a

4,000 mm/año con lluvias bien distribuidas y su pH es de 5 y 7.5 [10].

2.1.2.2. Taxonomía de Cymbopogon citratus

Reino: Plantae

División: Spermatophyta.

Clase: Monocotyledonae

Orden: Cyperales

Familia: Poaceae

Género: Cymbopogon

Especie: C. citratus [11].

10

2.1.3 Zingiber officinale (Jengibre)

2.1.3.1. Descripción botánica

Es una planta perenne aromática, raíz tipo tuberosa, los tallos son erectos, de forma oblicua,

redondo, anual, invertido por las suaves vainas de las hojas, 2 o 3 m de altura, con

inflorescencias amarillo-verdosas, rizomas lateralmente comprimidos de 7-15 cm de largo y

1-1,5 cm de ancho [11]. Surgen ramas largas de aproximadamente 1-3 cm que terminan en

hendiduras o en brotes no desarrollados, el parénquima del tubérculo puede ser de color

amarillo, blanco o rojo, dependiendo de la variedad, está recubierto por una piel de color

marrón que puede ser o bien gruesa o delgada, dependiendo la edad del tubérculo [12].

Se desarrolla en una altura predilecta de 400 a 800 m.s.n.m. con un clima subtropical, al

igual que en un clima tropical, con temperaturas entre 25 a 30 °C; la luminiscencia del sector

debe ser alta y su pluviosidad de 2000 mm; en lo que respecta al suelo debe adquirir un pH

entre 5 y 7,5 [11].

2.1.3.2. Taxonomía de Zingiber officinale

Reino: Plantae

División: Magnoliophyta

Clase: Liliopsia

Orden: Zingiberales

Familia: Zingiberaceae

Género: Zingiber

Especie: Z. officinale [12].

2.1.4. Aceites esenciales

Los aceites esenciales son mezclas volátiles de compuestos orgánicos generalmente líquidos,

que tienen un aspecto oleosa, el cual concede el olor de cada planta, escasos aceites

esenciales son apreciados por su actividad antibacteriana, antifúngica y letal, los

componentes de los aceites esenciales se hallan a menudo en las glándulas o espacio

intercelulares en el tejido de las plantas, también se suelen concentrar en las semillas, flores

hojas o frutos [13].

11

Los aceites esenciales (AEs) poseen características lipofílicas, que se consiguen obtener de

diferentes partes de las plantas a través de métodos físicos, destilación con vapor, y que

llevan en sí mismo el rastro, olor y sabor, del material vegetal del que provienen, los AEs

tienen una química compleja, totalmente consisten en una mezcla heterogénea de sustancias

orgánicas: hidrocarburos, alcoholes, aldehídos, cetonas, ésteres, entre otras, de peso

molecular menor de 400 Da y presión de vapor suficiente para volatilizarse a temperatura

ambiente [13].

2.1.5. Obtención de los aceites esenciales

Los aceites esenciales se pueden obtener de las muestras vegetales mediante métodos

oficiales como destilación por arrastre de vapor, métodos mecánicos (expresión) y métodos

no oficiales como extracción con disolventes orgánicos, extracción con grasas (enflorado,

digestión, método neumático) y extracción con gases licuados [14].

Uno de los métodos oficiales es la destilación por arrastre con vapor de agua, debido a su

alto rendimiento, la pureza del aceite obtenido y porque no requiere tecnología sofisticada,

razón por la cual es empleada en la mayoría de investigaciones e industrias [15]. La técnica

consiste en sumergir la muestra vegetal fresca previamente lavada y cortada en trozos

pequeños de aproximadamente 2 cm, colocarla en una cámara inerte y someterla a una

corriente de vapor de agua sobrecalentado, la esencia así arrastrada es posteriormente

condensada, recolectada y separada de la fracción acuosa mediante sulfato de sodio anhidro.

El aceite obtenido se conserva en un frasco de vidrio color ámbar en refrigeración a 4ºC [16].

2.1.6. Composición química del aceite esencial de Cymbopogon citratus

La composición química del aceite esencial Cymbopogon citratus varía según el origen

geográfico, entre los principales componentes se encuentran los compuestos de

hidrocarburos como terpenos alcoholes, cetonas esteres y aldehídos, principalmente el citral

(mezcla de dos aldehídos monoterpenos estereoisoméricos), el geranial isómero trans (40-

62 %) domina sobre la neral isómero cis (25-38 %), citronelal, terpineno, mirceno,

metilheptano y pineno [17].

12

2.1.7. Composición química del aceite esencial Zingiber officinale

El jengibre contiene una sustancia llamada gingerol, un líquido oleoso constituido por

fenoles homólogos, la cual produce su característico sabor picoso, en el tubérculo, se

identificó compuesto de la serie de gingeroles, que comprende la mayor abundancia y

actividad el: (5-hidroxi-1-(4-hidroxi-3-metoxi fenil) 3-un-decan) [11].´

entre los componentes de mayor importancia identificados, se puede señalar: mono y

sesquiterpenos, cafeno, β-felandreno, curcumeno, cineol, acetato de geranil, terfineol,

terpenos, borneol, geraniol, linalool, α-zingibereno (30-70%), β-sesquifellandreno (10-

15%); hay una ligera cantidad de shogaol identificado en tubérculos disecados, los

compuestos que dan el aroma al aceite esencial lo constituyen en, su mayoría sesquiterpenos,

con zingiberenos, por otra parte, los componentes con menor porcentaje de cantidad en el

aceite son: metilegingediol, gingediacetatos, metilegingediacetatos y C20 – dialdeido [11].

2.1.8. Propiedades Antifúngicas

Los compuestos de los AEs muestran actividades competentes contra patógenos dados por

los alimentos y microorganismos causantes de deterioro [18]. Algunos aceites esenciales

tienen propiedades insecticidas, antifúngicos y antibacterianas frente a microorganismos

patógenos que han sido considerados como ingredientes activos en algunos plaguicidas

botánicos, debido a su actividad frente a un número considerable de plagas, su toxicidad es

mínima en mamíferos y en su medio general [19].

2.1.9. Características de las propiedades antifúngica de los aceites

esenciales

El efecto fúngico de los aceites esenciales se relaciona al contenido de fenoles monoterpenos

principalmente el de tomillo (Thymus vulgari L.), orégano (Origanum vulgare L.) y

clavo (Eugenia caryophyllata Thunb), su mecanismo de acción se relaciona con el contenido

de interactuar con el citoplasma del patógeno y su modo de acción parece estar

estrechamente afín con la solubilidad de cada compuesto, debido a esto se ha reportado

toxicidad en humanos por la utilización de los AEs puros o en altas concentraciones,

ocasionando desde irritaciones en la piel hasta cáncer [20].

13

Al utilizar concentraciones mínimas de AEs, no genera cambios en el organismo, siendo así

considerados a estos productos como GRAS, estos aceites esenciales se lo han manifestado

como actividad fungicida contra patógenos postcosecha en un amplio intervalo de hongos;

En la actualidad, se han reportado varias investigaciones en donde se señala la actividad

fungicida de los aceites esenciales [20].

Screening ha informado en los experimentos realizados que el tomillo, clavo, canela, laurel,

orégano, ajo y limón son unos de los mejores aspirantes de amplio espectro para la inhibición

de los agentes patógenos transmitidos por los alimentos y microorganismos de

descomposición ya que estos poseen los cinco principales componentes activos contra 25

microorgansimos [21].

Tabla 1. Concentraciones mínimas inhibitorias de aceites esenciales probados “in vitro” contra microorganismos patógenos transmitidos por alimentos (burt, 2004).

Planta de la cual se deriva el

AE Especie bacteriana

CMI rango

aproximado(ul/ml)

Romero Escherichia coli 4.5 - > 10

Salmonella typhimurium > 20

Bacillus cereus 0.2

Staphyloccocus aureus 0.4 10

Listeria monocytogenes 0.2

Orégano E. coli 0.5 1.2

S. typhimurium 1.2

S. aureus 0.5 1.2

E. coli 0.6

S. typhimurium 2.5

S. aureus 0.6

E. coli 3.5 5

S. typhimurium 10 20

S. aureus 0.75 10

L. monocytogenes 0.2

E. coli 0.4 2.5

S. typhimurium > 20

L. monocytogenes 0.3

E. coli 0.45 1.25

B. cereus 5 10

FUENTE: RODRÍGUEZ ELVIA. 2011

14

2.1.10. Actividad biológica

En los últimos años se ha manifestado un extraordinario auge de la química de los productos

naturales en el ámbito mundial, entre los tres grupos de productos de origen botánico que

con mayor probabilidad tendrán el impacto más importante en la protección de plantas en la

próxima década se encuentran los aceites esenciales y sus constituyentes, descendientes de

diferentes especies vegetales [22].

Los componentes de aceites esenciales de varias especies como Sideritis sp., Lamiaceae, y

otras plantas, presentan actividad antimicótica (hongos patógenos al hombre), y en menor

grado presentan actividad antimicrobiana, el aceite esencial de Cymbopogon densiflorus

tiene acción contra varias bacterias Gram-positivas y Gram-negativas [23].

2.1.11. Alteraciones microbianas de las frutas por microorganismos

La elaboración y conservación de los alimentos con adecuada calidad es un requerimiento

imprescindible para satisfacer las demandas de los consumidores, una de las principales

causas de disminución de la calidad y seguridad biológica de los alimentos es el desarrollo

de microorganismos alteradores causantes de cambios de textura u organolépticas en un

alimento y causante de enfermedades; entre estos se encuentran: Bacterias lipolíticas, hongos

y levaduras [24].

Alterantes: los microorganismos alterantes modifican la apariencia del alimento,

provocando malos olores o sabores, o cambiando el color del mismo; en este caso, el

alimento no tiene por qué ser dañino para el consumidor [25].

Patógenos: los microorganismos patógenos resultan los más peligrosos, ya que no

modifican el alimento, aunque lo contaminen, por lo que al consumirlo se producen las

toxiinfecciones [25].

2.1.12. Macrophoma sp

El género Macrophoma sp es de mucha importancia ya que ocasiona muchas enfermedades

en frutos y en plantas [26].

15

Según [27] citados por [28] este hongo está clasificado taxonómicamente de la siguiente

manera:

Tabla 2 Taxonomía del genero Macrophoma sp

Reino:

División:

Subdivisión:

Clase:

Orden:

Familia:

Género:

Myceteae

Amastigomycota

Deuteromycotina

Deuteromicetes

Sphaeropsidales

Sphaeropsidaceae

Macrophoma

[29] Manifiestan que Macrophoma es un hongo parásito que presenta picnidias oscuras,

ostioladas y globosas; además tiene conidióforos simples cortos o alargados, las conidias

son hialinas y de una sola célula por encima de 15 µ de longitud, ovoides a extremadamente

elipsoides, Macrophoma puede ser una etapa en el desarrollo de Botryodiplodia sp., [30]

indica que los picnidios de Macrophoma pueden estar casi sobre la superficie o más o menos

embebidos en los tejidos del fruto o de la planta.

2.1.13. Verticillium sp

Este hongo produce necrosis en frutas y en el tejido vascular al inicio de la enfermedad se

observa un color amarillo en la base de la planta, el patógeno causa clorosis, bronceamiento

o enrojecimiento y marchitez parcial, se evidencia atreves de la aparición de micelio

algodonoso blanco [31].

De acuerdo a [31] este hongo está clasificado taxonómicamente de la siguiente manera:

Tabla 3 Taxonomia del genero Verticillium sp

Reino: Fungi

Clase: Deuteromycetes

Orden: Moniliales

Familia: Moniliaceae

Genero: Verticillium

16

Este micelio presenta en medio de cultivo, colonias delgadas, algodonosas y con variedad

de pigmentos [32]. Microscópicamente, tiene conidióforo recto, tabicado y ramificado cuya

terminación es en fiálides, con ápices puntiagudos [31]. Los ameroconidios se producen en

bolsas (gloisporas) presentando características hialinas y agrupándose en el extremo de la

fiálide. No presentan clamidosporas [31].

2.1.14. Annona muricata L. (guanábana)

Generalidades:

La fruta es climatérica, considerada cómo tropical exótica, con características sensoriales

excelsas que le brindan un potencial para su utilización bien cómo producto fresco o

transformado [33].

La Annona muricata L. (guanábana) es originaria de América y África tropical, pertenece al

género Guanabaní y a la sección Evannona, división Spermatophytia, subdivisión

Angiosperma, clase Dicotiledónea, subclase Archylamudeae, orden Ranales, familia

Anonaceae, género Annona, el árbol de guanábana por la forma de fijar el CO2 atmosférico,

se cataloga cómo planta C3, se comporta cómo caducifolio en condiciones de estrés por

agua, desnutrición o bajas temperaturas, particularmente por ésta razón, se considera

semicaducifolio, su fase reproductiva o de fructificación, en condiciones silvestres es

marcadamente estacional y bajo condiciones de riego y manejo agronómico apropiado [34].

La producción se torna continua, haciéndose menos pronunciados los picos estaciónales de

producción, su óptimo desarrollo se da en altitudes menores a 1.200 msnm, con temperatura

media entre 25 y 28°C, humedad relativa entre 60 y 80 %, Crece y produce bien en una

amplia gama de condiciones edáficas [34].

2.2. Marco referencial

2.2.1. Identificación de Hongos Fitopatógenos en cultivos de Terceira,

Azores

Se caracteriza este género por tener conidióforos hialinos ramificados de forma verticilada

y los conidios unicelulares, hialinos, ovoides o elipsoidales, solitarios o reunidos en grupos

en el extremo de las fiálides, dependiendo de la especie pueden existir microesclerocios [35].

17

Las especies pertenecientes al género Verticillium poseen un papel fitopatológico muy

importante; algunas especies parecen ser específicas de los tejidos leñosos y causan

alteraciones conocidas como traqueomicosis o más concretamente verticilosis, estas se

caracterizan por un amarilleamiento seguido de la desecación de las hojas; estos síntomas

pueden presentarse de forma localizada en una parte de la planta o por el contrario

generalizarse [35].

2.2.2. Efectos de los aceites esenciales amazónicos de citrus limón y

cymbopogon citratus sobre el crecimiento de hongos fitopatógenos.

Se evaluó el efecto de los aceites esenciales de Citrus limón y Cymbopogon

citratus, procedentes de la Amazonía ecuatoriana, sobre el crecimiento in vitro

de los hongos fitopatógenos Rhizopus stolonifer (ATCC 6227), Aspergillus

oryzae (ATCC 10124), Cladosporium cladosporioides (ATCC 16022), Fusarium

solani (ATCC 36031), Moniliophthora roreri y Phytophthora sp. Para

comprobar la actividad antifúngica de dichos aceites se utilizó el método de la

difusión en agar, con cinco diferentes concentraciones de aceite esencial (10, 50,

100, 200, 500 μL/mL) [36].

El aceite de C. citratus mostró una significativa actividad

antifúngica (p<0.05), dependiente de la dosis, los hongos A. oryzae, C. cladosporioides,

F. solani, M. roreri y R. stolonifer registraron una inhibición del crecimiento

del 95 %, a la concentración máxima (500 μL/mL), mostrando un comportamiento

similar al patrón (Thymus vulgaris). C. cladosporioides mostró una

sensibilidad especial ya que registró una inhibición creciente (de 60 % a 95 %),

respectivamente desde la concentración mínima hasta la máxima (10-500

μL/mL) de acuerdo a los resultados obtenidos, el aceite esencial de C. citratus resultó ser

promisorio para el control in vitro de hongos fitopatógenos [36].

18

2.2.3. Efecto antibacteriano y antifúngico del aceite esencial de Mentha

piperita (menta), Origanum vulgare (orégano) y Cymbopogon

citratus (hierba luisa) sobre Streptococcus mutans ATCC 25175,

Lactobacillus acidophilus ATCC 10746 y Candida albicans ATCC

90028.

El objetivo de la presente investigación fue determinar el efecto antibacteriano y antifúngico

in vitro del aceite esencial de Mentha piperita (menta), Origanum vulgare (orégano) y

Cymbopogon citratus (hierba luisa) mediante el método de difusión en agar con disco, sobre

Streptococcus mutans ATCC 25175, Lactobacillus acidophilus ATCC 10746 y Candida

albicans ATCC 90028, se utilizó el aceite esencial de hierba luisa al 50 y al 90 % [37].

Asimismo, para obtener concentraciones al 50 y al 90 %, se diluyeron en agua destilada y

DMSO (dimetilsulfóxido), al realizar las pruebas de sensibilidad in vitro se obtuvieron los

siguientes resultados: frente a Lactobacillus acidophilus y a Candida albicans el mayor

efecto lo tuvo la hierba luisa, el aceite esencial de orégano y hierba luisa tienen mayor

efectividad antibacteriana y antifúngica que los controles positivos clorhexidina al 0,12 % y

nistatina [37].

2.2.4. Evaluación de la Fitotoxicidad y la actividad antifúngica contra

Colletotrichum acutatum de los aceites esenciales de tomillo

(Thymus vulgaris), limoncillo (Cymbopogon citratus), y sus

componentes mayoritarios.

En el presente trabajo se evalúa la actividad antifúngica contra la especie C. acutatum de los

aceites esenciales (AE) de tomillo (Thymus vulgaris), limoncillo (Cymbopogon citratus), y

sus componentes mayoritarios, timol y citral [38]. Los resultados demuestran que el timol a

125 mg/L y el citral a 300 mg/L inhiben el crecimiento micelial completamente durante once

días de incubación [38].

19

2.2.5. Efecto de los extractos etanólicos de Jengibre (Ziingiber oficinale)

sobre el crecimiento micelial in vitro de Rhizoctonia Solani AG1 –

1 A

Se evaluó el efecto in vitro del extracto etanólico (EE) del Jengibre, sobre el desarrollo del

hongo. Para los EE se utilizaron rizomas, molidos en una licuadora y macedos en etanol 96

% durante dos días, el crudo se obtuvo con un Rotaevaporador Brikmann y se diluyó en

medio papa-dextrosa-agar en las concentraciones 0; 5; 10; 15; 20 y 25 % y se vertió en platos

de Petri, utilizando cuatro repeticiones (platos) por concentración, en el centro de cada plato

se colocó un disco de agar con micelio de R. solani, se incubaron a 25-27 ºC, hasta que en

el de 0 % la colonia alcanzó la orilla del plato, se midió el diámetro y se calculó el porcentaje

de inhibición del crecimiento del hongo causado por el EE. Los resultaron mostraron

diferencias significativas entre los tratamientos (P<0.001) hasta el noveno día de evaluación,

siendo la concentración 25% la más efectiva [39].

2.2.6. La situación de las annonaceae en México: principales plagas,

enfermedades y su control

Las principales enfermedades de las anonáceas reportadas son: Colletotrichum

gloeosporioides Penz, Rhizopusstolonifer Ehr., Phyllosticta sp., Pestalotiasp., Macrophom

a sp., Fusarium sp y Phytopthora sp., siendo la primera la principal enfermedad de mayor

importancia en el cultivo del guanábano dado que disminuye el rendimiento y calidad de los

frutos, en chirimoyo y guanábano es muy poca la información bibliográfica existente sobre

plagas y enfermedades, y en las demás especies de Annona es nula, no se han realizado

evaluaciones de las pérdidas que ocasionan las plagas y enfermedades en las Anonáceas,

ocasionando un desconocimiento pleno sobre los daños ocasionados por este factor biótico

[40].

20

2.2.7. Estudios biológicos y morfológicos del hongo causante de la

pudrición apical de los frutos del guayabo (Psidium guajava L.)

Se estudió el desarrollo del hongo causante de la pudrición de los frutos del guayabo, para

detectar la presencia de esclerocios en el micelio y determinar la forma, tamaño y color de

los picnidios y picnidiosporas presentes en los tejidos, en el desarrollo del micelio, formación

de picnidios y esclerocios in vitro e in vivo, macroscópicamente, el micelio es de textura

algodonoso e hialino, inicialmente, tornándose de color negro después de 96 horas,

microscópicamente, el micelio es de color marrón rojizo, con hifas septadas, algunas

ramificadas en un ángulo de 90 grados, con una ligera constricción en la base de la nueva

hifa [41].

En los tejidos, los picnidios son globosos a elípticos, individuales, para la formación de

picnidios en los tejidos enfermos, la temperatura óptima fue de 28-30 ºC, la humedad relativa

de un 55-100 % y la luz no tuvo influencia, los nutrientes necesarios son la glucosa y el

almidón, el micelio creció abundante a 28, 30 y 32 ºC, las características morfológicas del

hongo sugieren que pertenece al género Fusicoccum o al género Macrophoma, se hace

necesario estudiar su conidiogénesis para dilucidar definitivamente esta situación [41].

2.2.8. Evaluación in vitro de fungicidas para el control del

hongo Macrophoma sp., agente causal de la pudrición apical del

fruto del Guayabo (Psidium guajava L.).

Los frutos de guayaba en el Estado Zulia son afectados por una pudrición apical causada por

el hongo Macrophoma sp., ocasionando pérdidas económicas debido a la poca eficiencia y

alto costo de las medidas de control químico empleadas en su combate [42].

2.2.9. Caracterización fisiológica, físico-química, reológica,

nutraceútica, estructural y sensorial de la guanábana (annona

muricata l.)

La pérdida fisiológica de peso de la guanábana presentó un comportamiento continuo

creciente durante toda la etapa de poscosecha, con un ligero descenso en la velocidad a partir

del día 6, para este día se encontró una merma del 14,71% del peso. Durante toda la etapa

de poscosecha (incluyendo el período de sobremaduración y senescencia [43].

21

Las guanábanas perdieron un total de 21,72% de su peso. Para frutas de chirimoya, se han

encontrado pérdidas fisiológicas de peso de 14,2% a los ocho días de poscosecha,

almacenadas a 22°C y 60% , frutas de anón (Annona squamosa L.) almacenadas durante 7

días a 4°C y 95%, mostraron pérdidas fisiológicas de peso de 6,7% [43]. Las altas pérdidas

fisiológicas de peso que presentan las Annonaceas sp., hace que su deterioro físico sea muy

rápido comparado con otras frutas climatéricas.

El pH en la fruta el cual presentó comportamiento inverso a la acidez lo que es normal,

debido a que a mayor acidez menor pH, el mínimo valor en el pH se obtuvo

consecuentemente para el día 6 de poscosecha. De acuerdo a los valores encontrados la

guanábana se podría clasificar cómo una fruta de acidez intermedia [44], en la etapa

posclimatérica la disminución de la acidez, puede ser debida probablemente al consumo de

éstas moléculas orgánicas, en los diferentes ciclos metabólicos para proporcionar la energía

requerida por la fruta, además muchos de los ácidos orgánicos participan cómo precursores

de sustancias volátiles, que intensifican su presencia durante este período expresado por [45].

El incremento acelerado que se presenta desde el día 1 hasta el día 6 de poscosecha, donde

alcanzó una concentración de SST de 12,8°Brix, período en el cual la fruta típicamente

climatérica ha mostrado el pico máximo de producción de CO2, aspecto que evidencia la

gran actividad metabólica que involucra el paquete enzimático de las α y β amilasas, las

cuales durante la maduración, hidrolizan el almidón a carbohidratos más simples del tipo

disacáridos y monosacáridos (sacarosa, glucosa y fructosa, mayoritariamente), La Norma

Técnica Colombiana (NTC, 5208) establece para frutas de guanábana en madurez de

consumo, valores mínimos para SST de 13,5 °Brix.

22

CAPÍTULO III

METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN

23

3.1. Localización

Esta investigación se realizó entre los mes de Julio, Agosto y Septiembre del 2017, se utilizó

materiales equipos y reactivos disponibles en el Laboratorio de Microbiología y

Biotecnología del Campus Ing. Manuel Haz Álvarez, ubicado en la Av. Quito km 1 1/2 vía

a Santo Domingo, ubicada geográficamente bajo las coordenadas de 79° 27’ longitud oeste

y 01° 06’ de latitud sur y a una altitud de 73 msnm. El clima de la zona es tropical húmedo,

temperatura media de 25° C, con humedad relativa media de 84%.

3.2. Obtención de materiales para la investigación

En esta investigación se utilizaron aceites esenciales de Cymbopogon citratus (hierba luisa)

y Zingiber officinale (jengibre), adquiridos en la fundación CHANKUAP de la ciudad de

Macas Provincia de Morona Santiago.

La Annona muricata L. (guanábana) utilizada para aislamiento de hongos es procedente de

una finca situada en el Recinto la Saiba perteneciente al Cantón El Empalme Prov. Guayas.

3.3. Métodos de investigación

Método científico: utilizado como un modelo importante que orienta la investigación y la

recopilación de información secundaria previamente seleccionada.

Método de observación: se identificó el hongo adherido a la guanábana en el cual al mismo

se realizaron mediciones radiales, guiados por la compilación de información de un

protocolo claro en evicción de que estos resultados son ciertos al aplicar este método.

Método Inductivo-Deductivo: este método se demuestra matemáticamente mediante

diseños estadísticos como son Statgraphics e InfoStat y así concluir sobre las afirmaciones

o negaciones de las hipótesis planteadas.

Método analítico y síntesis: establece relación entre los microorganismos patógenos

identificados (causa) y la actividad antifungica que ejerce los aceites esenciales (efecto) en

la investigación.

24

3.4. Fuentes de recopilación de información

La redacción de la presente investigación se la obtuvo de fuentes secundarias como: (revistas

científicas, libros, entre otros), con el objetivo de respaldar dicha investigación con datos

bibliográficos.

3.5. Diseño de la investigación

Para el presente estudio se aplicó un Diseño Factorial (A x B x C), con 2 niveles en el Factor

A (hongos), 2 niveles en el Factor B (Aceites esenciales), y 3 niveles en el Factor C

(concentraciones) los cuales están descritos en el cuadro 1. Se obtuvo un modelo de 12

tratamientos y 2 repeticiones; sé realizó un Diseño Completamente al Azar (DCA) y se

analizaron los resultados con la prueba de significancia de Tukey (p<0.05).

3.5.1. Factores de estudio

Los factores de estudio que intervino en la investigación corresponden a los siguientes:

ELABORADO POR: Zamora, L. 2017

Tabla 4. Descripción de los factores de estudio para la identificación de la



hongos adheridos a la Annona Muricata L.

Factores Simbología Descripción

A: Hongos Patógenos

a0

a1

Hongo 1

Hongo 2

B: Aceites Esenciales

(comercial)

b0 Cymbopogon

citratus (hierba luisa)

b1

Zingiber officinale

(jengibre)

C: Concentraciones

c0 Concentración 1

c1 Concentración 2

c2 Concentración 3

25

3.6. Instrumentos de investigación

En la presente investigación se evaluó el porcentaje de inhibición micelial de cada uno de

los tratamientos los datos que se obtuvieron fueron ingresados en el programa estadístico

Statgraphics el mismo que permite establecer si existe o no diferencia significativa entre

cada uno de los factores analizados.

3.7. Tratamiento de los datos

Se aplicó un diseño completamente al azar (DCA) en un arreglo factorial A*B*C, dando

lugar al siguiente cuadro de tratamientos:

Tabla 5. Combinación de los tratamientos propuestos para la Identificación de la


Cymbopogon citratus (hierba luisa), Zingiber officinale (jengibre) en hongos

adheridos a la Annona muricata L.


TRATAMIENTOS SIMBOLOGÍA DESCRIPCIÓN

T1 a0b0c0 Macrophoma sp + AE Hierba luisa + 10 %



T4 a0b1c0 Macrophoma sp + AE Jengibre + 10 %



T7 a1b0c0 Verticillum sp+ AE Hierba luisa + 10 %



T10 a1b1c0 Verticillum sp + AE Jengibre + 10 %



26

3.8. Recursos humanos y materiales

3.8.1. Recursos humanos

Tutor de proyecto de investigación

Jefe de laboratorio de Microbiología

Jefe de laboratorio de Química básica

Jefe de laboratorio de Biotecnología

3.8.2. Materiales de laboratorio

Tabla 6. Materiales, equipo y reactivos para aislamientos de hongos


Tabla 7. Materiales, equipo y reactivos para preparación de PDA


Aislamiento hongos de Annona muricata L. (guanábana)

Materiales Equipos Reactivos

Gasa

Bisturí

Cajas Petri

Cinta Parafilm

Marcador indeleble

Mechero

Fosforera

Papel toalla

Cámara de

aislamiento

laminar

Incubadora

PDA (Papa Dextrosa Agar) con

antibiótico (Sulfato de

Estreptomicina y Cloranfenicol

“GM”) al 1 %.

Alcohol

Agua esterilizada

PDA (Papa Dextrosa Agar)


Algodón

Matraz Erlenmeyer 1000

mL

Marcador indelible

Micropipeta de 100 µL a

1000 µL

Papel aluminio

Varilla de vidrio

Autoclave

Balanza

Microondas

Refrigerador


Sulfato de Estreptomicina y

Cloranfenicol “GM”

Agua destilada

Alcohol

27

Tabla 8 Materiales, equipo y reactivos para repique de hongo


Tabla 9 Materiales, equipo y reactivos para inhibición de hongos


3.9. Manejo especifico del experimento

3.9.1. Obtención de los aceites esenciales

Los aceites esenciales de hierba luisa y jengibre fueron adquiridos de la Fundación

CHANKUAP

Repique de hongos

Materiales Equipos Otros

Algodón

Espátula

Cajas Petri

Gradilla

Marcador indeleble

Mechero

Probeta de 10 ml

Tarugo

Fosforera

Cámara de aislamiento

laminar

Incubadora

Refrigerador

Hongo madres por identificar

Alcohol

Inhibición de hongos


Algodón

Asa

Cajas Petri

Cinta Parafilm

Marcador indelible

Matraz Erlenmeyer 100

mL

Mechero

Fosforera

Micropipeta de 100 µL a

1000 µL

Pipetas Pasteur

esterilizadas

Probeta de 100 Ml

Cámara de flujo laminar

Incubadora


Sulfato de Estreptomicina y

Cloranfenicol “GM”

Alcohol

Agua destilada

Aceite esencial de hierba

luisa y jengibre

Solución de TWEEN 20

28

Preparación del PDA (Papa Dextrosa Agar)

La preparación del PDA (Papa Dextrosa Agar) se pesó 19,5 g de PDA disolviendo en 500

mL de agua se mantuvo en el microondas durante 5 minutos esperando que se disuelva

completamente, el mismo fue esterilizado durante tres horas en el autoclave se esperó hasta

que el PDA se temple para así añadir antibióticos (Sulfato de Estreptomicina y Cloranfenicol

“GM”), para su conservación se lo mantuvo en refrigeración.

Desinfección de la guanábana

La muestra se lavó con agua destilada eliminando cualquier residuo de materia extraña; esta

se desinfectó con una solución de hipoclorito de sodio al 3 %, esta se secó con papel toalla;

la muestra se colocó en una cámara húmeda previamente desinfectada para que comience su

proceso de descomposición.

Aislamiento de los hongos

El aislamiento de los hongos se realizó en la cámara de aislamiento laminar previamente

desinfectada con alcohol, con la ayuda del bisturí esterilizado se procedió a cortar pequeños

fragmentos de la guanábana, con la espátula esterilizada se sembró ocho muestras de

guanábana en cajas Petri con PDA (Papa Dextrosa Agar) estas fueron rotuladas y selladas

con cinta Parafilm posteriormente se dejó en la incubadora por 5 días a 28 °C.

Repique de hongos aislados

Los hongos se aíslaron en la cámara laminar cerca del mechero se procedió a colocar PDA

(Papa Dextrosa Agar) en las cajas petri al ser este gelificado se tomó la caja petri en donde

se encontraba el hongo madre con el tarugo esterilizado se procedió a tomar varias muestras

la cual con la ayuda de una espátula estéril se retiró parte de la muestra seleccionada,

inmediatamente fue sembrada en la caja petri con PDA (Papa Dextrosa Agar) estas fueron

rotuladas y selladas con cinta Parafilm posteriormente se dejó en la incubadora por 5 días a

28 °C, el tiempo de desarrolló del hongo fue 24 horas.

29

Identificación del hongo

Para la identificación del hongo se procedió a realizar placas y con el microscopio se pudo

observar al hongo Macrophoma sp, el mismo que estaba formado por picnidios y al

Verticillum sp., y la formación de sus conidios.

Proceso de Inhibición radial de hongos

Para la inhibición del hongo (Macrophoma sp., y Verticillum sp.) se dejaron dos testigo para

comparar con los tratamientos evaluando el porcentaje de inhibición del aceite esencial de

hierba luisa y jengibre se utilizaron concentraciones al 10 %, 15 %, 20 % , los mismos que

fueron disueltos en una solución de Tween 20, se colocó 10 ml de PDA en cajas Petri estéril

luego se procedió a invertir la concentraciones ya establecidas la misma que fue dispersada

por toda la caja con ayuda de un rastrillo, se sembró el hongo, estas fueron rotuladas y

selladas con cinta parafilm dejándolo en incubación a 28 °C; se realizó un control de

desarrollo del hongo durante 5 días midiendo el crecimiento micelial; para calcular el % de

inhibición del crecimiento se utilizó la siguiente fórmula: [46].

Ecuación 1. Porcentaje (%) de inhibición del crecimiento radial de los hongos

% 𝐝𝐞 𝐈𝐧𝐡𝐢𝐛𝐢𝐜𝐢ó𝐧 =𝐂𝐫𝐞𝐜𝐢𝐦𝐢𝐞𝐧𝐭𝐨 𝐦𝐢𝐜𝐞𝐥𝐢𝐚𝐥 𝐭𝐞𝐬𝐭𝐢𝐠𝐨−𝐂𝐫𝐞𝐜𝐢𝐦𝐢𝐞𝐧𝐭𝐨 𝐦𝐢𝐜𝐞𝐥𝐢𝐚𝐥 𝐭𝐫𝐚𝐭𝐚𝐦𝐢𝐞𝐧𝐭𝐨

𝐂𝐫𝐞𝐜𝐢𝐦𝐢𝐞𝐧𝐭𝐨 𝐦𝐢𝐜𝐞𝐥𝐢𝐚𝐥 𝐭𝐞𝐬𝐭𝐢𝐠𝐨∗ 𝟏𝟎𝟎

3.9.2. Analisis Fisicos quimicos de la Annona muricata L. (guanabana)

Pérdida de peso

El cálculo del peso de un cuerpo a partir de su masa se puede expresar mediante la segunda

ley de la dinámica

Se procedió a pesar las muestras de la Annona muricata L., en (g) en la balanza analítica

luego de esto se procedió a sacra el peso

w = m ∙ g

http://es.wikipedia.org/wiki/Leyes_de_Newton

http://es.wikipedia.org/wiki/Leyes_de_Newton

30

Donde w es peso, m es masa y g es la gravedad, tiene diferentes valores dependiendo el

sistema en el que se encuentre

Solidos totales (ºBrix)

Para la determinación de los sólidos totales (0Brix) se procede a calibrar el refractómetro con

agua destilada, se coloca una gota de la muestra continuamente se lleva a tomar la pertinente

lectura.

pH

Se lo realizo empleando papel indicador, el cual se aplicó directamente la cinta indicadora a

la fruta a estudiar Annona muricat L. (guanábana), se esperó un lapso de 3 min para

posteriormente tomar la respectiva lectura.

31

CAPÍTULO IV

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

32

4.1. Resultados

4.1.1. Aislamiento e identificación de los hongos patógenos presentes en

Annona muricata L. (guanábana)

Se realizó el aislamiento a partir del fruto infectado en donde se tomó pequeñas partes de

muestra de Annona muricata L. (guanábana) para incubación en PDA a 28 ºC, verificando

en cajas petri la estructura del hongo, seguidamente de esto se estableció placas y se pudo

identificar microscópicamente a Macrophoma sp.

Figura 1 Aislamiento e identificación de Macrophoma sp., en Annona muricata L.

(guanábana)

ELABORADO POR: Zamora, L. (2017)

Interpretación: De los aislamientos realizados en el laboratorio de Microbiología de la

Universidad Técnica Estatal de Quevedo, se identificó al hongo Macrophoma sp., El

medio de cultivo en que se sembró el microrganismo fue en PDA, este hongo mostró un

crecimiento agresivo, micelio de color blanco hasta 48 horas, después de la siembra para

cambiar a un color verde oliva a verde oscuro y finalmente tomarse negro, el micelio es

de apariencia algodonosa, después de 120 horas de la siembra el hongo cubrió todo el

espacio de la caja petri (9 cm de diámetro), las condiciones de incubación a nivel de

laboratorio fueron: temperatura 28 ºC.

33

La identificación se la realizó a los 5 días, después de la siembra en función de los cuerpos

fructíferos y picnidios presentes, para corroborar se envió muestras del micelio a INIAP

(Instituto Nacional de Investigación Agropecuarias) en la cual los resultados de la

identificación del micelio fue de Macrophoma sp.

Figura 2 Aislamiento e identificación de Verticillum sp., en Annona muricata L.

(guanábana)


Interpretación: Verticillum sp., este micelio produce necrosis en frutas se realizó el

aislamiento a partir de la Annona muricata L. (guanábana), de los aislamiento realizados en

el laboratorio de Microbiología de la Universidad Técnica Estatal de Quevedo se identificó

al hongo Verticillum sp., el medio de cultivo en que se sembró el microrganismo fue en PDA

este hongo mostro un crecimiento agresivo, micelio de color blanco, las condiciones de

incubación a nivel de laboratorio fueron: temperatura 28 ºC., la identificación se la realizo

al 4 día después de la siembra en función, para corroborar se envió muestras del micelio a

INIAP (Instituto Nacional de Investigación Agropecuarias) en la cual los resultados de la

identificación del micelio fue de Verticillum sp.

34

4.1.2. Resultados del análisis de varianza de las variables a estudiar.

A continuación, se presenta el análisis de varianza del crecimiento micelial de los hongos

Macrophoma sp., y Verticillum sp., por 24 horas.

Tabla 10. Análisis de varianza del crecimiento micelial por 24 h/cm

Fuente Suma de

Cuadrados

Gl Cuadrado Medio Razón-F Valor-P

EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 0,0408375 1 0,0408375 24,89 0,0004

B:Factor B 7,90054 1 7,90054 4815,84 0,0000

C:Factor C 3,36101 2 1,6805 1024,37 0,0000

D:Replicas 0,00700417 1 0,00700417 4,27 0,0632

INTERACCIONES

AB 0,262504 1 0,262504 160,01 0,0000

AC 0,258475 2 0,129237 78,78 0,0000

BC 1,22228 2 0,611138 372,52 0,0000

ABC 0,120808 2 0,0604042 36,82 0,0000

RESIDUOS 0,0180458 11 0,00164053

TOTAL (CORREGIDO) 13,1915 23 Nivel de confianza p <0,05

Coeficiente de varianza: 4,82


Interpretación: En la tabla 10 se observa, que existe diferencia significativa en el factor A

(Hongos a0 – a1), B (Aceites esenciales b0 – b1), factor C (Concentraciones c0 – c1 – c2),

también presenta diferencia en la interacción AB (Hongos a0 – a1 + Aceites esenciales b0 –

b1), AC (Hongos a0 – a1 + concentraciones c0 – c1 – c2), BC (Aceites esenciales b0 – b1 +

concentraciones c0 – c1 – c2), ABC (Hongos a0 – a1 + Aceites esenciales b0 – b1 +

concentraciones c0 – c1 – c2) para lo cual es necesario realizar una prueba de significación

(Tukey p <0.05), en las réplicas no existió diferencia significativa.

35

La siguiente tabla, presenta el análisis de varianza del crecimiento micelial de los hongos



Fuente Suma de

Cuadrados

Gl Cuadrado

Medio

Razón-F Valor-P

EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 0,256267 1 0,256267 99,26 0,0000

B:Factor B 38,1024 1 38,1024 14757,97 0,0000

C:Factor C 16,3459 2 8,17295 3165,58 0,0000

D:Replicas 0,0006 1 0,0006 0,23 0,6392

INTERACCIONES

AB 0,448267 1 0,448267 173,62 0,0000

AC 0,699033 2 0,349517 135,38 0,0000

BC 6,2671 2 3,13355 1213,70 0,0000

ABC 1,03343 2 0,516717 200,14 0,0000

RESIDUOS 0,0284 11 0,00258182

TOTAL (CORREGIDO) 63,1814 23

Nivel de confianza p <0,05



Interpretación: Según la tabla 11, del análisis de varianza (ADEVA), indicó que existe

diferencia significativa en el factor A (Hongos a0 – a1), B (Aceites esenciales b0 – b1), factor

C (Concentraciones c0 – c1 – c2), también presenta diferencia en la interacción AB (Hongos

a0 – a1 + Aceites esenciales b0 – b1), AC (Hongos a0 – a1 + concentraciones c0 – c1 – c2), BC

(Aceites esenciales b0 – b1 + concentraciones c0 – c1 – c2), ABC (Hongos a0 – a1 + Aceites

esenciales b0 – b1 + concentraciones c0 – c1 – c2), para lo cual es necesario realizar una prueba

de significación (Tukey p <0.05), mientras que en las réplicas no existió diferencia

significativa.

36

La siguiente tabla, presenta el análisis de varianza del crecimiento micelial de los hongos



Fuente Suma de

Cuadrados


EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 0,150417 1 0,150417 52,28 0,0000

B:Factor B 62,4037 1 62,4037 21688,51 0,0000

C:Factor C 25,5233 2 12,7617 4435,33 0,0000

D:Replicas 0,01215 1 0,01215 4,22 0,0644

INTERACCIONES

AB 0,828817 1 0,828817 288,06 0,0000

AC 0,581733 2 0,290867 101,09 0,0000

BC 5,1124 2 2,5562 888,41 0,0000

ABC 1,37293 2 0,686467 238,58 0,0000

RESIDUOS 0,03165 11 0,00287727




Interpretación: La tabla 12, se halla diferencia significativa entre los niveles del factor A

(Hongos a0 – a1), factor B (Aceites esenciales b0 – b1), factor C (Concentraciones c0 – c1 –

c2), también presenta diferencia en la interacción AB (Hongos a0 – a1 + Aceites esenciales

b0 – b1), AC (Hongos a0 – a1 + concentraciones c0 – c1 – c2), BC (Aceites esenciales b0 – b1

+ concentraciones c0 – c1 – c2), ABC (Hongos a0 – a1 + Aceites esenciales b0 – b1 +

concentraciones c0 – c1 – c2) por cual fue necesario efectuar una prueba de significación

(Tukey p <0.05), mientras que en las réplicas no existió diferencia significativa.

37

La siguiente tabla, presenta el análisis de varianza correspondiente a las 24 horas de

inhibición de los hongos Macrophoma sp., y Verticillum sp.

Tabla 13. Análisis de Varianza porcentaje de inhibición de los hongos a las 24 Horas

Fuente Suma de

Cuadrados

Gl Cuadrado

Medio

Razón-F Valor-P

EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 21,4704 1 21,4704 18,91 0,0012

B:Factor B 5557,13 1 5557,13 4895,06 0,0000

C:Factor C 2355,44 2 1177,72 1037,41 0,0000

D:Replicas 4,87802 1 4,87802 4,30 0,0625

INTERACCIONES

AB 197,915 1 197,915 174,34 0,0000

AC 178,296 2 89,148 78,53 0,0000

BC 855,276 2 427,638 376,69 0,0000

ABC 82,2988 2 41,1494 36,25 0,0000

RESIDUOS 12,4878 11 1,13525




Interpretación: De acuerdo a la tabla 13, muestra que existe diferencia significativa en el

factor A (Hongos a0 – a1), factor B (Aceites esenciales b0 – b1), factor C (Concentraciones c0

– c1 – c2), en las interaccione AB (Hongos a0 – a1 + Aceites esenciales b0 – b1), AC (Hongos

a0 – a1 + concentraciones c0 – c1 – c2), BC (Aceites esenciales b0 – b1 + concentraciones c0

– c1 – c2), ABC (Hongos a0 – a1 + Aceites esenciales b0 – b1 + concentraciones c0 – c1 – c2),

para lo cual es necesario realizar una prueba de significación (Tukey p <0.05), mientras que

en las réplicas no existió diferencia significativa.

38

A continuación, presenta el análisis de varianza correspondiente a las 72 horas de inhibición

de los hongos Macrophoma sp., y Verticillum sp.


Fuente Suma de

Cuadrados

Gl Cuadrado

Medio

Razón-F Valor-P

EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 39,3472 1 39,3472 87,57 0,0000

B:Factor B 6645,02 1 6645,02 14789,28 0,0000

C:Factor C 2845,59 2 1422,79 3166,60 0,0000

D:Replicas 0,102704 1 0,102704 0,23 0,6419

INTERACCIONES

AB 82,9188 1 82,9188 184,55 0,0000

AC 118,292 2 59,146 131,64 0,0000

BC 1089,39 2 544,696 1212,29 0,0000

ABC 177,304 2 88,6518 197,31 0,0000

RESIDUOS 4,94245 11 0,449313




Interpretación: La tabla 14, presenta diferencia significativa entre los niveles del factor A

(Hongos a0 – a1), factor B (Aceites esenciales b0 – b1), factor C (Concentraciones c0 – c1 –

c2), en las interaccione AB (Hongos a0 – a1 + Aceites esenciales b0 – b1), AC (Hongos a0 –

a1 + concentraciones c0 – c1 – c2), BC (Aceites esenciales b0 – b1 + concentraciones c0 – c1

– c2), ABC (Hongos a0 – a1 + Aceites esenciales b0 – b1 + concentraciones c0 – c1 – c2) a

excepción de las réplicas donde no existió diferencia significativa, por ende se ejecutó una

prueba de significación (Tukey p <0.05) para establecer diferencia entre las medias de los

niveles de los tratamientos.

39

A continuación, presenta el análisis de varianza correspondiente a las 120 horas de inhibición

de los hongos Macrophoma sp., y Verticillum sp.


Fuente Suma de

Cuadrados

Gl Cuadrado

Medio

Razón-F Valor-P

EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 19,3142 1 19,3142 54,23 0,0000

B:Factor B 7710,98 1 7710,98 21650,95 0,0000

C:Factor C 3155,1 2 1577,55 4429,46 0,0000

D:Replicas 1,495 1 1,495 4,20 0,0651

INTERACCIONES

AB 101,476 1 101,476 284,93 0,0000

AC 72,2648 2 36,1324 101,45 0,0000

BC 632,252 2 316,126 887,62 0,0000

ABC 169,966 2 84,9829 238,62 0,0000

RESIDUOS 3,91765 11 0,35615




Interpretación: En la tabla 15, existió diferencia significativa entre los factores A (Hongos

a0 – a1), B (Aceites esenciales b0 – b1), factor C (Concentraciones c0 – c1 – c2) y en la

interacción AB (Hongos a0 – a1 + Aceites esenciales b0 – b1), AC (Hongos a0 – a1 +

concentraciones c0 – c1 – c2) BC (Aceites esenciales b0 – b1 + concentraciones c0 – c1 – c2),

ABC (Hongos a0 – a1 + Aceites esenciales b0 – b1 + concentraciones c0 – c1 – c2) si existió

diferencia significativa, por lo cual se debe realizar una prueba de significación (Tukey p

<0.05), en las réplicas no existió diferencia significativa, por lo tanto no es necesario

emplear una prueba de significación.

40

A continuación, presenta el análisis de varianza del peso (D) de la Annona muricata L.

(guanábana) en 24 horas (día 1)

Tabla 16. Análisis de Varianza del peso (D) de la Annona muricata L. (guanábana) en 24

horas

Fuente Suma de

Cuadrados

Gl Cuadrado

Medio

Razón-F Valor-P

EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 1,85321E9 1 1,85321E9 2029,57 0,0000

B:Factor B 2,65129E11 1 2,65129E11 290359,51 0,0000

C:Factor C 1,13426E10 2 5,6713E9 6210,99 0,0000

D:Replicas 2,11688E7 1 2,11688E7 23,18 0,0520

INTERACCIONES

AB 6,44114E9 1 6,44114E9 7054,09 0,0000

AC 1,299E9 2 6,49501E8 711,31 0,0000

BC 2,69094E9 2 1,34547E9 1473,50 0,0000

ABC 5,43333E9 2 2,71667E9 2975,19 0,0000

RESIDUOS 1,00442E7 11 913108,

TOTAL (CORREGIDO) 2,94221E11 23 Nivel de confianza p <0,05



Interpretación: De acuerdo a la tabla 16, existió diferencia significativa entre los factores

A (Hongos a0 – a1), B (Aceites esenciales b0 – b1), factor C (Concentraciones c0 – c1 – c2) y

en la interacción AB (Hongos a0 – a1 + Aceites esenciales b0 – b1), AC (Hongos a0 – a1 +






41

La siguiente tabla, presenta el análisis de varianza del peso (D) de la Annona muricata L.



horas

Fuente Suma de

Cuadrados

Gl Cuadrado

Medio

Razón-F Valor-P

EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 1,16603E9 1 1,16603E9 2098,35 0,0000

B:Factor B 2,83461E11 1 2,83461E11 510110,67 0,0000

C:Factor C 1,2399E10 2 6,19952E9 11156,52 0,0000

D:Replicas 3,02626E7 1 3,02626E7 54,46 0,0237

INTERACCIONES

AB 6,52166E9 1 6,52166E9 11736,24 0,0000

AC 1,15192E9 2 5,7596E8 1036,49 0,0000

BC 2,30399E9 2 1,15199E9 2073,10 0,0000

ABC 5,27802E9 2 2,63901E9 4749,11 0,0000

RESIDUOS 6,11255E6 11 555686,




Interpretación: En tabla 17, existió diferencia significativa entre los factores A (Hongos a0

– a1), B (Aceites esenciales b0 – b1), factor C (Concentraciones c0 – c1 – c2) y en la interacción

AB (Hongos a0 – a1 + Aceites esenciales b0 – b1), AC (Hongos a0 – a1 + concentraciones c0

– c1 – c2) BC (Aceites esenciales b0 – b1 + concentraciones c0 – c1 – c2), ABC (Hongos a0 –

a1 + Aceites esenciales b0 – b1 + concentraciones c0 – c1 – c2) si existió diferencia

significativa, por lo cual se debe realizar una prueba de significación (Tukey p <0.05), en

las réplicas no existió diferencia significativa, por lo tanto no es necesario emplear una

prueba de significación.

42




horas

Fuente Suma de

Cuadrados

Gl Cuadrado

Medio

Razón-F Valor-P

EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 2,26296E8 1 2,26296E8 676,15 0,0000

B:Factor B 2,99991E11 1 2,99991E11 896337,87 0,0000

C:Factor C 1,70733E10 2 8,53667E9 25506,59 0,0000

D:Replicas 2,70513E7 1 2,70513E7 80,83 0,0251

INTERACCIONES

AB 4,38957E9 1 4,38957E9 13115,52 0,0000

AC 1,83587E9 2 9,17933E8 2742,68 0,0000

BC 4,95866E9 2 2,47933E9 7407,96 0,0000

ABC 5,68963E9 2 2,84482E9 8499,98 0,0000

RESIDUOS 3,68153E6 11 334685,












43




horas

Fuente Suma de

Cuadrados

Gl Cuadrado

Medio

Razón-F Valor-P

EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 2,66367E7 1 2,66367E7 68,43 0,0000

B:Factor B 2,79534E11 1 2,79534E11 718130,27 0,0000

C:Factor C 2,1106E10 2 1,0553E10 27110,85 0,0000

D:Replicas 3,8456E7 1 3,8456E7 98,79 0,0522

INTERACCIONES

AB 1,97574E9 1 1,97574E9 5075,71 0,0000

AC 3,17578E9 2 1,58789E9 4079,33 0,0000

BC 4,68127E9 2 2,34063E9 6013,14 0,0000

ABC 6,8796E9 2 3,4398E9 8836,92 0,0000

RESIDUOS 4,28178E6 11 389253,




Interpretación: En tabla 19, existió diferencia significativa entre los factor A (Hongos a0 –

a1), factor B (Aceites esenciales b0 – b1), factor C (Concentraciones c0 – c1 – c2), en las

interaccione AB (Hongos a0 – a1 + Aceites esenciales b0 – b1), AC (Hongos a0 – a1 +

concentraciones c0 – c1 – c2), BC (Aceites esenciales b0 – b1 + concentraciones c0 – c1 – c2),

ABC (Hongos a0 – a1 + Aceites esenciales b0 – b1 + concentraciones c0 – c1 – c2) a excepción

de las réplicas donde no existió diferencia significativa, por ende se ejecutó una prueba de

significación (Tukey p <0.05) para establecer diferencia entre las medias de los niveles de

los tratamientos.

44



Tabla 20. La siguiente tabla, presenta el análisis de varianza del peso (D) de la Annona

muricata L. (guanábana) en 288 horas

Fuente Suma de

Cuadrados

Gl Cuadrado

Medio

Razón-F Valor-P

EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 7,93316E8 1 7,93316E8 3894,13 0,0000

B:Factor B 2,71763E11 1 2,71763E11 1333992,79 0,0000

C:Factor C 2,96489E10 2 1,48245E10 72768,36 0,0000

D:Replicas 3,13731E7 1 3,13731E7 154,00 0,0521

INTERACCIONES

AB 1,0921E9 1 1,0921E9 5360,74 0,0000

AC 6,01841E9 2 3,0092E9 14771,19 0,0000

BC 6,5827E9 2 3,29135E9 16156,15 0,0000

ABC 7,42453E9 2 3,71226E9 18222,28 0,0000

RESIDUOS 2,24093E6 11 203721,











los tratamientos.

45



Tabla 21. La siguiente tabla, presenta el análisis de varianza del peso (D) de la Annona

muricata L. (guanábana) en 360 horas

Fuente Suma de

Cuadrados

Gl Cuadrado

Medio

Razón-F Valor-P

EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 1,42641E9 1 1,42641E9 4261,95 0,0000

B:Factor B 2,81017E11 1 2,81017E11 839646,74 0,0000

C:Factor C 6,45875E10 2 3,22937E10 96490,02 0,0000

D:Replicas 4,62593E7 1 4,62593E7 138,22 0,0526

INTERACCIONES

AB 2,52511E9 1 2,52511E9 7544,74 0,0000

AC 8,2135E9 2 4,10675E9 12270,50 0,0000

BC 8,23574E9 2 4,11787E9 12303,72 0,0000

ABC 4,95419E9 2 2,47709E9 7401,27 0,0000

RESIDUOS 3,68153E6 11 334685,












46

La siguiente tabla, presenta el análisis de varianza de los sólidos solubles (ºBrix) de la

Annona muricata L. (guanábana) en 24 horas (día 1)

Tabla 22. Análisis de Varianza de los sólidos solubles (ºBrix) de la Annona muricata L.

(guanábana) en 24 horas

Fuente Suma de

Cuadrados

Gl Cuadrado

Medio

Razón-F Valor-P

EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 0,375 1 0,375 2,83 0,1207

B:Factor B 0,375 1 0,375 2,83 0,1207

C:Factor C 0,25 2 0,125 0,94 0,4189

D:Replicas 1,04167 1 1,04167 7,86 0,0072

INTERACCIONES

AB 0,375 1 0,375 2,83 0,1207

AC 0,25 2 0,125 0,94 0,4189

BC 0,25 2 0,125 0,94 0,4189

ABC 0,25 2 0,125 0,94 0,4189

RESIDUOS 1,45833 11 0,132576




Interpretación: De acuerdo a la tabla 22, no existió diferencia significativa entre las medias

de los niveles de los tratamientos por lo cual no es necesario realizar una prueba de

significación (Tukey p <0.05).

47



Tabla 23. Análisis de varianza de los sólidos solubles (ºBrix) de la Annona muricata L.


Fuente Suma de

Cuadrados

Gl Cuadrado

Medio

Razón-F Valor-P

EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 1,30667 1 1,30667 25,07 0,0004

B:Factor B 0,24 1 0,24 4,60 0,0550

C:Factor C 46,3633 2 23,1817 444,76 0,0000

D:Replicas 4,50667 1 4,50667 86,47 0,0532

INTERACCIONES

AB 0,00666667 1 0,00666667 0,13 0,7274

AC 1,86333 2 0,931667 17,88 0,0003

BC 7,93 2 3,965 76,07 0,0000

ABC 2,56333 2 1,28167 24,59 0,0001

RESIDUOS 0,573333 11 0,0521212





– a1), factor C (Concentraciones c0 – c1 – c2) y en la interacción AC (Hongos a0 – a1 +






48



Tabla 24. Análisis de Varianza de los sólidos solubles (ºBrix) de la Annona muricata L.


Fuente Suma de

Cuadrados

Gl Cuadrado

Medio

Razón-F Valor-P

EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 12,7604 1 12,7604 134,80 0,0000

B:Factor B 11,6204 1 11,6204 122,76 0,0000

C:Factor C 81,9858 2 40,9929 433,06 0,0000

D:Replicas 2,34375 1 2,34375 24,76 0,0424

INTERACCIONES

AB 0,0704167 1 0,0704167 0,74 0,4068

AC 0,285833 2 0,142917 1,51 0,2634

BC 0,725833 2 0,362917 3,83 0,0545

ABC 1,72583 2 0,862917 9,12 0,0046

RESIDUOS 1,04125 11 0,0946591








<0.05), en las réplicas y en las interacciones AB (Hongos a0 – a1 + Aceites esenciales b0 –

b1), AC (Hongos a0 – a1 + concentraciones c0 – c1 – c2) BC (Aceites esenciales b0 – b1 +

concentraciones c0 – c1 – c2), no existió diferencia significativa.

49





Fuente Suma de

Cuadrados

Gl Cuadrado

Medio

Razón-F Valor-P

EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 6,82667 1 6,82667 91,58 0,0000

B:Factor B 32,6667 1 32,6667 438,21 0,0000

C:Factor C 80,01 2 40,005 536,65 0,0000

D:Replicas 1,5 1 1,5 20,12 0,0562

INTERACCIONES

AB 0,426667 1 0,426667 5,72 0,0357

AC 5,10333 2 2,55167 34,23 0,0000

BC 4,62333 2 2,31167 31,01 0,0000

ABC 2,10333 2 1,05167 14,11 0,0009

RESIDUOS 0,82 11 0,0745455











los tratamientos.

50





Fuente Suma de

Cuadrados

Gl Cuadrado

Medio

Razón-F Valor-P

EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 7,15042 1 7,15042 130,10 0,0000

B:Factor B 29,2604 1 29,2604 532,37 0,0000

C:Factor C 102,742 2 51,3712 934,67 0,0000

D:Replicas 0,920417 1 0,920417 16,75 0,0180

INTERACCIONES

AB 0,00375 1 0,00375 0,07 0,7988

AC 0,645833 2 0,322917 5,88 0,0184

BC 9,10583 2 4,55292 82,84 0,0000

ABC 1,9825 2 0,99125 18,04 0,0003

RESIDUOS 0,604583 11 0,0549621






interaccione AC (Hongos a0 – a1 + concentraciones c0 – c1 – c2), BC (Aceites esenciales b0

– b1 + concentraciones c0 – c1 – c2), ABC (Hongos a0 – a1 + Aceites esenciales b0 – b1 +

concentraciones c0 – c1 – c2) a excepción de las réplicas y en la interacción AB (Hongos a0

– a1 + Aceites esenciales b0 – b1), donde no existió diferencia significativa, por ende se

ejecutó una prueba de significación (Tukey p <0.05) para establecer diferencia entre las

medias de los niveles de los tratamientos.

51





Fuente Suma de

Cuadrados

Gl Cuadrado

Medio

Razón-F Valor-P

EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 12,3267 1 12,3267 607,13 0,0000

B:Factor B 39,5267 1 39,5267 1946,84 0,0000

C:Factor C 74,9233 2 37,4617 1845,13 0,0000

D:Replicas 0,326667 1 0,326667 16,09 0,0220

INTERACCIONES

AB 2,80167 1 2,80167 137,99 0,0000

AC 2,26333 2 1,13167 55,74 0,0000

BC 4,04333 2 2,02167 99,57 0,0000

ABC 1,34333 2 0,671667 33,08 0,0000

RESIDUOS 0,223333 11 0,020303












52

La siguiente tabla, presenta el análisis de varianza del pH de la Annona muricata L.


Tabla 28. Análisis de varianza del pH de la Annona muricata L. (guanábana) en 24 horas

Fuente Suma de Cuadrados Gl Cuadrado Medio Razón-F Valor-P

EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 0 1 0 0,00 1,0000

B:Factor B 0 1 0 0,00 1,0000

C:Factor C 1,33333 2 0,666667 5,50 0,0221

D:Replicas 0,666667 1 0,666667 5,50 0,0588

INTERACCIONES

AB 0 1 0 0,00 1,0000

AC 0 2 0 0,00 1,0000

BC 0 2 0 0,00 1,0000

ABC 0 2 0 0,00 1,0000

RESIDUOS 1,33333 11 0,121212




Interpretación: En tabla 28, existió diferencia significativa en el factor C (Concentraciones

c0 – c1 – c2) mientras que en el factor A (Hongos a0 – a1), B (Aceites esenciales b0 – b1), y en

las interacciones AB (Hongos a0 – a1 + Aceites esenciales b0 – b1), AC (Hongos a0 – a1 +


ABC (Hongos a0 – a1 + Aceites esenciales b0 – b1 + concentraciones c0 – c1 – c2), réplicas no

existió diferencia significativa, por lo tanto no es necesario emplear una prueba de

significación.

53




Fuente Suma de

Cuadrados

Gl Cuadrado

Medio

Razón-F Valor-P

EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 0,0416667 1 0,0416667 0,41 0,5364

B:Factor B 0,0416667 1 0,0416667 0,41 0,5364

C:Factor C 2,08333 2 1,04167 10,19 0,0531

D:Replicas 0,375 1 0,375 3,67 0,0819

INTERACCIONES

AB 0,0416667 1 0,0416667 0,41 0,5364

AC 0,0833333 2 0,0416667 0,41 0,6750

BC 0,0833333 2 0,0416667 0,41 0,6750

ABC 0,0833333 2 0,0416667 0,41 0,6750

RESIDUOS 1,125 11 0,102273




Interpretación: En tabla 29, no existió diferencia significativa entre las medias de los

niveles de los tratamientos por lo cual no es necesario realizar una prueba de significación

(Tukey p <0.05).

54




Fuente Suma de

Cuadrados


EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 0,0416667 1 0,0416667 1,00 0,3388

B:Factor B 0,0416667 1 0,0416667 1,00 0,3388

C:Factor C 4,08333 2 2,04167 49,00 0,0000

D:Replicas 0,0416667 1 0,0416667 1,00 0,3388

INTERACCIONES

AB 0,0416667 1 0,0416667 1,00 0,3388

AC 0,0833333 2 0,0416667 1,00 0,3990

BC 0,0833333 2 0,0416667 1,00 0,3990

ABC 0,0833333 2 0,0416667 1,00 0,3990

RESIDUOS 0,458333 11 0,0416667





c0 – c1 – c2) mientras que en el factor A (Hongos a0 – a1), en la interacción AC (Hongos a0 –

a1 + concentraciones c0 – c1 – c2) BC (Aceites esenciales b0 – b1 + concentraciones c0 – c1

– c2), ABC (Hongos a0 – a1 + Aceites esenciales b0 – b1 + concentraciones c0 – c1 – c2) y en



55




Fuente Suma de Cuadrados Gl Cuadrado Medio Razón-F Valor-P

EFECTOS PRINCIPALES

A:Factor A 0,0416667 1 0,0416667 1,00 0,3388

B:Factor B 0,0416667 1 0,0416667 1,00 0,3388

C:Factor C 4,75 2 2,375 57,00 0,0000

D:Replicas 0,0416667 1 0,0416667 1,00 0,3388

INTERACCIONES

AB 0,0416667 1 0,0416667 1,00 0,3388

AC 0,0833333 2 0,0416667 1,00 0,3990

BC 0,0833333 2 0,0416667 1,00 0,3990

ABC 0,0833333 2 0,0416667 1,00 0,3990

RESIDUOS 0,458333 11 0,0416667










56




Fuente Suma de

Cuadrados


EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 0,166667 1 0,166667 1,83 0,2029

B:Factor B 0,166667 1 0,166667 1,83 0,2029

C:Factor C 4,0 2 2,0 22,00 0,0001

D:Replicas 0 1 0 0,00 1,0000

INTERACCIONES

AB 0 1 0 0,00 1,0000

AC 0,333333 2 0,166667 1,83 0,2055

BC 0,333333 2 0,166667 1,83 0,2055

ABC 0 2 0 0,00 1,0000

RESIDUOS 1,0 11 0,0909091

TOTAL (CORREGIDO) 6,0 23

Nivel de confianza p <0,05









57




Fuente Suma de

Cuadrados


EFECTOS

PRINCIPALES

A:Factor A 0,0416667 1 0,0416667 1,00 0,3388

B:Factor B 0,0416667 1 0,0416667 1,00 0,3388

C:Factor C 4,75 2 2,375 57,00 0,0000

D:Replicas 0,0416667 1 0,0416667 1,00 0,3388

INTERACCIONES

AB 0,0416667 1 0,0416667 1,00 0,3388

AC 0,0833333 2 0,0416667 1,00 0,3990

BC 0,0833333 2 0,0416667 1,00 0,3990

ABC 0,0833333 2 0,0416667 1,00 0,3990

RESIDUOS 0,458333 11 0,0416667










58

4.1.3. Resultados con respecto al Factor A de los (Hongos a0 – a1)

identificados de la Annona muricata L. (guanábana) Resultados de la

prueba de significación (Tukey p<0.05) con respecto a los Factores de

Estudio

Gráfico 1 Resultados de las diferencias de medias en tiempos determinados de crecimiento

de los hongos de la prueba de significación Tukey (p<0.05).


Interpretación: El gráfico 1, muestra diferencia significativa entre el crecimiento de los

hongos Macrophoma sp y Verticillum sp., ya que en 24 horas tuvieron una media de a0 = 0,79

cm a1= 0,88 cm; en 72 horas el crecimiento del micelio fue de a0 = 1,81 cm en a1= 2,02 cm y

a las 120 horas la media de los mismo reflejo un valor a0 = 2,55 cm y a1= 2,71cm.

1. Crecimiento micelial de los

Hongos (ao – a1) en cm/ 24horas

2. Crecimiento micelial de los

Hongos (ao – a1) en cm/

72horas

3. Crecimiento micelial de los Hongos (ao – a1) en cm/ 120horas

Macrophoma sp Verticillum sp

Gráfico Caja y Bigotes

0

0,4

0,8

1,2

1,6

2

2,4

Cre

cim

ien

to r

ad

ial e

n c

m /2

4h

Factor A

0,79 cm

0,88 cm



0

1

2

3

4

5

Cre

cim

ien

to r

ad

ial e

n c

m /7

2h

Factor A

1,81 cm

2,02 cm



0

2

4

6

8

Cre

cim

ien

to r

ad

ial e

n c

m /1

20

h

Factor A

2,55 cm

2,71cm

59

Gráfico 2 Resultados de las diferencias de medias del porcentaje (%) de inhibición en

tiempos determinados de la prueba de significación Tukey (p<0.05).


Interpretación: El gráfico 2, muestra diferencia significativa entre el porcentaje (%) de

inhibición de los hongos Macrophoma sp y Verticillum sp., en 24 horas con un porcentaje

de inhibición de a0 = 78,71 % , a1= 76,82 % es decir que el hongo Macrophoma sp., tiene

mayor inhibición a diferencia del Verticillum sp., en 72 horas presento una media de a0 =

75,93 % a1= 73,37 % y en 120 horas tuvo una media de a0 = 71,61 % y a1= 69,81 % de

inhibición.

1. % de Inhibicion en 24 Horas de los

Hongos (ao – a1)

2. % de Inhibicion en 72 Horas

de los Hongos (ao – a1)

3. % de Inhibicion en 120 Horas de los Hongos (ao – a1)



40

50

60

70

80

90

100

24

Ho

ras

(%

de

In

hib

icio

n)

Factor A

78,71 %

76,82 %



34

54

74

94

114

72

Ho

ras

(%

de

In

hib

icio

n)

Factor A

75,93%

73,37 %



31

51

71

91

111

12

0 H

ora

s (

% d

e In

hib

icio

n)

Factor A

71,61%

69,81%

60

4.1.4. Resultados con respecto al Factor B (Aceites esenciales b0 – b1)

Gráfico 3 Resultados de las diferencias de medias en tiempos determinados de crecimiento

de los hongos y aceites esenciales de la prueba de significación Tukey (p<0.05).


Interpretación: El gráfico 3, muestra diferencia significativa entre los aceite esenciales (b0

– b1) y el crecimiento micelial de los hongos en las horas de crecimiento por lo cual se denota

que en la gráfica n°3 que en 24 horas tiene una media de b0 = 0,26 y un valor en b1= 1,41 es

decir que el AE de hierba luisa a 24 horas tiene menor crecimiento radial a diferencia del

AE de jengibre, en 72 horas tiene un valor inferior de b0 = 0,66, y un valor superior en b1=

3,18 a las 120 horas los AEs tuvieron una media de b0 = 1,02 y b1= 4,24 por lo cual el AE de

hierba luisa en 24, 72, 120 horas es el que retarda el crecimiento micelial en dichos hongos.

1. Crecimiento micelial en cm/

24horas con AE(b0 – b1)


72horas con AE(b0 – b1)

3. Crecimiento micelial en cm/ 120horas con AE(b0 – b1)

AE Hierba Luisa AE Jengibre


0

0,4

0,8

1,2

1,6

2

2,4

Cre

cim

ien

to r

ad

ial e

n c

m /2

4h

Factor B

1,41 cm

0,26 cm



0

1

2

3

4

5

Cre

cim

ien

to r

ad

ial e

n c

m /7

2h

Factor B

0,66 cm

3,18 cm

cm%



0

2

4

6

8

Cre

cim

ien

to r

ad

ial e

n c

m /1

20

h

Factor B

1,02 cm

4,24 cm

61

Gráfico 4 Resultados de las diferencias de medias del porcentaje (%) de inhibición en

horas de la prueba de significación Tukey (p<0.05).


Interpretación: El gráfico 4, muestra diferencia significativa entre el % de inhibición de

los AEs de Cymbopogon citratus y Zingiber officinale, en 24 horas con un porcentaje de

inhibición de a0 = 92,82 % , a1= 62,54 % es decir que el AE de Cymbopogon citratus tiene

mayor actividad antifúngica, en 72 horas presentaron una media de a0 = 91,29 % a1= 58,01

%, y en 120 horas las propiedades de inhibición de los AEs fueron de a0 = 88,64 % y a1=

52,79 %, de acuerdo a la prueba de significación se denota que el AE de hierba luisa tiene

mayor capacidad de retención micelial a diferencia del AE de jengibre.



% de Inhibicion en 120 Horas



40

50

60

70

80

90

100

24

Ho

ras

(%

de

In

hib

icio

n)

Factor B

92,98 %

62,54%



34

54

74

94

114

72

Ho

ras

(%

de

Inh

ibic

ion

)

Factor B

91,29 %

58,01 %



31

51

71

91

111

12

0 H

ora

s (

% d

e In

hib

icio

n)

Factor B

88,64 %

52,79 %

62

4.1.5. Resultados con respecto al Factor C (Concentraciones c0 – c1 – c2)

Gráfico 5 Resultados de las diferencias de medias entre las horas de crecimiento de los

hongos y las concentraciones de la prueba de significación Tukey (p<0.05).


Interpretación: El gráfico 5, muestra diferencia significativa entre el desarrollo micelial

de los hongos en horas y las concentraciones de los aceites esenciales (c0 – c1 – c2) en; 24

horas estos tuvieron una media de c0 = 1,31 en c1= 0,79 y c2= 0,40 en 72 horas sus medias

porcentuales fueron de c0 2,90 en c1 1,96 y c2 0,88 a las 120 horas reflejaron medias de c0

3,91 en c1 2,59 y c2= 1,39 es decir que las concentraciones establecidas al 10 %, 15 % y

20% de los aceites esenciales varia en el crecimiento micelial de dichos hongos.

1. Crecimiento micelial en cm/ 24horas

en concentraciones de AE (c0 – c1 – c2)


72horas en concentraciones de AE

(c0 – c1 – c2)

3. Crecimiento micelial en cm/ 120horas en concentraciones de AE (c0 – c1 – c2)

10% 15% 20%


0

0,4

0,8

1,2

1,6

2

2,4

Cre

cim

ien

to r

ad

ial e

n c

m /2

4h

Factor C

1,31 cm

0,79 cm

0,40 cm

10% 15% 20%


0

1

2

3

4

5

Cre

cim

ien

to r

ad

ial e

n c

m /7

2h

Factor C

2,90 cm

1,96 cm

0,88 cm

10% 15% 20%


0

2

4

6

8

Cre

cim

ien

to r

ad

ial e

n c

m /1

20

h

Factor C

3,91 cm

2,59 cm

1,39 cm

63

Gráfico 6 Resultados de las diferencias de medias del porcentaje (%) de inhibición en horas

de la prueba de significación Tukey (p<0.05).


Interpretación: El gráfico 6, presenta diferencia significativa entre el porcentaje (%) de

inhibición de los hongos en horas y las concentraciones de los aceites esenciales (c0 – c1 –

c2) en 24 horas estos tuvieron una media de c0 65,10 % en c1 78,90 % y c2 89,29 % en 72

horas sus medias porcentuales fueron de c0 61,62 % en c1 74,06 y c2 88,27 a las 120 horas

reflejaron medias de c0 56,44 % en c1 71,17 y c2 84,52 es decir que las concentraciones

establecidas al 10 %, 15 % y 20 % de los aceites esenciales varia en el retardamiento del

crecimiento micelial de dichos hongos.




10% 15% 20%


40

50

60

70

80

90

100

24

Ho

ras

(%

de

In

hib

icio

n)

Factor C

65,10 %

78,90 %

89,29 %

10% 15% 20%


34

54

74

94

114

72

Ho

ras

(%

de

In

hib

icio

n)

Factor C

61,62 %

74,06 %

88,27 %

10% 15% 20%


31

51

71

91

111

12

0 H

ora

s (

% d

e In

hib

icio

n)

Factor C

56,44 %

71,17 %

84,52%

64

4.1.6. Resultados con respecto a la vida anaquelaria de la Annona

muricata L (guanábana) con revestimiento de tres niveles de concentración

(10, 15, 20 %) de aceite esenciales Cymbopogon citratus (hierba luisa) y

Zingiber officinale (jengibre), mediante análisis físicos químicos

Gráfico 7. Resultados de las diferencias de medias del factor A del peso (D) en horas de la

prueba de significación Tukey (p<0.05).

1. Peso (D) en 24 Horas 2. Peso (D) en 72 Horas






10

11

12

13

14(X 100000,)

Peso

(D) D

ia 1

Factor A



10

11

12

13

14(X 100000,)

Pes

o (D

) D

ia 3

Factor A



10

11

12

13

14(X 100000,)

Peso

(D) D

ia 6

Factor A



10

11

12

13

14(X 100000,)

Peso

(D) D

ia 9

Factor A



94

104

114

124

134(X 10000,0)

Peso

(D) D

ia 1

2

Factor A

1,25 D

1,27 D

1,25 D

1,26 D

1,22 D

1,23 D

1,196 D 1,194 D

1,14 D 1,15 D

1,08 D

1,09 D

65

Interpretación: El gráfico 7, presenta diferencia significativa entre el peso (D) ya que en

24 horas estos tuvieron una media de a0 1,25 D en a1 1,27 D; en 72 horas sus medias

porcentuales fueron a0 1,25 D en a1 1,26 D; a las 144 horas reflejaron medias de a0 1,22 D

en a1 1,23 D; en 216 horas sus medias porcentuales fueron a0 1,196 D en a1 1,194 D; a las

288 horas reflejaron medias de a0 1,15 D en a1 1,14 D; y en 360 horas sus medias

porcentuales fueron a0 1,09 D en a1 1,08 D; es decir que el peso (D) de la Annona muricata

L (guanábana) con los hongos identificados inoculados influye en la pérdida de peso (D)

en tiempos determinados.

Gráfico 8. Resultados de las diferencias de medias del factor B del peso (D) en horas de la








10

11

12

13

14(X 100000,)

Peso

(D) D

ia 3

Factor B



10

11

12

13

14(X 100000,)

Peso

(D) D

ia 6

Factor B



10

11

12

13

14(X 100000,)

Peso

(D) D

ia 9

Factor B



94

104

114

124

134(X 10000,0)

Peso

(D) D

ia 12

Factor B



10

11

12

13

14(X 100000,)

Peso

(D) D

ia 1

Factor B



85

95

105

115

125(X 10000,0)

Peso

(D) D

ia 1

5

Factor B

1,16 D

1,37 D

1,15 D

1,36 D

1,34 D

1,11 D 1,30 D 1,08 D

1,25 D

1,04 D

1,19 D

982980,0 D

66

Interpretación: El gráfico 8, presenta diferencia significativa entre el peso (D) y los

aceites esenciales aplicados ya que en 24 horas estos tuvieron una media de b0 1,37 D en b1

1,16 D; en 72 horas sus medias porcentuales fueron b0 1,36 D en b1 1,15 D; a las 144 horas

reflejaron medias de b0 1,22 D en b1 1,23; en 216 horas sus medias porcentuales fueron b0

1,30 D en b1 1,08 D; a las 288 horas reflejaron medias de b0 1,25 D en b1 1,30 D; y en 360

horas sus medias porcentuales fueron b0 1,19 D en b1 980980,0 D; es decir que el peso (D)

de la Annona muricata L (guanábana) y los aceites esenciales influye en la pérdida de peso

(D) en tiempos determinados.

Gráfico 9. Resultados de las diferencias de medias del factor C del peso (D) en horas de la





10% 15% 20%


10

11

12

13

14(X 100000,)

Peso

(D) D

ia 1

Factor C10% 15% 20%


10

11

12

13

14(X 100000,)

Peso

(D) D

ia 3

Factor C

10% 15% 20%


10

11

12

13

14(X 100000,)

Peso

(D) D

ia 6

Factor C

10% 15% 20%


10

11

12

13

14(X 100000,)

Peso

(D) D

ia 9

Factor C

10% 15% 20%


94

104

114

124

134(X 10000,0)

Peso

(D) D

ia 1

2

Factor C

1,20 D

1,29 D

1,24 D

1,26 D 1,25 D 1,23 D

1,29 D

1,25 D

1,26 D

1,16 D

1,18 D

1,23 D

1,11 D

1,13 D

1,19 D

1,02 D

1,09 D 1,15 D

67

Interpretación: El gráfico 9, presenta diferencia significativa entre el peso (D) y las

concentraciones de los aceites esenciales aplicados ya que en 24 horas estos tuvieron una

media de c0 1,26 D en c1 1,24 D c2 1,29 D; en 72 horas sus medias porcentuales fueron c0

1,20 D en c1 1,23 D c2 1,28 D en 144 horas reflejaron medias de c0 1,20 D en c1 1,21 D c2

1,26 D en 216 horas sus medias porcentuales fueron c0 1,16 D en c1 1,18 D c2 1,23 D; a las

288 horas reflejaron medias de c0 1,11 D en c1 1,13 D c2 1,19 D; y en 360 horas sus medias

porcentuales fueron c0 1,02 D en c1 1,09 D c2 1,15 D; es decir que el peso (D) de la Annona

muricata L (guanábana) y las concentraciones de los aceites esenciales influye en la pérdida

de peso (D) en tiempos determinados.

Gráfico 10. Resultados de las diferencias de medias del factor A de los ºBrix en horas de

la prueba de significación Tukey (p<0.05).

1. ºBrix en 24 Horas 2. ºBrix en 72 Horas






14

14,4

14,8

15,2

15,6

16

°Bri

x D

ia 1

Factor A



7

9

11

13

15

°Brix

Dia

6

Factor A



5

7

9

11

13

15

°Brix

Dia

9

Factor A



4,6

6,6

8,6

10,6

12,6

14,6

°Brix

Dia

12

Factor A



4

6

8

10

12

°Brix

Dia

15

Factor A



10

11

12

13

14

15

16

°Bri

x D

ia 3

Factor A

15,0 15,25 13

12,58

11,75 10,29

9,83 8,76

8,70 7,6

1

7,40

5,97

68

Interpretación: El gráfico 10, no presenta diferencia significativa entre los ºBrix en 24 horas

estos tuvieron una media de a0 15,0 en a1 15,25; en 72 horas existió diferencia significativa

ya que sus medias porcentuales fueron a0 13 en a1 12,58; a las 144 horas reflejaron medias

de a0 11,75 en a1 10,29; en 216 horas sus medias porcentuales fueron a0 9,83 en a1 8,76; a las

288 horas reflejaron medias de a0 8,70 en a1 7,61; y en 360 horas sus medias porcentuales

fueron a0 7,40 en a1 5,97; es decir los ºBrix de la Annona muricata L (guanábana) con los

hongos identificados inoculados influye en tiempos determinados.

Gráfico 11. Resultados de las diferencias de medias del factor B de los ºBrix en horas de la








7

9

11

13

15

°Bri

x D

ia 6

Factor B



5

7

9

11

13

15

°Bri

x D

ia 9

Factor B



4,6

6,6

8,6

10,6

12,6

14,6

°Bri

x D

ia 1

2

Factor B



4

6

8

10

12

°Bri

x D

ia 1

5

Factor B



14

14,4

14,8

15,2

15,6

16

°Bri

x D

ia 1

Factor B



10

11

12

13

14

15

16

°Bri

x D

ia 3

Factor B

15,25 15

12,91 12,71

11,71

10,32

10,46

8,13

9,26

7,05

7,97

5,40

69

Interpretación: El gráfico 11, no presenta diferencia significativa entre los ºBrix del factor

B (aceites esenciales) ya que en 24 horas estos tuvieron una media de b0 15,25 en b1 15; en

72 horas sus medias porcentuales fueron b0 12,91 en b1 12,71; a las 144 existió diferencia

significativa entre las medias de b0 11,71 en b1 10,32; en 216 horas sus medias porcentuales

fueron b0 10,46 en b1 8,13; a las 288 horas reflejaron medias de b0 9,26 en b1 7,05; y en 360

horas sus medias porcentuales fueron b0 7,97 en b1 5,40; es decir que los ºBrix de la Annona

muricata L (guanábana) y los aceites esenciales influye en los sólidos solubles en tiempos

determinados.

Gráfico 12.Resultados de las diferencias de medias del factor C de los ºBrix en horas de la






10% 15% 20%


10

11

12

13

14

15

16°B

rix D

ia 3

Factor C

10% 15% 20%


5

7

9

11

13

15

°Bri

x D

ia 9

Factor C

10% 15% 20%


4,6

6,6

8,6

10,6

12,6

14,6

°Bri

x D

ia 1

2

Factor C10% 15% 20%


4

6

8

10

12

°Bri

x D

ia 1

5

Factor C

10% 15% 20%


14

14,4

14,8

15,2

15,6

16

°Bri

x D

ia 1

Factor C

10% 15% 20%


7

9

11

13

15

°Bri

x D

ia 6

Factor C

15 15,12 15,25

11

13,07

14,37

8,95

10,67

13,43

7,42

8,7

11,77

6,12

7,36 11

5,07

5,85

9,15

70

Interpretación: El gráfico 12, no presenta diferencia significativa entre los ºBrix y las

concentraciones de los aceites esenciales aplicados ya que en 24 horas estos tuvieron una

media de c0 15 en c1 15,12 c2 15,25; en 72 horas existió diferencia significativa entre sus

medias porcentuales fueron c0 11 en c1 13,07 c2 14,37 en 144 horas reflejaron medias de c0

8,95 en c1 10,67 c2 13,43 en 216 horas sus medias porcentuales fueron c0 7,42 en c1 8,7 c2

11,77; a las 288 horas reflejaron medias de c0 6,12 en c1 7,36 c2 11; y en 360 horas sus medias

porcentuales fueron c0 5,07 en c1 5,85 c2 9,15; es decir los sólidos solubles de la Annona

muricata L (guanábana) y las concentraciones de los aceites esenciales influye en tiempos

determinados.

Gráfico 13. Resultados de las diferencias de medias del factor C del pH en horas de la


1. pH en 24 Horas 2. pH en 72 Horas

3. pH en 144 Horas 4. pH en 216 Horas

5. pH en 288 Horas

6. pH en 360 Horas


10% 15% 20%


4

4,2

4,4

4,6

4,8

5

pH D

ia 1

Factor C

10% 15% 20%


4

4,2

4,4

4,6

4,8

5

pH D

ia 3

Factor C

10% 15% 20%


4

4,2

4,4

4,6

4,8

5

pH D

ia 6

Factor C

10% 15% 20%


4

4,2

4,4

4,6

4,8

5

pH D

ia 1

2

Factor C

10% 15% 20%


4

4,2

4,4

4,6

4,8

5

pH D

ia 1

5

Factor C

10% 15% 20%


4

4,2

4,4

4,6

4,8

5

pH D

ia 9

Factor C

4,5

4 4

4,62

4 4

4,87 4 4 5 4,12 4

5 4,5 4 5 4,87 4

71

Interpretación: El gráfico 13, presenta diferencia significativa entre el pH y las

concentraciones de los aceites esenciales aplicados; ya que en 24 horas estos tuvieron una

media de c0 4,5 en c1 4 c2 4; en 72 horas existió diferencia significativa entre sus medias

porcentuales fueron c0 4,62 en c1 4 c2 4 en 144 horas reflejaron medias de c0 4,87 en c1 4 c2 4

en 216 horas sus medias porcentuales fueron c0 5 en c1 4,12 c2 4; a las 288 horas reflejaron

medias de c0 5 en c1 4,5 c2 4; y en 360 horas sus medias porcentuales fueron c0 5 en c1 4,87

c2 4; es decir los sólidos solubles de la Annona muricata L (guanábana) y las

concentraciones de los aceites esenciales influye en tiempos determinados.

72

4.1.7. Resultados con respecto al Factor AxBxC (Hongos a0 – a1 + AEs b0 – b1 + Concentraciones c0 – c1 – c2)

Gráfico 14 Resultados de las interacciones del crecimiento micelial de los hongos, aceites esenciales y sus concentraciones de la prueba de

significación Tukey (p<0.05).


2. Crecimiento micelial en cm/ 24 horas

en interacciones AxBxC

Crecimiento micelial en cm/ 120 horas en

interacciones AxBxC

1.

3.

Crecimiento micelial en cm/ 72 horas

en interacciones AxBxC

73

Interpretación: El gráfico 7, no muestra diferencia significativa en 24 horas entre el

desarrollo de los hongos Macrophoma sp., Verticillum sp., al 10 % de concentración de AE

de jengibre ya que reflejaron una media de a0b1c0 = 2,21 y en a1b0c0= 2,10; en concentración

del 10 % del AE de hierba luisa existió diferencia significativa presentando una media

porcentual de a0b0c0= 0,36 y en a1b0c0= 0,60, al 15 % de concentración del AE de jengibre

existió diferencia significativa entre los tratamientos reflejando una media porcentual de

a0b1c1= 1,25 y en a1b1c1= 1,54; dado así que en 15 % de concentración del AE de hierba luisa

presento medias de a0b0c1= 0,00 y en a1b0c1= 0,40, al 20 % de concentración del AE de

jengibre presento diferencia significativa teniendo medias porcentuales de a0b1c2= 0,97 y en

a1b1c2= 0,4; y al en 20 % de concentración AE de hierba luisa presento medias de a0b0c2=

0,00 y en a1b0c2= 0,24; mientras que en 72 horas presenta diferencia significativa entre el


de jengibre ya que reflejaron una media de a0b1c0 = 5,00 y en a1b1c0= 4,49; en concentración


porcentual de a0b0c0= 0,85 y en a1b0c0= 1,29, al 15 % de concentración del AE de jengibre

existió diferencia significativa entre los tratamientos reflejando una media porcentual de

a0b1c1= 3,10 y a1b1c1= 3,53; dado así que en 15 % de concentración del AE de hierba luisa


jengibre presento diferencia significativa teniendo medias porcentuales de a0b1c2= 2,05 y en

a1b1c2= 0,92; y al en 20 % de concentración AE de hierba luisa presento medias de a0b0c2=

0,00 y en a1b0c2= 0,59; siendo así que en 120 horas realizando la prueba de significación

tukey presento los siguientes resultados no existió diferencia entre el desarrollo de los

hongos Macrophoma sp., Verticillum sp., al 10 % de concentración de AE de jengibre ya

que reflejaron una media de a0b1c0 = 6,12 y en a1b1c0= 6,05; en concentración del 10 % del

AE de hierba luisa existió diferencia significativa presentando una media porcentual de

a0b0c0= 1,45 y en a1b0c0= 2,05, al 15 % de concentración del AE de jengibre existió

diferencia significativa entre los tratamientos reflejando una media porcentual de a0b1c1=

3,89 y a1b1c1= 4,56; dado así que en 15 % de concentración del AE de hierba luisa presento

medias de a0b0c1= 0,82 y en a1b0c1= 1,10, al 20 % de concentración del AE de jengibre

presento diferencia significativa teniendo medias porcentuales de a0b1c2= 3,05 y en a1b1c2=

1,81; y al en 20 % de concentración AE de hierba luisa presento medias de a0b0c2= 0,00 y

en a1b0c2= 0,71.

74

Gráfico 15 Resultados de las medias del porcentaje (%) de inhibición de los hongos, aceites esenciales y sus concentraciones de la prueba de

significación Tukey (p<0.05).


2. 1.

3.

% de inhibicion en 24 horas en interacciones

AxBxC


AxBxC


AxBxC

75

Interpretación: El gráfico 8, no muestra diferencia significativa en 24 horas entre el

porcentaje de inhibición de los hongos Macrophoma sp., Verticillum sp., al 10 % de

concentración de AE de jengibre ya que reflejaron una media de a0b1c0 = 41,07 y en a1b1c0=

44,74; en concentración del 10 % del AE de hierba luisa existió diferencia significativa

presentando una media porcentual de a0b0c0= 90,40 y en a1b0c0= 84,21, al 15 % de

concentración del AE de jengibre existió diferencia significativa entre los tratamientos

reflejando una media porcentual de a0b1c1= 66,67 y en a1b1c1= 59,48; dado así que en 15

% de concentración del AE de hierba luisa presento medias de a0b0c1= 100 y en a1b0c1=

89,47, al 20 % de concentración del AE de jengibre presento diferencia significativa

teniendo medias porcentuales de a0b1c2= 74,14 y en a1b1c2= 89,21; y al en 20 % de

concentración AE de hierba luisa presentó medias de a0b0c2= 100 y en a1b0c2= 93,82;

mientras que en 72 horas presenta diferencia significativa entre el desarrollo de los hongos

Macrophoma sp., Verticillum sp., al 10 % de concentración de AE de jengibre ya que

reflejaron una media de a0b1c0 = 40,53 y en a1b1c0= 34,21; en concentración del 10 % del

AE de hierba luisa existió diferencia significativa presentando una media porcentual de

a0b0c0= 88,74 y en a1b0c0= 83,03, al 15 % de concentración del AE de jengibre existió

diferencia significativa entre los tratamientos reflejando una media porcentual de a0b1c1=

58,94 y a1b1c1= 53,62; dado así que en 15 % de concentración del AE de hierba luisa


jengibre presento diferencia significativa teniendo medias porcentuales de a0b1c2= 72,85 y

en a1b1c2= 87,96; y al en 20 % de concentración AE de hierba luisa presento medias de

a0b0c2= 100 y en a1b0c2= 92,31; siendo así que en 120 horas realizando la prueba de

significación tukey presento los siguientes resultados no existió diferencia entre el


de jengibre ya que reflejaron una media de a0b1c0 = 32,00 y en a1b1c0= 32,71; en

concentración del 10 % del AE de hierba luisa existió diferencia significativa presentando

una media porcentual de a0b0c0= 83,89 y en a1b0c0= 77,20, al 15 % de concentración del

AE de jengibre existió diferencia significativa entre los tratamientos reflejando una media

porcentual de a0b1c1= 56,78 y a1b1c1= 49,28; dado así que en 15 % de concentración del

AE de hierba luisa presento medias de a0b0c1= 90,89 y en a1b0c1= 87,77, al 20 % de

concentración del AE de jengibre presento diferencia significativa teniendo medias

porcentuales de a0b1c2= 66,12 y en a1b1c2= 79,87; y al en 20 % de concentración AE de

hierba luisa presento medias de a0b0c2= 100,00 y en a1b0c2= 92,10

76

Gráfico 16. Resultados de las medias de la vida anaquelaria de la Annona muricata L (guanábana) con revestimiento de tres niveles de

concentración (10, 15, 20 %) de aceite esenciales Cymbopogon citratus (hierba luisa) y Zingiber officinale (jengibre), mediante análisis físicos

químicos de la prueba de significación Tukey (p<0.05).


2. 1.

3.

Peso (D) de la Annona muricata L. en 15 dias

interacciones AxBxC

ºBrix de la Annona muricata L. en 15 dias

interacciones AxBxC

pH de la Annona muricata L. en 15 dias

interacciones AxBxC

77

Interpretación: El gráfico 16, muestra diferencia significativa en 360 horas (15 días) en

el peso (D) de la vida anaquelaria de la Annona muricata L. (guanábana) en la inoculación

de los hongos Macrophoma sp., Verticillum sp., al 10 % de concentración de AE de

jengibre ya que reflejaron una media de a0b1c0 = 9,26 y en a1b1c0= 8,60; en concentración


porcentual de a0b0c0= 11,80 y en a1b0c0= 11,22; al 15 % de concentración del AE de

jengibre existió diferencia significativa entre los tratamientos reflejando una media

porcentual de a0b1c1= 9,42 y en a1b1c1= 10,25; dado así que en 15 % de concentración del

AE de hierba luisa presento medias de a0b0c1= 12,20 y en a1b0c1= 11,80; al 20 % de

concentración del AE de jengibre no presento diferencia significativa teniendo medias

porcentuales de a0b1c2= 10,66 y en a1b1c2= 10,64; y al en 20 % no presento diferencia

significativa en concentración AE de hierba luisa ya que reflejaron medias de a0b0c2=

12,37 y en a1b0c2= 12,35; mientras que en los ºBrix presenta diferencia significativa entre

el desarrollo de los hongos Macrophoma sp., Verticillum sp., al 10 % de concentración de

AE de jengibre ya que reflejaron una media de a0b1c0 = 4,60 y en a1b1c0= 4,10; en

concentración del 10 % del AE de hierba luisa existió diferencia significativa presentando

una media porcentual de a0b0c0= 6,20 y en a1b0c0= 5,40, al 15 % de concentración del AE

de jengibre existió diferencia significativa entre los tratamientos reflejando una media

porcentual de a0b1c1= 4,85 y a1b1c1= 4; dado así que en 15 % de concentración del AE de

hierba luisa presento medias de a0b0c1= 9 y en a1b0c1= 5,55 al 20 % de concentración del

AE de jengibre presento diferencia significativa teniendo medias porcentuales de a0b1c2=

7,90 y en a1b1c2= 7; y al en 20 % de concentración AE de hierba luisa presento medias de

a0b0c2= 11,90 y en a1b0c2= 9,80; siendo así que el pH realizando la prueba de significación

tukey presento los siguientes resultados no existió diferencia entre el desarrollo de los

hongos Macrophoma sp., Verticillum sp., al 10 % de concentración de AE de jengibre ya

que reflejaron una media de a0b1c0 = 5 y en a1b1c0= 5; en concentración del 10 % del AE

de hierba luisa no existió diferencia significativa presentando una media porcentual de

a0b0c0= 5 y en a1b0c0= 5 al 15 % de concentración del AE de jengibre existió diferencia

significativa entre los tratamientos reflejando una media porcentual de a0b1c1= 5 y a1b1c1=

4,5; dado así que en 15 % de concentración del AE de hierba luisa no presento medias de

a0b0c1= 5 y en a1b0c1= 5 al 20 % de concentración del AE de jengibre no presento diferencia

significativa teniendo medias porcentuales de a0b1c2= 4 y en a1b1c2= 4; y al en 20 % de

concentración AE de hierba luisa presento medias de a0b0c2= 4 y en a1b0c2= 4

78

4.2 Discusión

Factor A. Identificación de los hongos patógenos presentes en Annona

muricata L (guanábana)

Macrophoma sp., este micelio al ser identificado macroscópicamente, se denotó que su

textura era tipo algodonosa que inicialmente era color blanco hasta 48 horas, después de la

siembra se torna un color verde oliva a verde oscuro y finalmente tornarse negro, coincide

lo obtenido con lo que expresa los autores [41]; que este micelio es de textura algodonosa e

hialino, inicialmente, tornándose de color negro después de 96 horas, así también; corrobora

lo que expresa los autores [42]; expresando que el hongo Macrophoma sp., presenta una

pudrición apical ocasionando pérdidas económicas, lo cual determinan los autores [40]; que

es la principal enfermedad de mayor importancia en el cultivo del guanábano y disminuye

el rendimiento y calidad de los frutos, con su presencia.

De acuerdo a los resultados obtenidos en la identificación macroscópica y

microscópicamente del hongo Macrophoma sp., coinciden con los autores antes

mencionado, en torno a la formación de picnidias, a la temperatura de 28 ºC de crecimiento

micelial y cambio de coloración del mismo.

Verticillum sp., este micelio al ser identificado macroscópicamente, presentó crecimiento

algodonoso de elevación media, con coloración inicial café, que conforme pasaba el tiempo

tornaba a café claro y a los concéntricos de color café, a nivel microscópico se detectó

conidióforos ramificados en ángulos agudos, con conidias unicelulares redondeadas. Estas

características son propias del género Verticillium sp., este hongo tiene crecimiento

algodonoso y de coloración café; corrobora lo que expresa los autores [35]; que el hongo

fitopatógeno Verticillum sp., conforme pasaba el tiempo torna café claro, microscópicamente

tiene conidióforos ramificados en ángulos agudos, con conidias unicelulares redondeadas.

De acuerdo a los resultados obtenidos en la identificación macroscópica y

microscópicamente del hongo Verticillum sp., coinciden con lo expresado de los autores

antes mencionado, en la presencia de conidióforos, a la temperatura de 28 ºC de crecimiento

micelial y cambio de coloración del mismo.

79

Factor B. Aceites esenciales Cymbopogon citratus (hierba luisa) y Zingiber

officinale (jengibre)

Los aceites esenciales estudiados como efecto fúngico en hongos fitopatogenos

Macrophoma sp., y Verticillum sp., de acuerdo a la literatura estudiada y citada se hace

referencia que dichos aceites tienen el poder de retardamiento de los hongos; en los

resultados obtenidos de nuestra investigación se denotó que el aceite esencial de hierba luisa

tiene mayor efecto fúngico a diferencia del aceite esencial de jengibre; esto se debe al

compuesto predominante que contiene el Cymbopogon citratus que lo cataloga como

antifúngico, esto coindice con lo que expresa los autores [38], que la actividad antifúngico

del Cymbopogon citratus contra la especie C. acutatum en concentraciones de 300 mg/L

inhiben el crecimiento micelial completamente durante once días de incubación debido a su

compuesto citral. La misma que corrobora las autoras [37], que el aceite esencial de hierba

luisa tiene mayor efectividad antibacteriana y antifúngica. De acuerdo a la poca investigación

existente sobre el efecto antifúngico del aceite esencial de jengibre se determina que dicho

aceite si tiene efecto antifúngico en menor porcentaje (%) de inhibición, por tanto; es

recomendable estudiar las propiedades del gigerol compuesto predominante del jengibre.

Factor C. concentraciones de los aceites esenciales Cymbopogon citratus

(hierba luisa) y Zingiber officinale (jengibre)

Concentraciones de aceite esencial Cymbopogon citratus (hierba luisa) de acuerdo a los

resultados obtenidos en nuestra investigación, se utilizó el aceite esencial de hierba luisa

como efecto antifúngico con el método de difusión agar en crecimiento de los hongos antes

mencionado, el cual registró una inhibición de crecimiento micelial de 90,78 % en la

concentración minima inhibtoria CMI de dicho aceite de acuerdo a los resultados obtenidos,

el aceite esencial de C. citratus reflejó ser prometedor para el control in vitro de hongos

fitopatógenos lo cual corrobora con los autores [36], expresando que el aceite esencial de C.

citratus mostró una sensibilidad especial ya que registró una inhibición creciente (de 60 %

a 95 %), respectivamente desde la concentración mínima hasta la máxima (10-500 μL/mL)

está dentro del parámetro estudiado a diferencia que los autores realizaron su investigación

en diferentes hongos Fito patógenos y nuestros resultados inhibió a los hongos (a0 – a1) es

decir que el aceite esencial de hierba luisa tiene un buen efecto fúngico; también coincide

con lo expresado por los autores [38], que la actividad antifúngico del Cymbopogon citratus

contra la especie C. acutatum en concentraciones de 300 mg/L inhiben el crecimiento

80

micelial completamente durante once días de incubación; es decir que los resultados

obtenidos en nuestra investigación es inferior al retardar el crecimiento micelial de los

hongos (a0 – a1).

De acuerdo a los resultados obtenidos en la CMI de los aceites esenciales utilizados

coinciden con lo expresado de los autores antes mencionado, refiriéndose que el aceite

esencial de hierba luisa es un excelente inhibidor de hongos fitopatogenos.

Zingiber officinale: de acuerdo a los valores reflejados en esta investigación el aceite

esencial de jengibre utilizado como inhibidor de los hongos (a0 – a1), su concentración

mínima inhibitoria (CMI) mostró un porcentaje de inhibición al 53,30 % corrobora con los

autores [39], en el cual mostró diferencia significativa entre los tratamientos (P<0.001)

realizados hasta el noveno día de evaluación, siendo la concentración 25% la más efectiva;

estos valores coinciden en la concentración máxima realizada a dicho aceite al (20%).

Vida anaquelaria de la Annona muricata L (guanábana) con revestimiento

de tres niveles de concentración (10, 15, 20 %) de aceite esenciales

Cymbopogon citratus (hierba luisa) y Zingiber officinale (jengibre),

mediante análisis físicos químicos

Análisis físicos químicos: Los factores físico-químicos más relevantes en la calidad de la

fruta es el peso, la concentración de los sólidos solubles totales, el pH, los cuales se

relacionan con el contraste de dulzura y acidez característica de la fruta.

El comportamiento de la pérdida fisiológica de peso expresada en Dinas (D) con respecto al

peso inicial, para las frutas de guanábana se obtuvo como resultado que en el periodo de 15

días la fruta con recubrimiento al 20 % de aceite esencial de hierba luisa en hongo

Macrophoma sp, tuvo una media de 12,37 D y con el hongo Verticillum sp su media fue de

12,35 dado esto se obtuvo que el recubrimiento de la guanábana al 20 % de aceite esencial

de hierba jengibre en hongo Macrophoma sp su peso en 15 días fue de 10,66 D y con el

hongo Verticillum sp se obtuvo una media de 10,64 D, corrobora lo que expreso [43], que

las altas pérdidas fisiológicas de peso que presentan las Annonaceas sp., hace que su

deterioro físico sea muy rápido comparado con otras frutas climatéricas.

81

Los sólidos solubles que se presenta durante el periodo de 15 días, donde alcanzo una

concentración de a0b0c2= 11,90 ºBrix (Macrophoma sp + Aceite esencial de Hierba luisa +

20 %) a1b0c2= 9,80 ºBrix (Verticillum sp + Aceite esencial de Hierba luisa + 20 %) y a0b1c2=

7,90 ºBrix (Macrophoma sp + Aceite esencial de jengibre + 20 %) y en a1b1c2= 7 ºBrix

Macrophoma sp + Aceite esencial de jengibre + 20 %) se encuentra coherente con lo

reportado por [33], quienes midieron concentraciones para frutas maduras de guanábana de

13°Brix. La Norma Técnica Colombiana (NTC, 5208) establece para frutas de guanábana

en madurez de consumo, valores mínimos para SST de 13,5 ºBrix, lo cual está ligeramente

inferior a los 11,9°Brix encontrados durante la investigación.

El mínimo valor en el pH se obtuvo consecuentemente para el día 15, con un valor de 4 en

los tratamientos realizados. De acuerdo a los valores encontrados la guanábana se podría

clasificar cómo una fruta de acidez intermedia lo que expresa [44], En la etapa posclimatérica

la disminución de la acidez, puede ser debida probablemente al consumo de éstas moléculas

orgánicas, en los diferentes ciclos metabólicos para proporcionar la energía requerida por la

fruta, además muchos de los ácidos orgánicos participan cómo precursores de sustancias

volátiles, que intensifican su presencia durante este período expresado por [45].

82

4.3. Tratamiento de hipótesis

De acuerdo a los resultados obtenidos en la presente investigación y tomando en cuenta las

variables de estudio, se presentaron las siguientes hipótesis:

“Los hongos fitopatógeno presentes en la guanábana son inhibidos con la CMI de los aceites

esenciales de Cymbopogon citratus (hierba luisa) y Zingiber officinale (jengibre) en tres

niveles de concentración”; los resultados se encontraron en los tres concentraciones que si

inhibieron por tanto se acepta la hipótesis alternativa planteada.

“Los hongos fitopatógeno presentes en la guanábana no son inhibidos con la CMI de los


tres niveles de concentración”; como ya se aseveró en el planteamiento de la anterior

hipótesis planteadas en este caso de esta hipótesis y de acuerdo a lo obtenido se rechaza la

hipótesis.

83

CAPÍTULO V

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

84

5.1. Conclusiones

Del establecimiento de las variables de estudio, y de los resultados encontrados, de

acuerdo al aislamiento que se realizó de la Annona muricata L se logró identificar

los hongos Macrophoma sp., Verticillum sp., que coinciden con la caracterización de

autores citados.

Los hongos identificados que inhibieron totalmente se les determino como la

concentración mínima inhibitoria (CMI), el aceite esencial de Cymbopogon citratus

(hierba luisa) al 20 % tiene mayor actividad antifungica logrando inhibir en su

totalidad al hongo Macrophoma sp., y un 92,10 % al Verticillum sp., siendo así que

el aceite esencial Zingiber officinale, (jengibre) al 20 % de concentración inhibió al

hongo Macrophoma sp., en 66,12 % y al Verticillum sp., en 79,87 % presentando la

mejor respuesta en el a0b0c2= T3 (Macrophoma sp + AE Hierba luisa + 20 %) pues

demostró que con esta concentración el micelio comienzan a tener remisión a su

desarrollo, el mejor tiempo de inhibición fueron en 120 horas, después de la siembra

del hongo, lo que permite retardar el crecimiento micelial.

La Annona muricata L. (guanábana) al ser revestida con la concentración mínima

inhibitoria (CMI) a0b0c2= T3 (Macrophoma sp + AE Hierba luisa + 20 %) logró

alcanzar 15 días de conservación manteniendo su aspecto y así retardando la

proliferación de hongos fitopatógenos a diferencia del aceite esencial de jengibre que

a partir de los 15 días presento proliferación de hongos.

85

5.2. Recomendaciones

Realizar una secuenciación enzimática del DNA llamada identificación molecular de

los hongo Macrophoma sp., y Verticillum sp., para que esta determine la

identificación a nivel de especie, en futuros trabajos de investigación.

Aplicar investigaciones sobre el compuesto del jengibre como inhibidor fúngico,

dado que se encuentra en apogeo su consumo, pero aún existe escasa información

del este tubérculo.

Utilizar los aceites esenciales estudiados para nuevas investigaciones como inhibidor

de conidias y picnidios demostrando su efectividad fúngica en los mismos, en

diferentes frutas tropicales propias de la región.

Emplear la concentración mínima inhibitoria (CMI) del aceite esencial de

Cymbopogon citratus (hierba luisa) y Zingiber officinale (jengibre) estudiados, en

frutas tropicales para un mayor tiempo de vida anaquealria.

86

CAPÍTULO VI

BIBLIOGRAFIA

87

6.1. Bibliografía

[1] Cabrera, P; Yaguache, B, “ACEITES ESENCIALES DE PLANTAS AMAZÓNICAS

PARA EL CONTROL DE FITOPATÓGENOS DE CULTIVOS CONVENCIONALES

DE LA PROVINCIA DE PASTAZA”., SANGOLQUÍ: ESPE, 2015.

[2] Vento, Y., INSTRUCTIVO TÉCNICO PARA EL CULTIVO DE LA GUANÁBANA,

Cuba: Primera Edision 2011, 2011.

[3] Morón, F; Morón, D; Nodarse, M, «Valoración de la evidencia científica para

recomendar Annona muricata L. (guanábana) como tratamiento o prevención del

cáncer,» Revista Cubana de Plantas Medicinales, vol. 15, nº 3, p. 170, 2010.

[4] BUCHANAN, B; Gruissem, W; Jones, R, Natural Products, Biochemistry &

Molecular Biology of Plants Physiologists, 2000.

[5] RUILOVA, A, DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACION INHIBITORIA

MÍNIMA DE ACEITES ESENCIALES ANTE BACTERIAS Y HONGOS

FITOPATÓGENOS, CUENCA, ECUADOR: UNIVERSIDAD DEL AZUAY, 2007.

[6] Andrades, I; Yender, F; Labarca, J; Ulacio, D; Paredes, C; Marín, Y, «Evaluación de

la antracnosis (Colletotrichum sp.) en guanábana (Annona muricata L.) tipo gigante en

el sector Moralito del estado Zulia, Venezuela,» Revista UDO Agrícola, vol. 9, nº 1,

pp. Zulia, Venezuela, 2009.

[7] Bejarano, R; Centeno, S, «Extracto de Citrus limon para el control de aflatoxinas y

hongos aflatoxigénicos en alimentos concentrados para pollos de engorde producidos

en Venezuela,» Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiología, vol. 29, nº 1, p.

1, 2009.

[8] Horna, G; Silva, M; Vicente, W; Tamariz, J, «Concentración mínima inhibitoria y

concentración mínima bactericida de ciprofloxacina en bacterias uropatógenas aisladas

en el Instituto Nacional de Enfermedades Neoplásicas.,» Revista Medica Herediana,

vol. 16, nº 1, p. 2, 2005.

88

[9] Moscoso, A; Agustina, L, Comparación del efecto inhibitorio in vitro del extracto

etanólico con el eceite esencial de Cymbop "Hierba luisa" sobre una cepa de Candida

albicans, Trujillo, 2013.

[10] Soto, R; Vega, G; Tamajón, A , «Instructivo Técnico del cultivo de Cymbopogon

citratus (DC)Stapf (caña santa).,» Revista cubana de Plantas Medicinales, vol. 2002,

nº 2, pp. 2-4, 2002.

[11] FLORES, M; PATIÑO, B, VARIACIÓN DE LA COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LOS

ACEITES ESENCIALES DE HIERBA LUISA (Cymbopogon citratus) Y JENGIBRE

(Zingiber officinale) EN FUNCIÓN DE LAS CONDICIONES AMBIENTALES Y DEL

TIPO DE SUELO DE LA ZONA DE CULTIVO EN LAS PROVINCIAS DE

ESMERALDAS, MANAB, Quito: UNIVERSIDAD POLITÉCNICA SALESIANA

SEDE QUITO, 2016.

[12] Gupta, S; Sharma, A, «Medicinal properties of Zingiber officinale Roscoe - A

Review.,» Journal of Pharmacy and Biological Sciences, vol. 9, nº 5, pp. 124-129,

2014.

[13] Valverde, P, COMPOSICIÓN QUÍMICA, POTENCIAL ANTIMICROBIANO Y

LETAL DE LOS ACEITES ESENCIALES DE LAS HOJAS DE HIERBA LUISA

(Cymbopogon citratus), MASTRANTE (Ageratum conyzoides), GUABIDUCA (Piper

carpunya), AJENJO (Artemisia absinthium) Y CEDRÓN (Lippia citriodora), C,

MACHALA – EL ORO – ECUADOR: UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA,

2015.

[14] Kuklinski, C, Farmacognosia. Estudio de las drogas y sustancias medicamentosas de

origen natural, Barcelona: OMEGA S.A., 2000.

[15] MEZA , K; VARGAS, G, EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA in

vitro DEL ACEITE ESENCIAL DE HIERBA LUISA (Cymbopogon citratus (DC)

STAPF), POACEAE EN UNA FORMULACIÓN COSMÉTICA CON FINALIDAD

ANTIACNEÍCA., Quito: UNIVERSIDAD POLITÉCNICA SALESIANA SEDE

QUITO, 2013.

89

[16] Segovia, I; Suárez, L; Castro, A; Suárez, S; Ruiz, J, «COMPOSICIÓN QUÍMICA

DEL ACEITE ESENCIAL DE Tagetes elliptica SMITH “CHINCHO” Y

ACTIVIDADES ANTIOXIDANTE, ANTIBACTERIANA Y ANTIFÚNGICA,»

Ciencia e Investigación, vol. 13, nº 2, pp. 81-86, 2010.

[17] Gagan, S; Shir, R; Panchal, V, «Scientific basis for the therapeutic use of Cymbopogon

citratus, stapf (Lemon grass).,» Journal of Advanced Pharmaceitical Technology &

Research,, vol. 2, nº 1, p. 4, 2011.

[18] Bassolé, H; Juliani, R, «Essential Oils in Combination and Their Antimicrobial

Properties,» Molecules, vol. 17, nº 12, pp. 3989-4006, 12 Abril 2012.

[19] Sánchez, Y; Pino, O; Correa, T; Naranjo, E; Iglesia, A, «ESTUDIO QUÍMICO Y

MICROBIOLÓGICO DEL ACEITE ESENCIAL DE Piper auritum KUNTH

(CAISIMÓN DE ANÍS),» vol. 24, nº 1, 2009.

[20] Ramos, M; Bautista, S; Barrera, L; Bosquez, E; Alia, I; Estrada, M, «Compuestos

Antimicrobianos Adicionados en Recubrimientos Comestibles para Uso en Productos

Hortofrutícolas,» vol. 28, nº 1, 2010.

[21] Suhr, K; Nielsen, P, «Antifungal activity of essential oils evaluated by two different

application techniques against rye bread spoilage fungi,» vol. 94, nº 4, 2003.

[22] Isman, M, «Botanical insecticides, deterrents, and repellents in modern agriculture and

an increasingly regulated world.,» Annual Review of Entomology, vol. 51, pp. 45-66,

January 2006.

[23] Martínez, M, «Universidad de Antioquia,» Universidad de Antioquia, Febrero 2003.

[En línea]. Available: http://farmacia.udea.edu.co/~ff/esencias2001b.pdf. [Último

acceso: 23 Noviembre 2016].

[24] Ávila, A; Fonseca, M, Calidad microbiológica de jugos preparados en Hogares de

bienestar familiar en la zona norte de Cundinamarca, Bogotá, 2008.

[25] Mora, G, Evaluación del uso de aceite esencial Cymbopogon Citratus Stapf (hierba

luisa) en la conservación y almacenamiento de tres frutos de consumo masivo del

90

mercado central del cantón Quevedo, QUEVEDO: UNIVERSIDAD TÉCNICA

ESTATAL DE QUEVEDO, 2012.

[26] Belezaca, C, Etiologia y Manejo de la pudricion del fuste de Schizolobium perahybum

(Pachaco) en la zona central del Litoral Ecuatoriano, Quevedo, 2002.

[27] Alexopoulos, C , Introduccion a la micologia, Buenos Aires - Argentina: Universitaria,

1962.

[28] Hilje, Q ; Araya, F ; Scorza, R , Plagas y Enfermedades Forestales en America Central;

Guia de campo., Turrialba - Costa Rica: CATIE, 1991.

[29] Barnett, H; Hunter, B , Illustrated genera of imperfect fungi., USA: Burgess Publishing

Company, 1972.

[30] Agrios, G , Fitopatologia, Mexico: Limusa, 1996.

[31] Alegre, P, MARCHITEZ POR VERTICILLIUM (Verticillium sp.)., CHAPINGO

MÉXICO: Universidad Tecnica Chapingo, 2013.

[32] Arias, J; Jerez, A, Elaboracion de un atlas para la descripcion macroscopica y

microscopica de hongos fitopatogenos de interes en especies de flores de corte

cultivadas en la Sabana de Bogota, Bogota D.C: Facultad de Ciencias Carrera de

Microbiologia Industrial, 2008.

[33] CHAPARRO, M; GUZMÁN, R; GALLO, F; MORENO, G, «Manejo poscosecha de

la guanábana (Annona muricata L.),» Agricultura Tropical, vol. 30, nº 2, pp. 63-70,

1993.

[34] MORTON, J, «Soursop.,» Fruits of warm climates., vol. 1, pp. 75-80, 1987.

[35] Prendes, C; Lorenzo, C; Melo, C; Cabrera, R; Giménez, C; Lopes, J , Identificación de

Hongos Fitopatógenos en cultivos de Terceira, Azores, Islas Canarias. España,: Dep.

de Ciencias Agrarias.

[36] Scalvenzi, L; Yaguache, B; Guerrini, A; Radice, M; Chiurato, M, «EFECTOS DE LOS

ACEITES ESENCIALES AMAZÓNICOS DE CITRUS LIMON Y CYMBOPOGON

91

CITRATUS SOBRE EL CRECIMIENTO DE HONGOS FITOPATÓGENOS,»

Scalvenzi, vol. 5, nº 3, p. 206, 2016.

[37] MARAVÍ, G, Efecto antibacteriano y antifúngico del aceite esencial de Mentha

piperita (menta), Origanum vulgare (orégano) y Cymbopogon citratus (hierba luisa)

sobre Streptococcus mutans ATCC 25175, Lactobacillus acidophilus ATCC 10746 y

Candida albicans ATCC 90028, Lima-Perú: Universidad Wiener, 2012.

[38] ALZATE O, Diego A; MIER M, Gonzalo I; AFANADOR K, Lucía ; DURANGO R,

Diego L; GARCÍA P, Carlos M, «EVALUACIÓN DE LA FITOTOXICIDAD Y LA

ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA CONTRA Colletotrichum acutatum DE LOS

ACEITES ESENCIALES DE TOMILLO (Thymus vulgaris), LIMONCILLO

(Cymbopogon citratus), Y SUS COMPONENTES MAYORITARIOS,» VITAE, vol.

16, nº 1, pp. 116-125, 2009.

[39] Him, Y; Rodríguez, D; Sanabria, M; Rodríguez, J , EFECTO DE LOS EXTRACTOS

ETANOLICOS DE JENGIBRE (Zingiber oficinale) SOBRE EL CRECIMIENTO

MICELIAL IN VITRO DE RHIZOCTONIA SOLANI AG1-1A., Zaragoza: VII Congreso

SEAE Zaragoza, 2006.

[40] Vidal, L; Lopez, H; Vidal, N; Ruiz, R; Castillo, D; Chiquito, R, La situación de las

annonaceae en México: principales plagas, enfermedades y su control, Mexico:

Academicos de la Facultad de Ciencias Agricolas.

[41] Jimenez, A; Santos, R, «Estudios biologicos y morfologicos del hongo causante de la

pudricion apical de los frutos del guayabo (Psidium guajava L.),» Rev. Fac. Agron,

vol. 9, 1992.

[42] Quintero, E; Urdaneta, L, «Evaluación in vitro de fungicidas para el control del hongo

Macrophoma sp., agente causal de la pudrición apical del fruto del Guayabo (Psidium

guajava L.).,» Fac. Agron. (LUZ), vol. 14, pp. 233-244, 1997.

[43] POOT, H. et al, El fruto del saramuyo (Annona squamosa) y su refrigeración a 4°C.

Facultad de Ciencias Químico Biológicas., Campeche: Universidad Autónoma de

Campeche, 2003.

92

[44] CAMACHO, G., Obtención y conservación de pulpas, Bogota D.C: Universidad

Nacional de Colombia, 1995.

[45] PARK, Y.; JUNG, S.; GORINSTEIN, S., «Ethylene treatment of ‘Hayward’ kiwifruits

(Actinidia deliciosa) during ripening and its influence on ethylene biosynthesis and

antioxidant activity.,» Scientia Horticulturae, vol. 108, nº 1, pp. 22-28, 2006.

[46] Narvaez, F, Valoración de los aceites esenciales de Citrus sinensis (naranja) y Citrus

nobilis (mandarina) como inhibidores de microorganismos en la conservación de

alimentos, Quevedo: Uiversidad Tecnica Estatal de Quevedo, 2015.

93

CAPÍTULO VII

ANEXO

94

Anexo 1. Crecimiento radial de los tratamientos

Factor A Factor B Factor C Replicas 24 h/cm 48 h/cm 72 h/cm 96 h/cm 120 h/cm

Macrophoma sp AE Hierba Luisa 10% 1 0,35 0,55 0,85 1,15 1,45

Macrophoma sp AE Hierba Luisa 15% 1 0 0,2 0,4 0,61 0,81

Macrophoma sp AE Hierba Luisa 20% 1 0 0 0 0 0

Macrophoma sp AE Jengibre 10% 1 2,2 3 4,48 5 6,1

Macrophoma sp AE Jengibre 15% 1 1,25 2,8 3,2 3,3 3,88

Macrophoma sp AE Jengibre 20% 1 0,95 1,65 2 2,11 3

Verticillum sp AE Hierba Luisa 10% 1 0,6 0,9 1,28 1,3 2

Verticillum sp AE Hierba Luisa 15% 1 0,4 0,6 0,8 0,9 1

Verticillum sp AE Hierba Luisa 20% 1 0,22 0,5 0,57 0,6 0,7

Verticillum sp AE Jengibre 10% 1 2 3,5 5 5,68 6,1

Verticillum sp AE Jengibre 15% 1 1,5 2,9 3,5 3,8 4,5


Macrophoma sp AE Hierba Luisa 10% 2 0,37 0,57 0,85 1,16 1,45

Macrophoma sp AE Hierba Luisa 15% 2 0 0,22 0,42 0,63 0,83

Macrophoma sp AE Hierba Luisa 20% 2 0 0 0 0 0


Macrophoma sp AE Jengibre 15% 2 1,25 2,83 3 3,37 3,9



Verticillum sp AE Hierba Luisa 15% 2 0,4 0,62 0,85 1 1,2


Verticillum sp AE Jengibre 10% 2 2,2 3,53 5 5,71 6


Verticillum sp AE Jengibre 20% 2 0,42 0,65 0,93 1,18 1,82 ELABORADO POR: Zamora, L. (2017)

95

Anexo 2. Crecimiento radial de los testigos



Nº Genero

TIEMPO (Horas)

24 H 48H 72H 96H 120H

R1 R2 R1 R2 R1 R2 R1 R2 R1 R2

1

Testigo

Macroph

oma sp., 3,75 3,77 6,4 6,42 7,55 7,53 8,7 8,72 9 9

Nº Genero

TIEMPO (Horas)

24 H 48H 72H 96H 120H

R1 R2 R1 R2 R1 R2 R1 R2 R1 R2

1

Testigo

Verticillu

m sp., 3,8 3,82 5 5,3 7,6 7,62 8 8,3 8,99 9

96

Anexo 3. Porcentaje de inhibición de los tratamientos en horas

Factor A Factor B Factor C Replicas

24 Horas (% de

Inhibicion)

72 Horas (% de

Inhibicion)

120 Horas (% de

Inhibicion)

Macrophoma sp AE Hierba Luisa 10% 1 90,67 88,74 83,89

Macrophoma sp AE Hierba Luisa 15% 1 100 94,7 91

Macrophoma sp AE Hierba Luisa 20% 1 100 100 100

Macrophoma sp AE Jengibre 10% 1 41,33 40,66 32,22



Verticillum sp AE Hierba Luisa 10% 1 84,21 83,16 77,75



Verticillum sp AE Jengibre 10% 1 47,37 34,21 32,15





Macrophoma sp AE Hierba Luisa 20% 2 100 100 100









Verticillum sp AE Jengibre 20% 2 88,95 87,76 79,76 ELABORADO POR: Zamora, L. (2017)

97

Anexo 4. Porcentaje de inhibición radial en testigos

Nº Genero

% Inhibición radial 24h 72h 120h

R1 R2 R1 R2 R1 R2

1 Testigo Macrophoma sp 0 0 0 0 0 0

2 Testigo Verticillum sp 0 0 0 0 0 0


Anexo 5. Diagrama de flujo del proceso de inhibición de los hongos

(Macrophoma sp., y Verticillum sp.) aislados de la Annona muricata L.

(guanábana)

Annona muricata L.


Identificación

Repique del Hongo

Incubación

Lavado y

desinfectado

Recepción

Inhibición con los

AEs

Siembra en PDA

Medición del micelio

Cámara Húmeda

Hipoclorito al 3 % Materia extraña

T: 26 °C

AE (hierba luisa) AE (jengibre)


98

Anexo 6. Peso (D) de la Annona muricata L. (guanábana)

Factor A Factor B Factor

C

Replicas Peso (D)

Día 1

Peso (D)

Día 3

Peso (D)

Día 6

Peso (D)

Día 9

Peso

(D) Día

12

Peso (D) Dia 15

Macrophoma sp AE Hierba Luisa 10% 1 1386700 1378860 1349460 1305360 1254400 1189720



Macrophoma sp AE Jengibre 10% 1 1128960 1114260 1079960 1068200 1024100 928060



Verticillum sp AE Hierba Luisa 10% 1 1383760 1364160 1329860 1284780 1221080 1124060



Verticillum sp AE Jengibre 10% 1 1176784 1153264 1080744 1025864 948444 861224
















99

Anexo 7. ºBrix de la Annona muricata L. (guanábana)

Factor A Factor B Factor C Replicas °Brix Dia 1 °Brix Dia 3 °Brix Dia 6 °Brix Dia 9 °Brix Dia 12 °Brix Dia 15

Macrophoma sp AE Hierba Luisa 10% 1 15 11 10 9 7 6,4



Macrophoma sp AE Jengibre 10% 1 15 12 10 8,4 7 4,7

Macrophoma sp AE Jengibre 15% 1 15 13 10 7 6,3 5


Verticillum sp AE Hierba Luisa 10% 1 16 11 9 7,2 6 5,5

Verticillum sp AE Hierba Luisa 15% 1 16 13 11 10 8 5,9


Verticillum sp AE Jengibre 10% 1 15 12 8 6 5 4,2



Macrophoma sp AE Hierba Luisa 10% 2 14 10 10 8,8 6,8 6


Macrophoma sp AE Hierba Luisa 20% 2 15 15 15 14 13 11,8

Macrophoma sp AE Jengibre 10% 2 15 11 9 8 6,8 4,5

Macrophoma sp AE Jengibre 15% 2 15 12,6 10 6,8 6 4,7

Macrophoma sp AE Jengibre 20% 2 15 14 13 10 9,6 7,8

Verticillum sp AE Hierba Luisa 10% 2 15 10 8,6 7 5,8 5,3

Verticillum sp AE Hierba Luisa 15% 2 15 12 10 9 7,6 5,2

Verticillum sp AE Hierba Luisa 20% 2 15 15 13 12,6 12 9,6

Verticillum sp AE Jengibre 10% 2 15 11 7 5 4,6 4

Verticillum sp AE Jengibre 15% 2 15 13 9,4 7,8 6 4

Verticillum sp AE Jengibre 20% 2 15 12 11,5 9,6 8,4 7 ELABORADO POR: Zamora, L. 2017

100

Anexo 8. pH de la Annona muricata L. (guanábana)


Factor A Factor B Factor C Replicas pH Día 1 pH Día 3 pH Día 6 pH Día 9 pH Día 12 pH Día 15

























101

Anexo 9. Fotos de la Fase experimental

Preparación de PDA (Papa Dextrosa Agar) y adición de antibióticos

Preparación de hipoclorito al 3% y desinfección de Annona muricata L.

Pesando el PDA Adición de los 19,5 g de PDA en 500 ml de H2O

Disolución Esterilización Material a utilizar Adición de antibiótico al

PDA

Agua estéril Cloro Desinfección Guanaba a utilizar

102

Aislamiento del hongo de la Annona muricata L.

Identificación de hongos de la Annona muricata L

PDA para siembra Siembra de muestra Muestra de Guanábana Materiales

Hongo Madre

(Anverso)

Macrophoma sp.

Hongo Madre

(Reverso)

Macrophoma sp.

Observación

microscópica

Macrophoma

sp.

Hongo Madre

(Anverso)

Verticillum sp.

Hongo Madre

(Reverso)

Verticillum sp.

Observación

microscópica

Verticillum sp.

103

Repique del hongo de la Annona muricata L

Inoculación del Macrophoma sp en 3 frutas tropicales

Repique Siembra Sellado Incubación

Inoculación Macrophoma sp

+ zanahoria Macrophoma sp

+ manzana

Macrophoma sp

+ naranja

Siembra Repique

104

Aplicación de los Aceites esenciales Cymbopogon citratus (hierba luisa)

y Zingiber officinale (jengibre) en la inhibición del hongo Macrophoma

sp., y Verticillum sp.

Crecimiento radial del micelio

Preparando las

concentraciones

Midiendo 10 ml

de PDA

Colocando los 10 ml de

PDA en las cajas petri

Agregando las

concentraciones en

PDA

Dispersando la

concentración en el

medio de cultivo

Sembrando

Sellado y rotulado

Crecimiento radial del hongo

105

Vida útil de la guanábana cubierta con la solución identificada (CMI)

de los aceites esenciales Cymbopogon citratus (hierba luisa) y Zingiber

officinale (jengibre)

Muestra

Aplicando la CMI del

aceite esencial de

Cymbopogon citratus Tiempo de vida útil

15 días

Aplicando la CMI del

aceite esencial de

Zingiber officinale

(jengibre)

Tiempo de vida útil 15

días Muestra

106

Anexo 10. Técnicas de Laboratorio

OBJETIVO

- Aislar y sembrar los hongos en placas Petri utilizando correctamente sus

respectivos agares y caldos de cultivo, en distintos métodos de

aislamientos.

INSTRUMENTAL

- Cámara de flujo laminar

- Bisturí

- Cajas petri,

- Hipoclorito de sodio al 3%

- Toallas de papel

- Mechero

- Marcador

- Incubadora

- Medio de cultivo PDA

- Pinzas

- Muestra vegetal con síntomas

Nota: Todos los procedimientos se deben ejecutar dentro de la cámara de flujo laminar;

además, deben cumplirse todas las condiciones de asepsia y esterilidad que se exigen

en un laboratorio. En otras palabras, se aplican siempre las buenas prácticas

microbiológicas (BPM).

Universidad Técnica Estatal de Quevedo

Laboratorio de Microbiología

Técnicas de aislamiento de hongos

107

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

Las siglas PDA corresponden a los componentes del medio: papa, dextrosa y

agar. Este medio se usa para aislar éste y otros patógenos.

Esterilizar la cámara de flujo laminar previo a la ubicación de los materiales,

para evitar algún tipo de contaminación y las muestras deben estar ubicadas en

tubos de ensayos.

PROCEDIMIENTO

- Paso 1: Cortar varios trozos del tejido enfermo utilizando un bisturí estéril.

- Paso 2: Desinfectar los trozos de muestra en una caja petri de 60 mm que

contenga una solución de hipoclorito de sodio al 3%, durante 3 minutos.

Enjuagar luego los trozos desinfectados con agua destilada estéril en otra

caja petri, vertiendo el agua sobre la muestra con una pipeta estéril.

- Paso 3: Colocar los trozos lavados sobre toallas de papel estériles durante

10 minutos para que se sequen.

- Paso 4: Cuando los trozos estén secos, tomarlos con una pinza estéril y

‘sembrarlos’ en una caja petri que contenga el medio de cultivo PDA.

Hacer lo mismo con las demás cajas (para multiplicar las muestras).

Incubar las cajas a 28 °C durante 5 días, tiempo en que el hongo producirá

masas de conidias y micelio.

108

OBJETIVO

- Determinar el crecimiento radial de los hongos durante cinco días

INSTRUMENTAL

- Regla

- Marcador indeleble

- Incubadora

Nota: Todos los procedimientos se deben ejecutar dentro de la cámara de flujo laminar;

además, deben cumplirse todas las condiciones de asepsia y esterilidad que se exigen

en un laboratorio. En otras palabras, se aplican siempre las buenas prácticas

microbiológicas (BPM).

PROCEDIMIENTO

- Paso 1: Desinfectar las manos y el área de trabajo.

- Paso 2: Colocar la regla que se utilizara para la medición en un lugar

amplio y estéril.

- Paso 3: Colocar las cajas proceder a la medicion y verificar su crecimiento

señalando con un marcador.

- Paso 4: Se aplica la fórmula correspondiente para verificar el porcentaje

de inhibición.

T - Tr / T * 100

Donde:

T = Testigo

Tr = Tratamiento

Universidad Técnica Estatal de Quevedo

Laboratorio de Microbiología

Técnica para Medición Radial

109

Anexo 11. Certificación INIAP

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