10_membrana_filtrante

5/10/2018 10_membrana_filtrante - slidepdf.com

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• Introducción

• Objetivo

• Fundamento

• Materiales

• Procedimiento

• Resultados

• Conclusiones

• Actividades Adicionales

• Bibliografía

INTRODUCCIÓN

El agua es un factor importante en la producción de

los medicamentos, por lo tanto su calidad, es de su-ma importancia ya que es la materia prima más usa-da y además está presente en otros procesos rela-cionados con dicha producción, como por ejemplo enlos de limpieza y sanitarización. Es por ello que elagua puede considerarse una fuente potencial decontaminación bacteriana de los medicamentos.

En la industria farmacéutica se conocen cinco tiposde agua: agua potable, agua suavizada, agua desio-nizada, agua destilada y agua producida por ósmosisreversa. La calidad microbiológica de cualquier tipo,dependerá del contenido microbiano del agua utiliza-da como materia prima, de los métodos de tratamien-tos a los que es sometida, y de los sistemas emplea-dos para su almacenamiento y distribución.

Para garantizar la calidad microbiológica del agua, esnecesario realizar el control de la misma, utilizandodiferentes métodos, que nos permitan realizar la nu-meración o el recuento de bacterias aerobias mesófi-las, mohos y levaduras, coliformes o la investigaciónde microorganismos patógenos.

Trabajo Práctico Nº 2

MÉTODO DE LA MEMBRANA FILTRANTEPARA EL ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO

DEL AGUA



LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA – MÉTODO DE LA MEMBRANA FILTRANTE PARA ELANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA

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2. 2

OBJETIVO

Al finalizar, el trabajo práctico, el estudiante estará en capacidad, mediante la con-sulta bibliográfica y la aplicación de las técnicas microbiológicas, de realizar elcontrol microbiológico del agua de proceso, utilizando la técnica de la MembranaFiltrante.

FUNDAMENTO

Este método se fundamenta en determinar el número y tipo de microorganismospresentes en una muestra de agua de proceso, por medio de la filtración de lamisma a través de una membrana filtrante con poros de tamaño adecuado (0,45μm de diámetro), la consiguiente retención de los microorganismos sobre dichamembrana y el cultivo de los mismos en diferentes agares de acuerdo al tipo de

microorganismo.

MATERIALES

Muestra de agua de procesoAgua peptonada al 0,1 %Placas estériles con medio ENDOPlacas estériles con agar SabouraudPlacas estériles con agar CetrimidePlacas estériles con agar MacConkey Placas estériles con agar para Recuento en Placa (Agar Standard Methods)

Equipo de filtración (Millipore)Membranas filtrantes estérilesBomba de vacíoPinzas estérilesEstufa

PROCEDIMIENTO

1. Colocar una membrana filtrante estéril, bajo condiciones asépticas, sobre elcentro del portafitro, usando pinzas estériles, con la superficie cuadriculadahacia arriba.




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2. Ensamblar el equipo, colocando el dispositivo de filtración y asegurando conuna pinza.

3. Verter 100 mL de la muestra de agua, en el portafiltro y proceder a filtrar.

4. Lavar el embudo con aproximadamente 100 mL de agua peptonada al 0,1%.

5. Remover la parte superior del portafiltro, y con una pinza estéril transferir lamembrana a la placa de Petri que contiene el medio de cultivo correspondienteal microorganismo que se va a identificar: Coliformes en agar endo, bacteriasaerobias mesófilas en agar para recuento en placas, mohos y levaduras enagar Sabouraud y Pseudomonas aeruginosa en agar cetrimide.

6. Al colocar la membrana, evitar la formación de burbujas entre ésta y el medio

de cultivo.

7. Esperar aproximadamente 20 minutos, para permitir la adhesión de la mem-brana al medio.

8. Con excepción de las placas de agar Sabouraud, incubar las placas en formainvertida, a las diferentes temperaturas y tiempos, de acuerdo al microorganis-mo investigado:




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1. Coliformes: Agar ENDO Incubación 35ºC ± 2ºC x 24-48 h2. Mohos y Levaduras: Agar Sabouraud Incubación 25ºC ± 2ºC x 5-7 días3. Bacterias aerobias Agar Recuento Incubación 35ºC ± 2ºC x 24-48 h

mesófilas en Placas4. Pseudomonas aeruginosa Agar cetrimide Incubación 35ºC ± 2ºC x 24-48 h

RESULTADOS

Contar las colonias en las membranas. Expresar los resultados como unidadesformadoras de colonias (u.f.c.) por mL o por 100 mL de agua, considerando el vo-lumen filtrado y el factor de dilución.

CARACTERÍSTICAS DE LOS MICROORGANISMOS RETENIDOS EN LASMEMBRANAS FILTRANTES, DE ACUERDO A LOS MEDIOS USADOS.

Bacterias aerobias mesófilas en agar pararecuento en placas.

Mohos y Levaduras en agar Sabouraud.

Coliformes en agar endo.




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Pseudomonas aeruginosa en agar cetrimide

Anotar los resultados:

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CONCLUSIONES

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ACTIVIDADES ADICIONALES

1. Investigue el significado de agua de proceso.

2. Señale las diferencias que existen entre los métodos para el recuento de mi-croorganismos citados en la guía.

3. Investigue para cada medio de cultivo usado en el presente ejercicio práctico,su composición y las características que presentan los microorganismos en el me-dio de cultivo para su numeración.




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BIBLIOGRAFÍA

Brock T.D. Madigan M.T. Martenko J.J. y Parker J. (Eds) Biología de los microor-ganismos. 8ª Edición. Prentice Hall International. (1999).

Prescott, L.M. y col. Microbiology. W.C. Brown Publishers. 4ª Edición. (1998).

The Official Compendia os Standards USP 24 NF. The United States Pharma-copeia. The National Formulary. Pharmacopeial Convention Inc. Rockville MD(1999).

http://www.bme.es/microkit/pic4sp.html

Prof. Norma De CastroProf. María Luisa De CurtisEnero 2002

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